儀器分析-分子發(fā)光

儀器分析6分子發(fā)光分析法Molecular楊海Y分子光譜分析法：基于物質(zhì)分子與光波(電磁作用時，物質(zhì)可見分光光2熒光分光光度 多標(biāo)記分析 激光共聚焦顯微 小動 成像系 一、熒光及熒光的產(chǎn)二、影響熒光的因三、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)4綠色熒光蛋白——2年化學(xué)下村修馬丁查爾菲錢永健 例如熒光標(biāo)記——生命科學(xué)的“指燈”染色觀 熒光標(biāo)8、熒光的定義9熒光的產(chǎn)基態(tài)0熒光的產(chǎn)激發(fā)1熒光的產(chǎn)能量轉(zhuǎn)換2熒光的產(chǎn)發(fā)射3熒光的產(chǎn)熒光，又作“螢光”，是指一種光致發(fā)光的冷光現(xiàn)光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比射光的的波長長的發(fā)射光；而且一旦停止激光，發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即。具有這種性質(zhì)發(fā)射光就被稱之為熒 內(nèi)轉(zhuǎn) 反系 無輻謝躍遷竄 振動弛豫熒 系 外轉(zhuǎn)移無輻射躍 竄 回到基 內(nèi)轉(zhuǎn)移能 之間 ST 之間 反系間竄躍由外部 取能量遲 輻謝躍遷 熒光：光 10 外轉(zhuǎn) 遲滯熒光 熒光的產(chǎn)熒光磷光化學(xué)發(fā)光生物發(fā)光散射光熒光的產(chǎn)光致漂白作用熒光的產(chǎn)、熒光光譜☆特點激發(fā)光譜與發(fā)射光：固定測量波長為熒光最大M：固定激發(fā)光波長為其最大激特點：斯托克位移特點：激發(fā)光譜特點：激發(fā)光譜與吸收光譜形狀相似一、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)、熒光與分子結(jié)構(gòu)φ=發(fā)射的光子數(shù)/吸收的光子＝熒光光強(qiáng)吸收的光強(qiáng)I化合化合苯萘蒽 λemmax躍遷類躍遷是產(chǎn)生熒光的主要躍遷一般比n11倍，5—要共軛效應(yīng) 化合苯苯苯化合苯苯苯苯苯甲λemmax相對熒光強(qiáng)剛性平面多數(shù)具有剛性平面結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子具有熒光。N無熒 偶氮 聯(lián)N有熒光 偶氮 代基效應(yīng)—HN2，—NHR，—NR2，—OH，—OR，—p→π—C=O，—COOH，—不產(chǎn)生p→π共 化合萘1-甲基1-氟1-氯1-溴1-碘化合萘1-甲基1-氟1-氯1-溴1-碘λλPmaxτ~空間位阻對熒光發(fā)射的影 立體異構(gòu)體對熒光發(fā)射的影 H3CN SO- - H 電離效應(yīng)對熒光發(fā)射的影 pH=1,有熒 pH=13,無熒重原子取代基效應(yīng)，，的系間竄躍由于重原子含有重原子的溶劑，由于重原子效應(yīng)熒光減弱、磷光增強(qiáng)、影響熒光強(qiáng)度的因素☆熒光強(qiáng)度與溶液濃度的當(dāng)入射光強(qiáng)度一定f=Kc即熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成之正比，但這種線性關(guān)系只有在極稀的溶液中時才成立。對于較濃溶液，由于猝滅現(xiàn)象和自吸收等原因，使熒光強(qiáng)度和波長一端有時，當(dāng)溶液濃度較大時，一部分熒光發(fā)射被自身熒光分析法的應(yīng) 一、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)熒光光譜光 結(jié)構(gòu)特點氙 ，熒光的測量通常在 樣品 與激發(fā)光成直角的 向上進(jìn) 光 激 數(shù)據(jù)處 儀器控?zé)晒夤庾V檢測器：熒光光譜儀及應(yīng)、熒光分析法AlgIt IF2.30kFI0εbIA IFk,F,I0 s直接熒光標(biāo)準(zhǔn)曲熒光熄滅工作熒光分析法的應(yīng)熒光分析方法的特點靈敏度高。檢測限比吸收光譜法低個數(shù)量級。通級定量分析：標(biāo)準(zhǔn)曲相對熒光強(qiáng)度 一、熒光二、影響熒光的因三、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)化學(xué)發(fā)光吸收化學(xué)能使分子發(fā)光的要有有利的化學(xué)反應(yīng)歷程，使化學(xué)反應(yīng)的能量至少能被一種物質(zhì)所接受并生成激發(fā)態(tài)，（），化光催化酶促化學(xué)發(fā) -化學(xué)發(fā)光免疫分析系中的熒光檢測化學(xué)發(fā)光免疫分析系 拜耳公司化學(xué)發(fā)光免疫分檢標(biāo)記免疫分析的常見類型直接 間接 競爭$$例小動成像系利用熒光素酶D像機(jī)偵測訊號，藉以觀察與分析同一動物或植物于特定時間點的反應(yīng)光xM52氣體麻醉系 f/0.95–f/16,50 10個（波長分別為430,465,500,605,640,675,710745nm，帶寬 695-770,810-875 時間 43x38x43 20–40 熒光成像 體內(nèi)分布示蹤將巰基丙酸修飾的發(fā)射波長為8量子點由于效應(yīng)靶向到Small2010,6, 可見光+→酶報告系以熒物來檢)PP肺癌9、判斷、藥物、毒性 貝克曼庫爾特流式細(xì)胞儀w同時多參多色熒速度快 個細(xì)胞微粒細(xì)胞凋亡研究究細(xì)胞凋亡有重要意義。應(yīng)用可根據(jù)細(xì)胞在凋亡過程中發(fā)生一系 表達(dá)該抗原的細(xì)胞 光強(qiáng)度 大多數(shù)儀器是在3 m大小的孔徑中將單細(xì) 前向角散射光a側(cè)向角散射a細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對復(fù)雜捕獲管分選(Catch電荷式流式細(xì)胞儀分 原始數(shù)據(jù)直方圖m二維點圖等高線圖密度 三維圖D單參數(shù)直方圖每一個細(xì)胞單參數(shù)的測量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計，以分布直方圖來顯示。橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號相對強(qiáng)度，縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)DNA含量直方圖和抗原表達(dá)直方 ， 外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點 雙色熒光標(biāo)記細(xì)胞散點 等高 密度A-設(shè)分析B對C P%D P%例共聚焦顯微鏡 84聚焦1購置時間：價值：~￥7分辨共聚焦顯微購置時間：價格a（） 88M多色標(biāo)記成像 Step Step Step CancerRes M的不足普通約2阿貝極限約了解分子發(fā)光熒光、磷光、化學(xué)發(fā)基本原掌握影響熒光強(qiáng)度的主要因素掌握熒光光譜和熒光分析的特點了解熒光光譜儀的基本了解發(fā)光分析定性和定SS儀器的重現(xiàn)性。規(guī)定，用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差來度量。 drs/絕對標(biāo)準(zhǔn)偏 次測量平均(xx