微生物檢驗重點知識

微生物識要點：一、葡萄球1致病因素：血漿凝固酶；溶血素；殺白細胞素；腸毒素；表皮剝脫毒素；TSST-1；耐熱核酸酶；葡激酶；透明質酸酶；脂酶。2臨床意義：癤癰等；內臟感染肺炎、膿胸、中耳炎、腦膜炎、心包炎、心內膜炎；全身感染敗血癥、膿毒血癥；（毒素相關）食物中毒；燙傷樣皮膚綜合癥；毒性休克綜合癥；假膜性腸炎。3鑒定：溶血；

細菌和菌落形態(tài)；生化實驗：觸+微陽性；鏈+腸陰性葡：桿菌肽R，呋喃唑酮S金黃色葡萄球菌特征：普通平-脂溶性黃色色素；血瓊-β血漿凝固酶+；甘露醇發(fā)酵+

耐熱核酸酶+2何確定標本中離的細菌為萄球菌并確其有無病性。答①直接鏡檢經革蘭染色后鏡檢發(fā)現(xiàn)革蘭染色陽性呈葡萄狀排列的球菌可初步報告疑為葡萄球菌需進一步分離培養(yǎng)鑒定②分離培養(yǎng)血培養(yǎng)需經增菌后轉種血平板進一步鑒定若無細菌生長需連續(xù)觀察7天并以血平板確定有無細菌的生長膿液尿道分泌物腦脊液沉淀物可直接接種血平板37℃過夜，可形成直徑約2-3mm、產生不同色素的菌落。金葡菌菌落周圍有透明溶血環(huán)。③試驗鑒定：血漿凝固酶試驗，甘露醇發(fā)酵試驗，耐熱核酸酶試驗，腸毒素測定，SPA檢測。致病性葡萄球菌菌落周圍有透明溶血環(huán)，血漿凝固酶試驗陽性，甘露醇發(fā)酵試驗陽性，耐熱核酸酶試驗陽性，SPA測有A蛋白的存在。二、鏈球菌：致病因素：M白；脂磷壁酸；透明質酸酶；鏈激酶；鏈道酶；鏈球菌溶血素；致熱外毒素。臨床意義A群：化膿性炎猩紅熱風濕熱急性腎小球腎炎IIIII肺炎鏈球菌大葉性肺炎中耳炎乳突炎鼻竇炎、腦膜炎、心內膜炎。3鑒定：形態(tài)。培養(yǎng)+血清等，血瓊脂-灰白色，半透明或不透明表面光滑小菌落；肺炎鏈球菌呈臍窩狀。幾中鏈球菌特征：群：血平板β溶血;桿菌肽-敏感群：血平板β溶血;桿菌肽-耐藥CAMP+；膽汗七葉苷（—尿酸水解試驗（+）草綠色鏈球菌：血平板α溶血；耐藥；膽汗七葉苷（—肺炎鏈球菌血平板α溶血optochin敏感菊糠分（+汗溶（+莢膜腫脹實驗（+）三、大腸埃希菌致病因素：侵襲力（K抗原和菌毛內毒素；腸毒素（LT）臨床意義：腸道外感染（泌尿系統(tǒng)感染為主，腹膜炎，膽道感染，肺炎等；腸道感染：EHEC、ETEC、EPEC、EIEC、EaggEC3鑒定：普通平板（濕潤、光滑、灰白中等大小菌落）有便毛，有動力，葡萄糖發(fā)酵（+硝酸鹽還原（+氧化酶（—酶（+）中國蘭平板（藍色伊紅美藍（紫黑色）麥康凱和SS（紅色）四、志賀菌屬1致病因素：侵襲力（菌毛毒素；外毒素（志賀毒素，也稱Vero）2臨床意義1）急性細菌性痢疾：腹痛腹瀉膿血粘液便，里急后重，發(fā)熱，便中帶血，粘液和；中毒性菌痢多見于小兒，）慢性細菌性痢疾；3）攜帶者3鑒定：葡萄糖發(fā)酵（+硝酸鹽還原（+氧化酶（—酶（）接種SS和麥康凱平板分離出無色透明的小菌落為可疑志賀菌血清學鑒定。5.述對疑似疾患者行病原學診的常規(guī)快速法答：常規(guī)鑒定：①初步鑒定②最后鑒別③鑒別試驗④血清學鑒定⑤非典型菌株可用傳代法及毒力試驗進行鑒定。快速診斷直接凝集②免疫熒光菌球法③協(xié)同凝集試驗④乳膠凝集試驗⑤分子生物學方法五、沙門菌屬致病因素侵襲力（Vi抗原毒素，腸毒素。臨床意義胃腸炎（食物中毒血癥和敗血癥；腸熱癥（傷寒副傷寒）3鑒定：接種SS麥康凱平板，分離出無色、透明的小菌落為可疑沙門氏菌，需進一步生化反應鑒定，3如何根據(jù)體和抗體的化特點斷肥達試驗結果？答：若O、H凝集效價均超過正常值，則腸熱癥的可能性大，若兩者均低，腸熱癥的可能性小，若高H高，可能預防接種或非特異性回憶反應，若OH不高，則可能感染早期或與傷寒沙門菌O抗原有交叉反應的其他沙門菌感染。4對腸熱癥患進行微物學檢查時本采集注意什么？答:根據(jù)不同的疾病、不同的病程取不同的標本。腸熱癥第1、2取外周血，第2、3周取糞便、尿液，全程可取骨髓分離培養(yǎng)細菌。六、銅綠假單胞菌其生物學特性主要有℃不生長，而42℃生長。在血瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基上均可形成5不同形態(tài)的菌落，在普通培養(yǎng)基上可產生多種色素。鑒定：革蘭陰性桿菌，葡萄糖氧化發(fā)酵（氧化型力陽性，氧化酶（+觸酶（+專性需氧，營養(yǎng)要求不高，麥康凱上生物良好，初始分離培養(yǎng)基特征性菌落（擴展性，平坦，具有鋸齒邊緣，金屬性光澤，產生藍綠色色素，玉米面氣味）度長，4度不長。七、嗜血桿菌簡述流嗜血桿菌的物學特.答：革蘭陰性短小球桿菌，無芽胞、無鞭毛、不能運動，多數(shù)菌有莢膜。需氧或兼性厭氧最適生長溫度℃，最佳培養(yǎng)基是巧克力瓊脂。臨床意義：腦膜炎、鼻咽炎、關節(jié)炎、心包炎，鼻竇炎，中耳炎鑒定：培養(yǎng)特性，5-10%，X因子，因子；血瓊脂：衛(wèi)星現(xiàn)象；巧克力平板，露滴狀菌落。八、霍亂弧菌霍亂患為什么會出劇烈腹及嚴重脫水癥狀？答霍亂弧菌可產生致瀉性極強的霍亂腸毒素該毒素由個A亞單位和5個相同的單位組成，B亞單位使毒素分子與真核細胞上的受體結合，A單位具有酶活性功能。A亞單位進入胞后，激活腺苷環(huán)化酶，令胞cAMP水平增高，導致腸粘膜細胞內的水、氯和碳酸氫鉀等過度分泌到腸腔，同時鈉的吸收減少，導致嚴重的腹瀉和嘔吐.九白喉棒桿菌簡述白棒狀桿菌的病過程答白喉棒狀桿菌存在于白喉患者的喉頭氣管及鼻腔粘膜有時皮膚結膜等部位也可見到傳染源為患者及帶菌者細菌多隨飛沫或污染的物品傳播感染后白喉棒狀桿菌在鼻咽部粘膜處繁殖并產生外毒素，引起局部炎癥和全身中毒癥狀。白喉桿菌在侵犯局部增殖，產生外毒素致病2．述白喉菌體外毒力驗的原、方法及結判斷。答：①瓊脂平板毒力試驗。將含20%牛血清肉湯瓊脂分注與平皿中，每只平皿10ml℃冷卻在凝固之前將浸有白喉抗毒素血清稀釋液的濾紙條沉于瓊脂內，制成平板Elek平板)。在與濾紙條相垂直的方向將待檢菌畫直線接種，劃線寬度約6-7mm，兩端與皿壁連接。同時，與之相距處平行劃線接種一標準產毒菌株作為陽性對照37℃培養(yǎng)24-48小時若菌苔兩側出現(xiàn)斜向外延伸的乳白色沉淀線并與其鄰近的標準產毒株的沉淀線相吻合則為產毒株②SPA協(xié)同凝集試驗白喉抗毒素IgG先吸附在上入待檢菌培養(yǎng)物上清液。若有白喉外毒素則與SPA-IgG結合出現(xiàn)可見的凝集反應③對流電泳將已知的白喉抗毒素和待檢菌培養(yǎng)液分置瓊脂板兩孔之中電泳后若兩孔之間出現(xiàn)白色沉淀線，表明待檢菌為產毒株。鑒定：革蘭染色陽性，有明顯的異染顆粒的桿菌，無莢膜，無鞭毛，菌體長短不一，直或微彎，一端或兩端膨大，排列呈V等文字形碲酸鉀血培養(yǎng)出黑色菌落，有或無狹窄B溶血，菌落灰白色，隆起，濕潤。九結核菌.致病機制：莢膜。脂質：包括索狀因子，磷脂，硫酸腦苷脂，蠟D。3蛋白質與蠟質D結合使機體產生超敏反應，引起組織壞死和全身中毒癥狀。2.結核分枝菌細胞中脂質含量，這一點有何意義答：結核分枝桿菌胞壁含脂質多，與其染色性、抵抗力、生長速度及致病性等特性有密切關系，脂質中的分枝菌酸使其具有抗酸性；細胞壁含大量脂質，可防止菌體內水分的丟失，故對干燥的抵抗力特別強；同時影響營養(yǎng)物質的吸收，故生長緩慢，且脂質中的磷脂、索狀因子、蠟質D、硫酸腦苷脂等毒性成分以不同機制致病。3簡述從標本檢驗結分枝桿菌的法。答：1．顯微鏡檢查(1)直接涂片染色鏡檢：是一種臨床常用的簡易快速的檢查方法。直接涂片法是用接種環(huán)取病人痰液中濃厚部分或離心沉淀／min，20min)的尿沉淀物—接種環(huán)涂片，涂片要厚。經自然于燥和火焰固定后進行齊-尼抗酸染色，或作金胺“o”熒光染色。前法用油鏡檢查，后法用熒光顯微鏡高倍鏡檢查鏡檢時應仔細查遍整個涂片或觀察至少個視野結核分枝桿菌抗酸染色后呈紅色其它細菌和細胞為藍色經熒光染色的結核分枝桿菌在黑色背景中呈亮黃色。涂片鏡檢結果應報告“找到抗酸性桿菌或“未找到抗酸性桿菌而不能報告“找到結核分枝桿菌(2)濃縮集菌涂片檢查法：如果直接涂片鏡檢不易檢出結核桿菌應采用濃縮集菌涂片檢查法以提高結核桿菌的檢出率所謂濃縮集菌涂片即為將采集標本離心取沉淀涂片或是采用漂浮集菌法，集菌后標本經反復多次使涂層加厚，一般取—個接種環(huán)，涂抹面積大約直徑在15mm可，干燥固定后染色鏡檢2．核酸檢測用PCR法快速診斷結核分枝桿菌感染設計結核分枝桿菌特異片段的引物進行擴增然后用結核分枝桿菌rRNA序列特異的DNA探針與之雜交PCR技術的特異性與敏感性均大于953的檢測用ELlSA法檢測患者血清中抗，可作為活動性結核分枝桿菌感染的快速診斷方法之一結核病人的血清陽性率為80—90。4簡述抗酸染的步驟及結，并舉兩種抗酸菌答：①初染：石炭酸復紅加溫染5min②脫色：3%的鹽酸酒精脫色1min③復染：美蘭染1min果：抗酸菌為紅色，非抗酸菌為藍色。結核分枝桿菌與麻風分枝桿菌均為抗酸菌5．患者懷患有肺結核如何進微生物學檢？（包標本采集至告結果的過程，檢查法應有統(tǒng)方法和快檢查方）答：1）標本采集：根據(jù)感染部位不同，采集不同的標本。）標本直接檢查：①顯微鏡檢查②核酸檢測③抗PPDIgG的檢測。3）分離培養(yǎng)與鑒定4）藥物敏感性試驗5）免疫學診斷6）動物接種梅毒螺體獲得性毒（TP）:一期：硬疳；二期：毒疹；期皮膚黏膜瘍，內器官肉芽。標本直接檢測1、暗視野顯微鏡檢查2、免疫熒光染色、鍍銀染色法4、核酸檢測?？贵w檢測性病研究實驗室試驗VDRL)2快速血漿反應素環(huán)狀卡試驗RRR甲苯胺紅不加熱血清試驗（）熒光梅毒螺旋抗體吸收試驗FTA-ABS；熒光梅毒螺旋抗體雙染色試驗FTA-ABS-DS;抗梅毒螺旋抗體的微量血凝檢測MHA-TP;抗梅毒螺旋抗體明姣顆粒凝集試驗ELISA1.較支原體與菌L型主要區(qū)（表格自）【生物學性狀與致病性--細菌L型--原體】--{培養(yǎng)特性--需要高滲-需要膽固醇}{落-油煎蛋狀，0.5-1mm---油蛋狀0.1-0.3mm}{態(tài)--高度多形態(tài)性--高度多形態(tài)性}{大小--大小為μm--小為μm}{細胞膜--不含固醇--含高濃度固醇}{細胞--缺乏或--}細胞壁缺失的原因-青霉素、溶菌酶和膽汁等作用所致，去除條件可恢復--遺傳}{通濾器-能通過濾器--通過濾器}{青霉素的作用--抵抗--抵抗}{液體培養(yǎng)--有一定混濁度附壁---混濁度極低}{病性--引起慢性感染，如骨髓炎、尿路感染和心內膜炎--原發(fā)性非典型性肺炎，泌尿生殖道感染和條件致病}1.述衣原體獨的發(fā)育期。答沙眼衣原體嚴格寄生在細胞內有獨特的發(fā)育周期在其繁殖發(fā)育的周期內，可見兩種形態(tài)，原體及始體。原體具有感染性，通過表面受體吸附于易感細胞并被細胞吞噬進體內在吞噬體內體積增大進入增殖狀態(tài)成始體。始體在吞噬體內以二分裂的形式進行分裂繁殖出子代并成熟為原體從易感細胞中釋放出來，再感染新的易感細胞。2.眼的病原體其傳播式。答：沙眼的病原體是沙眼衣原體，傳播方式主要通過眼-眼或眼-手-眼傳播3.原體有哪些要特點答：①形態(tài)多為球型，革蘭染色陰性原體小，介于細菌和病毒之間，始體大，大小與細菌相似。②代謝，缺乏能量來源，故嚴格的細胞內寄生③有獨特的發(fā)育周期④有DNA和RNA兩種核酸⑤由肽聚糖組成的細胞壁多種抗生素敏感。4.原體引起哪重要疾？答：能引起人類的沙眼、泌尿生殖道的感染和呼吸系統(tǒng)等疾病2.述白色念菌感染微生物檢查法及結分析答①直接鏡檢可見革蘭陽性圓形或卵圓形芽生孢子及假菌絲②分離培養(yǎng)在沙氏培養(yǎng)基上形成乳白色或淡黃色類酵母菌落檢可見假菌絲及成群的卵圓形芽生孢子③血清學實驗可檢測多種假絲酵母菌的抗體用或膠乳凝集實驗可檢出白假絲酵母菌細胞壁甘露聚糖動物實驗將白假絲酵母菌懸液經尾靜脈或腹腔注入小鼠或耳靜脈注入兔體內，5-7天后動物死亡，解剖發(fā)現(xiàn)腎、肝等有膿腫。白色念菌檢驗：1標本直接檢查直接顯微鏡檢查；G試驗，也稱螯試驗，也測定1-3-B-D-聚糖；抗原檢測，ELISA免疫印跡；核酸檢測；2培養(yǎng)鑒定接種沙氏培養(yǎng)基，或度培養(yǎng)1-4天，可見奶油色類酵母樣菌落，鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。鑒定試驗：1芽管形成試驗2厚膜孢子形成試驗3糖同化或發(fā)酵試驗。白色念菌鑒定的依有哪些答①直接鏡檢觀察到圓形或卵圓形的芽生孢子假菌絲假菌絲中隔部伴有芽生孢子，頂端有厚壁的厚膜孢子，革蘭染色陽性，著色不均勻。②玉米瓊脂室溫及35℃均生長并形成頂端厚膜孢子，42也能生長。③芽管形成試驗陽性。④葡萄糖、麥芽糖、半乳糖、蕈糖發(fā)酵試驗陽性，蔗糖、乳糖發(fā)酵試驗陰性。⑤葡萄糖、麥芽糖、半乳糖、蕈糖同化試驗陽性，乳糖同化試驗陰性。⑥三氮唑氯試驗，培養(yǎng)基不變色或淡紅色。橋。新生隱菌主要侵犯部位為肺、腦、腦膜，也可侵犯皮膚，骨，關節(jié)致病物質為莢膜；標本直接檢測：1顯微鏡檢查2抗原檢測3抗體檢測4核酸檢測1.述流行性冒病毒形態(tài)結構及主要結成分功能。流感病毒呈球形或絲狀⑴流感病毒的內部結構核衣殼：病毒分片段的，結合有核蛋白NP以及與復制和轉錄有關的三種依賴RNARNA聚酶蛋白。呈螺旋對稱。基質蛋白M蛋白蓋在核衣殼外面M蛋白抗原性穩(wěn)定，也具有型特異性。外膜：來自宿主細胞的脂質雙層膜。⑵流感病毒的輔助結構血凝素(HA)：HA（病毒吸附護性抗原，血凝抑制抗體保護性抗體)神經氨酸酶（NA）（核衣殼釋放）與病毒釋放有關。2.述分離與定流感毒常用的實室檢驗法有些。.主要包括病毒分離培養(yǎng)、血清學診斷和快速診斷方法3.型流感病為何容引起大流行流感病毒節(jié)段，甲型和乙型由8個節(jié)段，丙型由7個節(jié)段構成。甲型流感病毒根據(jù)其表面HA和NA抗原性的不同，可分為若干亞型。4.述流感病的抗原異。抗原漂（antigenicdrift因HA或NA的點突變造成變異幅度小屬量變，引起局部中、小型流行?？乖D換（antigenic）因HA或NA的大幅度變異造成，屬質變，導致新亞型的出現(xiàn)，引起世界性的暴發(fā)流行。輪狀病臨床意：月嬰幼兒呈急性胃腸炎感染，24-72小時潛伏，80%兒先發(fā)熱，嘔吐和腹痛，隨即頻繁腹瀉，第10-20次，淡黃色水樣便或蛋花湯樣酸性便呀白色米湯樣便，無粘液和膿血，惡臭。簡述輪病毒的微生檢驗方⑴標本采集與處理⑵標本直接檢查①電鏡和免疫電鏡檢查②抗原檢測③病毒RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳分析④核酸檢測⑶病毒分離培養(yǎng)2.述乙型肝病毒的態(tài)結構。球形,雙層衣殼。外衣殼包膜(質雙層+白質HBsAg等內衣殼：HBcAg、HBeAg內部：DNA---環(huán)狀雙鏈、DNA多聚酶簡述乙肝炎病毒的因組及功能。不完全雙鏈環(huán)狀DNA，含4個ORF,編碼蛋白S：HBsAg,Pre-s1,Pre-s2C：HBcAg，HBeAgP：polymerase多聚酶X：HBxAg基因簡述乙肝炎病毒的原組成其意義。HBV抗原組成⑴、HBsAg表面原：是機體受感染的主要標志之一。具有抗原性，能刺激機體產生保護性抗體，即抗。⑵、HBcAg核心抗原：HBcAg主要定位于感染細胞核內不易從患者血清中檢出但也可在肝細胞膜表面表達宿主CTL作用的主要靶抗原HBcAg抗原很強能刺激機體產生抗，但無中和作用。檢出高效價抗HBc，特別是抗則表示HBV在肝內處于復制狀態(tài)⑶、HBeAg核心抗原HBeAg可作為HBV復制及血清具有傳染性的標志。急性乙型肝炎進入恢復期時HBeAg消失抗HBe陽性但抗Hbe亦見于攜帶者及慢性乙型肝炎血清中?？笻Be說明病毒感染性較低（是預后良好的征象）簡述乙肝炎病毒抗抗體系檢測的用途⑴乙型肝炎的診斷⑵判斷傳染型⑶判斷預后⑷篩選獻血員⑸檢測乙肝疫苗接種效果⑹流行病學調查3．細胞病感染的病原直接檢方法有哪些