2012同等學(xué)力串講分子生物學(xué)老師

甘氨甘氨 丙氨丙氨 亮氨亮氨 苯丙氨酸苯丙氨酸phenylalanine 脯氨脯氨 2. 蛋氨 天冬酰天冬酰 谷氨酰谷氨酰 蘇氨蘇氨 33 aspartic glutamic 44.堿性氨基酸 氨基酸的理化性1、兩性等電點(isoelectricpoint,pI)—在某一pH的溶液中，氨電點

R—CH—COOH

R—CH—

R—CH—

R—CH— NH

3NH 3

2、紫外吸大吸收峰280nm附近（近紫外區(qū)）3、茚三酮反脯氨酸與茚三酮水合物共熱，可生成黃色(微量氨基酸定性或定量分析 二、肽鍵和肽鍵（peptidebond）——是由一個氨基酸的-羧基 H2N—C—C—OH+H—N—C—

-

H2N—C—C—N—C—

氨基酸殘基 氨基酸殘基肽鍵（—CO—NH—）是蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu) 肽9三、蛋白質(zhì)的分子結(jié)基本結(jié)構(gòu)一級

分子結(jié)

二級結(jié)構(gòu)（種類）β-轉(zhuǎn)（二級與三級之間）(超二級結(jié)構(gòu)

（一）蛋白質(zhì)的一級結(jié)蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)——指多肽鏈中氨基酸的排列順序。主要的化學(xué)鍵：肽鍵有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。多肽鏈中氨基酸的排列順序，肽鍵是主要連接（二）蛋白質(zhì)的二級結(jié)主要化學(xué)鍵：-螺-折-轉(zhuǎn)-螺

(1右手螺旋，每圈含3.6個AA(2)肽鍵平面與螺旋長軸平螺圈之間形成氫(3R分布在螺旋外（脯氨酸可以破壞-螺旋）-折 -轉(zhuǎn) 模體（motif）—通常具有特征性氨基酸序列，結(jié)合鈣離子的模 鋅指結(jié) 結(jié)構(gòu)域（）——在球蛋白分子中，在二纖纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)（三）蛋白質(zhì)的三級肽鏈中所有原子在三的排布位置。（較大的蛋CCVanderWaals力等

肌紅蛋白(N分子伴侶（molecularchaperone）——存在一類蛋白質(zhì)，可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合，隨后松開，引導(dǎo)肽鏈正確折疊，此類蛋白質(zhì)稱為分子伴侶。（熱休克蛋白、值得注意三維結(jié)構(gòu)，其一級結(jié)構(gòu)特征是富含親水性氨基酸殘基（特別是帶電荷的氨基），而疏水性氨基酸此類蛋U或者內(nèi)在非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)IUP）在全部蛋白質(zhì)分子中，大約30%具有部分非折疊結(jié)構(gòu)。（四）蛋白質(zhì)的四級結(jié) 構(gòu)四、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)（一）蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)HbA N-val·his·leu·thr·pro·glu· N-val·his·leu·thr·pro·val· （二）蛋白質(zhì)空間結(jié)肌紅Hb亞基結(jié)合后引起亞基構(gòu)象變化，稱為別構(gòu)效應(yīng)。的氧離曲線呈S形五、白質(zhì)的理化性（一）蛋白質(zhì)的兩性電蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團，在一定的溶液pH條蛋白質(zhì)的等電點(pI)——當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的體內(nèi)蛋白質(zhì)的等電點多在pH5.0左兩性解離和等電P

P

P （二）分子大小與

分子量范圍從大約6000到1000000或更纖維蛋白（不溶于水形球蛋白（一般溶于水。但膜蛋白是特殊的球蛋白，不溶于水，其疏水（三）蛋白質(zhì)的膠體性蛋白質(zhì)呈親水膠體的兩個穩(wěn)定因素水化+++++++水化+++++++–––––－－－帶正電荷的蛋白 負(fù)電荷的蛋白酸堿堿酸堿堿等電點的酸+

脫水作– +++

– －－帶正電荷的蛋白

不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)

負(fù)電（四）蛋白質(zhì)的紫外吸（五）蛋白質(zhì)的變性和復(fù)變性的本質(zhì)不改變蛋變性的因素：高溫、高壓、電離輻射、超聲波、紫 天然狀態(tài)，有催化

非折疊狀態(tài)，無活色劑：考馬斯亮藍(lán)、氨基黑等。此外，還有銀染法六、蛋白質(zhì)的分離、純23、蛋白質(zhì)帶電荷的不 種用膜，而蛋白質(zhì)被截留在膜上離利用物質(zhì)密度的不同，經(jīng)離心后，分布于不同的層而分離密度*分離純化蛋白*測分子*分離純化蛋白*測分子*脫度質(zhì)pI等電點時相鄰蛋白質(zhì)分子之間沒有靜電別純沉 的加入使水溶液的介電常數(shù)降低，使、乙醇、低溫方萃白質(zhì)的水化程度降低，因此促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的*該方法易使蛋白變性，操作中注意控制條蛋白方 原 種 用根據(jù)純方法

*分離鑒定質(zhì)*測亞基分利用對配

凝膠層析（分子篩離子交換柱層4親和層七、蛋白質(zhì)組和蛋白質(zhì)組 第五 核酸化一、核酸的化學(xué)(

98%以上分布于細(xì)胞核，其余分布 10％分布于細(xì)胞核、其余在細(xì)胞質(zhì) RNA也可作為 核酸的基本組成單位——核苷分子組成有3——堿基——核酸的存在部位、功能和化學(xué)組主要在主要在細(xì)胞遺傳信息的載遺傳信息的表2-脫氧核腺嘌呤A、鳥嘌呤腺嘌呤A、鳥嘌呤胞嘧啶C、胸腺嘧啶胞嘧啶C、尿嘧啶二、核酸的分子（一）核酸的基本組成單位——

OO242165H H核苷酸的連

核苷酸之間5ACTGCT人 組長度為3.2×109

AG(二)DNA

5′DNA二級結(jié)構(gòu)——雙螺旋結(jié)構(gòu)模型(B [A]=[T]、[G][C]以氫鍵配對DNA分子由兩條相互平行 相的脫氧多核苷酸A=T;GC.相鄰堿基平面距離0.34nm， 核小體。（核小體—是染色質(zhì)的基本組成單位）（DNA：約 組蛋白：H1、H2A，H2B、H3、5在有 4.DNA 信使轉(zhuǎn)運核糖體/白體3-是蛋白質(zhì)合成的模，其編碼區(qū)中每3轉(zhuǎn)運的氨核糖體中的rRNA，是核（具有催化功能的作堿基組成1個特異和識別催化肽鍵形成，并氨基酸子，將板mRNA種蛋白質(zhì)組裝成傳信息傳遞給蛋白的合成蛋白質(zhì)的。此外:還有一些其他類型的小分子RNA信使原核mRNA翻譯起始部位有特殊的堿基序列--SD序在起 AUG上游7～10個堿基處有一段富含嘌呤的列，其共有序列為GAG，稱為D序列（長4～6個堿基）真核mRNA結(jié)構(gòu)大多數(shù)真核mRNA5′末端都已7基鳥嘌呤-三磷酸核苷（m7GpppN）為起始結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)被稱為帽子結(jié)構(gòu)。它是由鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶加到轉(zhuǎn)錄后的mRNA分子上的。5′帽子結(jié)構(gòu)提供信號使核糖體小亞基與之結(jié)合，保護mRA免受核酸酶降解，并且與成mRNA從核內(nèi)輸送到細(xì)胞質(zhì)有關(guān)。帽子結(jié)構(gòu)后面是5′-UTR,編碼區(qū)，3′-UTR，3′末端有polyA大多數(shù)真核mRNA的3′末端有一個含20～250個腺苷酸的多聚腺苷酸（polyA)結(jié)構(gòu)，稱為多聚A尾。（polyA尾不是DNA編碼的，而是轉(zhuǎn)錄后加工產(chǎn)物，組蛋白沒有polyA尾）。polyA尾是真核mRNA 標(biāo)志之一脊椎動物、植物和酵母的mRNA起 子及其附近在保守的共有序列，即Kozak序列mRNA(intron)

外顯(exon)

mRNA的功把DNA所攜帶的遺傳信息，按堿基互補配對原則，抄錄并傳送至核糖體，用以決定其合成蛋白質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄后剪翻2、轉(zhuǎn)運tRNA的二級結(jié)構(gòu)—三葉草氨基酸氨基酸（tRNA含稀有堿基比較多

tRNA的三級結(jié)構(gòu)—LtRNA的功 3、核糖體

rRNA的種類（根據(jù)沉降系數(shù)rRNA的功參與組白體，作為蛋白質(zhì)

核糖原核生真核生

小

蛋白種動物細(xì)胞內(nèi)主要的RNA種類及功細(xì)胞核和線粒功白體 白體組成成 (不均一核成熟mRNA的前信使蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運轉(zhuǎn)運氨基細(xì)胞內(nèi)小核內(nèi)小參與hnRNA的剪接、轉(zhuǎn)核仁小胞質(zhì)小rRNA的加蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成信微RNA（miRNA）22(約20～25）個。雙鏈RNA，產(chǎn)生 等，這一細(xì)胞反應(yīng)過程稱為RNA干擾（RNAi）三、核酸的理化性質(zhì)和 核酸在260nm處有最大光吸收DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的

DNA的GC含量越高，Tm值越大第二章酶（一）概酶是一類由活細(xì)胞產(chǎn)生的，對其特異底物具有用的蛋白質(zhì)核酶是具有催化功能的RNA分子（二）酶的分子組成和單純酶：僅由氨基酸構(gòu)成的酶。如脲酶、淀粉酶、脂酶酶蛋白：決定酶的特全 金屬離輔因

輔基:與酶蛋白結(jié)合輔酶:與酶蛋白結(jié)合疏 （透析易除去活性中心內(nèi)的必需基團的作

催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)酶易失活（變性酶的活性可受到調(diào) ：是指其催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力通常利用在一定條件下所催化的反應(yīng)速度表示 大 單⑴概念：在一定條件下和時間內(nèi)，將一定量的底物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物所需要的酶量。（U/g或⑵國際單位(IU)：在最適反應(yīng)條件下（250C），每分鐘化1微摩爾底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物所需的酶量定義為１個IU⑶ ：表示酶的純度。用每毫克蛋白質(zhì)所含 越大,酶的純度越高⑴轉(zhuǎn)換數(shù)（Kcat）：是酶的催化常數(shù)其定義為在一定條件下每秒鐘每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的摩爾酶轉(zhuǎn)換底物的微摩爾數(shù)。多數(shù)酶的at－104。⑵米氏常數(shù)（Km）：是酶的特征性常數(shù)在數(shù)值上等于酶促速度達(dá)到最大速度一半時的底物濃度(mol/L)⑶v Km+Kcat/Km比值：作為酶催化效率的參數(shù)。（一）過渡態(tài)、活化能在一個化學(xué)反應(yīng)體系中，反應(yīng)物分子的能量有處于較高能量狀態(tài)的活化分子根據(jù)酶-底物反應(yīng)的中間復(fù)合物學(xué)說：E＋S ESE＋酶催化作用的機制類型有:鄰近效應(yīng)、一般酸堿催化、親電催化、靜電效應(yīng)和誘導(dǎo)契合。多數(shù)酶蛋白在催化過程中同時利用兩種或兩種以上催化機制 能量

酶促反應(yīng)活化能的改 反應(yīng)物在反應(yīng)前的能量狀態(tài)（活化態(tài)指反應(yīng)物在反應(yīng)途徑中能量最高、最不穩(wěn)定的形此時化學(xué)鍵正在斷裂或在一定溫度下，1摩爾底物全部進(jìn)入活化狀態(tài)所自由能，等于過渡態(tài)和基態(tài)的自由能差（KJ/mol）結(jié)合是形成酶-底物復(fù)合物過程中釋放的能量，主要來酶和底物之間結(jié)合的次級鍵，每個次級鍵的 放出少量自由能。這是降低酶促反應(yīng)活化能和穩(wěn)定常見的酶活性調(diào)節(jié)方

某些酶在其它酶催

行,一般不消耗能飾逆化下，學(xué)使其肽鏈上的特共殊基團發(fā)修生可逆的共價價修飾，快速飾改變酶活性，修稱為化學(xué)修調(diào)飾調(diào)節(jié)，或酶飾共價修飾調(diào)節(jié)節(jié)。 共別蛋白構(gòu)象改變，從而影響價構(gòu)酶的活性稱別構(gòu)調(diào)節(jié)。這修調(diào)種酶稱為別構(gòu)酶。飾

四、核酶定義：具有催化功能的RNA分子。類型：類型I和類型II自我剪接內(nèi)M1RNA(存在于RNaseP,參與tRNA前體加工 和 丁 的正、負(fù)鏈RNA（線粒體逆轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒核糖體大亞基rRNA(肽?；D(zhuǎn)移酶活性gRNA(參與RNA編輯某些snRNA(參與真核RNA前體剪接)特點：催化反應(yīng)動力學(xué)特征與蛋白酶相似Km低(RNA與底物結(jié)合的專一性較強Kcat低(催化速度慢第六章DNA的生物合成 )與損傷修遺傳信息的流向 蛋白鏈DNA為模板合成子鏈DNA的過程。遺傳信 多數(shù)以DNA鏈為模板鏈，按照堿基互補原進(jìn)行合成。 以RNA鏈為模板鏈需要耗能，能量來自底物NTP（或dNTP）特異的聚合酶催化核酸的生物合成（二 的一般特1.半保 (semi-conservative 親代 子代 雙 由一 起點形成移動方向相反的兩 （leadingstrand）；而另一條鏈的合成方向 叉的 這些小片段被稱為岡崎片段(Okazakifragments)，岡崎片（laggingstrand）。這種方式稱為半不連 起點是指 所必需的一段特殊的DNA序列細(xì)菌、質(zhì)粒 和酵母通常具有比較明顯 起點長約200～300bp。哺乳動 子(replicon)：是一個獨立的DNA 子子引物所DNA聚合酶均不能從游離的核苷酸開末端,通過加入核苷酸使DNA鏈得以延伸。引物的主要形式是RNA，少量的（噬菌體）以DNA或者核苷酸（結(jié)合蛋白質(zhì)）為引物參與 解旋酶類 酶；④DNA連接酶等。此外，的起始、延伸和終止階段均需要其他酶和 參與 的物模板(template解開成單鏈的DNA母引物(primer提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合底物(substrate):dATP,dGTP,dCTP,dTTP聚合酶(polymerase):依賴DNA的DNA聚合酶，簡 物種遺傳的保守性，又能通過變異不斷進(jìn)滾環(huán) 和噬菌體4．D-環(huán)（線粒體5．2D-環(huán)（葉綠體（三）大腸桿菌DNA 的過起始(延長終止1 起始點oriC被DnaADnaB蛋白具有解螺旋DnaC蛋白使DnaB蛋白結(jié)合于起始點，DNA雙鏈局部被打開，物酶及其他蛋白加入，形 體（primosome）形成拓?fù)洚悩?gòu)酶使分子的超螺旋構(gòu)象變化，使DNA結(jié)、纏繞等， 全過程中起作用解鏈酶的作用是解開解螺旋酶在蛋白因子的輔助下打開DNA雙鏈單鏈結(jié)合蛋白SSB結(jié)合于處于單鏈狀態(tài)模板合成引物體中的引物酶 酶DnaG）催化合成RNA引物引物長度11-12nt，5’端為pppAG,由引物提供3’-OH 開始進(jìn)行2 2鏈的延長：在DNApolIII的作用下，使鏈延長3 物，引物留下的空隙由DNApolI催化自方向延DNA連接酶：將兩個不連續(xù)片段相鄰的5’-P和3’-OH連接起來，成為連續(xù)的子鏈， 的終止：隨從鏈上不連續(xù)性片段的連RNA

DNA-polPDNA2、反義RNA(antisenseRNA)——能夠互補和 或者mRNA），并抑制其功能的RNA分子（四）DNA聚合1、原核生物的DNA聚合酶有DNA-pol功能： 中的錯誤進(jìn)行校讀， 和修復(fù)中DNA-pol功能：它參與DNA（在無DNApolI和DNApolIII時起作用,具3’5核酸外切酶活性。 功能：是原核生 ）5’→3’聚合活性，3’→5’核酸外切酶活 N DNA-pol C323個氨基5

大片段/Klenow片段5核酸外切酶活 2、真核生物的DNA聚合DNA-pol ，有引物酶活性(合成引物)DNA-pol ,修復(fù)DNA-pol 粒體 DNA-pol延長子鏈的主要酶，有解螺旋酶DNA-polDNA-pol

DNA聚合酶性質(zhì)比較（均具有5’→3’聚合酶活性DNA聚合酶1＋＋DNA聚合酶1＋—DNA＋—（延長過程4——1——2＋—2＋—核5＋—（五）端粒和端端粒(omere)——真核生物線性DNA分子末端的特殊結(jié)構(gòu)。由特殊的重復(fù)序列組成；對的穩(wěn)定性起重要作用，防止后隨鏈最后一個岡崎片段的端粒酶——是一種核糖白(RNP)，具逆轉(zhuǎn)錄酶活功能：維持的穩(wěn)定維持DNA（六 的忠實 的保真性至少要依賴三種機 ；出錯時DNA-pol的及時校讀功(’5’核酸外切酶活性)二、DNA損傷修 （一）（二）切除修復(fù)（前修復(fù)堿基切除修復(fù)系②核苷酸切除修復(fù)堿基切DN糖苷酶特異識別DN中發(fā)生改變的堿基，例如，胞嘧啶脫氨基產(chǎn)生的并通過水解將其除去，接著AP核酸內(nèi)切酶迅速識別這個丟失堿基的露位點，在其5’端切斷磷酸二酯鍵，再由磷酸二酯酶切除脫氧核糖磷酸殘基。最后，由DNA聚合酶和連接酶將缺口修錯配修在DNA完成以后，依賴模板提供的信息，以將精確度提高100～1,000倍。步驟：①識別②尋找錯配③切除修（三）重組修 （四）應(yīng)急反應(yīng) 三、反轉(zhuǎn)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）——以RNA為模板、以dNTP為料、由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成DNA的過程。這一過程剛好與轉(zhuǎn)錄相反，所以被稱為反轉(zhuǎn)錄，這種酶叫作（逆轉(zhuǎn)錄酶）DNA指導(dǎo)的DNA聚合RNaseH種 突變率高，不斷出現(xiàn) 株的原因逆轉(zhuǎn)錄細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)RNA模DNA-RNA雙鏈第七章RNA生物合成和一、轉(zhuǎn)錄（transcription 達(dá) 蛋白質(zhì)和多肽 模 兩股鏈模板鏈轉(zhuǎn)錄（不對稱轉(zhuǎn)錄原 產(chǎn) 配 A-T，G- A-U，T-A，G-注：DDDP是依賴于DNA的DNADDRP是依賴于DNA的RNA 3′·cgtgatgtaca 轉(zhuǎn) 翻N ·Val·His·Val

mRNA（正鏈（二）RNA(RNApolymerase,RNARNA聚合酶（RNApol）——是以雙鏈DNA的一條鏈RNApol不同于DNApol，它無校對功能，不需引物新的RNA鏈的合成方向為：5＇→3＇ 單鏈不需要啟動子起單鏈不需要啟動子起始延40終止合成的模板校正功無有原核生物的RNA聚合亞 分子 亞基數(shù) β＇ 決定哪 被轉(zhuǎn) 識別啟動子,辨認(rèn)起始點,轉(zhuǎn)錄起注：α2ββ’ 酶，起催化RNA鏈延長的作有多種(如：70)，識別不 的啟動

真核生物的RNA聚合種 核 核 核45SrRNA,加 5SrRNA產(chǎn)生3種 U1- -鵝膏耐 極敏 敏真核生物RNA-Pol比原核生物RNA-pol復(fù)雜,含13-15個亞基分三類 亞共同亞基：3種RNA-pol共特異亞基：每種RNA-pol有4-7RNA-polⅡ的最大亞基的C端結(jié)構(gòu)域若干個7肽重復(fù)序列(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-

反式作用因指能夠調(diào) 表達(dá)的因子是RNApol識別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA細(xì)菌啟動子特有轉(zhuǎn)錄起點：轉(zhuǎn)錄起點的堿基90%以上是嘌呤2-103-35序分別以-10序列、-35序列為中心，各含6bp，其中富含A/T原核生物的啟動子區(qū)有兩個高度保守的序列-35區(qū)的TTGACA序列：RNApol的轉(zhuǎn)錄-10區(qū)的TATAAT（Pribnow盒）序列：為轉(zhuǎn)錄起-10和-35序列之間保持一定間隔距一般為16-18bp，在空間上利于RNApol的結(jié)不同的啟動子RNApolRNA聚合酶保護區(qū)結(jié) 53-35

-10

13135TTTTGACAACTG(recognitionsite)

TATTATAATATATTA真核生物的啟動子特點 起始上游-100-200bp范圍內(nèi)。 啟動子：包括TATA盒和起始子定轉(zhuǎn)錄起2啟動子近側(cè)序列元件：位于 處。包括GC盒、CAAT盒和OCT(八聚體)等。決注：TATA盒結(jié)合蛋白(TBP)具有結(jié)合TATA盒的作用2、增強子因子識別與結(jié)合的順式作用元件，能調(diào)（常為增強）鄰近的轉(zhuǎn)錄活性。部位：一般位于轉(zhuǎn)錄起始點上游或下游50kb處，但在特點：1增強子的轉(zhuǎn)錄激活作用與其位置和2有些增強子具有組織特異負(fù)增強子(negativeenhancer)又稱沉默子

順式作用元-GCGC---CAAT---增強CAATCAAT 或RNA中既能被轉(zhuǎn)錄又能被翻（四）轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子——是指RNApol起始轉(zhuǎn)錄需要的輔助因子有4種模體：螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(helix-turn-鋅指結(jié)構(gòu)(zincfinger亮氨酸拉鏈(leucine螺旋-環(huán)-螺旋(helix-loop-②激活結(jié)構(gòu)域:負(fù)責(zé)與轉(zhuǎn)錄裝置中的其他組分相互

（五）終止子及終止因終止子：是提供轉(zhuǎn)錄停止信號的DNA因子（蛋白質(zhì)）原核生物的終止子有兩種類①不依賴ρ因子的終止轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物3端形成富含/的發(fā)夾結(jié)構(gòu)點出現(xiàn)寡聚U，使RNA聚合酶脫離模板而終止轉(zhuǎn)錄。②依賴ρ因子的終RNA生物合成的抑制特 舉嘌呤和嘧啶類似 *人工合成的堿基類似物 6-巰基嘌（堿基類似物 能夠抑制和干擾核酸的合 5-氟尿嘧DNA模板功能的抑制劑*與DNA結(jié)合，使DNA失去轉(zhuǎn) 烷化劑,放線菌素的模板功能，從而抑制其 RNA聚合酶抑制 *抑制革蘭氏陽性菌和結(jié)核枝桿菌的RNA聚合酶的亞基

抑制真核生物的RNA聚合 α-鵝膏蕈二、轉(zhuǎn)錄過原核生物與真核生物轉(zhuǎn)原核生 真核生

RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH3

轉(zhuǎn)錄因子和RNApol象；RNApol前移處處遇上核小三、轉(zhuǎn)錄后加原核生物的轉(zhuǎn)錄后加rRNAtRNAmRNARNAaseⅢ切割，產(chǎn)生16S5SrRNA的中間前5’端由RNAaseP切割加3’端由RNAaseD加工。①核酸內(nèi)切酶兩端切酶切割后③3’端加-CCA-④核苷酸的修飾和異真核生物的轉(zhuǎn)錄后加 tRNA前 mRNA前①rRNA前體(45S)RNAaseⅢ切割產(chǎn)生28S5.8S和18SrRNA的中前體②核酸內(nèi)切酶加工及甲基修飾至成熟

5’端由RNAaseP負(fù)責(zé)加工 復(fù)3’端的加工需要多種核②堿基經(jīng)修飾和異構(gòu)化形稀有堿基(DHU、T、I、注：對rRN自我剪切加工的研究中，發(fā)現(xiàn)了“”（ibzme），它是具有錘頭型或發(fā)卡型二級結(jié)構(gòu)并具有催化活性的一類核糖核酸。

5’3’端加

真核生物mRNA前體的轉(zhuǎn)錄后加*轉(zhuǎn)錄開始不久，mRNA的5’端加上一個7-m7Gppp，G來自GTP。帽子結(jié)構(gòu)有3種類型甲基來自S-腺苷甲硫氨酸（SAM）*PolyA位點上游10-30個核苷酸處有一個保守的加尾信號polyA聚合酶在polyA位點加上100-250個A尾。內(nèi)部甲基化*主要是N6-甲基腺嘌呤（m6A）。 *即去掉內(nèi)含子，連接外顯子。外顯子和內(nèi)含子交界處的共有序列（內(nèi)含子5’端為GU-3’AG，這就是GU-AG規(guī)則）參與mRNA剪接方式分類型Ⅰ自我剪接，類型Ⅱ自我剪接，核mRNA剪接體的剪接，核tRNA的酶促剪接，反式剪接，選擇性剪接，polyA位點選6種U系列snRNA（U1-U3在核仁參與rRNAU2-U6參與snRNP共有系統(tǒng)性紅斑狼瘡 Sm是U1、U2、U4、U5snRNP的共有蛋白

四、 ,是以

SARS脊髓灰質(zhì)炎HIV白血病 肉瘤病第八章蛋白質(zhì)的生物合成（翻譯遺傳，將特定序列的氨基酸通過肽鍵結(jié)合,形成多肽鏈的過程，是表達(dá)的重要階段。 方向，每3個相鄰核苷酸組成1個

一、蛋白質(zhì)合成–mRNA（messengerRNA,信使–rRNA（ribosomal 白體–tRNA（transferRNA,轉(zhuǎn)移基本原料：20種氨基酸酶及眾多蛋白因子，如IF、ATP、GTP

二、mRNA及遺遺傳學(xué)將編碼一個多肽的 位稱為順反 轉(zhuǎn)錄生成的mRNA可編碼幾種功能相關(guān)的蛋白質(zhì)，為多順反子(polycistron)。cistron)。原核生物的多順反子(即一條mRNA鏈編碼多個功能相關(guān)的蛋白質(zhì)5 真核生物的單順反子(一條mRNA鏈只能編碼一種多肽鏈)5mG-

編碼序 起

終 mRNA上存在遺傳。mRNA分子上從5至3方向，由AUG開始，每3個核苷酸為一組，決定肽鏈上某一個氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止信號，稱為三聯(lián)體(tripletcoden)或子(coden)。起始(initiation終止(termination 核苷酸：AUGC43= 氨基

AG遺 的特點遺 終 子UAA、UAG、起 遺 具有以下特 擺動性（ 間不嚴(yán)格遵守常見的堿基配氨基酸活化——氨基酰氨基酸活化——氨基酰-tRNA合成酶蛋白質(zhì)肽鏈延 整個翻譯過程可分為：翻譯的終止(termination(一)氨基酸的活化與轉(zhuǎn)氨基酸的活化：氨基酰-tRNA合成(aminoacyl-tRNA氨基酰ii真核生物：Met-tRNAMetii

(甲酰甲硫氨酰-tRNA

（二）蛋白質(zhì)生物合成的基本過1imRNA和起始氨基酰-tRNA(Met-tRNAMet)，分別與白體結(jié)合而形成翻譯起始復(fù)合物(translationalinitiationcomplex)。iiitRNA

原核生物翻譯過白體結(jié)構(gòu)P位：肽酰(peptidylA位：氨基酰(aminoacylE位(exit根據(jù)mRNA序列的指導(dǎo)，次序添加氨基酸，從N端向C端延伸肽鏈，直到合成終止的過程。（肽鏈NC端） 白體循環(huán)(ribosomalcycle)，每次循環(huán)增加一個進(jìn)位成肽(peptidebond轉(zhuǎn)位真核生物肽鏈合成的延長過程與原核基本

①進(jìn)位——氨酰－tRNAA位點，需要GTP水解提供能②成肽——P位點肽酰-tRNA上肽多基團酯鍵的羰基，與A位點氨酰肽肽鏈延體大亞基rRNA伸③轉(zhuǎn)位——核糖體沿mRNA伸方向移動一個子，肽酰-tRNA

Tu和EF-Ts

(真核(真核成13、肽鏈合成的當(dāng)mRNA上終止 肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA 白體等分，這些過程稱為肽鏈合成終止翻譯終止：需要釋放因子和終 ①釋放因子識別并結(jié)合出現(xiàn)在A位上的終 ②肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ富钚?，使連接多③多聚白四、蛋白質(zhì)合成后加工和輸從白體釋放出的新生多肽鏈不具備蛋白質(zhì)肽鏈一級結(jié)構(gòu)的修 個別氨基酸的修高級結(jié)構(gòu)修 亞基聚

過程原真－1和IF－3，然后與mRNA結(jié)合,依靠mRNA的SD序列和16S －2和IF－3離開，最后形成Met－tRNAMet和i起始因IF-1、2和已發(fā)9種多①進(jìn)位——氨酰－tRNA進(jìn)入核糖體A位點，需要GTP肽 提供能量延酰－tRNA上氨基酸的α－NH2形成肽鍵，并轉(zhuǎn)移到A位上，使多 肽酰－tRNA由A位轉(zhuǎn)移到P位，A位空出。空載tRNA經(jīng)E位點脫落。需要GTP水解提供能量。翻①釋放因子識別并結(jié)合出現(xiàn)在A位上終 子譯終②肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ富钚裕惯B接多止C端和tRNA的酯鍵發(fā)生水解,釋放多肽鏈和tRNA③核糖體大、小亞基解

2五、蛋白質(zhì)合成的能量消耗和翻譯忠實耗能過能量供體（消耗耗能過能量供體（消耗高能磷酸鍵數(shù)氨酰－tRNA合ATP（2個肽鏈延伸移GTP（1個GTP（1個能量六、蛋白質(zhì)合成抑制蛋白質(zhì)合成抑制劑的作用點、作用原理和應(yīng)2011年同等學(xué)力人員申請學(xué)科試卷分代表谷氨酸的符號【答案】

【解析】谷氨酸的代表符號是Glu33 aspartic glutamic 44 蛋白質(zhì)在280nm紫外光區(qū)有最大光吸收的主A．芳香族氨基【答案】

B．酸性氨基D．【解】含共軛Л鍵的芳香族氨基酸（如色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸）其特征光吸收波長為。（四）蛋白質(zhì)的紫外吸B．所有原子在空間的位E．【答案】【解析】蛋白質(zhì)分子的三級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈中整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位即肽鏈中所有原子在 的排布位置

（三）蛋白質(zhì)的三級肽鏈中所有原子在三的排布位置。（較大的蛋CCVanderWaals力等

肌紅蛋白(ND．一級結(jié)構(gòu)不變，三級結(jié)構(gòu)改E．一級、二級、三級和四級結(jié)構(gòu)均改【答案】【】的一級結(jié)構(gòu)不改變，由于破壞了非共硫鍵，所以蛋白質(zhì)的（五）蛋白質(zhì)的變性和復(fù)變性的本質(zhì)不改變蛋變性的因素：高溫、高壓、電離輻射、超聲波、紫 酶蛋白的米氏常取決于溫度和酶的濃與酶蛋白對底物的親和力無關(guān)E．等于酶蛋白每秒鐘轉(zhuǎn)換底物的分子【答案】【解析】速度一半時的底物濃度?？山频乇硎久概c底大底關(guān)系密

⑶ ：表示酶的純度。用每毫克蛋白質(zhì)所含 越大,酶的純度越高3．轉(zhuǎn)換數(shù)和米氏⑴轉(zhuǎn)換數(shù)（Kcat）：是酶的催化常數(shù)其定義為在一定條件下每秒鐘每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的摩爾酶轉(zhuǎn)換底物的微摩爾數(shù)。多數(shù)酶的at－104。⑵米氏常數(shù)（Km）：是酶的特征性常數(shù)在數(shù)值上等于酶促速度達(dá)到最大速度一半時的底物濃度(mol/L)有催化活性的RNA分A．統(tǒng)稱核C．都是人工合成

E．【答案】【解析】核酶泛指具有催化功能的RNA分子第二章酶（一）概酶是一類由活細(xì)胞產(chǎn)生的，對其特異底物具有用的蛋白質(zhì)核酶是具有催化功能的RNA分子（二）酶的分子組成和單純酶：僅由氨基酸構(gòu)成的酶。如脲酶、淀粉酶、脂酶酶蛋白：決定酶的特全 金屬離輔因

輔基:與酶蛋白結(jié)合輔酶:與酶蛋白結(jié)合（透析易除去

體內(nèi)激活無活性的胃蛋白酶酶原的主要方式【答案】

【】的前體（酶原）去除部分肽段這一過程稱為蛋（又稱酶原的激活消化酶（白酶等）就是通過蛋白酶解激活的例子常見的酶活性調(diào)節(jié)方 非

行,一般不消耗能 蛋白激酶所轉(zhuǎn)移的磷酸基團的來源通常E．GTP的β-磷酸基【答案】

B．ATP的β-磷酸基團【解析】在化學(xué)修飾的調(diào)節(jié)中，磷酸化和去磷酸化激酶將ATP的γ-磷酸基團轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞的常見的酶活性調(diào)節(jié)方 非

行,一般不消耗能 符號“A”代表的核酸分子的堿基組分【答案】

【解析】組成核酸分子（A）、鳥嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、尿嘧（U）和胸腺嘧啶（T）核酸的存在部位、功能和化學(xué)組主要在主要在細(xì)胞遺傳信息的載遺傳信息的表2-脫氧核腺嘌呤A、鳥嘌呤腺嘌呤A、鳥嘌呤胞嘧啶C、胸腺嘧啶胞嘧啶C、尿嘧啶E．核糖核苷【答案】

【解析】核酸由脫氧核糖核酸DNA)和核糖核第五 核酸化一、核酸的化學(xué)(

98%以上分布于細(xì)胞核，其余分布 10％分布于細(xì)胞核、其余在細(xì)胞質(zhì) RNA也可作為

合成前導(dǎo)C．切除引

合成后隨合成引合成前導(dǎo)鏈和后【答案】【解析】在原核生物DNA DNA聚合酶性質(zhì)比較（均具有5’→3’聚合酶活性DNA聚合酶1＋＋DNA聚合酶1＋—DNA＋—（延長過程4——1——2＋—2＋—核5＋—DNA聚合酶α在真核DNA 合成引【答案】

合成后隨D．合成前導(dǎo)【解析】在真核DNA 時，DNA聚合酶α有合DNA聚合酶性質(zhì)比較（均具有5’→3’聚合酶活性DNA聚合酶1＋＋DNA聚合酶1＋—DNA＋—（延長過程4——1——2＋—2＋—核5＋—逆轉(zhuǎn)錄是E．水解RNA【答案】【】逆轉(zhuǎn)錄是指以RN為模板、以P為原料、由逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成A的過程一過程剛好與轉(zhuǎn)錄相反，所以被稱為逆轉(zhuǎn)錄。5三、反轉(zhuǎn)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）——以RNA為模板、以dNTP為料、由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成DNA的過程。這一過程剛好與轉(zhuǎn)錄相反，所以被稱為反轉(zhuǎn)錄，這種酶叫作（逆轉(zhuǎn)錄酶）DNA指導(dǎo)的DNA聚合RNaseH種 突變率高，不斷出現(xiàn) 株的原因細(xì)菌的啟動子C．DNA聚合酶結(jié)合并開始的位點D．RNA聚合酶結(jié)合并開始E．起【答案】【解析】細(xì)菌的啟動子是RNApol識別、結(jié)合RNA聚合酶識別、結(jié)合并啟動的DNA序列

1.啟動子是RNApol識別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA（1）細(xì)菌啟動子特有轉(zhuǎn)錄起點：轉(zhuǎn)錄起點的堿基90%以上是嘌呤2-103-35序分別以-10序列、-35序列為中心，各含6bp，其中富含A/T原核生物的啟動子區(qū)有兩個高度保守的序列-35區(qū)的TTGACA序列：RNApol的轉(zhuǎn)錄-10區(qū)的TATAAT（Pribnow盒）序列：為轉(zhuǎn)錄起-10和-35序列之間保持一定間隔距一般為16-18bp，在