標準解讀

《GB/T 38481-2020 微生物超低頻突變測定 雙重測序法》是一項國家標準，旨在提供一種準確檢測微生物中發(fā)生的超低頻率突變的方法。該標準詳細描述了如何通過雙重測序技術(shù)來識別和量化這些罕見的基因變異。

在標準文件中，首先定義了一些關(guān)鍵術(shù)語，比如“超低頻突變”指的是在群體中的發(fā)生率低于常規(guī)測序方法檢測限值（通常為<0.1%）的遺傳變化?！半p重測序”則是一種能夠提高檢測靈敏度的技術(shù)手段，它通過兩次獨立地對同一DNA片段進行測序，并比較結(jié)果來發(fā)現(xiàn)其中存在的差異點，從而實現(xiàn)對極低豐度突變體的有效捕捉。

接著，《GB/T 38481-2020》規(guī)定了一系列實驗操作步驟，包括樣本準備、文庫構(gòu)建、高通量測序以及數(shù)據(jù)分析等過程。特別強調(diào)了在整個流程中需要采取嚴格的質(zhì)量控制措施以確保數(shù)據(jù)準確性與可靠性。例如，在樣本處理階段要求使用無菌技術(shù)和條件；文庫制備時需注意避免交叉污染；而在數(shù)據(jù)分析環(huán)節(jié)，則推薦采用特定算法過濾掉可能由測序錯誤或PCR擴增偏倚引起的人工變異信號。

此外，該標準還提出了針對不同應(yīng)用場景下選擇合適對照品的重要性，以及如何合理設(shè)置實驗參數(shù)以優(yōu)化檢測效率等方面的指導(dǎo)建議。通過遵循這些建議，研究者可以獲得更精確的結(jié)果，進而支持科學(xué)研究或臨床應(yīng)用中對于微生物遺傳多樣性的深入理解。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2020-11-19 頒布
  • 2020-11-19 實施
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文檔簡介

ICS07080

A21.

中華人民共和國國家標準

GB/T38481—2020

微生物超低頻突變測定雙重測序法

Determinationofultralow-frequencymutationsformicroorganisms—

Duplexsequencing

2020-11-19發(fā)布2020-11-19實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

微生物超低頻突變測定雙重測序法

GB/T38481—2020

*

中國標準出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

202011

*

書號

:155066·1-63938

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T38481—2020

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中國標準化研究院提出并歸口

。

本標準起草單位清華大學(xué)洛陽華清天木生物科技有限公司江漢大學(xué)中國標準化研究院

:、、、。

本標準主要起草人張翀邢新會李梅剪興金王立言郭肖杰張樂樂彭海馬愛進

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38481—2020

微生物超低頻突變測定雙重測序法

1范圍

本標準規(guī)定了用雙重測序法測定微生物超低頻突變的方法

。

本標準適用于微生物基因組或基因片段超低頻突變的測定

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

超低頻突變ultralow-frequencymutations

化學(xué)物理或生物因素導(dǎo)致微生物發(fā)生的頻率低于-5的永久性改變

、DNA1×10。

32

.

條形碼標簽barcodelabel

接在待測片段兩側(cè)的核苷酸片段用以標示同一擴增家族的協(xié)助進行突變位點的

DNA,DNA,

確認

。

33

.

互補標簽家族complementarytagfamily

所有含兩端互補條形碼標簽的片段

DNA。

34

.

雙鏈同源序列double-strandconsensussequencesDCSs

;

帶有相同條形碼標簽的雙鏈序列包含反向互補鏈

DNA,。

4原理

在待測片段兩端接上一段隨機且互補的雙鏈核苷酸條形碼標簽然后對所有帶有條形

DNA12nt,

碼標簽的序列進行雙重的高通量測序利用隨機互補標簽排除掉測序文庫制備過程中所引入

。12nt,

的突變進而準確檢測突變位點和突變率

,。

5試劑

除非另有規(guī)定僅使用分析純試劑

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