果蔬貯藏技術(shù)PPT

果蔬貯藏方法研究現(xiàn)狀，存在問題及發(fā)展趨勢骨質(zhì)疏松與鈣的綜述目錄增加骨密度的保健食品原料增加骨密度功能檢驗(yàn)方法增加骨密度的保健食品開發(fā)3124增加骨密度保健食品的功能評價指標(biāo)5稱為“帶有小藍(lán)帽的食品”。1骨質(zhì)疏松與鈣骨形成主要由造骨細(xì)胞完成，骨吸收則由破骨細(xì)胞實(shí)現(xiàn)。骨中的鈣不斷從破骨細(xì)胞中釋出進(jìn)入混溶鈣池，而混溶鈣池的鈣又不斷地沉積于成骨細(xì)胞中。成年人的骨骼每年要有10%修補(bǔ)更新。男性18歲以后，女性更早些時，骨的長度開始穩(wěn)定，但骨質(zhì)密度仍繼續(xù)增加，至40歲以后，則骨質(zhì)密度開始下降，此時可能有骨質(zhì)疏松出現(xiàn)。此時破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞的總體代謝不平衡，破骨細(xì)胞的工作量超過成骨細(xì)胞工作水平。“如果我們活的足夠長，不管是男人和女人，我們都將會患骨質(zhì)疏松癥”。英國國家骨質(zhì)疏松癥協(xié)會于1996年發(fā)起將每年的10月20日定為“世界骨質(zhì)疏松日”。1.1骨質(zhì)疏松分類骨質(zhì)疏松癥又分為原發(fā)性骨質(zhì)疏松、繼發(fā)性骨質(zhì)疏松和特發(fā)性骨質(zhì)疏松三大類。第一類是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥：：是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征，以至骨的脆性增高而骨折危險(xiǎn)增加的一種全身性骨病。臨床上最常見的有兩種類型：Ⅰ型為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，Ⅱ型為老年性骨質(zhì)疏松癥。第二類是繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥：它是指骨質(zhì)疏松繼發(fā)于某一疾病或具有某一明確的單一原因，包括以下疾病或因素：1.內(nèi)分泌性疾病。2.骨髓增生性疾病。3.藥物性骨量減少。4.營養(yǎng)缺乏性疾病。5.慢性疾?。黠@的實(shí)質(zhì)器官疾病、結(jié)締組織疾?。?.先天性疾病。7.廢用性骨丟失。8.其他能引起繼發(fā)性骨質(zhì)疏松的疾病和因素。第三類是特發(fā)性骨質(zhì)疏松癥：①青少年骨質(zhì)疏松癥。②青壯年成人骨質(zhì)疏松癥。1.2骨質(zhì)疏松的影響因素1、內(nèi)分泌因素雌激素、蛋白質(zhì)合成代謝減弱，成骨細(xì)胞減少，功能減弱，及基質(zhì)形成減少所致。2、廢用性因素絕對臥床11~60天即可見骨量減少。老年人活動少，肌肉強(qiáng)度減弱，骨量減少。由于不活動，不負(fù)重，肌肉對骨骼的機(jī)械刺激減弱，可造成肌肉萎縮，骨形成減少，骨吸收增加，形成骨質(zhì)疏松。一般說來，男性比女性的體力活動多，活動量大，患骨質(zhì)疏松的風(fēng)險(xiǎn)減少。3、營養(yǎng)性因素蛋白質(zhì)缺乏，骨有機(jī)基質(zhì)生成不良，維生素C缺乏也影響骨基質(zhì)形成，并使膠原組織成熟發(fā)生障礙。4、遺傳因素骨質(zhì)疏松癥多見于白種人，其次為黃種人，黑種人較少見。骨質(zhì)疏松癥常見于一個家庭的多名成員。骨量取決于遺傳。一般女性骨質(zhì)疏松發(fā)生率高于男性。婦女絕經(jīng)期開始后的1~10年里，是骨量丟失最為迅速的階段。1.3鈣的簡單了解鈣主要在小腸吸收鈣的吸收影響因素：（1）飲食因素①膳食中鈣的水平：正常情況下，食物中的鈣含量越豐富，越有利于鈣的吸收。②維生素D：因?yàn)榫S生素D缺乏時可使鈣和磷的吸收下降。③乳糖：由于鈣與乳糖螫合，形成低分子量的可溶性絡(luò)合物，從而增加了小腸吸收鈣的速度所致。④膳食中鈣與磷的比值：鈣磷以2:1或1:1最有利于鈣的吸收。⑤蛋白質(zhì)：由于蛋白質(zhì)在消化過程中產(chǎn)生氨基酸，可使腸道pH降低，有利于不溶性鈣鹽的解離，使之變成鈣離子以利腸道吸收。另外產(chǎn)生的賴氨酸、精氨酸可與鈣形成易吸收的鈣鹽。⑥酸性介質(zhì)：較低的pH可使鈣保持在溶解狀態(tài)，因?yàn)殁}大部分在小腸上段酸性環(huán)境中被吸收。⑦植酸鹽類和草酸：草酸、植酸和磷酸鹽，它們與鈣形成不溶解的鹽類而使鈣不能被吸收利用，所以一般由植物性食物供給的鈣，吸收率皆較低。⑧纖維素⑨脂肪：大量攝入脂肪也影響鈣的吸收，因脂肪酸可與鈣形成不溶解的鈣皂，使鈣的吸收降低。⑩酒精、尼古?。簲z入過量的酒精，對成骨細(xì)胞有毒性作用。（2）鈣狀態(tài)一般膳食鈣都是以化合物形式存在的，進(jìn)入胃內(nèi)受胃酸的作用解離成離子鈣，然后在小腸被吸收?，F(xiàn)代工藝將鈣在體外就制成解離狀態(tài)的離子鈣，在腸道的吸收率就比傳統(tǒng)的鈣制劑如碳酸鈣、乳酸鈣等要高。另外鈣制劑的顆粒大小也影響吸收率，顯然顆粒小的鈣鹽在胃酸作用下易溶解。（3）胃腸道的生理狀態(tài)

胃酸對鈣離子的解離有重要作用，膳食中的鈣都是以螯合物或化合物的形式存在。當(dāng)胃酸分泌不足時，勢必影響食物中鈣離子的解離。任何腸道疾病，特別是小腸的疾患都有可能干擾鈣的吸收。當(dāng)腹瀉時，腸蠕動加快，食物在腸道停留時間短，鈣的吸收就減少（4）激素

活性維生素D、甲狀旁腺素、降鈣素、生長激素和性激素能增加腸鈣的吸收；而腎上腺皮質(zhì)激素和甲狀腺激素則減少腸鈣的吸收。食物中鈣的來源以奶及奶制品最好，不但含量豐富，而且吸收率高。但是我國人民乳制品的消費(fèi)量遠(yuǎn)低于西方國家，鈣的攝入量普遍低且質(zhì)量不佳，吸煙的人口比重相當(dāng)大，偏食，營養(yǎng)不均衡，不喜歡運(yùn)動的人不在少數(shù)，這些都為骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生造成隱患。所以對特殊需鈣的人群，如兒童、孕婦、乳母、青少年、老年可適當(dāng)補(bǔ)充鈣劑。一般市售鈣劑在成人的吸收率均在30%左右。推薦的口服液主要是碳酸鈣、檸檬酸鈣和葡萄糖醛酸鈣。2增加骨密度的保健食品原料2.1原料一碳酸鈣白色微晶細(xì)粉。無臭無味。按粉末大小可分為重質(zhì)碳酸鈣（30~50μm），輕質(zhì)碳酸鈣（5μm），膠體碳酸鈣（0.03~0.05μm）三種。我國多使用輕質(zhì)碳酸鈣。其中膠體碳酸鈣最易被人體吸收。二醋酸鈣（乙酸鈣）白色松散細(xì)粉。易吸潮。加熱至160℃分解成CaCO3

及丙酮。易溶于水，微溶于乙醇。三乳酸鈣白色至奶白結(jié)晶粉末或顆粒。溶于水，易溶于熱水。特點(diǎn)是水中溶解度優(yōu)于其他鈣劑，乳酸鈣為5.4%，葡萄糖酸鈣3.9%，檸檬酸鈣0.096%，碳酸鈣0.0015%。乳酸鈣的風(fēng)味優(yōu)良。其吸收率優(yōu)于其他鈣劑。作為鈣的強(qiáng)化劑，可用于面包、糖食制品、小麥粉、調(diào)制奶粉、豆腐、發(fā)酵豆醬、腌菜等。四磷酸氫鈣白色結(jié)晶性粉末。無臭無味。幾乎不溶于水，易溶于稀鹽酸、稀硝酸及檸檬酸銨液，不溶于乙醇。五葡糖酸鈣白色結(jié)晶顆?；蚪q毛狀粉末。無臭無味，六

檸檬酸鈣白色細(xì)粉，無臭。稍有吸濕性。難溶于水。其吸收不受胃酸影響，也不會引起胃酸缺乏者的反應(yīng)。七檸檬酸蘋果酸鈣CCM是由碳酸鈣等鈣源與檸檬酸、蘋果酸按一定比例混合溶解后所形成的絡(luò)合混合物，不采用過分劇烈的反應(yīng)所產(chǎn)生的化合物。CCM有優(yōu)良的溶解性和呈味性。一般鈣鹽（如碳酸鈣）在pH=5以上時溶解性急速下降，而CCM則在pH1~10范圍內(nèi)均能穩(wěn)定溶解，此外一般鈣鹽舌感較差，而CCM則有良好的呈味性，一般鈣鹽會阻礙人體對鐵的吸收，而CCM能緩和這一缺點(diǎn)。曾有人對21~30歲健康女性用同位素方法進(jìn)行臨床試驗(yàn)，證明CCM比碳酸鈣、尤其是CCM再配合橙汁、牛奶者，其吸收率相當(dāng)高。另曾對10~17歲健康男女用交叉測試法來比較鈣鹽的吸收性，臨床試驗(yàn)證明CCM的鈣具有很高的吸收率，證明CCM是優(yōu)良的補(bǔ)鈣品。另證明對絕經(jīng)期婦女，也是很好的補(bǔ)鈣制品，可明顯預(yù)防骨質(zhì)疏松。由于各種原料均符合食品用原材料的要求，制法及其結(jié)構(gòu)均符合常規(guī)要求，故應(yīng)是安全可靠的。如CCM能配合橙汁一起食用，則證明不會有形成腎結(jié)石之虞。八L-蘇糖酸鈣白色微細(xì)顆粒狀粉末，無臭無味。溶于水，不溶于無水甲醇、無水乙醇和乙醚。易吸濕。九天冬氨酸鈣白色粉末，易吸濕。溶解度高，達(dá)39%。水溶液無色無味，呈中性，穩(wěn)定性好，鈣含量23.39%十

生物碳酸鈣（生物未煅燒鈣）

1以扇貝、牡蠣為主的貝殼未燒結(jié)鈣2珊瑚未繞結(jié)鈣3蛋殼未燒結(jié)鈣4骨（獸、魚骨）未燒結(jié)鈣5珍珠層未燒結(jié)鈣白色微細(xì)無定形粉末，無臭無味.易吸收臭氣。十一

活性鈣（生物煅燒鈣；活性離子鈣）貝殼煅燒鈣主要成分為氧化鈣；海膽煅燒鈣主要成分為氧化鈣；蛋殼煅燒鈣主要成分為氧化鈣；珊瑚煅燒鈣，主要成分為氧化鈣；獸骨、魚骨煅燒鈣，經(jīng)微粉碎后煅燒而成，主要成分為磷酸鈣；乳清煅燒鈣，由酸凝乳清為原料，分離并除去乳清蛋白和乳糖后再精制、煅燒而成，主要成分為磷酸鈣。白色到灰白色結(jié)晶性粉末，略有咸澀味，無臭。呈強(qiáng)堿性，在水中或吸濕后成氫氧化鈣。吸收二氧化碳后則成為碳酸鈣。不溶于水和乙醇，溶于酸性液。十二蛋殼粉蛋殼大部分為碳酸鈣，少量為磷酸鈣和硅酸鹽，另含約2%蛋白質(zhì)。蛋殼的利用有利于環(huán)保，也是價格最便宜、加工最簡單、在日本市場上所占份額較多的一種鈣源。白色細(xì)粉，舌感細(xì)膩，無氣味。在膨化食品中加入1~10%，可提高膨松度和脆度。十三骨骼鈣各種獸骨（牛骨、牦牛骨等）、魚骨（鰻、鰹等）的主要成分是多種磷酸鈣的混合物，骨骼也是鉛等重金屬的蓄積組織，故所制成的產(chǎn)品也有重金屬等超標(biāo)的報(bào)導(dǎo)，出廠時應(yīng)嚴(yán)格控制。白色至奶油色粉末。無臭無味。不溶于乙醇和水。十四

乳清鈣牛乳中所含的無機(jī)鹽，是消化吸收和營養(yǎng)價值最好的無機(jī)鹽源。與其他食品中的鈣相比，是最優(yōu)質(zhì)的鈣源，這是因?yàn)榕Ｈ橹械拟}約有70%呈酪蛋白膠粒狀態(tài)。乳白色易流動粉末，有奶香，是所有天然鈣中風(fēng)味最好的。十五

大豆異黃酮主要成分共約12種，分為異黃酮和異黃酮苷兩類.黃色至淡黃色粉狀，味微苦。溶于水。耐熱耐酸。改善老年人的骨質(zhì)疏松（尤其是老年婦女由更年期綜合癥所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥），提高骨中的礦物質(zhì)含量和骨密度，促進(jìn)骨質(zhì)代謝。十六酪蛋白磷酸肽（酪蛋白鈣肽）一種富含磷酸絲氨酸的多肽，有α和β兩種構(gòu)型。由牛乳酪蛋白用胰蛋白酶水解后精制而成。乳白色粉末。十七

納豆納豆是盛產(chǎn)于日本的一種大豆煮熟的發(fā)酵制品。發(fā)酵豆粒表面有納豆菌的白色薄膜，似豆豉氣味。表面有粘液狀絲，系由納豆菌繁殖而形成的多肽酶類。納豆菌含有相當(dāng)高的維生素K2，可生成骨蛋白質(zhì)，再與鈣共同生成骨質(zhì)，增加骨密度，防止骨折。十八

海藻糖天然品廣泛存在于蘑菇、酵母、海藻等中。能在小腸中消化吸收。易溶于水、熱乙醇，不溶于乙醇。2.2鈣制劑目前，市場上增加骨密度的保健食品的作用原理主要有：①直接補(bǔ)充鈣質(zhì)如各種鈣劑、磷酸鹽、維生素D等，可通過直接補(bǔ)充鈣質(zhì)而達(dá)到增加骨密度的目的。磷酸鹽可促進(jìn)骨形成，抑制骨細(xì)胞的破壞，可以長期應(yīng)用。②調(diào)整內(nèi)分泌而促進(jìn)鈣的吸收

1．如降鈣素可減少骨質(zhì)吸收，降低血循環(huán)中的鈣，增加骨質(zhì)中的鈣含量，降鈣素由于可降低血鈣，所以在用降鈣素時應(yīng)補(bǔ)足鈣量，起到治療骨質(zhì)疏松的作用。

2．對防治絕經(jīng)性骨質(zhì)疏松，雌激素替代療法是一種有效措施。研究發(fā)現(xiàn)，大豆中的某些成分，如大豆皂甙、大豆異黃酮等物質(zhì)具有雌激素樣作用，可與雌激素競爭受體，同時可避免雌激素的副作用。因此，中老年婦女經(jīng)常攝人大豆及其制品可減緩骨丟失，防止骨質(zhì)疏松。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為“藥食同源”“腎主骨生髓”，助陽中藥附子、肉桂、肉蓯蓉、仙靈脾可使雄性大鼠血中腎上腺皮質(zhì)酮含量增加。選擇鈣劑注意事項(xiàng)（1）有腎功能障礙的病人不應(yīng)選擇磷酸鈣制劑。（2）服鈣劑易便秘的患者可選擇碳酸鈣以外的鈣劑。（3）人體對鈣的吸收利用率和鈣產(chǎn)品的顆粒大小無關(guān)，而且要看是否具有生物活性。（4）看安全性，不用動物骨粉。（5）國內(nèi)外經(jīng)過大量人體試驗(yàn)，正事無論何類鈣，吸收率一般都在30%~40%左右，并沒有哪種鈣的吸收率特別高。吸收率只能是參考量，不能以他判定鈣劑優(yōu)劣。鈣過量的危害1.不適當(dāng)?shù)拇罅垦a(bǔ)鈣會使血鈣增高，增加腎臟負(fù)擔(dān)，引起腎臟結(jié)石和高血壓。猝死也可由細(xì)胞內(nèi)突然大量增加的鈣引起。2.大量口服鈣劑，會使胃內(nèi)酸度降低，食欲下降，不利于人體對食品中營養(yǎng)的消化和吸收。3.服用檸檬酸鈣會明顯增加鋁濃度和尿鋁排泄量。4.長期大量補(bǔ)鈣可引起便秘，攝入大量碳酸鈣還能出現(xiàn)高鈣血癥、惡心、嘔吐及乏力等。中國營養(yǎng)學(xué)會2000年制定的中國居民鈣適宜攝入量如下：（1）11～18歲的青少年正處于身體生長發(fā)育階段，骨骼生長迅速，每日所需鈣量為1000毫克（mg）。（2）成人平均每日所需鈣量為800毫克（mg）。（3）孕婦、乳母因?yàn)樘幱谔厥馍頃r期，所需鈣量高于常人，為每日1000～1200毫克（mg）。（4）50歲以上老年人平均每日所需鈣量為1000毫克（mg）。選購增加骨密度的保健食品一定要認(rèn)準(zhǔn)衛(wèi)生部或國家食品藥品監(jiān)督管理局的批準(zhǔn)文號和批準(zhǔn)的功能，不要盲目相信廣告宣傳，尤其不要相信那些宣傳具有“治療疾病”功效的保健食品。對于多數(shù)人來講，完全不必額外補(bǔ)充維生素D。每天只要有20分鐘室外活動，通過曬太陽，人體就能合成足夠一天需要的維生素D；如果確實(shí)不能到室外曬太陽，或者考慮治療疾病需要，確需額外補(bǔ)充維生素D的，每日也不要超過400國際單位。3增加骨密度的保健食品開發(fā)3.1大豆異黃酮生產(chǎn)工藝異黃酮的工業(yè)分離方法可分為萃取法和吸附法。①萃取法生產(chǎn)大豆異黃酮異黃酮糖苷的最常見的萃取方法是以含水乙醇或甲醇（60%~80%）為溶劑提取，提取液蒸去乙醇，再以正丁醇/水分配的方法萃取。②醇法大豆?jié)饪s蛋白乳清水分離大豆異黃酮3.2大豆皂甙生產(chǎn)技術(shù)①大豆皂甙乙醇水溶液提取法把大豆粉碎，并用石油醚浸提，以便把大豆中的色素和油脂去掉。蒸發(fā)回收石油醚，把剩余物進(jìn)行干燥，粉碎可得到去色脫脂豆粉。在90℃的水槽中放入去色脫脂豆粉的15倍的乙醇液溶器中混合浸泡40h。冷卻提取液至室溫，并過濾。濾渣用水洗1~2遍，混合濾液，在溫度45℃條件下，于真空干燥器中干燥即可得到大豆皂甙。②大豆皂甙水提取法大豆粉碎，并用石油醚浸提，以便把大豆中的色素和油脂去掉。蒸發(fā)回收石油醚，把剩余物干燥，粉碎可得到去色脫脂豆粉。用體積為10倍的水與去色脫脂豆粉混合，在溫度為100℃條件下，浸泡提取5h，把混合物溫度降至室溫，用離心機(jī)在轉(zhuǎn)速為60000r/min下離心10min，然后在溫度45℃條件下于真空干燥器中干燥即可得到大豆皂甙。3.3有機(jī)鈣的發(fā)酵法生產(chǎn)①乳酸鈣的發(fā)酵法生產(chǎn)工藝薯干粉原料并行發(fā)酵生產(chǎn)乳酸鈣工藝流程圖1—消化罐2發(fā)酵池3—種子罐4—泵5—沉淀罐6—加熱罐7—壓濾機(jī)8—往復(fù)泵9—蒸發(fā)器10—脫色罐11—流化床干燥器②葡萄糖酸鈣的發(fā)酵法生產(chǎn)工藝先利用微生物(黑曲霉)將葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡糖酸，而后再用CaCO3將葡糖酸中和為葡糖酸鈣。4增加骨密度

保健食品的功能評價指標(biāo)評價增加骨密度功能的保健食品的功效如何，不僅需要進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)，而且應(yīng)在動物實(shí)驗(yàn)有效的前提下進(jìn)行為期2年的人體實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)采取自愿的原則，選擇40~65歲的骨質(zhì)疏松受試者，試吃受試物的過程中停服其他治療藥物及有關(guān)保健食物。測試的指標(biāo)有：動物試驗(yàn)必測的指標(biāo)：骨鈣、骨密度、鈣的吸收率，此外還有骨皮質(zhì)厚度、骨小梁、磷含量等。人體試驗(yàn)可以測定血清鈣、血清磷、肌酐、堿性磷酸酶及尿羥脯氨酸、尿鈣。此外，要做骨的X線檢查和骨密度測定。測定血清鈣的方法有原子吸收光譜法、EDTA滴定法、鄰甲酚酞絡(luò)合劑直接比色法等。正常參考值如下：原子吸收法為8.7~10.7mg/dL；滴定法為2.2~2.6mmol/L、鄰甲酚酞絡(luò)合劑比色法為8.6~10.6mg/dL。正常人血磷水平為0.91~1.6mmol/L。臨床上常用的檢測尿鈣方法是測定24h尿鈣量、每克肌酐排出的尿鈣量即尿鈣/肌酐比值（包括24h尿和空腹尿）以及空腹2h的尿鈣水平。2h尿鈣的正常值均在100~300mg/24h。肌酐的正常值：尿中1000~1500/24h尿全血1~1.8mg/dL，血清（血漿）0.5~1.4mg/dL堿性磷酸酶的測定多以其活性單位表示酶的含量，即在單位時間內(nèi)此酶能催化生成多少微摩爾的反應(yīng)產(chǎn)物。20~60歲的正常人每天尿羥脯氨酸總量為25mg左右。測定糞鈣含量使用同位素標(biāo)記的方法，即口服一定量45Ca，分別測定糞便及尿液中排泄的鈣同位素（45Ca）量，從而計(jì)算體內(nèi)滯留的鈣量。5增加骨密度功能檢驗(yàn)方法根據(jù)受試樣品作用原理的不同，分為方案一（補(bǔ)鈣為主的受試物）和方案二（不含鈣或不以補(bǔ)鈣為主的受試物）兩種。方案一1.實(shí)驗(yàn)原理機(jī)體中的鈣絕大部分儲存于骨骼及牙齒中，大鼠若攝入鈣量不足會影響機(jī)體和骨骼的生長發(fā)育，表現(xiàn)為體重、身長、骨長、骨重、骨鈣含量及骨密度低于攝食足量鈣的正常大鼠。因此，通過對生長期大鼠在攝食低鈣飼料的基礎(chǔ)上分別補(bǔ)充碳酸鈣（對照組）或受試含鈣產(chǎn)品（實(shí)驗(yàn)組），比較兩者在促進(jìn)機(jī)體及骨骼的生長發(fā)育，增加骨礦物質(zhì)含量和增加骨密度功能上的作用，從而對受試樣品增加骨密度的功能進(jìn)行評價。2.儀器和試劑①儀器：原子吸收分光光度計(jì)、骨密度儀（單光子骨密度儀或雙能X線骨密度儀或相關(guān)儀器）、精密卡尺、動物解剖器械、動物天平、105℃烘箱②硝酸，優(yōu)級純高氯酸，優(yōu)級純氧化鑭，2%氧化鑭溶液稱取分析純氧化鑭（含量大于99.99%）25

克，加75ml優(yōu)級純鹽酸，加去離子水至1000ml。鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取1.2486

克分析純碳酸鈣（純度大于99.99%），加50ml去離子水，加鹽酸使之溶解。移入1000ml容量瓶中，加2%氧化鑭溶液至刻度。此溶液1.00ml相當(dāng)于500μm鈣。儲于聚乙烯瓶中，4℃保存，臨用時稀釋。3.實(shí)驗(yàn)方法（1）實(shí)驗(yàn)動物出生4周左右的斷乳大鼠，體重約60~75克，同一性別，每組8~12只。（2）基礎(chǔ)飼料：用此基礎(chǔ)飼料配制低鈣對照組以及各劑量組?；A(chǔ)飼料配方（Ca2+計(jì)，調(diào)整Ca2+為150mg/100g飼料）（3）劑量分組及受試樣品給予時間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個劑量組，以人體推薦量的5倍為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，同時設(shè)一個低鈣對照組（150mg/100g飼料）和與相應(yīng)劑量受試物鈣水平相同的碳酸鈣對照組（如僅設(shè)一個碳酸鈣對照組，推薦設(shè)立與高劑量鈣水平相同的碳酸鈣對照組）。用低鈣對照組（150mg/100g飼料）飼料配制受試樣品各劑量組和碳酸鈣對照組。受試樣品給予時間3

個月。（4）受試物給予途徑經(jīng)口灌胃給予受試物，無法灌胃時將受試物摻入飼料，并記錄每只動物的飼料攝入量。（5）實(shí)驗(yàn)步驟出生4周的斷乳大鼠經(jīng)適應(yīng)期一周后，禁食12小時，稱體重，按體重隨機(jī)分組，分籠飼養(yǎng)。飲用去離子水以避免從飲水中獲得鈣。4.觀察指標(biāo)（1）體重測定：禁食12小時后，測定體重。每周一次。（2）股骨重量測定：動物喂養(yǎng)3個月后處死，剝離出右側(cè)股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，稱量骨干重。（3）股骨骨密度測定：用骨密度儀，（單光子骨密度儀或雙能X線骨密度儀或其它相關(guān)儀器）測量股骨中點(diǎn)及股骨遠(yuǎn)心端的骨密度。（4）骨鈣含量及飼料含鈣量測定：用原子吸收法測量。①樣品采集與制備a.飼料樣品經(jīng)均勻混合并過20目篩，在烘箱中烘干，置干燥器中冷卻后稱重，磨細(xì)。b.取大鼠一側(cè)股骨在105℃烘箱中烘干至恒重后，置于三角瓶中進(jìn)行消化。②樣品消化根據(jù)樣品中鈣的含量，準(zhǔn)確稱取0.300~1.00克，置于150ml三角瓶中，上蓋小漏斗，加入混合酸（硝酸：高氯酸=4：1)15~20ml，在電熱板上加熱消化直至冒白煙并透明無色。消化液透明無色后加數(shù)毫升去離子水，煮沸以趕除剩余的酸，重復(fù)兩次，最后消化液的體積不超過1ml。消化樣品時應(yīng)同時作空白試驗(yàn)，加入與樣品消化時相同體積的混合酸，在相同條件下消化。③測定按照原子吸收分光光度計(jì)儀器說明書的步驟進(jìn)行。測定液、標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白均用0.5%氧化鑭溶液稀釋，定容。5.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05

，P≤0.05，用多個實(shí)驗(yàn)組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果判定骨鈣含量或骨密度顯著高于低鈣對照組且不低于相應(yīng)劑量碳酸鈣對照組，鈣的吸收率不低于碳酸鈣對照組，可判定受試物具有增加骨密度功能的作用。方案二一實(shí)驗(yàn)原理雌性成年大鼠切除卵巢后，骨代謝增強(qiáng)，并發(fā)生骨重吸收（破骨）作用大于骨生成（成骨）作用的變化。這種變化表現(xiàn)出為骨量丟失，經(jīng)過一定時間的積累，可以造成骨密度降低模型。在建立模型的同時或模型建立之后，給模型實(shí)驗(yàn)組大鼠補(bǔ)充受試樣品，通過受試物抑制破骨或促進(jìn)骨等骨代謝調(diào)節(jié)作用，觀察其在增加骨密度功能及骨鈣含量的效果，從而對受試樣品增加骨密度的功能進(jìn)行評價。2.實(shí)驗(yàn)動物雌性大鼠，300克左右，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)1周。3.飼料配方4.儀器和試劑①儀器：原子吸收分光光度計(jì)、單光子骨密度儀或雙能X線骨密度儀或其它相關(guān)儀器、精密卡尺、動物解剖器械、動物天平、105℃烘箱②試劑硝酸，優(yōu)級純高氯酸，優(yōu)級純氧化鑭，2%氧化鑭溶液稱取分析純氧化鑭（含量大于99.99%）25克，加75ml優(yōu)級純鹽酸，加去離子水至1000ml。鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取1.2486克分析純碳酸鈣（純度大于99.99%，加50ml去離子水，加鹽酸使之溶解。移入1000ml容量瓶中，加2%氧化鑭溶液至刻度。此溶液1.00ml相當(dāng)于