微生物的生長(zhǎng)

第四章微生物的生長(zhǎng)一、微生物的生長(zhǎng)二、微生物生長(zhǎng)的測(cè)定方法第一節(jié)微生物生長(zhǎng)的測(cè)定

單細(xì)胞微生物也有個(gè)體生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂繁殖這兩個(gè)過(guò)程。多細(xì)胞微生物的個(gè)體生長(zhǎng)則反映在個(gè)體的細(xì)胞數(shù)目和每個(gè)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)含量的增加。

在實(shí)際工作中，單個(gè)微生物細(xì)胞太小，研究單個(gè)微生物細(xì)胞的生長(zhǎng)比較困難，并且也無(wú)意義。

微生物的生長(zhǎng)是指微生物個(gè)體或群體細(xì)胞各組成成分按比例、有規(guī)律地不可逆增加的過(guò)程。微生物的生長(zhǎng)表現(xiàn)在微生物個(gè)體的生長(zhǎng)和群體生長(zhǎng)2個(gè)水平。一、微生物的生長(zhǎng)個(gè)體生長(zhǎng)

個(gè)體繁殖

群體生長(zhǎng)群體生長(zhǎng)=

個(gè)體生長(zhǎng)

+

個(gè)體繁殖

所以，微生物的生長(zhǎng)通常是指微生物的群體生長(zhǎng)??！也就是說(shuō)：微生物的生長(zhǎng)過(guò)程包含了微生物的繁殖過(guò)程。

在實(shí)際工作中，測(cè)定微生物細(xì)胞生長(zhǎng)的方法可以分為兩類。生長(zhǎng)的

測(cè)定方法

細(xì)胞計(jì)數(shù)法細(xì)胞生物量的測(cè)定

直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)器測(cè)定法平板菌落計(jì)數(shù)法

比濁法最大概率數(shù)法

間接計(jì)數(shù)法涂片計(jì)數(shù)法細(xì)胞的自動(dòng)計(jì)數(shù)法干重法含氮量測(cè)定法（一）、細(xì)胞計(jì)數(shù)法

鏡檢計(jì)數(shù)法適用于單細(xì)胞微生物數(shù)量的測(cè)定。測(cè)定時(shí)需借助計(jì)數(shù)板和顯微鏡。

細(xì)胞較小的細(xì)菌可采用比得羅夫—霍瑟細(xì)菌計(jì)數(shù)板，細(xì)胞較大的酵母菌、真菌孢子和血細(xì)胞則采用血球計(jì)數(shù)板。1、直接計(jì)數(shù)法（1）計(jì)數(shù)器測(cè)定法快速簡(jiǎn)便，但不能區(qū)別死活菌體，測(cè)得的是總菌數(shù)。利用直接計(jì)數(shù)法測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量時(shí)，菌懸液濃度不宜太低或太高（常大于106個(gè)/ml）。（2）涂片計(jì)數(shù)法將已知體積的待測(cè)樣品，均勻的涂布在載玻片的已知面積內(nèi)，經(jīng)固定染色后，在顯微鏡下選擇若干個(gè)視野計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。

每個(gè)視野可用鏡臺(tái)測(cè)微尺測(cè)量直徑并計(jì)算面積，從而推算出單位體積樣品中所含的細(xì)胞數(shù)量。（3）細(xì)胞的自動(dòng)計(jì)數(shù)法用電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器來(lái)計(jì)數(shù)。電子計(jì)數(shù)是通過(guò)測(cè)定一個(gè)小孔中液體的電阻來(lái)進(jìn)行。小孔僅能通過(guò)一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞通過(guò)這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，并作為一個(gè)脈沖記錄在一個(gè)電子標(biāo)尺上。使一份已知體積含有待測(cè)細(xì)胞的液體通過(guò)這個(gè)小孔，當(dāng)每個(gè)細(xì)胞通過(guò)時(shí)就被計(jì)數(shù)了。2、間接計(jì)數(shù)法（1）平板菌落計(jì)數(shù)法

將待測(cè)液按10倍遞增做一系列稀釋，然后選擇其中某連續(xù)三個(gè)稀釋度的菌液作涂布平板或傾注平板，在一定的條件下培養(yǎng)，那么分散的每一個(gè)細(xì)胞都將發(fā)育成一個(gè)菌落，再對(duì)平皿中菌落計(jì)數(shù)就可以推算出原始樣液中的活菌數(shù)。測(cè)得的是活菌數(shù)，手續(xù)繁雜，容易受影響

該方法主要是依據(jù)在適當(dāng)?shù)南♂尪认?，每一個(gè)微生物細(xì)胞可以繁殖成一個(gè)菌落，通過(guò)測(cè)定菌落的數(shù)量即可來(lái)推算菌懸液中的活菌數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：測(cè)定的是活菌數(shù)。缺點(diǎn)：操作煩瑣，時(shí)間長(zhǎng)N=每套平板的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷取樣體積數(shù)（2）最大概率數(shù)法

將一定量的稀釋液接種到新鮮合適的培養(yǎng)基上以后不出現(xiàn)繁殖為止。再選擇三個(gè)連續(xù)稀釋度作試管培養(yǎng)，根據(jù)出現(xiàn)生長(zhǎng)的管數(shù)，查找已編好的MPN（最大概率表），就可以計(jì)算出單位體積樣品中細(xì)胞的近似數(shù)。（1）比濁法

是一種快速測(cè)定菌懸液中微生物細(xì)胞數(shù)量的方法。當(dāng)光線通過(guò)菌懸液時(shí)，由于菌體細(xì)胞不能透光，會(huì)造成透光率下降。在一定的濃度范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與菌懸液的光密度（OD值）成正比，與透光度成反比。因此，可預(yù)先測(cè)定菌液濃度與OD值之間的關(guān)系曲線，然后可據(jù)此查得未知樣品中菌的相對(duì)數(shù)量。（二）測(cè)定細(xì)胞或原生質(zhì)總量的方法此法簡(jiǎn)單快速，但顏色不能太深，不能含有顆粒性雜質(zhì)。2、干重法

取一定量的菌液，用離心或過(guò)濾的方法將菌體分離出來(lái)，清洗后置于80~100℃烘箱中烘干至恒重或在60℃真空干燥至恒重后稱其重量。一般細(xì)菌干重約為濕重的20%~25%。

適用于含菌量高但不含其他溶性雜質(zhì)的樣品。蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要組分，氮又是蛋白質(zhì)的重要組分，且氮的含量是相對(duì)穩(wěn)定的，因此，可以借菌體含氮量來(lái)間接表示菌體的含量。

3、總氮量測(cè)定法

適用于菌體濃度較高的樣品，一般只適合研究工作。第二節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線一、單細(xì)胞微生物的生長(zhǎng)曲線二、掌握微生物生長(zhǎng)規(guī)律對(duì)工業(yè)生產(chǎn)的指導(dǎo)意義一、單細(xì)胞微生物的生長(zhǎng)曲線

細(xì)菌細(xì)胞雖小，但與其他生物細(xì)胞或個(gè)體一樣，也有從小到大的生長(zhǎng)過(guò)程。

將少量的細(xì)菌純培養(yǎng)物接種到恒定體積的液體培養(yǎng)基后，定時(shí)取樣測(cè)定培養(yǎng)基中的細(xì)胞數(shù)量，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的群體生長(zhǎng)具有一定的規(guī)律。

若以時(shí)間作橫坐標(biāo)，以活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值作縱坐標(biāo)，可以繪制出一條類似于S型的曲線，稱為細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。

緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期t0lgN1、緩慢期（延遲期）

當(dāng)細(xì)菌接種到新鮮的培養(yǎng)基后，細(xì)菌往往不會(huì)立即繁殖，需要經(jīng)過(guò)一定時(shí)間來(lái)調(diào)節(jié)自身的生理機(jī)能，以適應(yīng)新環(huán)境。因此，在曲線開始的一段時(shí)間，細(xì)胞數(shù)量幾乎不增加，生長(zhǎng)速率趨近于零，曲線平緩。特點(diǎn)：這個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短與菌種的遺傳性、菌齡、接種菌量、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期t0lgN2、對(duì)數(shù)期（指數(shù)期）

細(xì)菌在完全適應(yīng)新環(huán)境后，細(xì)胞開始轉(zhuǎn)入旺盛生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速率達(dá)到最大值，細(xì)胞呈幾何級(jí)數(shù)（2n）增加，進(jìn)入對(duì)數(shù)期。特點(diǎn)：對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)條件相同時(shí)，不同菌種的代時(shí)（即繁殖一代所需要的時(shí)間）是不相同的，相同菌種的代時(shí)則是穩(wěn)定的；培養(yǎng)條件不同時(shí)，同一菌種的代時(shí)也是不同的。此外，對(duì)數(shù)期的菌體整齊、代謝活躍、生長(zhǎng)快、染色均勻，群體中的細(xì)胞化學(xué)組成、形態(tài)、生理特征比較一致。緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期t0lgN3、穩(wěn)定期（平衡期）

在對(duì)數(shù)期以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)逐漸消耗，有害代謝產(chǎn)物積累，pH值變化等，使細(xì)胞生活力下降，細(xì)胞的繁殖速率開始下降，而死亡率上升，當(dāng)二者趨于平衡時(shí)，群體的活菌數(shù)達(dá)到最高并保持一段時(shí)間的相對(duì)穩(wěn)定。特點(diǎn)：處于穩(wěn)定器的菌體形態(tài)大小典型，生理生化反應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定，細(xì)胞開始積累貯存物質(zhì)，如肝糖、異染顆粒、脂肪粒等，大多數(shù)芽孢菌在這個(gè)生長(zhǎng)階段形成芽孢?？股睾湍承┟割愐苍趯?duì)數(shù)期和穩(wěn)定期轉(zhuǎn)換階段產(chǎn)生。

緩慢期對(duì)數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期t0lgN4、衰亡期穩(wěn)定期后如果繼續(xù)培養(yǎng)，菌體就會(huì)出現(xiàn)變形、自溶等現(xiàn)象，死亡率逐漸增加，活菌數(shù)迅速減少，這一階段稱為衰亡期。二、掌握微生物生長(zhǎng)規(guī)律對(duì)工業(yè)生產(chǎn)的指導(dǎo)意義（一）縮短緩慢期（二）延長(zhǎng)對(duì)數(shù)期（三）控制穩(wěn)定期（四）推遲衰亡期

微生物生長(zhǎng)是微生物自身的遺傳特性和外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。在一定限度內(nèi)，環(huán)境因子的變化，可導(dǎo)致微生物的形態(tài)、生理或遺傳特性的變化，但如果環(huán)境因子的改變超過(guò)了一定限度，則會(huì)造成微生物細(xì)胞的死亡。當(dāng)然，微生物也可在一定程度上通過(guò)自身的代謝活動(dòng)來(lái)改變環(huán)境條件，使之更適應(yīng)其生存和發(fā)展。

影響微生物生長(zhǎng)的環(huán)境因素較多，概括起來(lái)有三大類，包括物理、化學(xué)和生物因素。第三節(jié)微生物生存環(huán)境條件環(huán)境因素溫度

水分和滲透壓

pH值

氧氣和Eh

輻射線

超聲波

化學(xué)藥劑

物理因素化學(xué)因素生物因素一、溫度

溫度是微生物生長(zhǎng)的重要環(huán)境條件之一，不同微生物的生長(zhǎng)繁殖都需要一定的溫度范圍，表現(xiàn)為最低、最適和最高生長(zhǎng)溫度（即溫度三基點(diǎn)）。

1、微生物的生長(zhǎng)溫度范圍

根據(jù)微生物對(duì)溫度的要求和適應(yīng)能力，可將其分為嗜冷、嗜溫和嗜熱微生物三種類型：微生物類型最低(℃)最適(℃)最高(℃)生活環(huán)境嗜冷

微生物

專性

-12

5—15

15—20生活于兩極地區(qū)

兼性

-5—0

10—20

25—30

海水及冷藏食品

嗜溫

微生物

室溫

10—20

25—3040—45

土壤中、植物體內(nèi)等環(huán)境體溫

10—20

37—40

40—45

人及溫血?jiǎng)游矬w內(nèi)等環(huán)境嗜熱

微生物

專性25—45

50—5570—90生活于堆肥、溫泉、土壤表層等高溫環(huán)境中

2、溫度對(duì)微生物的作用

（1）最低生長(zhǎng)溫度對(duì)微生物的影響

最低生長(zhǎng)溫度是微生物生長(zhǎng)的溫度下限，低于此溫度，微生物的生長(zhǎng)就會(huì)受到抑制，但一般不會(huì)死亡。因此，可以利用低溫來(lái)保藏微生物或者保藏食物，常用的保藏溫度為4-8℃。

從最低生長(zhǎng)溫度到最適生長(zhǎng)溫度，隨著溫度的上升，細(xì)胞的代謝活性增強(qiáng)，生長(zhǎng)速率加快。

（2）最適生長(zhǎng)溫度對(duì)微生物的影響

最適生長(zhǎng)溫度是微生物生長(zhǎng)速度最快的溫度，但并非微生物代謝的最適溫度。

如：乳鏈球菌最適生長(zhǎng)溫度是34℃，細(xì)胞總量最高的溫度是25-30℃，而發(fā)酵速度最快溫度則為40℃，乳酸產(chǎn)量的最高溫度是30℃。

（3）最高生長(zhǎng)溫度對(duì)微生物的影響

微生物在最高溫度下僅有微弱生長(zhǎng)，而當(dāng)環(huán)境溫度超過(guò)微生物生長(zhǎng)的最高溫度后，將導(dǎo)致微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的不可逆破壞，蛋白質(zhì)、酶、核酸變性，最終將殺死微生物。

通常將能在10分鐘內(nèi)殺死微生物的溫度稱為致死溫度。

高溫可以導(dǎo)致微生物細(xì)胞死亡，因此，可以利用高溫來(lái)滅菌。

多數(shù)細(xì)菌、酵母菌、真菌和病毒的致死溫度為55-60℃；放線菌和真菌的孢子抗熱性比其營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞強(qiáng)，在75-80℃時(shí)，10分鐘才會(huì)被殺死；細(xì)菌的芽孢具有高度的耐熱性，可以耐受100℃的高溫；極少數(shù)細(xì)菌，如嗜熱脂肪芽孢桿菌在70℃下可以生長(zhǎng)，芽孢在121℃加熱12分鐘才會(huì)死亡。致死溫度：3、高溫滅菌的方法

干熱滅菌

濕熱滅菌

焚燒

恒溫干燥法

（耐熱的金屬和玻璃器皿、可燃燒的物品）

（常用，140-160℃，2h；耐熱的物品）

煮沸

巴斯德消毒法間歇滅菌

高壓蒸汽滅菌

超高溫滅菌（100℃，15min以上；不耐熱的物品）

（常用，0.2Mpa，121℃，20min；一般培養(yǎng)基、水、纖維制品）

（0.05MPa，110℃，20min；含糖培養(yǎng)基）

（60-70℃，15-20min；食品、飲料等）（100℃，每次2-3h，2-3次；不耐高溫的藥品，特殊培養(yǎng)基）

（130—140℃，0.5—1s，液體的飲料等）

二、水分和滲透壓

微生物細(xì)胞的含水量一般為70-90%，孢子或芽孢的含水量較低，只有60-70%。水分是微生物細(xì)胞代謝活動(dòng)必不可少的條件，如果外界環(huán)境過(guò)于干燥，將影響微生物的正常代謝，甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。

當(dāng)環(huán)境中缺水或大氣相對(duì)濕度低于70%時(shí)，微生物細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)受到抑制。因此，可以借用干燥的方法來(lái)保存食品和物品。

除缺水會(huì)直接影響微生物的生長(zhǎng)外，當(dāng)環(huán)境中滲透壓發(fā)生改變時(shí)，也可能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生生理性缺水，使細(xì)胞不能進(jìn)行正常的生長(zhǎng)代謝。因此，可用蜜餞或鹽漬的方法保存食品。

超聲波是指振動(dòng)頻率超過(guò)2萬(wàn)Hz的聲波。通過(guò)劇烈的振動(dòng)，使細(xì)胞破裂，引起細(xì)胞內(nèi)含物外泄死亡。

超聲波的破碎效果與處理功率、頻率、處理時(shí)間、微生物類型和生理狀態(tài)等因素有關(guān)。

在研究工作中，常用超聲波來(lái)破碎細(xì)胞。但超聲波處理時(shí)會(huì)釋放大量的熱能，所以，必須在冰浴中進(jìn)行，并作短時(shí)間的多次處理。三、超聲波(一)pH值

環(huán)境的pH值對(duì)微生物的生長(zhǎng)有較大的影響。微生物可在pH1-11的范圍內(nèi)生活，但不同的微生物對(duì)pH值的適應(yīng)性有較大的差異。大多數(shù)細(xì)菌、放線菌的最適pH值為7.0-8.0，適應(yīng)范圍5.0-10.0，真菌的最適pH值多為3.0-6.0。

pH值的改變常造成微生物代謝途徑的改變，并形成不同的代謝產(chǎn)物。

微生物也可以通過(guò)自身的代謝活動(dòng)改變環(huán)境的pH值，因此控制發(fā)酵液的pH是控制生產(chǎn)的指標(biāo)之一。常用方法：加入緩沖物質(zhì)、適時(shí)加無(wú)機(jī)酸堿或生理活性物質(zhì)等。應(yīng)用pH的殺菌：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿具有很強(qiáng)的殺菌力，但無(wú)機(jī)酸堿對(duì)人和器皿的腐蝕性強(qiáng)，故很少采用。乳酸、醋酸等有機(jī)酸對(duì)環(huán)境危害小，可用作防腐劑。石灰常用于環(huán)境衛(wèi)生的消毒。

（二）氧氣

氧氣對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響也較大。

不同的微生物對(duì)氧氣的需求不同，根據(jù)微生物對(duì)氧氣的要求，可以將微生物分為五大類：好氧微生物

厭氧微生物

兼性厭氧微生物

微好氧微生物

耐/忌氧微生物

微生物極少單獨(dú)存在，總是較多種群聚集在一起，當(dāng)微生物的不同種類或微生物與其他生物出現(xiàn)在一個(gè)限定的空間內(nèi)，他們見互為環(huán)境，表現(xiàn)出復(fù)雜的關(guān)系：（一）寄生（二）互生（三）共生（四）拮抗三、生物因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響二、化學(xué)消毒劑

不同的化學(xué)藥劑對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響是不同的。大多數(shù)化學(xué)藥劑只有在高濃度時(shí)才起殺菌作用，低濃度僅為抑菌作用，而極低濃度則沒(méi)有作用或?qū)ξ⑸锏纳L(zhǎng)有促進(jìn)作用。

化學(xué)藥劑對(duì)微生物的作用取決于藥劑濃度、作用時(shí)間和微生物對(duì)藥物的敏感性等。研究表明化學(xué)藥劑對(duì)微生物的作用主要表現(xiàn)為三方面：（1）破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如苯酚、乙醇。（2）干擾細(xì)胞能量代謝，如重金屬、CO和氰化物。（3）干擾物質(zhì)合成，如磺胺、氨基酸結(jié)構(gòu)類似物。

根據(jù)化學(xué)藥劑的性質(zhì)和使用目的，可分為五種類型：

有機(jī)化學(xué)藥劑無(wú)機(jī)化學(xué)藥劑染色劑表面活性劑

化學(xué)治療劑三、紫外線和射線

在環(huán)境中存在著各種能量的輻射線，不同能量的輻射線對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響不相同的?？梢姽獠ㄩL(zhǎng)397-800nm，是光能自養(yǎng)型和光能異養(yǎng)型微生物唯一的或主要的能量來(lái)源。1、紫外線（UV）

紫外線是波長(zhǎng)為100-397nm的非電離輻射線，具有較強(qiáng)的殺菌和誘變作用，其最強(qiáng)的作用波長(zhǎng)是265-266nm，這也是微生物細(xì)胞核酸的最大吸收波長(zhǎng)。

紫外線主要作用于細(xì)胞DNA，使相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體、使DNA斷裂或發(fā)生交聯(lián)，最終使微生物細(xì)胞變異或死亡。另外還可促使氧形成臭氧。

通常低劑量的UV可用于誘變育種，而高劑量的UV可殺菌，但其穿透力較弱，一般僅用作空氣、無(wú)色的水和器皿表面的滅菌。1.SPF值：一般類型皮膚的人8～12為宜；對(duì)光敏感的人12－20為宜；敏感性皮膚應(yīng)挑選植物配方的防曬品或是含有二氧化鈦的物理性防曬霜；只在上下班的路上接觸陽(yáng)光的上班族，15以下即可，以臉部防曬為主；在野外游玩、海濱游泳時(shí)30以上。游泳時(shí)最好選用防水的防曬護(hù)膚品。2.PA值：PA+有效防護(hù)時(shí)間大約4小時(shí)。PA++有效防護(hù)時(shí)間大約8小時(shí)。PA+++超強(qiáng)防護(hù)。2、電離輻射

電離輻射是高能電磁波，包括X-射線、α-射線、β-射線和γ-射線。這些射線的特點(diǎn)是波長(zhǎng)短，能量大，穿透力強(qiáng)，殺傷力大。對(duì)微生物有致死作用。常用的高能射線是利用60Co源產(chǎn)生的γ-射線。可用于不耐熱食品、塑料制品和草炭吸附劑的滅菌。激光有強(qiáng)烈殺菌能力的波長(zhǎng)是在250~800nm間，特別是265nm波長(zhǎng)最有效。微波是頻率在3×102~3×105MHz的電磁波。3、激光與微波四、接種室的空氣滅菌五、過(guò)濾除菌六、防霉劑1、有機(jī)化學(xué)藥劑（1）酚及其衍生物

酚類化合物是醫(yī)學(xué)上常用的消毒劑，其作用主要是損傷微生物的細(xì)胞膜，鈍化酶和使蛋白質(zhì)變性。苯酚的有效殺菌濃度為2-5%，但因具有難聞的氣味和對(duì)皮膚的強(qiáng)烈刺激性，很少在臨床上使用。甲酚、間苯二酚等苯酚衍生物的刺激性小，殺菌作用較強(qiáng)，常用于醫(yī)院對(duì)痰液、糞便及手術(shù)前的消毒。煤皂酚（來(lái)蘇爾）是乳化的甲酚溶液，常用3-5%的煤皂酚來(lái)消毒桌面、用具等。

（2）醇類

可通過(guò)細(xì)胞膜中的類脂而破壞膜結(jié)構(gòu)，并使蛋白質(zhì)變性，但對(duì)芽孢和無(wú)囊膜病毒的作用效果較差。70%的乙醇?xì)⒕ψ顝?qiáng)，常用于皮膚的消毒。加入1%的碘可使其殺菌力大大的增強(qiáng)。異丙醇的殺菌力較乙醇強(qiáng)，揮發(fā)性低，常用于皮膚和用具的消毒。

（3）醛類

醛可與蛋白質(zhì)的多種基團(tuán)發(fā)生共價(jià)結(jié)合而使之變性。37-40%的甲醛溶液俗稱福爾馬林，常用于保存生物標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)室用0.5-10%的甲醛溶液，加熱熏蒸進(jìn)行空氣消毒。其缺點(diǎn)是對(duì)眼睛和粘膜具有刺激性，穿透力較差，作用慢，氣味難聞。戊二醛的刺激性和異味均較小，殺菌力強(qiáng)，在3-10h內(nèi)可殺死細(xì)菌芽孢，常用2%戊二醛消毒醫(yī)療器械和用具。

（4）酸類

有機(jī)酸能抑制微生物酶和代謝活性，對(duì)人毒性小，常加入食品、飲料和化妝品中，以防止霉菌生長(zhǎng)。山梨酸鉀，苯甲酸鈉等常用于食品防腐。

可用5~10ml/m2的醋酸來(lái)熏蒸滅菌，所以釀醋的工人很少感冒。（5）新型有機(jī)化學(xué)殺菌劑

環(huán)氧乙烷是目前廣泛應(yīng)用的一種新型空氣和器械表面消毒劑，可使蛋白質(zhì)變性，能在4~18小時(shí)內(nèi)殺死微生物細(xì)胞和芽孢，常用于不耐熱物品的消毒，但缺點(diǎn)是毒性大、純品易爆，使用時(shí)需與CO2和N2混合使用。

2、無(wú)機(jī)化學(xué)藥劑

主要包括鹵化物、重金屬、氧化劑、無(wú)機(jī)酸和堿等。

常用碘和氯。（1）鹵化物碘可與酶或蛋白中的酪氨酸結(jié)合，對(duì)各類都有較好的殺菌作用。碘酒可用于皮膚、傷口和粘膜表面的消毒。氯包括氯氣和氯化物，可用作飲水、游泳池、垃圾場(chǎng)器具的消毒。氯氣和氯化物的殺菌作用在于產(chǎn)生次氯酸和原子氧，初生態(tài)的原子氧是強(qiáng)氧化劑，能破壞細(xì)胞膜，殺死微生物。

（2）重金屬及其化合物

重金屬離子具有很強(qiáng)的殺菌效力，以Hg+、Ag+和Cu2+的作用最強(qiáng)。重金屬離子進(jìn)入細(xì)胞后可與酶和蛋白質(zhì)上的巰基（-SH）結(jié)合，使之失活或變性。汞的化合物中常用的是0.1%的升汞（氯化汞）和有機(jī)汞，如紅汞、硫柳汞等。由于無(wú)機(jī)汞毒性較大，并具有殘留毒性，因此無(wú)機(jī)汞化物只用于種子表皮和器皿表面的消毒。有機(jī)汞毒性較小，可用于傷口和皮膚表面的消毒。銀的化合物以硝酸銀應(yīng)用較多，0.1~1%的濃度可用作滴眼劑和皮膚消毒劑。銅的化合物使用最多的是硫酸銅，一般用1ppm的硫酸銅防止藻類在清潔水體中生長(zhǎng)。波爾多液是硫酸銅與生石灰（CaO）的混合液，可用于防治農(nóng)作物的真菌病害。

（3）氧化劑

氧化劑主要通過(guò)對(duì)細(xì)胞成分的氧化作用來(lái)達(dá)到殺菌的目的。常用的有0.1%的高錳酸鉀和3%的過(guò)氧化氫。臭氧的氧化性非常強(qiáng)，可用于飲水的消毒，但目前的成本比較高。

3、染色劑

許多生物染色劑在低濃度下具有明顯的抑菌效果和一定的特異性。堿性染料的陽(yáng)離子基團(tuán)可與蛋白質(zhì)氨基酸上的羧基或核酸上的磷酸基團(tuán)結(jié)合，從而阻斷正常細(xì)胞的代謝過(guò)程。

常用的有結(jié)晶紫、吖啶黃等堿性染料。G+細(xì)菌對(duì)堿性染料十分敏感，結(jié)晶紫在3~10ppm即可抑制G+細(xì)菌的生長(zhǎng)，而對(duì)G-細(xì)菌的抑制濃度達(dá)到100ppm。

4、表面活性劑

表面活性劑是指可降低液體分子表面張力的化學(xué)物質(zhì)，如肥皂、洗衣粉等。表面活性劑能夠影響細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和透性，使細(xì)胞的某些必要成分（如K+）流失而引起微生物生長(zhǎng)停滯并死亡。肥皂和洗衣粉等陰離子表面活性劑的殺菌力不強(qiáng)，主要通過(guò)洗滌來(lái)減少微生物的數(shù)量。季胺類陽(yáng)離子表面活性劑具有