【課件】2023屆高三生物一輪復(fù)習(xí)課件：基因工程+

1.基因工程的四個(gè)步驟

P76頁(yè)第一段。2.目的基因的篩選和獲?。篜CR的條件、過(guò)程。3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建：①基因工程的核心步驟是？該步驟的作用是？--P80②基因表達(dá)載體的組成部分？每一部分的作用？③構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程？--P80頁(yè)和圖

同種限制酶或是能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割基因表達(dá)載體和含目的基因的DNA片段，DNA連接酶連接。4.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞①導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有？P80-81花粉管通道法：P81農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：

導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的方法有？P82受體細(xì)胞一般為受精卵，全能性高---顯微注射法

導(dǎo)入微生物細(xì)胞的方法有？P82---Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞……②轉(zhuǎn)化的定義--P81頁(yè)資料卡，③農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：T-DNA的定義和特點(diǎn)？農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過(guò)程5.目的基因的檢測(cè)與鑒定

①分子水平的檢測(cè)--如何檢測(cè)染色體DNA上是否插入外源基因？②如何檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA？

③如何檢測(cè)是否翻譯成了蛋白質(zhì)？④個(gè)體水平如何檢測(cè)？--P82性狀測(cè)定、抗性檢測(cè)6.基因工程的應(yīng)用：獲得乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物的過(guò)程？--P90基因工程菌的定義---P91相關(guān)信息

7.蛋白質(zhì)工程的定義---P93基礎(chǔ)是？通過(guò)什么手段？目的是？基因工程只能生產(chǎn)出自然界已有的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)工程對(duì)目的基因進(jìn)行實(shí)質(zhì)性的改造，從而改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程的基本思路---P94第三段和圖。標(biāo)記基因的作用機(jī)制？?jī)H僅用標(biāo)記基因來(lái)鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，一定可靠嗎？--P98T1答案：D目的基因—載體連接物載體—載體連接物目的基因—目的基因連接物下圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體的簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。（2）若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對(duì)這些連接產(chǎn)物進(jìn)行__________。用上述3種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是__________________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是__________________分離純化目的基因—載體連接物、載體-載體連接物載體—載體連接物（3）目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是________，其合成的產(chǎn)物是____________。（4）在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是_________________。啟動(dòng)子mRNAEcoRⅠ和BamHⅠ（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有______________________、__________________、__________________________三種。1.基因工程的四個(gè)步驟

P76頁(yè)第一段。2.目的基因的篩選和獲取：3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建：①基因工程的核心步驟是？該步驟的作用是？--P80②基因表達(dá)載體的組成部分？每一部分的作用？③構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程？--P80頁(yè)和圖

同種限制酶或是能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割基因表達(dá)載體和含目的基因的DNA片段，DNA連接酶連接。4.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞①導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有？P80-81花粉管通道法：P81農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：

導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的方法有？P82受體細(xì)胞一般為受精卵，全能性高---顯微注射法

導(dǎo)入微生物細(xì)胞的方法有？P82---Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞……②轉(zhuǎn)化的定義--P81頁(yè)資料卡，③農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：T-DNA的定義和特點(diǎn)？農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過(guò)程5.目的基因的檢測(cè)與鑒定

①分子水平的檢測(cè)--如何檢測(cè)染色體DNA上是否插入外源基因？②如何檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA？③如何檢測(cè)是否翻譯成了蛋白質(zhì)？④個(gè)體水平如何檢測(cè)？--P82性狀測(cè)定、抗性檢測(cè)6.基因工程的應(yīng)用：獲得乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物的過(guò)程？--P90基因工程菌的定義---P91相關(guān)信息

7.蛋白質(zhì)工程的定義---P93基礎(chǔ)是？通過(guò)什么手段？目的是？基因工程只能生產(chǎn)出自然界已有的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)工程對(duì)目的基因進(jìn)行實(shí)質(zhì)性的改造，從而改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程的基本思路---P94第三段和圖。三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：1.植物細(xì)胞P80-81花粉管通道法：我國(guó)獨(dú)創(chuàng)；多種操作方法（微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；植物受粉后剪去柱頭，將DNA溶液滴加到花柱切面，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊）P81農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：

轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。

農(nóng)桿菌特點(diǎn)：①土壤微生物；侵染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有侵染能力。

②農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后，Ti質(zhì)粒的T-DNA轉(zhuǎn)移到被侵染細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。方法：將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA中，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。根據(jù)受體細(xì)胞不同，具體轉(zhuǎn)化方法不同。葉片、花序等與農(nóng)桿菌混合，篩選、培養(yǎng)2.動(dòng)物細(xì)胞P82受體細(xì)胞一般為受精卵，全能性高---顯微注射法

3.原核生物P82

大腸桿菌應(yīng)用最廣泛。---Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：1.侵染對(duì)象？導(dǎo)入的受體細(xì)胞：體細(xì)胞、受精卵2.原理？Ti質(zhì)粒與T-DNA的特點(diǎn)？3.目的基因插入的位置？4.兩次拼接（兩次基因重組）、

兩次轉(zhuǎn)入（方法？）5.轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞如何獲得最終的新品種？具體原理：在農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上存在T-DNA，T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上，因此只要將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA中，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞穩(wěn)定存在和表達(dá)的關(guān)鍵：T—DNA攜帶目的基因轉(zhuǎn)移至植物細(xì)胞染色體DN

A上小本P3729．(2020·山東青島模擬)下圖為農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)段結(jié)構(gòu)示意圖。農(nóng)桿菌附著植物細(xì)胞后，T-DNA首先在農(nóng)桿菌中從右邊界到左邊界被剪切、復(fù)制，然后進(jìn)入植物細(xì)胞并整合到染色體DNA上，繼而誘發(fā)細(xì)胞異常生長(zhǎng)和分裂，形成植物腫瘤。以下有關(guān)敘述正確的是(

)A．Ti質(zhì)粒存在于農(nóng)桿菌的擬核DNA之外B．植物腫瘤的形成與A、B兩個(gè)基因的表達(dá)有關(guān)C．清除植物腫瘤組織中的農(nóng)桿菌后腫瘤不再生長(zhǎng)D．利用T-DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)基因時(shí)需保留LB、RB序列ABD目的基因的檢測(cè)與鑒定分子水平③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)個(gè)體生物學(xué)水平鑒定一、檢測(cè)與鑒定的目的：檢測(cè)和鑒定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性。②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因二、檢測(cè)與鑒定的方法：方法：PCR技術(shù)、核酸分子雜交抗原-抗體雜交：抗原與抗體特異性結(jié)合方法：PCR技術(shù)、核酸分子雜交

性狀檢測(cè)、抗性檢驗(yàn)

1.PCR技術(shù)基本原理：根據(jù)目的基因兩端的堿基序列特點(diǎn)設(shè)計(jì)特定引物，然后進(jìn)行PCR，看是否擴(kuò)增出目的基因。如果有擴(kuò)增產(chǎn)物,表明被測(cè)的DNA中含有目的基因,如果沒(méi)有的話,就表明沒(méi)有成功轉(zhuǎn)入目的基因.2.如何用PCR檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄出了目的基因的mRNA？提取細(xì)胞中的總mRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得總cDNA，利用目的基因特點(diǎn)設(shè)計(jì)的特定引物，進(jìn)行PCR1.基本原理核酸分子雜交技術(shù)互補(bǔ)的核酸單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈，即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行。當(dāng)用一段已知目的基因的核苷酸序列作為探針，與被測(cè)基因或mRNA進(jìn)行接觸，若兩者的堿基完全配對(duì)成雙鏈，則表明被測(cè)基因或mRNA中含有已知的目的基因序列。2.過(guò)程3.基因探針用放射性同位素(如32P)、熒光分子等標(biāo)記的、與目的基因互補(bǔ)的特異核苷酸序列。基因探針可以包括整個(gè)目的基因，或目的基因的一部分。如果顯示出雜交帶，就表明待測(cè)樣品含有目的基因或目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)錄?！驹斀狻緼、根據(jù)分析“引子”是一段DNA序列，徹底水解產(chǎn)物有磷酸、脫氧核糖和四種含氮堿基，共6種產(chǎn)物，A錯(cuò)誤；B、由于線粒體中也含有DNA，因此設(shè)計(jì)“引子”的DNA序列信息還可以來(lái)自線粒體DNA，B錯(cuò)誤；C、根據(jù)題干信息“利用現(xiàn)代人的DNA序列設(shè)計(jì)并合成了引子”，說(shuō)明設(shè)計(jì)“引子”前不需要知道古人類的DNA序列，C正確；D、土壤沉積物中的古人類雙鏈DNA需要經(jīng)過(guò)提取，且在體外經(jīng)過(guò)加熱解旋后，才能與“引子”結(jié)合，而不能直接與引子結(jié)合，D錯(cuò)誤。植物基因工程動(dòng)物基因工程基因工程藥物食品工業(yè)基因工程的應(yīng)用1、用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速率：導(dǎo)入外源生長(zhǎng)激素基因2、用于改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)1.胰島素、干擾素等藥品2.乳腺生物反應(yīng)器.組成、制備過(guò)程---P903.器官移植基因工程菌---定義，P91

生產(chǎn)酶等用工程菌生產(chǎn)人胰島素2.生產(chǎn)人胰島素的工藝流程：1.工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達(dá)的菌類細(xì)胞株系稱為“工程菌”①用PCR獲取人胰島素基因②將人胰島素基因插入質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體；③用Ca+處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌；④檢測(cè)篩選出成功轉(zhuǎn)化的大腸桿菌，⑤進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)（菌種擴(kuò)大培養(yǎng)、配置培養(yǎng)基、滅菌、接種、發(fā)酵、產(chǎn)物的分離和提純）思考：目前除了可以利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素，還可以用酵母菌來(lái)生產(chǎn)人胰島素，請(qǐng)從細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的角度考慮，二者生產(chǎn)的人胰島素有何不同？大腸桿菌是原核生物，沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)合成的胰島素肽鏈進(jìn)行加工，需后期人為加工酵母菌是真核生物，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，可以對(duì)合成的胰島素肽鏈進(jìn)行一定的加工和修飾。乳腺生物反應(yīng)器1.乳腺生物反應(yīng)器的制備過(guò)程2.獲得乳腺生物反應(yīng)器的步驟和培育普通轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的步驟有什么區(qū)別？在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，在編碼目的蛋白的基因序列前，加上在乳腺中特異性表達(dá)的基因的啟動(dòng)子3.利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)蛋白質(zhì)，有什么局限性？4.如何改進(jìn)？涉及的生物學(xué)技術(shù)？3.受性別和發(fā)育時(shí)期的限制，只有在泌乳期的雌性個(gè)體中，轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá)4.制備膀胱生物反應(yīng)器，不受性別和發(fā)育時(shí)期的限制。蛋白質(zhì)工程1.對(duì)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)和改造是通過(guò)蛋白質(zhì)工程實(shí)現(xiàn)的。2.蛋白質(zhì)工程的概念，定位---第二代基因工程基礎(chǔ)：蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律和及其與生物功能的關(guān)系途徑：目的：改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，滿足人類的生產(chǎn)或生活的需要改造基因或合成基因（基因修飾或基因合成）3.蛋白質(zhì)工程操作程序的基本思路與基因工程有什么不同？①.基因工程是遵循中心法則，DNA→mRNA→蛋白質(zhì)→折疊產(chǎn)生功能，基本上是生產(chǎn)出自然界已有的蛋白質(zhì),

基因工程僅僅對(duì)目的基因進(jìn)行DNA片段的切割和連接，不改變基因的遺傳信息②.蛋白質(zhì)工程是按照以下思路進(jìn)行的：

預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成新基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程對(duì)目的基因進(jìn)行實(shí)質(zhì)性的改造（如堿基對(duì)的增添、缺失、替換等）或者根據(jù)蛋白質(zhì)預(yù)期功能設(shè)計(jì)合成全新基因，改變基因的遺傳信息DNA的粗提取和鑒定

新坐標(biāo)P275三

、1.提取的原理：

①DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可用這一原理初步分離DNA與蛋白質(zhì)

②DNA在不同濃度的2mol/L的NaCl中溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl鑒定的原理？DNA溶液+二苯胺，沸水加熱變藍(lán)3.材料選擇的依據(jù)，能否用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞？

4.方法步驟：①研磨后，DNA存在于上清液，還是下層液體中？②上清液中含有DNA和蛋白質(zhì)，加預(yù)冷酒精的作用？出現(xiàn)的白色絲狀物是？如何獲取DNA？③如何鑒定DNA？

2mol/L的NaCl的作用？二苯胺的作用和使用條件？

新坐標(biāo)279頁(yè)案例導(dǎo)引下列利用洋蔥進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是A．將研磨液加入切碎的洋蔥，充分研磨后過(guò)濾要棄去上清液B．采用體積分?jǐn)?shù)為95%酒精溶液析出DNA的方法可去除部分雜質(zhì)C．用塑料離心管是因?yàn)橛貌Ａщx心管容易破損D．將白色絲狀物溶解在NaCl溶液中，加入二苯胺試劑后振蕩，觀察顏色變化沒(méi)有細(xì)胞核和細(xì)胞器，無(wú)DNA13.粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過(guò)濾后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過(guò)濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物的處理方式是（

）A.加入適量的木瓜蛋白酶B.37～40℃的水浴箱中保溫10～15分鐘C.加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精D.加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2mol/L→過(guò)濾→調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0．14mol/L【詳解】A、木瓜蛋白酶可以水解DNA中的蛋白質(zhì)類雜質(zhì)，由于酶具有專一性，不能水解DNA，過(guò)濾后在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物，A正確；B、37～40℃的水浴箱中保溫10～15分鐘不能去除濾液中的雜質(zhì)，應(yīng)該放在60~75℃的水浴箱中保溫10～15分鐘，使蛋白質(zhì)變性析出，B錯(cuò)誤；C、向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌，過(guò)濾后在得到的濾液中加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精，此時(shí)DNA析出，不會(huì)進(jìn)入濾液中，C錯(cuò)誤；D、加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2mol/L→過(guò)濾→調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0．14mol/L，DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中溶解度小，DNA析出，不會(huì)進(jìn)入濾液中，D錯(cuò)誤。瓊脂糖凝膠電泳DNA片段的擴(kuò)增和電泳鑒定1.PCR的原理，電泳的原理。---P84第二段

①凝膠中DNA的遷移速率的影響因素？②如何檢測(cè)DNA瓊脂糖凝膠電泳是用于分離、鑒定和提純DNA片段(雙鏈)的標(biāo)準(zhǔn)方法。瓊脂糖是從瓊脂中提取的一種多糖，具親水性，但不帶電荷，是一種很好的電泳支持物。DNA在堿性條件下（pH8.0的緩沖液）帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中通過(guò)凝膠介質(zhì)向正極移動(dòng)，不同DNA分子片段由于分子量大小和構(gòu)型不同，在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速率液不同。分子量大的遷移速率慢溴化乙錠（EB）可嵌入DNA分子堿基對(duì)間形成熒光絡(luò)合物，經(jīng)紫外線照射后，可分出不同的區(qū)帶，達(dá)到分離、鑒定分子量，篩選重組子的目的。取出凝膠，放在含有溴化乙錠的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外燈下觀察，有橙紅色熒光條帶的位置，即為DNA條帶，或在紫外燈下照相記錄電泳圖譜。溴化乙錠是致癌劑，操作時(shí)要小心，必須戴手套。2．用XhoI和SalI兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別處理同一DNA片段，酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不正確的是（）A．如圖中兩種酶識(shí)別的核苷酸序列不同

B．如圖中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNAC．泳道①中是用SalI處理得到的酶切產(chǎn)物

D．圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA電泳是常用的分離、鑒定技術(shù)，在生物中的應(yīng)用也非常的廣泛．某病是一種單基因遺傳?。ㄓ肁、a表示），其家庭系譜圖如圖1所示，對(duì)各家庭成員該對(duì)等位基因進(jìn)行電泳如圖2．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）該病遺傳方式是常染色體的隱性病，判斷依據(jù)是？產(chǎn)生該病的根本原因是基因突變．（4）對(duì)Ⅱ3的不同細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行了分離（如圖3），產(chǎn)生細(xì)胞1、2、3的根本原因是基因的選擇性表達(dá)，其中細(xì)胞3的名稱是胰島B細(xì)胞．基因編輯CRISPR/Cas9系統(tǒng)類似于哪種酶的作用？哪一部分負(fù)責(zé)識(shí)別目標(biāo)DNA？哪一部分負(fù)責(zé)切割目標(biāo)DNA？基因編輯（1）從CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖看，能夠行使特異性識(shí)別DNA序列并切割特定位點(diǎn)功能的分子是___________，其類似于基因工程中__________的作用。該分子在發(fā)揮作用時(shí)，必須先有向?qū)NA與特定的DNA發(fā)生

。催化

斷裂。若向?qū)NA的識(shí)別序列為UCAGAAUC,則被切割的DNA堿基序列為

。相比于早期基因工程的優(yōu)點(diǎn)：

。（2）CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛存在于原核生物，其存在的意義：。真核細(xì)胞中沒(méi)有編碼Cas9的基因，可以利用基因工程的方法建構(gòu)

，將基因?qū)胝婧思?xì)胞，目的是

;.Cas9是在細(xì)胞中的

合成的，而向?qū)NA的合成需要

酶的催化。目標(biāo)DNA編輯后重新連接需要

酶的鏈接。（1）向?qū)NA(sgRNA)分子和Cas9蛋白限制酶堿基互補(bǔ)配對(duì)磷酸二酯鍵AGTCTTAG可以人為選擇目的DNA的切割位點(diǎn)，目的性強(qiáng)（2）切割破壞外源DNA防止外源DNA的入侵基因表達(dá)載體使目的基因在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在并且遺傳和表達(dá)核糖體RNA聚合酶DNA連接酶25.水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)?？蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻，實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因（Wx基因）啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯，從而獲得了3個(gè)突變品系。（1）將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，所需的酶是______，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為_(kāi)_________。（2）根據(jù)啟動(dòng)子的作用推測(cè)，Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了______，從而改變了Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比，3個(gè)突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列___(填：發(fā)生或不發(fā)生)改變，原因是_____________。（3）為檢測(cè)啟動(dòng)子變化對(duì)Wx基因表達(dá)的影響，科研人員需要檢測(cè)Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA（WxmRNA）的量。檢測(cè)時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA，經(jīng)_____過(guò)程獲得總cDNA。通過(guò)PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴(kuò)增出Wx基因的cDNA，原因是________。（4）各品系WxmRNA量的檢測(cè)結(jié)果如圖所示，據(jù)圖推測(cè)糯性最強(qiáng)的品系為_(kāi)____，原因是_____________。【答案】(1).限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶(2).轉(zhuǎn)化(3).RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合(4).不發(fā)生(5)