實(shí)驗(yàn)九碘-淀粉比色法測(cè)定血清淀粉酶-副本

碘-淀粉比色法測(cè)定血清淀粉酶

原理血清（或血漿）中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6糖苷鍵支鏈的糊精。在底物過(guò)量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管比較，從而推算出淀粉酶的活力單位。試劑操作步驟計(jì)算參考值試劑

1、0.4mg/ml底物緩沖液：4℃冰箱保存6個(gè)月。2、0.1mol/L碘貯備液：4℃避光保存6個(gè)月。0.01mol/L碘應(yīng)用液的配制:將碘貯備液:蒸餾水=1︰9稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配4℃避光保存。

操作步驟混勻，660nm波長(zhǎng)，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度。*注：不同樣本批量測(cè)試前需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定最佳取樣濃度，將(空白OD-測(cè)定OD)控制在0.05~0.150之間

1、單位定義：100ml血清（漿）中的AMS，在37℃與底物作用15分鐘，水解5mg淀粉為1個(gè)單位。2、公式：計(jì)算樣本最佳取樣濃度摸索

根據(jù)不同動(dòng)物血清及組織之間的差異，最好是在批量實(shí)驗(yàn)之前做個(gè)預(yù)試以確定最佳取樣濃度。例1：取大鼠血清用生理鹽水稀釋成不同濃度（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍），取樣0.1ml進(jìn)行檢測(cè)臨床意義淀粉酶可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)。流行性胰腺炎，特別是急性胰腺炎時(shí)，血和尿中的AMY顯著增高。急性胰腺炎發(fā)病后8~12h血清AMY開(kāi)始升高，12~24h達(dá)高峰，2~5d下降至正常。如超過(guò)500U有意義，達(dá)350U時(shí)應(yīng)懷疑有此病。尿中AMY約于發(fā)病后12~24小時(shí)開(kāi)始升高，下降也比血清AMY慢，因此在急性胰腺炎后期測(cè)定尿AMY更有價(jià)值。注意事項(xiàng)酶活性在400U以下時(shí)，與底物的水解量成線性。如測(cè)定管吸光度小于空白管吸光度一半時(shí)，應(yīng)加大血清稀釋倍數(shù)或減少稀釋血清加入量，測(cè)定結(jié)果再乘以稀釋倍數(shù)。草酸鹽、拘櫞酸鹽、EDTA-Na2及氟化鈉對(duì)AMY活性有抑制作用，肝素?zé)o抑制作用。唾液含高濃度淀粉酶應(yīng)防止帶入。淀粉產(chǎn)品不同，其空白吸光度可有明顯差異，一般空白吸光度應(yīng)在0.40以上。注意事項(xiàng)緩沖淀粉溶液若出現(xiàn)混濁或絮狀物，表示緩沖淀粉溶液受污染或變質(zhì)，不能再用，應(yīng)重新配制。本法適用于其他體液淀粉酶的測(cè)定。尿液先作20倍稀釋后測(cè)定。評(píng)價(jià)本法線形范圍<400U，批內(nèi)CV

3.1%~9.0%，批間CV12.4%~15.1%，與對(duì)-硝基苯麥芽庚糖苷法相比較，在酶活性低時(shí)相關(guān)性好，但酶活性較高時(shí)相關(guān)性差，因此，該法不