GB 15193.12-2014食品安全國家標準體外哺乳類細胞HGPRT基因突變試驗

中華人民共和國國家標準

GB1519312—2014

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食品安全國家標準

體外哺乳類細胞HGPRT基因突變試驗

2014-12-24發(fā)布2015-05-01實施

中華人民共和國發(fā)布

國家衛(wèi)生和計劃生育委員會

GB1519312—2014

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前言

本標準代替體外哺乳類細胞基因突變試驗

GB15193.12—2003《(V79/HGPRT)》。

本標準與相比主要變化如下

GB15193.12—2003,:

標準名稱修改為食品安全國家標準體外哺乳類細胞基因突變試驗

———“HGPRT”;

增加了術(shù)語和定義

———;

修改了試驗目的和原理

———;

增加了不同種類受試物的配制方法

———;

增加了參考陽性對照物

———;

增加了試驗用細胞株

———。

Ⅰ

GB1519312—2014

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食品安全國家標準

體外哺乳類細胞HGPRT基因突變試驗

1范圍

本標準規(guī)定了體外哺乳類細胞次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因突變試驗的基本試

(HGPRT)

驗方法和技術(shù)要求

。

本標準適用于評價受試物的致突變作用

。

2術(shù)語和定義

21HGPRT基因

.

哺乳類動物的次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因在人類基因定位于染色體的長

。,HGPRTX

臂坐標為在小鼠也定位于染色體

,Xq26.1;X。

22突變頻率

.

在某種細胞系中某一特定基因突變型的細胞集落占細胞集落總數(shù)的百分率

,()()。

3試驗目的和原理

細胞在正常培養(yǎng)條件下能夠產(chǎn)生在含有硫代鳥嘌呤的選擇性

,HGPRT,6-(6-thioguanine,6-TG)

培養(yǎng)液中催化產(chǎn)生核苷單磷酸摻入中致細胞死亡在致癌和或

,HGPRT-5'-(NMP),NMPDNA。()

致突變物作用下某些細胞染色體上控制的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變不能再產(chǎn)生從而

,XHGPRT,HGPRT,

使突變細胞對具有抗性作用能夠在含有的選擇性培養(yǎng)液中存活生長

6-TG,6-TG。

在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下使細胞暴露于受試物一定時間然后將細胞再傳代培養(yǎng)

,,,

在含有的選擇性培養(yǎng)液中突變細胞可以繼續(xù)分裂并形成集落基于突變集落數(shù)計算突變頻率

6-TG,。,

以評價受試物的致突變性

。

4材料和試劑

41細胞

.

常用中國倉鼠肺細胞株和中國倉鼠卵巢細胞株其他如小鼠淋巴瘤細胞株

(V79)(CHO),(L5178Y)

和人類淋巴母細胞株亦可細胞在使用前應進行有無支原體污染的檢查

(TK6)。。

42培養(yǎng)液

.

應根據(jù)試驗所用系統(tǒng)和細胞類型來選擇適宜的培養(yǎng)基對于和細胞常用最低必需培

。V79CHO,

養(yǎng)基改良培養(yǎng)基加入胎牛血清和適量抗菌素對于和

(MEM,Eagle)、Eagle(DMEM)10%。TK6

細胞常用培養(yǎng)液加入馬血清培養(yǎng)瓶培養(yǎng)或馬血清孔板培養(yǎng)和

L5178Y,