各種酶切體系_第1頁(yè)
各種酶切體系_第2頁(yè)
各種酶切體系_第3頁(yè)
全文預(yù)覽已結(jié)束

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

EcoRI酶切鑒定組分體系質(zhì)粒DNA3gl水4plbuffer1.5glBSA0.5ulEcoRI1ul10m體系，于水浴中切割3小時(shí)，然后電泳，點(diǎn)樣5pl。通常質(zhì)粒DNA出現(xiàn)三個(gè)條帶，由前到后的順序?yàn)殚]環(huán)質(zhì)粒、線性質(zhì)粒和開(kāi)環(huán)質(zhì)粒。BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定使用pMD-18T載體連接的目的片段，酶切鑒定時(shí)選用BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定：（見(jiàn)下表）依DNA量定體系5gl10gl10"10gl重組DNA26.534BSA0.30.50.2—BamHI0.410.50.5HindIII0.410.50.5Buffer(10X)0.5111H2O1.4—4.84「反應(yīng)條件37°C水浴，3hr，電泳檢測(cè)若質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，這幾乎總是由于從細(xì)菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清時(shí)注意得不夠，可用酚:氯仿對(duì)solution進(jìn)行抽提，以去除少量制備中的雜質(zhì)，若問(wèn)題依然存在，可用離心，柱層析純化DNA。XbalI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl火菌去離子水8.54.3—10Xbuffer211BSA(10ug/ul)0.20.10.1DNA(1ug/ul)8.347.9XbaI(10U/ul)0.50.30.5SalI(10U/ul)0.50.30.5反應(yīng)條件37C，1~3hr，電泳檢測(cè)HindII單酶切依DNA量定體系30gl火菌去離子水410Xbuffer3DNA(1ug/ul)20HindIII3反應(yīng)條件37C，1?3hr，電泳檢測(cè)NotI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl10gl30gl40pl火菌去離子水8.54.3—262.410XbufferD211134BSA(10皿l)0.20.10.10.20.60.6DNA(1ug/ul)8.347.961830NotI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5SalI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5

依DNA量定體系20pl10gl火菌去離子水--10Xbuffer21DNA(1ug/ul)178.5NheI10.5反應(yīng)條件37C,1~3hr，電泳檢測(cè)反應(yīng)條件

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論