化藥六類固體仿制制劑研發(fā)流程

化藥六類固體仿制制劑研發(fā)流程1.法規(guī)要求1.1相關(guān)法規(guī)介紹《藥品注冊管理辦法》（局令第28號）規(guī)定：第十二條仿制藥申請，是指生產(chǎn)國家食品藥品監(jiān)督管理局已批準上市的已有國家標準的藥品的注冊申請；但是生物制品按照新藥申請的程序申報。第七十四條仿制藥應(yīng)當(dāng)與被仿制藥具有同樣的活性成份、給藥途徑、劑型、規(guī)格和相同的治療作用。已有多家企業(yè)生產(chǎn)的品種，應(yīng)當(dāng)參照有關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則選擇被仿制藥進行對照研究。

第七十七條省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理部門應(yīng)當(dāng)自受理申請之日起5日內(nèi)組織對研制情況和原始資料進行現(xiàn)場核查，并應(yīng)當(dāng)根據(jù)申請人提供的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準組織進行生產(chǎn)現(xiàn)場檢查，現(xiàn)場抽取連續(xù)生產(chǎn)的3批樣品，送藥品檢驗所檢驗。

1.2針對法規(guī)提出的要求，研發(fā)工作主要體現(xiàn)以下幾個重點：

1.2.1對被仿制藥品，即參比制劑的選擇提出要求

由第七十四條規(guī)定可知，

研發(fā)仿制藥品，需要首先選擇確定被仿制藥品，即參比制劑。一般應(yīng)首先選擇進口注冊國內(nèi)上市的原研制劑，因為原發(fā)廠產(chǎn)品經(jīng)過系統(tǒng)的非臨床與臨床研究，安全性、有效性得到確認，進口時對人種差異也進行了研究。所以，選擇參比制劑是非常重要的。

1.2.2強調(diào)了對比研究，是判斷兩者質(zhì)量是否一致的重要方法之一仿制藥不同于創(chuàng)新藥是通過系統(tǒng)的探索性研究來證明藥物的安全性、有效性，仿制藥則通過與上市產(chǎn)品即參比制劑的對比性研究，證明其物質(zhì)基礎(chǔ)的一致性和質(zhì)量特征的等同性，來橋接上市藥品的安全性、有效性。仿制藥研究的總體目標是設(shè)計、研究并生產(chǎn)出可以替換已上市產(chǎn)品的仿制藥品。選準參比制劑，全面分析參比制劑，確定研究達成的目標，進而確定自身的工藝處方及質(zhì)量標準。以保證，自制仿制品可以完全替代參比制劑，并且可以按照國家相關(guān)法規(guī)要求，實現(xiàn)大生產(chǎn)的可行性和穩(wěn)定性。

1.2.3強化工藝驗證，確保大生產(chǎn)能始終如一地按照申報工藝生產(chǎn)出質(zhì)量恒定的產(chǎn)品小試研究、中試放大是大生產(chǎn)可行性的基礎(chǔ)，工藝的優(yōu)化與中試放大是從實驗室過渡到工業(yè)生產(chǎn)不可缺少的環(huán)節(jié)，是工藝能否工業(yè)化的關(guān)鍵，同時對評價工藝路線的可行性、穩(wěn)定性具有重要意義。隨著研究工作的推進，制備工藝的不斷優(yōu)化，通過放大試驗與工藝驗證實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。工藝驗證的目的是模擬生產(chǎn)規(guī)模，按照生產(chǎn)工藝能否生產(chǎn)出質(zhì)量均一恒定的產(chǎn)品，通過工藝驗證，能確保大生產(chǎn)時能始終如一地按照申報工藝生產(chǎn)出質(zhì)量恒定的產(chǎn)品，保證工藝的一致性。研發(fā)仿制藥品，小試研究、中試放大僅僅是基礎(chǔ)研究工作，重點關(guān)注的是經(jīng)過生產(chǎn)規(guī)模的藥品，是否可以做到安全性、有效性、質(zhì)量可控性。1.2.4增加批準前生產(chǎn)現(xiàn)場的檢查這樣的審批程序可解決以往的申報工藝與大生產(chǎn)工藝不一致、大生產(chǎn)不可行的弊端，同時保證申報工藝的大生產(chǎn)可行性，質(zhì)量標準針對大生產(chǎn)樣品的適用性。只有現(xiàn)場核查、藥審中心審評結(jié)論、生產(chǎn)檢查及藥檢報告三項都過關(guān)，才能拿到藥品批準文號，加強了監(jiān)管力度，體現(xiàn)了仿制藥的過程控制理念。

這就對工藝研發(fā)人員提出了更高的要求，即所有的研發(fā)工藝都必須在實際的生產(chǎn)設(shè)備上，可以恒定持續(xù)的重現(xiàn)，同時小試研發(fā)階段的研究工作，必須結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備與環(huán)境，開展針對性的研發(fā)工作，而不能脫離生產(chǎn)實際情況，開展小試研發(fā)工作。2、研發(fā)工作的階段性介紹2.1立項2.2前期準備（文獻調(diào)研、參比制劑選擇與研究等…）2.3小試工藝研究2.4質(zhì)量研究2.5中試工藝研究2.6穩(wěn)定性研究2.7生產(chǎn)驗證研究2.8申報資料的全部撰寫與整理2.9申報現(xiàn)場核查3、前期準備：3.1、信息調(diào)研3.1.1查找標準與文獻資料1）工藝方面的資料原料藥、制劑的各國專利；原料藥（含合成工藝、晶形、穩(wěn)定性）與制劑在各知名或核心期刊中的相關(guān)文獻。2）質(zhì)量方面的資料查找原料藥與制劑的相關(guān)標準，包括美國，英國，歐洲，日本，中國藥典標準，該品種在中國進口注冊標準與全檢報告，以及相關(guān)的色譜方法的文獻。3.1.2文獻的匯總3.1.2.1工藝文獻的總結(jié)1）原料藥合成工藝文獻初步了解合成該原料藥廣泛采用的工藝，為原料藥雜質(zhì)譜的分析，提供初步的資料。2）原料藥晶形文獻根據(jù)藥物溶解度和生物膜通透性，可將化學(xué)藥物按生物藥劑學(xué)分析系統(tǒng)（BCS）分類：1類高溶解度-高通透性藥物2類低溶解度-高通透性藥物3類高溶解度-低通透性藥物4類低溶解度-低通透性藥物不適合做固體制劑針對上述2、3類原料藥，其不同晶形可能影響原料藥在體內(nèi)的溶解度與通透性，進而影響原料藥在體內(nèi)的生物利用度與生物等效性。

不同晶形的原料藥在自然條件下存在的穩(wěn)定性不相同，可導(dǎo)致制劑工藝中發(fā)生晶形轉(zhuǎn)變等情況。產(chǎn)生的后果：a轉(zhuǎn)變后的晶形生產(chǎn)的制劑，影響原料藥在體內(nèi)的生物利用度與生物等效性。B轉(zhuǎn)變后的晶形，侵犯晶形專利。例如：硫酸氫氯吡格雷片。不同晶形的原料藥可表現(xiàn)出不同的物理和機械性質(zhì)，包括吸濕性、片劑制粒后的粒子形狀、密度、粒子流動相和可壓縮性，進而影響片劑的生產(chǎn)工藝。不同晶形的原料藥在自然條件下存在的穩(wěn)定性不相同，可導(dǎo)致生產(chǎn)的制劑在穩(wěn)定性試驗中出現(xiàn)異常。3）原料藥的穩(wěn)定性文獻

了解原料藥在溫、光、濕、氧的自然條件下，穩(wěn)定性情況?？梢詾橹苿┕に嚨倪x擇與開展，提供前期的參考。4）制劑文獻重點關(guān)注，制劑工藝是否可以在現(xiàn)有生產(chǎn)條件下重現(xiàn)；制劑工藝是否使用特殊的生產(chǎn)設(shè)備，是否需要提前采購該特殊設(shè)備或采用其他現(xiàn)有設(shè)備或工藝替代生產(chǎn)。制劑工藝如有專利保護，如何規(guī)避專利，開展仿制藥的試驗工作。3.1.2.2質(zhì)量標準文獻的總結(jié)總結(jié)所有標準中原料藥與制劑的有關(guān)物質(zhì)，初步確定制劑的雜質(zhì)譜，為針對性探索有關(guān)物質(zhì)色譜方法，提供合適的目標物質(zhì)。參考各標準中的色譜方法，為制訂最終合適的色譜方法，提供文獻支持。綜合比較各質(zhì)量標準，選擇要求更“高”的標準，可作為仿制藥研究的初始標準。一般情況下，優(yōu)先選擇進口注冊標準。3.2參比制劑的選擇

由審評中心電子期刊，“20100727關(guān)于藥學(xué)對比研究的幾點要求-黃曉龍”，得知參比制劑的選擇要求如下：藥學(xué)對比研究用對照品的選擇原則是：

（1）如果原研企業(yè)產(chǎn)品已經(jīng)進口中國，應(yīng)首選已進口或本地化生產(chǎn)的原研產(chǎn)品；

（2）如果無法獲得原研產(chǎn)品，可以采用質(zhì)量優(yōu)良的在發(fā)達國家上市的藥品，如在ICH成員國上市的同品種，即美國、歐盟或日本等國的同品種仿制產(chǎn)品。如果上述國家產(chǎn)品已經(jīng)進口中國，可采用進口品。

（3）如果無法獲得符合上述要求的對照品，則應(yīng)在充分考慮立題合理性的前提下，采用多家國內(nèi)上市的主流產(chǎn)品，進行深入的對比研究，所申報產(chǎn)品的質(zhì)量應(yīng)能達到其中最優(yōu)產(chǎn)品的質(zhì)量。

（4）如果確實無法獲得符合要求的已上市對照品，在充分考慮立題合理性的前提下，應(yīng)按照新藥研究的技術(shù)要求進行相應(yīng)的研究。

3.3參比制劑的采購

1）最好獲得有效期內(nèi)的三批。實際情況是，基本上只能買到有效期內(nèi)的兩批或一批。

2）參比制劑的采購要求（告訴采購人員）：需要從正規(guī)渠道購買，需提供購買發(fā)票；生產(chǎn)廠家；種類（劑型）；規(guī)格（產(chǎn)品規(guī)格和包裝規(guī)格）；采購量3.4進口標準、色譜柱、對照品的采購3.4.1進口注冊標準的購買注意事項：需購買注冊標準、標準起草說明、檢測報告、附帶色譜圖。3.4.2色譜柱的購買獲得進口標準與其他法定標準后，為了開展標準的制訂工作，就需要提前購買標準要求的特殊色譜柱，如手性柱或其他特殊填充劑的色譜柱。3.4.3對照品的購買（告訴采購人員）：需要從正規(guī)渠道購買，需提供購買發(fā)票；對照品的名稱；對照品的用途（定性或定量）；對照品采購量。3.4.4特別的試劑與試藥質(zhì)量標準中鑒別或檢查項下，使用的特殊試劑與試藥。3.5參比制劑的剖析說明：工作應(yīng)分兩部分，即制劑部門進行參比制劑處方的剖析工作；分析部門進行參比制劑的全面檢測工作。參比制劑的剖析：查看參比制劑說明書中的處方介紹，應(yīng)明確參比制劑使用哪些輔料，這些輔料在制劑工藝中分析發(fā)揮什么左右，哪些輔料可能是影響制劑工藝操作的關(guān)鍵輔料。查閱各輔料的國內(nèi)生產(chǎn)廠家、進口注冊廠家。存在的風(fēng)險：1、參比制劑的處方中，有的輔料國內(nèi)無生產(chǎn)、也無進口注冊，則要考慮替代的輔料。2.不能使用無注冊證的化工級別的輔料。

3.5.1參比制劑的全面檢測3.5.1.1工藝參數(shù)1）片劑的外觀與片型如果參比片劑的外觀特殊或片型特殊，應(yīng)查看現(xiàn)有試驗或生產(chǎn)設(shè)備是否滿足需要，是否需要提前準備特殊的生產(chǎn)設(shè)備。2）片重、片硬度、片脆碎度為準備仿制工藝提供初步的信息。3）片水分為準備仿制工藝提供初步的信息。3.5.1.2質(zhì)量參數(shù)1）有關(guān)物質(zhì)色譜條件的探索與建立結(jié)合上述文獻與標準，初步選擇一個適用的質(zhì)量標準，確定初步的雜質(zhì)譜，獲得相關(guān)的系統(tǒng)適用性樣品或雜質(zhì)對照品，配制系統(tǒng)適用性溶液，檢測初步確定的有關(guān)物質(zhì)色譜條件是否適用，不適用則調(diào)整色譜條件，制訂適合檢測當(dāng)前雜質(zhì)譜的色譜方法。

說明：本項工作是分析試驗的重點工作之一，只有建立合適的有關(guān)物質(zhì)色譜條件，才可以開展參比制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測，及后續(xù)的制劑工藝探索中相關(guān)樣品的檢測。難點：通常選用的進口標準中的有關(guān)物質(zhì)色譜條件，特別是梯度流動相條件，很難重復(fù)。需要花費大量時間，調(diào)整梯度色譜條件，甚至于從新建立色譜條件。2）光學(xué)異構(gòu)體的色譜條件原料藥的法定標準中有異構(gòu)體的檢測，制劑的進口標準中無異構(gòu)體的檢測，需要建立制劑樣品的異構(gòu)體檢測的色譜方法。3）上述色譜條件建立后，檢測參比制劑中有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)譜，即雜質(zhì)個數(shù)，雜質(zhì)位置（各雜質(zhì)的保留時間，或相對主峰的相對保留時間），單個雜質(zhì)含量（面積百分含量%或真實量mg），總雜質(zhì)的量。原料藥的異構(gòu)體雜質(zhì)含量。4）檢測溶出度、制劑中主成分的含量。3.5.2參比制劑的破環(huán)試驗?zāi)康模?）、初步了解參比制劑的降解途徑，為自制制劑的工藝，提供信息。了解參比制劑對破環(huán)條件的耐受程度，初步掌握制劑的穩(wěn)定性情況。2）、了解參比制劑在各破環(huán)條件下的降解雜質(zhì)情況；3）、驗證建立的有關(guān)物質(zhì)色譜條件，如果使用當(dāng)前建立的色譜條件無法分離一些降解雜質(zhì)，則需要再次調(diào)整色譜條件。增加色譜條件的適用性與耐用性。4）初步了解參比制劑的降解雜質(zhì)譜。

3.5.3繪制參比制劑的溶出曲線3.5.3.1不同溶出介質(zhì)中溶出曲線的繪制溶出曲線的繪制：至少四種溶出介質(zhì)，如進口標準溶出度使用的溶出介質(zhì)不是常用的四種介質(zhì)，也要使用進口標準的溶出介質(zhì)進行溶出曲線的對比。介質(zhì)：PH1.2的HCl溶液PH4.5和PH6.8的緩沖溶液水3.5.3.2不同轉(zhuǎn)速下溶出曲線繪制

如果，進口標準中溶出度操作項下，漿法轉(zhuǎn)速高于50r/min，則需要分別繪制該轉(zhuǎn)速的溶出曲線與

50r/min的溶出曲線。因為，固體制劑溶出操作中，溶出杯中的轉(zhuǎn)籃或攪拌槳的轉(zhuǎn)速不同，可導(dǎo)致固體制劑的溶出效果不同，所以，可通過不同的轉(zhuǎn)速區(qū)別不同固體制劑的溶出效果。3.5.4參比制劑的穩(wěn)定性樣品檢測

考察參比制劑在影響因素條件下的穩(wěn)定性情況。放置穩(wěn)定性所需參比制劑的要求：參比制劑出廠日期盡量在一年內(nèi)，最好半年內(nèi)。放置情況：分為參比制劑除去包裝的藥片（裸藥片）、帶包裝的藥片，開展影響因素。目的：通過裸藥片的穩(wěn)定性試驗，可了解參比制劑自然降解情況，為自制制劑的穩(wěn)定性試驗提供信息；帶包裝藥片的穩(wěn)定性試驗，可考察包材保護藥片的情況，為選擇包材提供初步的信息。3.5.5參比制劑的晶形考查1）了解參比制劑中原料藥的晶形如果文獻資料明確顯示，原料藥存在多晶型現(xiàn)象，且晶型對其穩(wěn)定性和/或生物利用度有較大影響，則必須盡量了解參比制劑中原料藥的晶形。2）怎么了解參比制劑中原料藥的晶形查找各種文獻了解；使用多種適合的檢測技術(shù)，例如，粉末X-衍射，熱分析法（差熱掃描、熱重分析等），光譜法（紅外、雷曼、固態(tài)核磁共振）。

3.5.6質(zhì)量標準的制訂

依據(jù)上述試驗，完成質(zhì)量標準草案第一版的制訂工作。為配合制劑工藝研究，提供質(zhì)量標準。3.5.7參比制劑全檢報告

依據(jù)制訂的質(zhì)量標準，進行參比制劑的全檢，出具參比制劑檢測報告，含溶出曲線。3.5.8包材的研究應(yīng)進行充分的文獻、資料信息與專利的調(diào)研，充分了解參比制劑的包材情況。如：包材是否存在特殊性；直接使用參比制劑包材，作為自制品的包材，在考慮生產(chǎn)成本的前提下，該包材是否可以直接選用等包材信息。為自制品選擇包材，初步提供參考信息。3.6輔料采購（與3.5的分析實驗同時進行）制劑部門根據(jù)參比制劑處方的剖析后，提供輔料采購計劃。重點：

1）輔料廠家的資質(zhì)證明性文件

2）為必須不必要的麻煩，輔料購買首選藥用級輔料。

3）相同的輔料，既要購買國內(nèi)廠家的產(chǎn)品，也要購買國外廠家已經(jīng)在中國進口注冊的產(chǎn)品。3.7包材的采購（與3.5的分析實驗同時進行）制劑部門根據(jù)參比制劑的包裝情況，提供包材的采購計劃。重點：

1）包材廠家的資質(zhì)證明性文件

2）包材的等級，首選藥用級別，也有食用級別。

3）特殊包材，需要與廠家溝通協(xié)商

3.8制劑用原料藥的選擇與采購3.8.1原料藥的采購

重點：

1）選擇的原料藥廠家資質(zhì)證明性文件，必須齊全。

2）原料藥廠家規(guī)模盡量大，以保證原料藥可以長期穩(wěn)定的供應(yīng)。3.8.2原料藥的檢測3.8.2.1原料藥檢測標準的選擇因為，原料藥有法定標準，而依據(jù)進口標準也制訂了制劑的質(zhì)量標準。則應(yīng)該使用制訂的制劑標準，檢測原料藥，才具有針對性。3.8.2.2原料藥的檢測與選擇購買的原料藥的雜質(zhì)存在如下情況：1）雜質(zhì)個數(shù)明顯多于參比制劑2）雜質(zhì)個數(shù)與參比制劑相同，但雜質(zhì)量遠高于參比制劑中相同雜質(zhì)量。3）雜質(zhì)個數(shù)與參比制劑相同，雜質(zhì)量與參比制劑中相同雜質(zhì)量，相差不大。4）雜質(zhì)個數(shù)與參比制劑相同，雜質(zhì)量小于參比制劑中相同雜質(zhì)量。5）雜質(zhì)個數(shù)少于參比制劑，雜質(zhì)量小于參比制劑中相同雜質(zhì)量。

應(yīng)優(yōu)先選擇，滿足情況5、4的原料藥。3.8.2.3原料藥內(nèi)控標準的制訂為了購買滿足參比制劑雜質(zhì)譜的原料藥，需要根據(jù)制劑標準，制訂原料藥的內(nèi)控標準。3.8.2.4原料藥檢測結(jié)論根據(jù)原料藥內(nèi)控標準，出具原料藥檢驗報告。3.8.2.5確定原料藥供應(yīng)商依據(jù)原料藥廠家的資質(zhì)證明性文件是否齊全，原料藥是否符合內(nèi)控標準的要求，確定原料藥的供應(yīng)商。3.8.4確定原料藥的雜質(zhì)譜確定原料藥后，應(yīng)向廠家索要原料藥的生產(chǎn)工藝，并結(jié)合前面查閱的工藝文獻資料，推導(dǎo)原料藥的雜質(zhì)譜，重點關(guān)注是否存在遺傳毒性雜質(zhì)、無紫外吸收的雜質(zhì)（雜質(zhì)檢測使用UV檢測器）。1）經(jīng)雜質(zhì)譜推導(dǎo)，如果發(fā)現(xiàn)有潛在遺傳毒性或毒性較大的雜質(zhì)，而廠家標準中沒有控制，自訂的原料藥內(nèi)控標準也沒有控制，則要針對性的制訂原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，以證明購買的原料藥中是否存在該潛在的遺傳毒性雜質(zhì)，經(jīng)檢測是否在合理范圍內(nèi)，以判斷是否需要將該雜質(zhì)訂入制劑的有關(guān)物質(zhì)標準中。2）經(jīng)雜質(zhì)譜推導(dǎo)，如果發(fā)現(xiàn)有無紫外吸收的雜質(zhì)，則要針對性的制訂原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，以證明購買的原料藥中是否存在該雜質(zhì)。以判斷是否需要將該雜質(zhì)訂入制劑標準的有關(guān)物質(zhì)中。3.9輔料的檢驗3.9.1輔料檢測標準依據(jù)購買輔料的來源，選擇相應(yīng)的質(zhì)量標準，開展檢測。3.9.2輔料檢測依據(jù)選擇的質(zhì)量標準，開展輔料的全檢，出具檢測報告。選擇合格的輔料。4、制劑工藝研究4.1原輔料相容性試驗

目的：

1）考察各輔料與原料藥以一定比例混合后，放置于影響因素條件下，在固定時間點檢測，以考察選擇的輔料是否與原料藥產(chǎn)生相互影響，選擇的輔料是否可以使用。

2）初步了解制劑的雜質(zhì)譜，主要為降解雜質(zhì)。

難點：復(fù)方片劑中輔料相容性試驗，針對本項內(nèi)容，在下面內(nèi)容中，提供了一些探討。復(fù)方片劑輔料相容性試驗與雜質(zhì)譜歸屬1.復(fù)方片劑雜質(zhì)的檢測方法

1.1檢測儀器

HPLC-DAD、HPLC-ELSD、LC-MS。1.2檢測的色譜方法思路優(yōu)先推薦，復(fù)方中各原料及其有關(guān)物質(zhì)分別使用針對性強的色譜方法，分別檢測；而不要將多個原料及其有關(guān)物質(zhì)統(tǒng)一在一個色譜條件下，導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)歸屬與計算的困難。1.3檢測波長的選擇：應(yīng)選用對各雜質(zhì)均有較強吸收的波長作為檢測波長，當(dāng)一個測定波長無法兼顧所有雜質(zhì)時，可選用不同波長分別測定。

1.4重點監(jiān)控穩(wěn)定性較差原料藥的降解產(chǎn)物及有毒或有害雜質(zhì)2雜質(zhì)歸屬的試驗操作2.1復(fù)方中各成分的說明例如：復(fù)方中有原料藥A、原料藥B；輔料1，輔料2，輔料3.2.2相容性試驗需要準備的樣品原料藥A；原料藥B；原料藥A與原料藥B按處方比例混合物；輔料1；輔料2；輔料3；輔料1、2、3按處方比例混合物；原料藥A與輔料1按處方比例混合物；原料藥A與輔料2按處方比例混合物；原料藥A與輔料3按處方比例混合物；原料藥B與輔料1按處方比例混合物；原料藥B與輔料2按處方比例混合物；原料藥B與輔料3按處方比例混合物；原料藥A與輔料1、2、3按處方比例混合物；原料藥B與輔料1、2、3按處方比例混合物；原料藥A、B與輔料1、2、3按處方比例混合物；2.3樣品的檢測與放置2.3.10天樣品的檢測依據(jù)制劑標準，重點檢測上述樣品的外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)譜。2.3.2影響因素條件依據(jù)穩(wěn)定性試驗要求，在影響因素條件下放置上述樣品，分別在5、10、20、30天取樣，依據(jù)制劑標準，重點檢測上述樣品的外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)譜。通過比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產(chǎn)生新的雜質(zhì)。2.3.3加速試驗依據(jù)穩(wěn)定性試驗要求，在加速條件下放置上述樣品與制劑樣品，分別在1、2、3、6月取樣，依據(jù)制劑標準，重點檢測上述樣品的外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)譜。通過這些研究工作，可進一步明確復(fù)方制劑中各雜質(zhì)的歸屬，明確各藥物在加速試驗條件下及一般貯藏條件下的主要降解產(chǎn)物，為制定貯藏條件及質(zhì)量控制重點建立基礎(chǔ)。

3雜質(zhì)的定性歸屬方法（1）HPLC峰保留時間對比法

峰保留時間法是采用HPLC法，在相同的色譜條件下分別測定復(fù)方制劑和各主成分（原料藥或相同輔料單方片）的HPLC圖譜，經(jīng)對比研究將各個有關(guān)物質(zhì)歸屬為不同的主成分，在質(zhì)量標準中用相對保留時間法將各雜質(zhì)歸屬為不同的主成分，然后分別進行控制。HPLC峰保留時間對比法具有方便、快捷的優(yōu)點，但對于制成復(fù)方制劑后新增加的雜質(zhì)則無法進行控制，需要LC-MS等其他的方法研究確定。不過，仍然可以采用相對保留時間來表征各有關(guān)物質(zhì)的歸屬情況。

（2）LC-MS聯(lián)用法

LC-MS聯(lián)用法是對復(fù)方制劑中的有關(guān)物質(zhì)進行歸屬的最為有效的方法之一。該方法可以采用液質(zhì)聯(lián)用儀對復(fù)方制劑HPLC圖譜中出現(xiàn)的各個主要色譜峰分別進行質(zhì)譜分析，獲得各主要雜質(zhì)的一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖，根據(jù)各雜質(zhì)的分子離子峰和及裂解后產(chǎn)生的碎片離子峰的信息進行初步的質(zhì)譜分析，從而推測雜質(zhì)是由哪種主成分產(chǎn)生的。由于主成分與其相應(yīng)的有關(guān)物質(zhì)一般皆具有淵源關(guān)系，可利用質(zhì)譜中出現(xiàn)的一些信息進行歸屬。4雜質(zhì)的檢測計算

1）針對已知雜質(zhì)、超過鑒定限度未知雜質(zhì)、由化學(xué)結(jié)構(gòu)可知為遺傳毒性或有毒雜質(zhì)，均應(yīng)采用雜質(zhì)對照品法計算。

2）低于鑒定限度的雜質(zhì)，可采用不加校正因子的自身對照法計算。5各雜質(zhì)限度的確定雜質(zhì)譜與參比制劑一致或雜質(zhì)種類較被仿品少，無超過鑒定限度的新雜質(zhì)；各雜質(zhì)含量不超過被仿品

——試制品的雜質(zhì)控制達到了研究目標雜質(zhì)譜與參比制劑一致或雜質(zhì)種類較被仿品少，無超過鑒定限度的新雜質(zhì)；但已知雜質(zhì)含量超過了被仿品

——改進工藝，降低雜質(zhì)含量雜質(zhì)譜與被仿品不一致，有超過鑒定限度的新雜質(zhì)；但已知雜質(zhì)含量不超過被仿品

——鑒定新雜質(zhì)結(jié)構(gòu)

——分析其產(chǎn)生原因，改進工藝，降低雜質(zhì)含量至鑒定限度以下

——若通過改進工藝，雜質(zhì)含量不能降低至鑒定限度以下，應(yīng)根據(jù)雜質(zhì)研究決策樹，進行后續(xù)研究。雜質(zhì)譜與被仿品不一致，有超過鑒定限度的新雜質(zhì)；且已知雜質(zhì)含量亦超過被仿品

——改進工藝，降低雜質(zhì)水平工藝路線：原料，中間體質(zhì)量控制；工藝條件的控制承接上述內(nèi)容繼續(xù)開始，仿制制劑的研發(fā)流程探討4.2處方篩選

分析配合檢測樣品4.3小試制劑工藝研究分析配合檢測樣品4.4小試工藝驗證實驗室內(nèi)，用擬定的處方工藝生產(chǎn)三批樣品，樣品規(guī)模盡量接近中試規(guī)模的1/10.

5質(zhì)量標準研究5.1色譜方法學(xué)的驗證試驗分析部使用小試樣品，開展申報用質(zhì)量標準試驗，重點是色譜方法學(xué)的驗證試驗。有關(guān)物質(zhì)、光學(xué)異構(gòu)體（如果有）、溶出度、含量測定，均需要進行方法學(xué)驗證。方法學(xué)驗證的內(nèi)容：1）系統(tǒng)適用性2）專屬性含溶劑、輔料的干擾、制劑的破壞試驗。3）供試品溶液穩(wěn)定性4）線性與范圍5）檢測限與定量限6）精密度試驗含重復(fù)性、中間精密度試驗7）準確度即回收率試驗8）色譜方法的耐用性針對不同的檢測目標，方法學(xué)驗證中的各項內(nèi)容的操作方法與合格標準也不相同。5.2性狀、鑒別、其他檢查的試驗內(nèi)容，可依據(jù)法定標準及其附錄內(nèi)容，選擇合適的試驗方法。5.3根據(jù)小試樣品的全部檢測，制訂制劑質(zhì)量標準第二版草案。出具三批小試樣品的檢驗報告書。5.4對比研究

1）與參比制劑的雜質(zhì)譜對比。

2）與參比制劑的溶出曲線對比研究

3）總結(jié)判斷，小試工藝生產(chǎn)的仿制制劑是否等同于參比制劑。如果，出現(xiàn)不等同的情況，應(yīng)及時尋找工藝中的問題，及時調(diào)整工藝。5.5取一批小試樣品，影響因素條件下放置，分別5、10天檢測，初步判斷小試樣品的穩(wěn)定性情況，為包材選擇，中試放大，提供一些參考信息。6中試生產(chǎn)（仿制制劑項目的重點工作）6.1中試批量法規(guī)要求：中試產(chǎn)品必須在GMP車間進行生產(chǎn)；所用設(shè)備應(yīng)和將來大生產(chǎn)所用設(shè)備相同或原理及設(shè)備參數(shù)相同；批量為不少于大生產(chǎn)的1/10。6.2中試工藝優(yōu)化

根據(jù)各工藝設(shè)備的具體情況，優(yōu)化并確定各工藝設(shè)備操作參數(shù)范圍，制訂最終中試工藝，以保證可以生產(chǎn)出合格的生產(chǎn)級別樣品。6.3中試工藝的確認用確定的工藝在中試車間連續(xù)生產(chǎn)三批中試產(chǎn)品；按照GMP的要求，編寫各種相關(guān)的生產(chǎn)記錄文件。6.4中試產(chǎn)品的質(zhì)量研究6.4.1制劑部應(yīng)與分析部積極溝通，告知分析部中試工藝與小試工藝相比，工藝方法是否變化很大。分析部，應(yīng)根據(jù)工藝變化的大小，再次使用中試產(chǎn)品，開展部分質(zhì)量研究試驗或全部質(zhì)量研究試驗。6.4