深圳市血液中心 血液篩查工作匯報(20150414煙臺)

深圳市血液中心

血液篩查工作情況匯報深圳市血液中心曾勁峰

1234抗-HTLV血液篩查獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢測化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)（CLIA）在血液篩查中的應(yīng)用輸血安全相關(guān)科研工作匯報報告內(nèi)容一、抗-HTLV血液篩查抗-HTLV血液篩查國內(nèi)外概況人類嗜T淋巴細(xì)胞自血病病毒可通過血液途徑傳播，能引起惡性淋巴瘤、成人T淋巴細(xì)胞白血病(ATL)等疾病。我國抗-HTLV陽性人群主要分布于福建沿海地區(qū)、新疆和廣東地區(qū)，陽性率為0.01％~1.0％。為探索深圳地區(qū)獻(xiàn)血人群HTLV感染情況，我們于2014年初將其納入到血液篩查檢測項目中?？?HTLV血液篩查國內(nèi)外概況廈門已于十年前已經(jīng)開展了抗－HTLV的檢測。

深圳市血液中心經(jīng)過認(rèn)真考慮，決定于2014年開始對深圳地區(qū)獻(xiàn)血人群開展抗－HTLV篩查。試劑：萬泰公司提供的抗－HTLV試劑。血液樣本常規(guī)酶免檢測HTLV酶免檢測初篩陽性樣本正常發(fā)放原樣管雙孔復(fù)檢復(fù)檢陽性樣本白膜層留樣送檢我中心HTLV檢測開展情況至今檢測數(shù)據(jù)2014年4月至今，共計檢測近10萬人份，初篩陽性標(biāo)本共計73例抗-HTLV初篩陽性率：0.7‰

確證陽性2例目前，初篩陽性樣本送中國食品藥品檢定研究院確證實驗HTLV對獻(xiàn)血資格判定的顧慮由于政策法規(guī)的限制，HTLV不是法定檢測項目，因此未將HTLV初篩陽性的檢測結(jié)果用于獻(xiàn)血資格的控制我國衛(wèi)生行政主管部門已決定在部分地區(qū)推動HTLV的檢測，如何完善相關(guān)行業(yè)法規(guī)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，值得我們共同討論二、獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢測國內(nèi)外現(xiàn)狀1.

目的和意義美國、日本、澳大利亞等國家和我國的香港地區(qū)均已將不規(guī)則抗體篩查列入獻(xiàn)血者常規(guī)檢測。我國衛(wèi)生行政部門目前尚未要求對獻(xiàn)血者進(jìn)行抗體篩查。1.2不規(guī)則抗體的不良影響不規(guī)則抗體是除ABO血型系統(tǒng)抗體以外的所有抗體，是引起眾多臨床問題的主要原因之一。輸血不良反應(yīng)不規(guī)則抗體血型鑒定困難新生兒溶血病疑難配型1.

目的和意義

◆

有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體；◆在配血前鑒定不規(guī)則抗體，可以避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤；◆特別對于交叉配血不合或有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者，能夠最大限度降低輸血風(fēng)險。

1.3不規(guī)則抗體篩選的重要意義1.

目的和意義2014年8月至今，深圳市血液中心無償獻(xiàn)血者標(biāo)本17939例符合獻(xiàn)血條件的獻(xiàn)血人群。

2.

技術(shù)和方法抗人球蛋白檢測卡，即不規(guī)則抗體篩檢卡（江蘇蘇大賽爾）不規(guī)則抗篩細(xì)胞（長春博德）

2.1樣品來源2.2試劑2.

技術(shù)和方法不規(guī)則抗篩細(xì)胞2.2試劑紅細(xì)胞血型抗體篩選格局圖序Rh-hrMNSsKiddDuffyLewisDiegoLutheranKellPXg序結(jié)果號DCEceMNSsJkaJkbFyaFybLeaLebDiaDibLuaLubKkKpaKpbP1Xga號鹽水IAT1++--+++++-++-+--+-+-+-++-1

2+-+++++-++++--+++-+-+-+--2

3-+-++++-+-+++-+-+-+-+-+-+3

2.3儀器

2.技術(shù)和方法Aigel300全自動血庫系統(tǒng)◆微柱凝膠法：應(yīng)用微柱凝膠法對17939例獻(xiàn)血者血漿進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查,對初篩陽性反應(yīng)樣品重復(fù)檢測2次。仍為陽性反應(yīng)的送輸血研究所做抗體特異性鑒定實驗。

干擾因素少，操作法簡單、方便、敏感性高；結(jié)果易判斷又能較長時間保存；操作具有可證明性，便于管理；④自動化、信息化程度高。2.技術(shù)和方法2.4方法3.

檢測數(shù)據(jù)標(biāo)本量初檢陽性標(biāo)本數(shù)量復(fù)檢陽性標(biāo)本數(shù)量確診陽性標(biāo)本數(shù)量1793934（0.19%）21（0.12%）21（0.12%）單位：例表1獻(xiàn)血人群不規(guī)則抗體篩查結(jié)果注：21例確診陽性標(biāo)本中多數(shù)為抗－M抗體和冷抗體3.1數(shù)據(jù)種類3.1陽性標(biāo)本示例一010740這個標(biāo)本結(jié)果是1+，疑似陽性（確認(rèn)結(jié)果為陰性）.3.檢測數(shù)據(jù)3.1陽性標(biāo)本示例二211261這個標(biāo)本的Ⅲ號篩選細(xì)胞為弱陽性（確認(rèn)結(jié)果：冷抗體）3.檢測數(shù)據(jù)4.橫向合作的目的完善臨床輸血信息化管理系統(tǒng)

加強(qiáng)輸血管理，深圳市血液中心與合作醫(yī)院間的Lis系統(tǒng)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，有效實現(xiàn)了血液信息快速的互換共享。資料齊全與合作醫(yī)院的管理系統(tǒng)成功連接數(shù)據(jù)準(zhǔn)確查詢方便統(tǒng)計快捷操作簡單管理規(guī)范安全備份4.橫向合作的目的◆評估深圳地區(qū)不規(guī)則抗體篩查的陽性率◆評估不規(guī)則抗體篩查結(jié)果對臨床患者交叉配血的影響◆確保受血者輸入獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞的安全性，最大限度保證紅細(xì)胞的存活時間◆評估不規(guī)則抗體篩查對輸血安全風(fēng)險，為電子交叉配血推廣和應(yīng)用打下基礎(chǔ)合作意義4.橫向合作的目的電子配血，是將信息化技術(shù)應(yīng)用到配血中的一種技術(shù)，就是將獻(xiàn)血者的血液信息和患者的血液信息輸入計算機(jī)，由計算機(jī)系統(tǒng)判斷和傳輸血型鑒定結(jié)果、審核血型信息并選擇相容性血液輸注。電子配血-優(yōu)勢安全性節(jié)省人力物力節(jié)省時間減少血液浪費電子配血是未來輸血發(fā)展的必然趨勢。4.橫向合作的目的三、化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)（CLIA）在血液篩查中的應(yīng)用在國內(nèi)進(jìn)口設(shè)備應(yīng)用廣泛CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況（之一）澳大利亞，新西蘭，新加坡，馬來西亞，泰國，韓國，印度尼西亞，香港等國家和地區(qū)。以上國家基本都在使用Abbott的Prism化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。項目涉及：HBsAg，anti-HCV，anti-HIV1/2的血清學(xué)檢測。新加坡血液中心的檢測設(shè)備CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況（之二）日本使用的是自己開發(fā)的方法（CLEIAs,CL4800testingsystem,Fujirebio,Tokyo,Japan），檢測項目增加了anti-HBc（定性），anti-HBs（定量）。同時日本還常規(guī)檢測anti-HTLV1。CLIA技術(shù)在血液篩查的應(yīng)用情況（之三）其他區(qū)域，如美國全部使用化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)用于血液篩查。檢測項目增加了anti-HBc，anti-HTLVI/II，anti-T-Cruzi(抗查格斯)等項目的檢測。而在歐洲，化學(xué)發(fā)光也被廣泛，如德國，法國等。病毒標(biāo)志物的檢測糖尿病各類激素水平檢測感染性疾病心血管疾病腫瘤標(biāo)志物檢測臨床應(yīng)用廣泛為什么血站實驗室沒有應(yīng)用?規(guī)范要求用于血液篩查的檢測試劑屬于藥品和三類醫(yī)療器械監(jiān)督管理范疇，質(zhì)量必須符合《中華人民共和國藥品管理法》和《中華人民共和國醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》的有關(guān)規(guī)定；而一般醫(yī)院檢驗科試劑屬于三類醫(yī)療器械監(jiān)督管理目前沒有國產(chǎn)CLIA試劑取得“藥字”號注冊資格。國產(chǎn)設(shè)備沒有普及，只有少數(shù)進(jìn)口企業(yè)的產(chǎn)品可以應(yīng)用，且使用成本相對較貴化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)未在國內(nèi)血站實應(yīng)用原因法律法規(guī)法律、法規(guī)評估國產(chǎn)CLIA設(shè)備連續(xù)工作的穩(wěn)定性、可靠性；評估國產(chǎn)CLIA試劑的檢測靈敏度，特異性；評估CLIA檢測技術(shù)血站實驗室開展檢測的可行性；測試目的-評估內(nèi)容CLIA試劑:深圳邁瑞公司生產(chǎn)的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測試劑。比對試劑：為血站現(xiàn)用的HBsAg3.0(Sorin)、HIV(Biorad)、TMA核酸檢測試劑(Grifols)AntiHBc(科華、萬泰、新創(chuàng))及檢測項目:HIV(Ab/P24

Ag)、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc檢測平臺:全自動化學(xué)發(fā)光分析儀，血站現(xiàn)有ELISA及核酸檢測平臺檢測原理`材料：試劑及檢測平臺CLIA檢測血樣：2014年4月期間單獨采集的2163樣品(促凝管)考評試劑：CLIA磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑(邁瑞)參考試劑：ELISA-HBsAg3.0(Sorin)、

HIV(Biorad)、AntiHBc(科華、萬泰、新創(chuàng))TMA核酸檢測試劑(Grifols)樣本測試原則樣本在邁瑞CL2000i化學(xué)發(fā)光儀上測試HIV、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc，測試與血站血篩同步進(jìn)行重復(fù)測樣本挑選原則（重測三次）：考評試劑HBsAg結(jié)果與HBV核酸檢測或HBsAg酶免結(jié)果不符的樣本；考評試劑HBsAg結(jié)果為陽性或HBV核酸檢驗為陽性或HBsAg免疫檢驗結(jié)果陽性，而邁瑞HBeAg為陰性的樣本；考評試劑HIV測試結(jié)果與HIV核酸檢測或HIV酶免結(jié)果不符的樣本CLIA實驗設(shè)計

增強(qiáng)型ALP+AMPPD發(fā)光體系超順磁性微粒子分離系統(tǒng)

模塊化設(shè)計，單機(jī)最高240T/H，靈敏度高，精密度高，線性范圍寬一鍵實現(xiàn)試劑在線更換，檢測耗材少全自動化學(xué)發(fā)光儀CL2000i聯(lián)機(jī)/拓展圖單機(jī)圖CLIA實驗設(shè)計樣本結(jié)果處理：以三種方法測試中兩次測試一致的結(jié)果為CLIA系統(tǒng)最終結(jié)果。參考結(jié)果判定項目核酸結(jié)果ELISA結(jié)果參考結(jié)果（CLIA）HBsAg陽性陽性陽性陽性陰性陽性陰性陽性陽性陰性陰性陰性HIV陽性陽性陽性陽性陰性陽性陰性陽性陽性陰性陰性陰性Anti-HBc以三家結(jié)果AntiHBc(科華、萬泰、新創(chuàng))均相同為參考結(jié)果HBeAg陽性樣本已羅氏和雅培結(jié)果為準(zhǔn)，陰性樣本即認(rèn)為陰性工作流程獻(xiàn)血樣本采集樣本離心處理化學(xué)發(fā)光及血站測試結(jié)果對比分析樣本重測與結(jié)果分析HIV抗原抗體試劑盒測試結(jié)果3例ELISA陽性全部檢出：對比試劑（羅氏+雅培）也為陽性；考察試劑初測23例假陽—后續(xù)分析：與采血管等有關(guān)；通過優(yōu)化參數(shù)及試劑配方，19例重測全部轉(zhuǎn)陰，剩余4例假陽。系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)NAT216302163ELISA216032163系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)NAT216302163MR系統(tǒng)2140232163系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)血站結(jié)果216032163MR系統(tǒng)2140232163MRHIV化學(xué)發(fā)光VS血站結(jié)果(血站結(jié)果為參比)99.07%2140100.00%3MRHIV化學(xué)發(fā)光VSNAT(NAT為參比試劑)98.94%21400.00%0ELISAVSNAT(NAT為參比試劑)99.86%21600.00%0HBsAg測試結(jié)果MR系統(tǒng)與血站結(jié)果共有13例樣本結(jié)果不符。進(jìn)行第三方試劑驗證：羅氏HBsAg定量檢測試劑盒與雅培HBsAg定量檢測試劑盒系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)NAT215122153ELISA2144192163系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)ELISA2144192163MR系統(tǒng)215492163系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)NAT215122153MR系統(tǒng)215492163系統(tǒng)陰性樣本陽性樣本總樣本數(shù)陰性符合率符合樣本數(shù)陽性符合率符合樣本數(shù)血站結(jié)論2142212163MR系統(tǒng)21549216399.86%21480.00%0MRHBsAg化學(xué)發(fā)光VS血站參考結(jié)果99.95%214142.86%9MRHBsAg化學(xué)發(fā)光VSNAT99.40%21380.00%0ELISAVSNATMRHBsAg化學(xué)發(fā)光VSELISA100.00%214447.37%913例結(jié)果不符HBsAg樣本驗證結(jié)果13例不符樣本，邁瑞系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)完全符合，與雅培有2例不符。2例不符樣本中1例(218#-20140407)深圳血站測試結(jié)果與雅培結(jié)果一致。1例(30#-20140421)深圳血站結(jié)果與雅培、羅氏和邁瑞結(jié)果均不一致！HBsAg樣本日期樣本編號核酸結(jié)果ELISA血站結(jié)論IU/ml結(jié)果IU/ml結(jié)果IU/ml結(jié)果20140415115NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg2014041610NegPOSPOS0.01Neg<0.05Neg0.04Neg2014041692NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041782NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140417116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg20140417218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.05POS2014041859NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041887NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042034NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140420218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042130NegNegNeg0.48POS0.241POS0.82POS2014042146NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg20140423116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg注：邁瑞系統(tǒng)cutoff為0.08IU/ml，羅氏為0.057IU/ml，雅培為0.05IU/ml深圳市血站測試結(jié)果MR系統(tǒng)測試結(jié)果羅氏e411系統(tǒng)測試結(jié)果雅培i1000系統(tǒng)測試結(jié)果12例參考HBsAg＋測試結(jié)果分析樣本日期樣本編號測試結(jié)果（IU/mL，CO=0.08IU/mL）ELISA核酸20140416200214203112460.00+-20140417200214303981420.00+-20140417200214304068420.00+-20140418200214203281460.00+-20140418200214203230420.00+-20140418200214005968420.01-+20140419200214203356440.00+-20140419200214101835460.00+-20140421200214203455420.00+-20140421200214101924440.00-+20140422200214101940440.01+-20140424200214304348460.01+-

捕獲一例HIV窗口期背景：捐血者：男，39歲，在我中心第一次獻(xiàn)血2015年3月15采集血樣，16日同時進(jìn)行ELISA一遍、NAT一遍檢測。HIV檢測試劑為抗體/抗原試劑，TMA核酸檢測試劑；檢測結(jié)果：ELISA-/NAT+3月27日（采血12天后）進(jìn)行第二次抽樣檢測。檢測結(jié)果：ELISA+/NAT+HIVELISA檢測漏檢例證HIVELISA檢測漏檢例證樣本采集日期邁瑞HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg(COI)ELISATMA抗HIV硒標(biāo)方法WB帶型2015031562.5153.9399.980.23進(jìn)口第四代0.019國產(chǎn)第三代＋－無特異性條帶2015032758.1151.9890.3711.24進(jìn)口第四代0.22國產(chǎn)第三代＋－無特異性條帶對比測試結(jié)果說明:HIV化學(xué)發(fā)光法檢測窗口期早于ELISA2.CLIA試劑性能與進(jìn)口CLIA試劑對本例樣品的HIV檢測性能相當(dāng)行業(yè)規(guī)范對CLIA方法的政策性完善民族企業(yè)的崛起和進(jìn)步，國產(chǎn)試劑、檢測平臺的發(fā)展檢測成本的降低國家對血篩試劑審批制度的改進(jìn)

期待四、輸血安全相關(guān)科研工作匯報專門從事血液病毒核酸檢測的深入研究工作。研究輸血潛在的感染風(fēng)險，提高中心的科研水平。1.成立核酸研究室1.人才的引進(jìn)：2013年以來引進(jìn)多名博士、碩士，提高科研能力2.購置科研設(shè)備，建立研究平臺3.建立先進(jìn)的病毒分子生物學(xué)系統(tǒng)分析方法和技術(shù)。

聘請英國劍橋大學(xué)輸血醫(yī)學(xué)部JPALLAIN教授（英國兩院院士）為我中心核酸研究團(tuán)隊客座