染色體G顯帶標(biāo)本的制備_第1頁
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染色體G顯帶標(biāo)本的制備二、實驗原理常規(guī)制備的染色體標(biāo)本經(jīng)烤片后,用熱堿、各種蛋白酶、尿素、去垢劑或其它溶液等預(yù)處理再以Giemsa染色,在油鏡下可看到染色體兩臂顯示出著色深淺不同的橫紋。最常用的是胰蛋白酶法。染色體帶型的形成主要取決于DNA、核酸結(jié)合蛋白及染料三者的相互作用,主要是指DNA的堿基組成及其與結(jié)合蛋白形成的特定結(jié)構(gòu)對染料分子的作用??赡艿臋C(jī)理是:G帶區(qū)含有較豐富的A-T對,在間期核呈固縮狀態(tài),而且是DNA晚復(fù)制區(qū)之一,其與蛋白結(jié)合緊密而不易被胰酶分解,因而深染;而G陰性帶區(qū)富含G-C對,蛋白與其結(jié)合較疏松,易被胰酶消化分解而不易著色。(。。。深染區(qū)由許多二硫鍵交聯(lián),淺染區(qū)則缺乏二硫鍵、多硫氫鍵。。。)Giemsa染料是天青-伊紅染料,著色首先取決于二個天青分子同蛋白結(jié)合,在此基礎(chǔ)上再結(jié)合一個伊紅分子,通過胰酶的顯帶預(yù)處理可除去陰性G帶區(qū)的蛋白。

試劑及器材試劑:胰蛋白酶、0.4%酚紅、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸鹽緩沖液,0.85%生理鹽水。器材:37℃恒溫水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴頭。實驗步驟取胰酶25mg,溶解于盛有50ml0.85%生理鹽水的染色缸中,置37℃恒溫水浴箱中,加入0.4%酚紅2滴,混勻,以5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH為6.6-7.0。實驗步驟待胰酶液溫度升至37℃后,將染色體標(biāo)本片(37℃烘箱烤片)放入胰酶液中,并輕輕擺動,數(shù)秒(視烤片時間而定)后取出,立即自來水沖洗。染色:pH7.4磷酸鹽緩沖液4.5ml

Giemsa原液

0.5ml染色8-10分鐘。自來水沖洗,空氣干燥,鏡檢。注意事項良好的培養(yǎng)效果為,標(biāo)本片上中期分裂相要多,且染色體分散要好。染色體長度應(yīng)能適應(yīng)顯帶分析技術(shù)的要求。G顯帶成敗之關(guān)鍵取決于胰酶液的濃度和處理時間之搭配。顯帶不夠標(biāo)本的補(bǔ)救(無水乙醇脫色1-2min;甲醇冰醋酸固定液脫色1h后烤片、消化、染色)標(biāo)本實驗結(jié)果低倍鏡下可看到中期分裂相,進(jìn)而轉(zhuǎn)至高倍鏡及油鏡下觀察,可見染色體較為飽滿,分布均勻,著色較好,沿染色體長軸可顯出深淺不同的G帶橫紋。人類染色體G帶歌謠:一禿二蛇三蝶飄,四像鞭炮五黑腰;六號像個小白臉,七蓋八下九苗條,十號長臂近帶好,十一低來十二高;十三、四、五一二一;十六長臂縊痕大,十七長臂帶腳鐐,十八白頭肚子飽;十九中間一點腰,二

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