Y染色體微缺失檢測培訓(xùn)課件

Y染色體微缺失檢測Y染色體微缺失檢測1一、背景1全球不育夫婦占已婚夫婦10%-15%2其中男性原因占40%-50%3遺傳因素占男性不育的30%410%~15%的特發(fā)性無精癥存在Y染色體的微缺失一、背景1全球不育夫婦占已婚夫婦10%-15%2二Y染色體微缺失相關(guān)基因Y染色體是最短的近端著絲粒染色體,是男性特有的染色體。1976年，Tiepolo和Zuifaidi首先提出Y染色體上有多個(gè)基因參與生精過程。多年研究，發(fā)現(xiàn)男性特有的Y染色體上面存在一個(gè)關(guān)鍵的與生育相關(guān)的因子的區(qū)域，稱為AZF區(qū)。目前認(rèn)為在AZF區(qū)上存在四個(gè)精子發(fā)生亞區(qū)（AZFa、AZFb、AZFc、AZFd），各亞區(qū)包含的位點(diǎn)在男性生殖細(xì)胞發(fā)育的不同時(shí)期起著不同的作用，位點(diǎn)的缺失可致患者表現(xiàn)為少、弱精癥或無精癥從而引發(fā)不育。一般認(rèn)為，Y染色體的近端缺失（涉及AZFa和AZFb），表現(xiàn)以唯支持細(xì)胞綜合癥為主的嚴(yán)重生精障礙，Y染色體的遠(yuǎn)端缺失（涉及AZFd和AZFc），可殘留島狀的生精正常區(qū)域。對(duì)無精癥患者中，對(duì)檢查睪丸過小或睪丸活檢仍無精子患者，一般不再行AZF基因檢測。總之，開展染色體和AZF檢測，可全面評(píng)價(jià)男性不育遺傳缺陷，從而更好的解釋發(fā)病原因，提供遺傳咨詢和指導(dǎo)臨床診療。1996年將AZF區(qū)劃分為3個(gè)區(qū):AZFa、AZFb、AZFc。1999年研究發(fā)現(xiàn)在AZFb和AZFc間存在AZFd。研究發(fā)現(xiàn),在Y染色體AZFa、AZFb、AZFc3個(gè)區(qū)至少發(fā)現(xiàn)15個(gè)與精子發(fā)生相關(guān)的基因，AZFd區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)基因。二Y染色體微缺失相關(guān)基因Y染色體是最短的近端著絲粒染色體3二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失的病人,主要表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合征伴睪丸體積縮小,無精子生成AZFb缺失的病人主要表現(xiàn)為生精過程阻滯在精母細(xì)胞階段,無精子生成AZFc區(qū)缺失病人表現(xiàn)多樣化,會(huì)出現(xiàn)無精子癥和少精子癥的不同臨床表現(xiàn)二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失的病人,主要表現(xiàn)為4二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失患者33%為嚴(yán)重少精子,67%表現(xiàn)為無精子AZFb缺失患者9%輕度少精子,23%嚴(yán)重少精子,68%無精子AZFc缺失患者46%嚴(yán)重少精子,54%無精子二Y染色體微缺失相關(guān)基因5二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa-b缺失患者50%嚴(yán)重少精子50%無精子AZFa-c缺失患者100%無精子AZFb-c缺失患者4%嚴(yán)重少精子,96%無精子二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa-b缺失患者50%嚴(yán)6二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失較為少見,占整個(gè)AZF缺失4.9%。整個(gè)AZFa區(qū)域缺失通常表現(xiàn)為SCOS,為絕對(duì)的無精子癥。若患者為AZFa缺失,不建議做睪丸穿刺尋找精子進(jìn)行卵細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射，目前只能尋求供精人工授精技術(shù)來獲得妊娠。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失較為少見,占整個(gè)A7二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFb缺失也不多見,占整個(gè)AZF缺失15.8%。缺失的典型睪丸組織學(xué)特征是精子成熟障礙,主要停滯在初級(jí)精母細(xì)胞階段。但也有SCOS的報(bào)告，睪丸穿刺不能獲得精子,因此,臨床上也不建議做睪丸穿刺。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFb缺失也不多見,占整個(gè)A8二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFc缺失是臨床上最常見的AZF缺失類型,臨床和睪丸組織學(xué)表型多種多樣。一般說來,AZFc缺失患者尚存精子生成能力。AZFc缺失見于無精子癥或嚴(yán)重少精子癥患者,罕見情況下,也可以在自然狀態(tài)下遺傳給其男性后代在無精子癥患者中,AZFc缺失者通過睪丸精子穿刺獲得精子的機(jī)會(huì)比其他缺失類型大,同時(shí)可以從睪丸穿刺獲得精子進(jìn)行ICSI受孕,但這些患者的男性后代都將是AZFc缺失的攜帶者，建議在進(jìn)行試管嬰兒前,行遺傳咨詢。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFc缺失是臨床上最常見的AZ9三AZF微缺失與其他不育因素AZF微缺失與隱睪癥AZF微缺失與精索靜脈曲張AZF微缺失與雙側(cè)輸精管缺如AZF微缺失與睪丸支持細(xì)胞AZF微缺失與生殖激素異常AZF微缺失與其他不育因素三AZF微缺失與其他不育因素AZF微缺失與隱睪癥10四Ｙ染色體微缺失的檢測方法核型分析總體上來說操作繁瑣、效率不高,尤其是難以檢測出微小的染色體異常或變異。熒光原位雜交(Fluorescenceisituhybridization,FISH)雖然有更高的分辨率,但其檢測的范圍為20kb~5Mb,對(duì)于微小的染色體缺失也難以檢測,且繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作與高昂的成本也限制了FISH技術(shù)在臨床中的廣泛應(yīng)用。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法核型分析總體上來說操作繁瑣、效11四Ｙ染色體微缺失的檢測方法目前關(guān)于Ｙ染色體微缺失的檢測方法最常用的是多重聚合酶鏈反應(yīng)(ＰＣＲ)技術(shù)而檢測的位點(diǎn)有很多但有研究表明ＳＹ８４ＳＹ１５２ＳＹ１２７ＳＹ１４７\ＳＹ２５４-ＤＡＺ和ＲＢＭＹ１這６個(gè)基因標(biāo)志物能覆蓋大部分已發(fā)現(xiàn)的微缺失其他的位點(diǎn)序列靈敏度比較低,當(dāng)然不同種族間可能會(huì)有輕微的差異四Ｙ染色體微缺失的檢測方法目前關(guān)于Ｙ染色體微缺失的檢12四Ｙ染色體微缺失的檢測方法由于不同實(shí)驗(yàn)室采用PCR方法不同,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果各異。為提高診斷質(zhì)量，歐洲男科協(xié)會(huì)(EAA)和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控網(wǎng)(EMQN)在1999、2004年先后頒布了第1版和第2版Y染色體微缺失分子診斷指南，規(guī)范了檢測微缺失時(shí)的Y染色體序列標(biāo)簽點(diǎn)(sequencetargetedsites，STS)與所采用的內(nèi)外對(duì)照方法。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法由于不同實(shí)驗(yàn)室采用PC13四Ｙ染色體微缺失的檢測方法選擇位于Y染色體短臂(Yp)的睪丸決定基因(SRY)和鋅指蛋白基因(ZFX／ZFY)為對(duì)照。ZFX／ZFY既存在于x染色體短臂，也存在于Yp，其與SRY一起構(gòu)成2個(gè)目前推薦使用的參照基因。每個(gè)AZF區(qū)域至少設(shè)置2個(gè)STS位點(diǎn)才能正確有效.其推薦的STS為AZFa：sY84，sY86：AZFb：sY127，sY134；AZFc：sY254，sY255。多重PCR實(shí)驗(yàn)中的引物應(yīng)包括：sY14(SRY)，zFY，，sY84，sY86，sY127，sY134，sY254，sY255。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法選擇位于Y染色體短臂(Y14五染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義1用于原發(fā)性無精或少弱精癥的遺傳咨詢。通過遺傳病因診斷，找到男性不育的遺傳病因，則可避免不必要的藥物及手術(shù)治療。2進(jìn)行輔助生育之前對(duì)其進(jìn)行遺傳病因診斷，可盡量避免將不良基因傳遞給下一代3輔助生育精子質(zhì)量篩選4為未來的基因治療提供理論依據(jù)。五染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義1用于原發(fā)性無精或少15染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義為臨床治療各種男性不育提供分子或細(xì)胞水平的依據(jù)，Ｙ染色體微缺失雖然不會(huì)影響身體健康和心理健康，但會(huì)導(dǎo)致后代出現(xiàn)同樣的不育問題對(duì)于不育夫婦，特別是無精子癥和嚴(yán)重少精癥的不育夫婦，雖然其可以通過ＩＣＳＩ達(dá)到妊娠的目的，并且有正常的胚胎發(fā)育和足月妊娠，但在接受ＩＣＳＩ治療之前有必要進(jìn)行Ｙ染色體微缺失的檢測以及移植前遺傳診斷，盡量選擇女嬰，切斷遺傳途徑。染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義為臨床治療各種男性不育提供分16EGFR突變與非小細(xì)胞肺癌酪氨酸激酶抑制劑靶向治療EGFR突變與非小細(xì)胞肺癌酪氨酸激酶抑制劑靶向治療17一背景肺癌是當(dāng)今世界上最常見的惡性腫瘤,男性肺癌占各類惡性腫瘤發(fā)病率的首位,女性肺癌發(fā)病率僅次于乳腺癌占第2位。盡管手術(shù)和化療技術(shù)不斷提高,但肺癌患者的預(yù)后仍然很差,5年生存率仍<20%。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高,產(chǎn)生了一些針對(duì)分子靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物。這些藥物針對(duì)性強(qiáng),能特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞。其中以表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)為靶點(diǎn)的分子靶向治療(moleculartargetedtherapy)在非小細(xì)胞肺癌的治療中日漸突出。一背景肺癌是當(dāng)今世界上最常見的惡性腫瘤,男性肺癌占各類惡18EGFR屬于受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases,RTKs),調(diào)控細(xì)胞的生長、分化、血管生成及凋亡抑制,其信號(hào)通路與惡性腫瘤的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。靶向藥物稱作酪氨酸激酶抑制劑(tyrosinekinasesinhibitors,TKIs),其中吉非替尼(Gefitibib,商品名為Iressa易瑞沙)和埃羅替尼(Erlotinib,商品名為Tarceva特羅凱)治療可以使腫瘤縮小。在Gefitibib和Erlotinib的臨床試驗(yàn)和治療中,僅有一部分NSCLC人群對(duì)藥物有反應(yīng)EGFR屬于受體酪氨酸激酶(receptortyr19發(fā)現(xiàn)幾乎所有對(duì)TKIs敏感的NSCLC患者都存在EGFR基因的體細(xì)胞突變。因此,研究NSCLC患者不同治療反應(yīng)性的機(jī)制、以及從中篩選出最適治療對(duì)象進(jìn)行有針對(duì)性的治療具有重要臨床意義。發(fā)現(xiàn)幾乎所有對(duì)TKIs敏感的NSCLC患者都存在EGFR20EGFR基因突變與TKIs治療敏感性文獻(xiàn)報(bào)道：肺癌細(xì)胞中EGFR酪氨酸激酶編碼區(qū)基因突變是靶向藥物奏效的一個(gè)必要前提條件,研究結(jié)果顯示,對(duì)EGFR突變型NSCLC,Gefitinib的有效率高達(dá)80%以上,而對(duì)野生型腫瘤則基本無效。這一研究隨后被相繼其它研究所證實(shí)。EGFR基因突變與TKIs治療敏感性文獻(xiàn)報(bào)道：肺癌細(xì)胞中21EGFR基因位于7號(hào)染色體短臂7p12～14區(qū),由28個(gè)外顯子組成。EGFR在許多腫瘤中過表達(dá),與腫瘤的生長侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在肺癌中,EGFR突變多出現(xiàn)于外顯子18～21區(qū)。最常見的突變包括19區(qū)的缺失突變(deletion)和21區(qū)的點(diǎn)突變(pointmutation),這兩種突變約占所有EGFR突變的85%～90%。EGFR基因位于7號(hào)染色體短臂7p12～14區(qū),由2822外顯子19區(qū)的堿基缺失主要是第746～752位密碼子的缺失突變,導(dǎo)致EG2FR蛋白中氨基酸序列丟失,這一缺失改變了受體酪氨酸激酶ATP結(jié)合槽(ATP2bindingcleft)的角度,從而改變了細(xì)胞對(duì)TKIs的敏感性。外顯子21的點(diǎn)突變主要是第858位密碼子出現(xiàn)T→G轉(zhuǎn)換,引起EGFR蛋白中該位點(diǎn)的氨基酸由亮氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫彼?簡稱L858R),此種結(jié)構(gòu)改變也使細(xì)胞對(duì)TKIs的敏感性發(fā)生變化外顯子19區(qū)的堿基缺失主要是第746～752位密碼子的缺23其他EGFR突變比較少見,包括外顯子18區(qū)的點(diǎn)突變和外顯子20區(qū)的插入突變其他EGFR突變比較少見,包括外顯子18區(qū)的點(diǎn)突變和外24TKIs治療耐受與EGFR二次突變并不是所有的EGFR突變都會(huì)導(dǎo)致對(duì)Gefitinib或Erlotinib敏感性的增加,對(duì)Gefitinib或Erlotinib最初有反應(yīng)的患者可發(fā)生二次突變而出現(xiàn)TKI治療耐受。如T790M,發(fā)生在EGFR外顯子20區(qū),編碼的蘇氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?氨基酸的改變導(dǎo)致了ATP結(jié)合區(qū)結(jié)構(gòu)改變,使得細(xì)胞對(duì)TKIs的敏感性降低。T790M突變也可出現(xiàn)在未做治療的患者中,因此,對(duì)于EGFR不同突變的功能有必要進(jìn)一步研究,以明確某個(gè)或某幾個(gè)突變是篩選適合TKIs治療患者的最佳指標(biāo)。TKIs治療耐受與EGFR二次突變并不是所有的EGFR突25EGFR基因擴(kuò)增和CA重復(fù)序列的多態(tài)性表達(dá)EGFR或存在EGFR基因擴(kuò)增的患者對(duì)Erlotinib治療反應(yīng)好,并且生存率得到明顯提高。研究發(fā)現(xiàn)：EGFR的高拷貝數(shù)與對(duì)藥物較好的反應(yīng)率、疾病控制率和存活率相聯(lián)系。EGFR蛋白的高表達(dá)與好的治療結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)度則次之。同時(shí)EGFR突變與較好的反應(yīng)率和預(yù)后有關(guān)。EGFR基因擴(kuò)增和CA重復(fù)序列的多態(tài)性表達(dá)EGFR或存在26但進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)分析表明只有高的EGFR基因拷貝數(shù)對(duì)應(yīng)較高的存活率。因此說明,EGFR基因擴(kuò)增可作為篩選TKIs治療的指標(biāo)之一。但進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)分析表明只有高的EGFR基因拷貝數(shù)對(duì)應(yīng)較高的27研究發(fā)現(xiàn),位于EGFR內(nèi)含子1的CA重復(fù)序列的多態(tài)性可影響EGFR的蛋白表達(dá),低重復(fù)CA數(shù)患者EGFR的RNA和蛋白表達(dá)高于高重復(fù)CA數(shù)的患者,體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)低重復(fù)CA數(shù)細(xì)胞對(duì)Gefitinib的敏感性較高。研究發(fā)現(xiàn),位于EGFR內(nèi)含子1的CA重復(fù)序列的多態(tài)性28EGFR家族其他成員—HER2/HER3HER2可與EGFR結(jié)合形成異源二聚體,引發(fā)受體自身磷酸化過程。有研究認(rèn)為,HER22基因拷貝數(shù)增加的腫瘤對(duì)Gefitinib更敏感。但亦有研究發(fā)現(xiàn),FISH(原位熒光雜交)檢測HER2或HER3陽性腫瘤與陰性腫瘤相比,兩組患者的病程進(jìn)展時(shí)間及平均存活時(shí)間均沒有顯著差異。但是在體外細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)中,不論有無EGFR突變存在,HER2和(或)HER3高表達(dá)的細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)Gefitinib較高的敏感性。EGFR家族其他成員—HER2/HER3HER2可與EG29K-RAS基因突變K-RAS是EGFR信號(hào)通路下游的基因。與EGFR基因突變相反,K-RAS突變常見于吸煙者和分化差的腫瘤。而且發(fā)生K-RAS突變的NSCLC并不同時(shí)出現(xiàn)EGFR突變,這兩種基因的突變是互相排斥的,提示K-RAS突變可以作為腫瘤對(duì)TKIs治療不敏感的指標(biāo),這部分患者應(yīng)采用其他方式的治療。K-RAS基因突變K-RAS是EGFR信號(hào)通路下游的基因30總結(jié)綜上所述,以EGFR受體酪氨酸激酶為靶點(diǎn)抗腫瘤藥物已經(jīng)成為晚期肺癌治療的一種新選擇。由于NSCLC中EGFR基因突變與TKIs治療敏感性顯著相關(guān),臨床上應(yīng)根據(jù)EGFR突變情況來選擇用藥。針對(duì)TKIs不敏感的患者,需要發(fā)展可對(duì)抗EGFR二次突變以及其他調(diào)控分子的新的靶向藥物?？偨Y(jié)綜上所述,以EGFR受體酪氨酸激酶為靶點(diǎn)抗腫瘤藥物已經(jīng)31Y染色體微缺失檢測Y染色體微缺失檢測32一、背景1全球不育夫婦占已婚夫婦10%-15%2其中男性原因占40%-50%3遺傳因素占男性不育的30%410%~15%的特發(fā)性無精癥存在Y染色體的微缺失一、背景1全球不育夫婦占已婚夫婦10%-15%33二Y染色體微缺失相關(guān)基因Y染色體是最短的近端著絲粒染色體,是男性特有的染色體。1976年，Tiepolo和Zuifaidi首先提出Y染色體上有多個(gè)基因參與生精過程。多年研究，發(fā)現(xiàn)男性特有的Y染色體上面存在一個(gè)關(guān)鍵的與生育相關(guān)的因子的區(qū)域，稱為AZF區(qū)。目前認(rèn)為在AZF區(qū)上存在四個(gè)精子發(fā)生亞區(qū)（AZFa、AZFb、AZFc、AZFd），各亞區(qū)包含的位點(diǎn)在男性生殖細(xì)胞發(fā)育的不同時(shí)期起著不同的作用，位點(diǎn)的缺失可致患者表現(xiàn)為少、弱精癥或無精癥從而引發(fā)不育。一般認(rèn)為，Y染色體的近端缺失（涉及AZFa和AZFb），表現(xiàn)以唯支持細(xì)胞綜合癥為主的嚴(yán)重生精障礙，Y染色體的遠(yuǎn)端缺失（涉及AZFd和AZFc），可殘留島狀的生精正常區(qū)域。對(duì)無精癥患者中，對(duì)檢查睪丸過小或睪丸活檢仍無精子患者，一般不再行AZF基因檢測?？傊?，開展染色體和AZF檢測，可全面評(píng)價(jià)男性不育遺傳缺陷，從而更好的解釋發(fā)病原因，提供遺傳咨詢和指導(dǎo)臨床診療。1996年將AZF區(qū)劃分為3個(gè)區(qū):AZFa、AZFb、AZFc。1999年研究發(fā)現(xiàn)在AZFb和AZFc間存在AZFd。研究發(fā)現(xiàn),在Y染色體AZFa、AZFb、AZFc3個(gè)區(qū)至少發(fā)現(xiàn)15個(gè)與精子發(fā)生相關(guān)的基因，AZFd區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)基因。二Y染色體微缺失相關(guān)基因Y染色體是最短的近端著絲粒染色體34二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失的病人,主要表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合征伴睪丸體積縮小,無精子生成AZFb缺失的病人主要表現(xiàn)為生精過程阻滯在精母細(xì)胞階段,無精子生成AZFc區(qū)缺失病人表現(xiàn)多樣化,會(huì)出現(xiàn)無精子癥和少精子癥的不同臨床表現(xiàn)二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失的病人,主要表現(xiàn)為35二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失患者33%為嚴(yán)重少精子,67%表現(xiàn)為無精子AZFb缺失患者9%輕度少精子,23%嚴(yán)重少精子,68%無精子AZFc缺失患者46%嚴(yán)重少精子,54%無精子二Y染色體微缺失相關(guān)基因36二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa-b缺失患者50%嚴(yán)重少精子50%無精子AZFa-c缺失患者100%無精子AZFb-c缺失患者4%嚴(yán)重少精子,96%無精子二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa-b缺失患者50%嚴(yán)37二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失較為少見,占整個(gè)AZF缺失4.9%。整個(gè)AZFa區(qū)域缺失通常表現(xiàn)為SCOS,為絕對(duì)的無精子癥。若患者為AZFa缺失,不建議做睪丸穿刺尋找精子進(jìn)行卵細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射，目前只能尋求供精人工授精技術(shù)來獲得妊娠。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFa缺失較為少見,占整個(gè)A38二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFb缺失也不多見,占整個(gè)AZF缺失15.8%。缺失的典型睪丸組織學(xué)特征是精子成熟障礙,主要停滯在初級(jí)精母細(xì)胞階段。但也有SCOS的報(bào)告，睪丸穿刺不能獲得精子,因此,臨床上也不建議做睪丸穿刺。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFb缺失也不多見,占整個(gè)A39二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFc缺失是臨床上最常見的AZF缺失類型,臨床和睪丸組織學(xué)表型多種多樣。一般說來,AZFc缺失患者尚存精子生成能力。AZFc缺失見于無精子癥或嚴(yán)重少精子癥患者,罕見情況下,也可以在自然狀態(tài)下遺傳給其男性后代在無精子癥患者中,AZFc缺失者通過睪丸精子穿刺獲得精子的機(jī)會(huì)比其他缺失類型大,同時(shí)可以從睪丸穿刺獲得精子進(jìn)行ICSI受孕,但這些患者的男性后代都將是AZFc缺失的攜帶者，建議在進(jìn)行試管嬰兒前,行遺傳咨詢。二Y染色體微缺失相關(guān)基因AZFc缺失是臨床上最常見的AZ40三AZF微缺失與其他不育因素AZF微缺失與隱睪癥AZF微缺失與精索靜脈曲張AZF微缺失與雙側(cè)輸精管缺如AZF微缺失與睪丸支持細(xì)胞AZF微缺失與生殖激素異常AZF微缺失與其他不育因素三AZF微缺失與其他不育因素AZF微缺失與隱睪癥41四Ｙ染色體微缺失的檢測方法核型分析總體上來說操作繁瑣、效率不高,尤其是難以檢測出微小的染色體異?；蜃儺悺晒庠浑s交(Fluorescenceisituhybridization,FISH)雖然有更高的分辨率,但其檢測的范圍為20kb~5Mb,對(duì)于微小的染色體缺失也難以檢測,且繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作與高昂的成本也限制了FISH技術(shù)在臨床中的廣泛應(yīng)用。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法核型分析總體上來說操作繁瑣、效42四Ｙ染色體微缺失的檢測方法目前關(guān)于Ｙ染色體微缺失的檢測方法最常用的是多重聚合酶鏈反應(yīng)(ＰＣＲ)技術(shù)而檢測的位點(diǎn)有很多但有研究表明ＳＹ８４ＳＹ１５２ＳＹ１２７ＳＹ１４７\ＳＹ２５４-ＤＡＺ和ＲＢＭＹ１這６個(gè)基因標(biāo)志物能覆蓋大部分已發(fā)現(xiàn)的微缺失其他的位點(diǎn)序列靈敏度比較低,當(dāng)然不同種族間可能會(huì)有輕微的差異四Ｙ染色體微缺失的檢測方法目前關(guān)于Ｙ染色體微缺失的檢43四Ｙ染色體微缺失的檢測方法由于不同實(shí)驗(yàn)室采用PCR方法不同,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果各異。為提高診斷質(zhì)量，歐洲男科協(xié)會(huì)(EAA)和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控網(wǎng)(EMQN)在1999、2004年先后頒布了第1版和第2版Y染色體微缺失分子診斷指南，規(guī)范了檢測微缺失時(shí)的Y染色體序列標(biāo)簽點(diǎn)(sequencetargetedsites，STS)與所采用的內(nèi)外對(duì)照方法。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法由于不同實(shí)驗(yàn)室采用PC44四Ｙ染色體微缺失的檢測方法選擇位于Y染色體短臂(Yp)的睪丸決定基因(SRY)和鋅指蛋白基因(ZFX／ZFY)為對(duì)照。ZFX／ZFY既存在于x染色體短臂，也存在于Yp，其與SRY一起構(gòu)成2個(gè)目前推薦使用的參照基因。每個(gè)AZF區(qū)域至少設(shè)置2個(gè)STS位點(diǎn)才能正確有效.其推薦的STS為AZFa：sY84，sY86：AZFb：sY127，sY134；AZFc：sY254，sY255。多重PCR實(shí)驗(yàn)中的引物應(yīng)包括：sY14(SRY)，zFY，，sY84，sY86，sY127，sY134，sY254，sY255。四Ｙ染色體微缺失的檢測方法選擇位于Y染色體短臂(Y45五染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義1用于原發(fā)性無精或少弱精癥的遺傳咨詢。通過遺傳病因診斷，找到男性不育的遺傳病因，則可避免不必要的藥物及手術(shù)治療。2進(jìn)行輔助生育之前對(duì)其進(jìn)行遺傳病因診斷，可盡量避免將不良基因傳遞給下一代3輔助生育精子質(zhì)量篩選4為未來的基因治療提供理論依據(jù)。五染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義1用于原發(fā)性無精或少46染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義為臨床治療各種男性不育提供分子或細(xì)胞水平的依據(jù)，Ｙ染色體微缺失雖然不會(huì)影響身體健康和心理健康，但會(huì)導(dǎo)致后代出現(xiàn)同樣的不育問題對(duì)于不育夫婦，特別是無精子癥和嚴(yán)重少精癥的不育夫婦，雖然其可以通過ＩＣＳＩ達(dá)到妊娠的目的，并且有正常的胚胎發(fā)育和足月妊娠，但在接受ＩＣＳＩ治療之前有必要進(jìn)行Ｙ染色體微缺失的檢測以及移植前遺傳診斷，盡量選擇女嬰，切斷遺傳途徑。染色體微缺失相關(guān)基因研究的

意義為臨床治療各種男性不育提供分47EGFR突變與非小細(xì)胞肺癌酪氨酸激酶抑制劑靶向治療EGFR突變與非小細(xì)胞肺癌酪氨酸激酶抑制劑靶向治療48一背景肺癌是當(dāng)今世界上最常見的惡性腫瘤,男性肺癌占各類惡性腫瘤發(fā)病率的首位,女性肺癌發(fā)病率僅次于乳腺癌占第2位。盡管手術(shù)和化療技術(shù)不斷提高,但肺癌患者的預(yù)后仍然很差,5年生存率仍<20%。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高,產(chǎn)生了一些針對(duì)分子靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物。這些藥物針對(duì)性強(qiáng),能特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞。其中以表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)為靶點(diǎn)的分子靶向治療(moleculartargetedtherapy)在非小細(xì)胞肺癌的治療中日漸突出。一背景肺癌是當(dāng)今世界上最常見的惡性腫瘤,男性肺癌占各類惡49EGFR屬于受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases,RTKs),調(diào)控細(xì)胞的生長、分化、血管生成及凋亡抑制,其信號(hào)通路與惡性腫瘤的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。靶向藥物稱作酪氨酸激酶抑制劑(tyrosinekinasesinhibitors,TKIs),其中吉非替尼(Gefitibib,商品名為Iressa易瑞沙)和埃羅替尼(Erlotinib,商品名為Tarceva特羅凱)治療可以使腫瘤縮小。在Gefitibib和Erlotinib的臨床試驗(yàn)和治療中,僅有一部分NSCLC人群對(duì)藥物有反應(yīng)EGFR屬于受體酪氨酸激酶(receptortyr50發(fā)現(xiàn)幾乎所有對(duì)TKIs敏感的NSCLC患者都存在EGFR基因的體細(xì)胞突變。因此,研究NSCLC患者不同治療反應(yīng)性的機(jī)制、以及從中篩選出最適治療對(duì)象進(jìn)行有針對(duì)性的治療具有重要臨床意義。發(fā)現(xiàn)幾乎所有對(duì)TKIs敏感的NSCLC患者都存在EGFR51EGFR基因突變與TKIs治療敏感性文獻(xiàn)報(bào)道：肺癌細(xì)胞中EGFR酪氨酸激酶編碼區(qū)基因突變是靶向藥物奏效的一個(gè)必要前提條件,研究結(jié)果顯示,對(duì)EGFR突變型NSCLC,Gefitinib的有效率高達(dá)80%以上,而對(duì)野生型腫瘤則基本無效。這一研究隨后被相繼其它研究所證實(shí)。EGFR基因突變與TKIs治療敏感性文獻(xiàn)報(bào)道：肺癌細(xì)胞中52EGFR基因位于7號(hào)染色體短臂7p12～14區(qū),由28個(gè)外顯子組成。EGFR在許多腫瘤中過表達(dá),與腫瘤的生長侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在肺癌中,EGFR突變多出現(xiàn)于外顯子18～21區(qū)。最常見的突變包括19區(qū)的缺失突變(deletion)和21區(qū)的點(diǎn)突變(pointmutation),這兩種突變約占所有EGFR突變的85%～90%。EGFR基因位于7號(hào)染色體短臂7p12～14區(qū),由2853外顯子19區(qū)的堿基缺失主要是第746～752位密碼子的缺失突變,導(dǎo)致EG2FR蛋白中氨基酸序列丟失,這一缺失改變了受體酪氨酸激酶ATP結(jié)合槽(ATP2bindingcleft)的角度,從而改變了細(xì)胞對(duì)TKIs的敏感性。外顯子21的點(diǎn)突變主要是第858位密碼子出現(xiàn)T→G轉(zhuǎn)換,引起EGFR蛋白中該位點(diǎn)的氨基酸由亮氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫彼?簡稱L858R),此種結(jié)構(gòu)改變也使細(xì)胞對(duì)TKIs的敏感性發(fā)生變化外顯子19區(qū)的堿基缺失主要是第746～752位密碼子的缺54其他EGFR突變比較少見,包括外顯子18區(qū)的點(diǎn)突變和外顯子20區(qū)的插入突變其他EGFR突變比較少見,包括外顯子18區(qū)的點(diǎn)突變和外55TKIs治療耐受與EGFR二次突變并不是所有的EGFR突變都會(huì)導(dǎo)致對(duì)Gefitinib或Erlotinib敏感性的增加,對(duì)Gefitinib或Erlotinib最初有反應(yīng)的患者可發(fā)生二次突變而出現(xiàn)TKI治療耐受。如T790M,發(fā)生在EGFR外顯子20區(qū),編碼的蘇氨酸轉(zhuǎn)變