NY/T 539-2002副結(jié)核病診斷技術(shù)

5.11.220141NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T539-2002副結(jié)核病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforparatuberculosis2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T539—2002副結(jié)核?。╬aratuberculosis，Johne'sdisease）是由副結(jié)核分枝桿菌（mycobacteriaparatuberculosis）引起的以反動物為主的一種饅性、消耗性傳染病，其臨床癥狀以持續(xù)性腹瀉和饅性消瘦為特征。該病廣泛地分布于世界各國，引起較大的經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeIntentionaldesEpizootic（法）,OIE將其劃為B類傳染病，我國也將其劃為類傳染病。副結(jié)核病潛伏期長，有的終生感染而不表現(xiàn)出臨床癥狀。至目前為止，尚無治療該病的有效方法，防治該病的主要方法是監(jiān)測、隔離和淘汰病畜。目前該病的檢疫方法有細菌學(xué)檢套和免疫學(xué)檢套。后者主要是包括皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、瓊脂擴散試驗、間接紅細胞凝集試驗、淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗、補體結(jié)合反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。本標準提出的補體結(jié)合反應(yīng)、皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA方法與〇IE推薦的可選擇方法基本一致。本標準的附錄A為規(guī)范性附錄，附錄B為資料性附錄。本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)、吉林省獸醫(yī)研究所。本標準起草人：何昭陽、吳玉環(huán)、顧萬鉤、錢愛東。

NY/T539-2002副結(jié)核病診斷技術(shù)1范圍本標準規(guī)定了副結(jié)核病的診斷技術(shù)。本標準的細菌學(xué)檢查、皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)適用于牛、羊、鹿等動物的副結(jié)核病診斷；EIISA檢疫方法適用于牛的副結(jié)核病診斷2細菌學(xué)檢盤2.1材料準備0.5%氫氧化鈉液、水浴槽、離心機等抗酸染色法試劑：配制及染色方法見附錄A。2.2操作方法取待檢類樣(盡可能取帶有粘液或血絲的類便)15g～20g,加約3倍量的0.5%氫氧化鈉液，混勾，55C水浴乳化30min,以4層沙布過濾，取濾液1000r/min離心5min,去沉渣后，再以3000r/min4000r/min離心30min.去上清，用沉淀涂片。也可以直腸刮取物、病變腸段粘膜直接涂片。火焰固定抗酸染色（見附錄A)后鏡檢。2.3結(jié)果判定發(fā)現(xiàn)在細胞內(nèi)有被染成紅色、成叢排列的短桿菌即為細菌檢查陽性(十）否則判為細菌檢查陰性（-）.3皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗3.1材料準備3.1.1器材游標卡尺、滅菌的1ml.注射器及針頭、75%酒精棉、記錄本等。3.1.2變應(yīng)原副結(jié)核分枝桿菌提純蛋白衍生物（副結(jié)核PPD)或禽分枝桿菌提純蛋白衍生物(禽結(jié)核PPD)。3.2操作方法3.2.1將被檢動物編號，在頸側(cè)中三分之一處中部的健康皮膚處剪毛，直徑約10cm,將注射部位的皮膚用手捏起，以卡尺測量皮膚皺褶厚度并記錄。局部消毒。3.2.2將變應(yīng)原以滅菌生理鹽水稀釋至0.5mg/mL,與皮膚呈15°～20°的角度進行皮內(nèi)注射。注射后注射部位應(yīng)量現(xiàn)綠豆至黃豆大小的小包，無論動物種類及大小一律皮內(nèi)注射0.1mL。如注至皮下或溢出，應(yīng)于離原注射點8cm以遠處補注一針，并在記錄中加以說明。3.2.3羊在尾根無毛的皺褶部進行皮內(nèi)注射。3.3結(jié)果判定注射72h觀察反應(yīng)，檢查