GB/T 23239-2009伊氏錐蟲病診斷技術

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犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏錐蟲病診斷技術

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２００９０３０９發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２３２３９—２００９

前言

本標準的制定參照了世界動物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）編寫的《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊（哺乳動物、

禽鳥與蜜蜂）》（第五版，２００４）。

本標準的附錄Ａ、附錄Ｂ和附錄Ｃ為資料性附錄。

本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口。

本標準起草單位：中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所。

本標準主要起草人：周金林、沈杰。

Ⅰ

書

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏錐蟲病診斷技術

１范圍

本標準規(guī)定了新鮮血片、薄血涂片染色、毛細管集蟲、實驗動物接種等病原鑒定方法和乳膠凝集試

驗、間接血凝試驗和酶聯免疫吸附試驗等血清學試驗技術。

本標準適用于伊氏錐蟲病的診斷、檢疫、流行病學調查。

２臨床診斷

依家畜種類不同，臨床癥狀表現不同。馬（騾、驢）一般呈急性經過，感染后，體溫突然升高到４０℃

以上，稽留數日，而后經短時間的間隙，再行發(fā)作，體表水腫為常見癥狀，結膜和第三眼瞼常有出血斑。

黃牛、水牛及駱駝等一般呈慢性經過，有不定期的間歇發(fā)熱，食欲不振，消瘦，腫腳和耳、尾干枯癥狀，許

多慢性感染病例無明顯病變。

有以上臨床癥狀者，可以懷疑感染，確診需要實驗室檢驗。

３病原鑒定

３．１采血樣

可從耳靜脈或尾靜脈采取外周血，從頸靜脈或其他大靜脈采取深部血液，因伊氏錐蟲喜歡寄生于深

部血液，處于低蟲血癥時，外周血檢出率常低于深部血的５０％。

３．２新鮮血片檢查

在干凈載玻片上滴上一小滴鮮血，蓋上蓋玻片，使血液擴散成為細胞單層，再用光學顯微鏡（２００倍）

觀察活動錐蟲。為防止血液在觀察時干涸，也可先在載玻片滴血時加一滴生理鹽水或３％檸檬酸三鈉

生理鹽水。

３．３薄血膜染色檢查

將一小滴血放在清潔載玻片一端約２０ｍｍ處，按常用方法推成薄血膜，迅速風干，用甲醇固定

２ｍｉｎ，干燥后，再加姬氏染色液（配法參見附錄Ａ）染色２５ｍｉｎ，傾去染色液，自來水沖洗，干燥后用

４００倍～１０００倍顯微鏡檢查。

３．４毛細管集蟲檢查

３．４．１材料準備

肝素處理過的毛細管（管內徑１．５ｍｍ，長７５ｍｍ的玻璃或無色透明的硬質塑料管，在擬進血的一

端吸入３％肝素鈉１０ｍｍ，用烤箱７０℃～８０℃烤干后備用），顯微鏡一臺，離心機一臺，載玻片，蓋玻

片，１２號以上注射針頭（或金屬針），塑泥（橡皮泥）。

３．４．２采集待檢血樣

從動物耳靜脈或尾靜脈穿刺獲得血液。先用酒精棉擦凈擬采血處皮膚，干后用針頭穿刺血管，血流

出時用毛細管吸入達４０ｍｍ深（即７０μＬ血），封閉未沾染血的另一端（可用塑泥或火焰加熱封閉）。

３．４．３集蟲

以３０００犵離心１０ｍｉｎ，待紅細胞全部沉積于毛細管下半部，上層為黃色血漿時即可。

３．４．４檢查

在毛細管的血漿與紅細胞分界線下１ｍｍ處將管折斷（切斷、剪斷）