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文檔簡介
實驗一
光學顯微鏡的使用與標本片觀察一、目的要求1、掌握光學顯微鏡的使用方法;重要微生物的典型形態(tài)。2、了解光學顯微鏡的原理。二、光學顯微鏡的基本結構1.鏡座;2.載物臺;3.鏡臂;4.棱鏡套;5.鏡筒;6.接目鏡;7.轉換器;8.接物鏡;9.聚光器;10.虹彩光圈;11.光圈固定器;12.聚光器升降螺旋;13.反光鏡;14.細調節(jié)器;15.粗調節(jié)器;16.標本夾光學顯微鏡基本結構:1.
照明燈2.
聚光器3.
載物臺和切片夾4.
推進器5.
物鏡6.
粗細螺旋7.
目鏡8.
照相機等接口1、增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達100×,放大倍數(shù)這樣大的鏡頭,焦距很短,直徑很小,但所需要的光照強度卻最大。*油鏡
從承載標本的玻片透過來的光線,因介質密度不同(從玻片進入空氣,再進入鏡頭),有些光線會因折射或全反射,不能進入鏡頭,致使在使用油鏡時會因射入的光線較少,物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失,在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率(n=1.55)相仿的鏡油(通常使用香柏油,其折射率n=1.52)。2、增加顯微鏡的分辨率
油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。三、實驗器材1、微生物標本片
2、香柏油、二甲苯。3、光學顯微鏡、擦鏡紙。四、實驗步驟1、觀察前的準備(1)顯微鏡的安置
置顯微鏡于平整的實驗臺上,鏡座距實驗臺邊緣約3~4㎝。鏡檢時姿勢要端正。
取、放顯微鏡時應一手握住鏡臂,一手托住底座,使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提;且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察,以減少眼睛疲勞,也便于邊觀察邊繪圖或記錄。(2)光源調節(jié)
安裝在鏡座內的光源燈可通過調節(jié)電壓以獲得適當?shù)恼彰髁炼?,而使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時,應根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調節(jié)其角度,使視野內的光線均勻,亮度適宜。
2、顯微觀察在目鏡保持不變的情況下,使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下,特別是初學者,進行顯微觀察時應遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序,因為低倍數(shù)物鏡視野相對大,易發(fā)現(xiàn)目標及確定檢查的位置。(1)低倍鏡觀察
將染色標本玻片置于載物臺上,用標本夾夾住,移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。將10×物鏡置于光路中,用粗調節(jié)器慢慢升起載物臺,使標本在視野中初步聚焦,再使用細調節(jié)器調節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片,認真觀察標本各部位,找到合適的目的物,仔細觀察并記錄觀察到的結果。
(2)高倍鏡觀察
在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其移至視野中心后,輕輕轉動物鏡轉換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調節(jié)后,微調細調節(jié)器使物像清晰,利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結果。
(3)油鏡觀察
在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后,用粗調節(jié)器將載物臺降低,然后將油鏡轉到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油,從側面注視,用粗調節(jié)器將載物臺小心地上升,使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。調節(jié)照明使視野的亮度合適,用粗調節(jié)器將載物臺徐徐下降,直至視野中出現(xiàn)物像并用細調節(jié)器使其清晰準焦為止。
3、顯微鏡用畢后的處理(1)下降載物臺,取下載玻片。(2)用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油,然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡,最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。切忌用手或其他紙擦拭鏡頭,以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕,影響觀察。
(3)用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡,用稠布清潔顯微鏡的金屬部件。(4)將各部分還原,將物鏡轉成“八”字形,再向下旋。
4、微生物
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