【公開課】動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體（第2課時(shí)）高二生物（人教版2019選擇性必修3）

第2節(jié)

動(dòng)物細(xì)胞工程第2課時(shí)：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體第二章1.視頻中了解到針對新冠肺炎真正的特效藥是什么？2.這種特效藥有著怎樣的特點(diǎn)呢？針對新冠病毒的單克隆抗體。這種單克隆抗體可以和新冠病毒特異性結(jié)合，準(zhǔn)確定位、藥效強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間久，并且可以大量儲(chǔ)備生產(chǎn)?；仡櫯f知：抗體產(chǎn)量低、純度低，而且特異性差（已免疫的）B淋巴細(xì)胞體外不能無限增殖（已免疫）B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體腫瘤細(xì)胞能無限增殖回顧舊知：抗體第1節(jié)學(xué)習(xí)的植物體細(xì)胞雜交技術(shù)跨越不同種植物之間生殖隔離的屏障，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育出新的作物類型。

思考：有沒有技術(shù)讓這兩種細(xì)胞雜交，培育出既能產(chǎn)生抗體，雙能大量增殖的細(xì)胞呢？1、概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。4、結(jié)果：形成雜交細(xì)胞。即融合后形成的原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性3、誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒5.過程：病毒顆粒滅活的病毒顆粒粘附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜融合細(xì)胞核融合形成雜交細(xì)胞在病毒的作用下，使細(xì)胞互相凝聚6.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途意義細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散培育新品種制備單克隆抗體物理法：電融合法、離心法化學(xué)法：PEG，高Ca2+—高PH融合法電融合法，PEG融合法，滅活的病毒植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能(1)與植物原生質(zhì)體融合相比，動(dòng)物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒(

)(2)滅活的含義是用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)(

)(3)二倍體動(dòng)物細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞仍然是二倍體細(xì)胞(

)×√判斷正誤×1.(2022·天津市高二階段練習(xí))如圖表示仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的部分過程，下列敘述正確的是A.細(xì)胞A和細(xì)胞B必須為同種細(xì)胞才能融合B.細(xì)胞C同時(shí)有細(xì)胞A和細(xì)胞B的遺傳物質(zhì)C.該融合過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有選擇透過性D.此過程的原理是動(dòng)物細(xì)胞具有全能性√2.對比動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，下列論述合理的是A.均可使用PEG、電融合或滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B.兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離C.兩者都可以體現(xiàn)細(xì)胞的全能性D.在適宜的條件下，均可產(chǎn)生完整個(gè)體√1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷缺陷：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。不能無限增殖產(chǎn)生大量抗體動(dòng)物體內(nèi)抗原

刺激漿細(xì)胞抗體篩選單一B細(xì)胞增殖分化抗原不純抗原不純?nèi)绾谓鉀Q這個(gè)問題呢？一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案：動(dòng)物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體活動(dòng)：以小組為單位討論單克隆抗體的制備過程，時(shí)間為7分鐘，選出兩位小組代表上臺(tái)演示2、單克隆抗體的制備過程

注射特定抗原

從脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞

骨髓瘤細(xì)胞

培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞目的是獲得產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合多種雜交細(xì)胞選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生抗體特點(diǎn)第一次篩選知識(shí)拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞能無限增殖，生長培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤2、單克隆抗體的制備過程雜交瘤細(xì)胞第二次篩選96孔板培養(yǎng)和篩選篩選抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)和抗體檢測既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生特異性抗體特點(diǎn)在體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)液中獲取從腹水中獲取單克隆抗體獲取單克隆抗體克隆化培養(yǎng)和抗體檢測每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞96孔板培養(yǎng)和篩選第二次篩選檢測原理：抗原和抗體能夠特異性結(jié)合誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么？大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法兩次篩選的目的獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞物理:電融合法化學(xué):聚乙二醇

生物：滅活的病毒第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞抗原-抗體雜交法

篩選2克隆化體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體思考：B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞抗原-抗體雜交法

篩選2克隆化體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)既可以產(chǎn)生特異性抗體，又可以大量增殖單克隆抗體制備中包括幾個(gè)階段？動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：(1)能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異。(2)與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合。(3)可以大量制備。思考：3.單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛的應(yīng)用抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體比原來診斷方法提前了10d左右，準(zhǔn)確率在90﹪以上。艾滋病檢測試劑(主要用于癌癥治療)如：單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”優(yōu)點(diǎn)：位置準(zhǔn)確、療效高、副作用小結(jié)合同位素的單抗（2）用于運(yùn)載藥物和治療疾?。?）用于運(yùn)載藥物和治療疾病抗體-藥物偶聯(lián)物

（ADC）細(xì)胞凋亡①ADC被細(xì)胞吞噬②⑤ADC抗體藥物接頭實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。臨床上主要用來治療淋巴瘤的一種單克隆抗體藥物(1)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，得到的都是雜交瘤細(xì)胞(

)(2)單克隆抗體制備過程中兩次篩選的目的相同(

)(3)ADC的抗體具靶向運(yùn)輸作用、藥物具有治療作用(

)××判斷正誤√3.新型冠狀病毒表面的刺突蛋白(S蛋白)與人呼吸道黏膜上皮細(xì)胞ACE2受體結(jié)合，入侵細(xì)胞后可引起肺炎。針對此環(huán)節(jié)研發(fā)單克隆抗體是治療新冠肺炎的研究熱點(diǎn)之一，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是A.①過程需多次向小鼠體內(nèi)注射S蛋白，以便于從

脾臟中獲得致敏的B淋巴細(xì)胞B.②過程可通過電融合法使兩個(gè)細(xì)胞融合C.經(jīng)③過程篩出的細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生識(shí)別

S蛋白的單克隆抗體D.S蛋白的單克隆抗體能夠阻斷病毒入侵正常細(xì)胞以減弱對機(jī)體的毒害√4.抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷，過程如圖所示。下列敘述不正確的是A.抗體進(jìn)入細(xì)胞后激活溶酶體酶，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡B.ADC可通過胞吞方式進(jìn)入腫瘤細(xì)胞C.單克隆抗體攜帶細(xì)胞毒素與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合D.腫瘤細(xì)胞凋亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程，會(huì)產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)√5.(2022·廣西南寧高二階段練習(xí))如圖是一種“生物導(dǎo)彈”的作用原理示意圖，沒有與腫瘤細(xì)胞結(jié)合的“生物導(dǎo)彈”一段時(shí)間后被機(jī)體清除。