大腸菌群檢驗操作規(guī)程

*****〔沈陽〕兒童制品文件編碼第*****〔沈陽〕兒童制品文件編碼第1頁共6頁大腸菌群計數(shù)檢驗操作規(guī)程頒發(fā)頒發(fā)部門質(zhì)量部□復審□頁數(shù)2頁文件治理標準■操作標準□ 文件編碼質(zhì)技術(shù)標準□ 原編編碼起草審年月日核批QC年月日執(zhí)行年月日質(zhì)量治理部、QC一、目的建立大腸菌群計數(shù)檢驗的標準操作程序，使操作過程標準化。二、適用范圍適用于大腸菌群計數(shù)的檢驗操作。三、職責檢驗人員嚴格按檢驗操作規(guī)程進展檢驗。QC主管監(jiān)視檢查執(zhí)行狀況。四、程序范圍〔coliforms〕的測定術(shù)語和定義大腸菌群：在肯定培育條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。設(shè)備和材料除微生物試驗室常規(guī)滅菌及培育設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：3.1恒溫培育箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒溫水浴箱：46℃±1℃。天平：感量為0.1g。均質(zhì)器。振蕩器。無菌吸管：1mL〔具0.01mL刻度、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸頭。500mL。無菌培育皿：直徑90mm。pH計或pH比色管或周密pH試紙。菌落計數(shù)器。4.培育基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨〔LaurylSulfateTryptose，LST〕AA.1?；途G乳糖膽鹽〔BrilliantGreenLactoseBile，BGLB〕肉湯：見附錄AA.2磷酸鹽緩沖液：見附錄A中A.3。無菌生理鹽水：見附錄A中A.4。1mol/LNaOH：見附錄AA.5。1mol/LHCl：見附錄AA.6。檢驗程序大腸菌群MPN計數(shù)的檢驗程序見圖1。檢樣25檢樣25g(mL)樣品+225mL稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋3個適宜稀釋度的樣品勻液，接種LST肉湯管36℃±1℃ 48h±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣BGLB肉湯36℃±1℃48h±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性MPN表報告結(jié)果1大腸菌群MPN計數(shù)法檢驗程序操作步驟樣品的稀釋25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min1:10的樣品勻液。25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶〔瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠〕中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。pH值應在6.5～7.51mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)。〔留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面用11mL無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。依據(jù)對樣品污染狀況的估量，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞11支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不15min。初發(fā)酵試驗每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液〔液體樣品可以選擇原液1mL，則用LST肉湯，36℃±124h±2h，觀看倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24h±2h產(chǎn)氣48h±2h，產(chǎn)氣者進展復發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。復發(fā)酵試驗1〔BGLB〕管中，36℃±148h±2h，觀看產(chǎn)氣狀況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。大腸菌群最可能數(shù)〔MPN〕的報告MPNg〔mL〕樣品中大腸菌群MPN值。A〔標準性附錄〕培育基和試劑附錄〔LST〕肉湯成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化鈉5.0g乳糖5.0g〔K2HPO4〕2.75g〔KH2PO4〕2.75g月桂基硫酸鈉0.1g蒸餾水1000mLpH6.8±0.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)整pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10mL。12115min?！睟GLG〕肉湯成分蛋白胨 10.0g乳糖 10.0g牛膽粉〔oxgall或oxbile〕溶液 200mL0.1%煌綠水溶液 13.3mL蒸餾水 800mLpH7.2±0.1制法500mL200mL〔20.0g脫水牛膽粉200mLpH7.0～7.5975mp10mL。12115min。磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀〔KH2PO4〕 34.0g蒸餾水 500mLpH7.2制法500mL175mL1mol/L氫pH1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓15min。無菌生理鹽水成分氯化鈉 8.5g蒸餾水 1000mL制法：8.5ｇ1000mL蒸餾水中，12115min。1mol/L NaOH成分NaOH 40