農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)(課件)講解學(xué)習(xí)

農(nóng)藥殘留(cánliú)快速測定技術(shù)江陰市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(jiǎncè)中心2013年5月第一頁，共20頁。

濫用(lànyòng)“神農(nóng)丹”種姜第二頁，共20頁。2012年2011年2010年第三頁，共20頁。農(nóng)殘快速(kuàisù)測定方法及儀器介紹一、農(nóng)藥殘留簡述二、快速檢測方法及相關(guān)儀器(yíqì)三、農(nóng)殘速測儀介紹第四頁，共20頁。一、農(nóng)藥(nóngyào)殘留簡述1、農(nóng)藥(nóngyào)殘留相關(guān)名詞農(nóng)藥(nóngyào)分類無機化合物（目前使用較多的品種(pǐnzhǒng)有硫懸浮劑、波爾多液等。）化學(xué)合成農(nóng)藥(nóngyào)生物源農(nóng)藥礦物源農(nóng)藥有機合成化合物動物源農(nóng)藥（如動物毒素、昆蟲性引誘劑等）植物源農(nóng)藥（如植物內(nèi)源激素、植物源昆蟲激素等）微生物源農(nóng)藥（井岡霉素、白僵菌、蘇云金桿菌等）有機氯類有機磷類擬除蟲菊酯類氨基甲酸酯類雜環(huán)類化合物其它（苯氧羧酸類、脲類化合物）第五頁，共20頁。農(nóng)藥殘留：農(nóng)藥使用后殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。以mg/kg、ug/kg、ng/kg表示。農(nóng)藥殘留的危害：農(nóng)藥若大量殘留在農(nóng)副產(chǎn)品表面會引起人的神經(jīng)傳導(dǎo)阻礙、神經(jīng)麻痹甚至引起死亡。最大殘留限量：在農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許濃度，又稱最高殘留限量，以每千克(qiānkè)農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的毫克數(shù)（毫克/千克(qiānkè)）表示。我國違禁農(nóng)藥：666DDT、毒鼠強、甲胺磷、甲基對硫磷、對硫磷、久效磷、磷胺等高毒農(nóng)藥全面禁止使用第六頁，共20頁。2、國家(guójiā)農(nóng)藥殘留速測檢測標(biāo)準(zhǔn)NY/T448-2001蔬菜上有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(jiǎncè)方法GB/T5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(jiǎncè)第七頁，共20頁。二、快速檢測方法及相關(guān)(xiāngguān)儀器1、速測卡法（紙片法）膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍(lán)色），有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變(gǎibiàn)，由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。第八頁，共20頁。2、酶抑制率法（分光(fēnɡuānɡ)光度法）在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間(shíjiān)的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。第九頁，共20頁。目前使用的快速(kuàisù)檢測儀器儀器(yíqì)原理：酶抑制率法（分光光度法）使用此方法的儀器(yíqì)有：深圳安鑫寶WT系列農(nóng)藥殘留速儀長春吉大·小天鵝GDYN-110SB農(nóng)殘速測儀上海博納CL-BIII八通道殘留農(nóng)藥測定儀等特點：精確度高、穩(wěn)定性強易于操作第十頁，共20頁。三、農(nóng)殘速測儀介紹(jièshào)（一）原理農(nóng)藥對膽堿酯酶（檢測試劑）的活性有抑制作用，這樣就抑制了膽堿酯酶催化顯色劑水解發(fā)生顯色反應(yīng)，通過對顯色反應(yīng)的測定(cèdìng)來實現(xiàn)農(nóng)藥殘留量的測量。由此可判定果品蔬菜樣品中的殘留農(nóng)藥的含量。正常情況：底物+膽堿酯酶---水解→膽堿膽堿+顯色劑→→→黃色溶液第十一頁，共20頁。（二）抑制率計算方法通過測定(cèdìng)果蔬中的殘留農(nóng)藥使乙酰膽堿酯酶活性變化的程度來測定(cèdìng)樣品果蔬中的此類殘留農(nóng)藥毒性，儀器測定(cèdìng)的殘留農(nóng)藥大小用“抑制率”來表示。抑制率是農(nóng)藥對酶抑制程度的顯示指標(biāo)，其計算方式為:

I=((A0-At)/A0)×100％I———抑制率A0———對照的吸光度值

At———樣品溶液的吸光度值第十二頁，共20頁。（三）GB/T5009.199-2003方法(fāngfǎ)介紹1、配試劑緩沖液、酶試劑、顯色劑、底物均按照儀器自帶的使用說明書的要求配制而成（所用水為蒸餾水或純凈水(jìnɡshuǐ)）。除緩沖溶液可常溫放置，其他試劑配置后必須0-4℃避光保存，使用前冷卻至室溫，保存期不宜過長，一般現(xiàn)配先用。第十三頁，共20頁。

2、實驗(shíyàn)操作空白樣操作步驟及要求(yāoqiú)：①取2.5ml緩沖溶液加入試管中（記錄）。②分別加入0.1ml酶液（記錄），0.1ml顯色劑（記錄）至試管中。③搖勻后于37℃放置15min（計時）。④加入0.1ml底物（記錄）至試管中搖勻，此時檢液起顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中檢測。⑤注意比色皿光面毛面的放置方向。按對照檢測鍵，3min后記錄空白樣的△AC值。第十四頁，共20頁。樣品(yàngpǐn)樣的操作步驟及要求：取樣步驟及要求：①稱取菜樣1g〔要求一種菜樣要從不同植株取樣，從葉片部位?。ü麑嵤卟擞玫俄樒は飨拢?，剪成1cm左右見方(jiànfāng)碎片，混勻后用鑷子稱取1g（記錄），放入燒杯或提取瓶中（編號）〕。②取5ml緩沖溶液加入編好號的樣品瓶中（記錄）。③用手或借助儀器振蕩1-2min（計時）。④振蕩完成后靜置3-5min（計時）。第十五頁，共20頁。⑤試管中加入2.5ml樣品提取液。⑥再分別(fēnbié)加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml顯色劑至各樣品樣的試管中。⑦搖勻后于37℃放置15min（計時）。⑧各樣品樣中加入0.1ml底物搖勻。⑨最后將每個試管中的樣品液倒入比色皿中，迅速放入儀器中，按樣品檢測鍵，3min后記錄實驗結(jié)果。第十六頁，共20頁。3、結(jié)果(jiēguǒ)的判定結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品(yàngpǐn)提取液對酶的抑制率≥50%時，樣品(yàngpǐn)為陽性結(jié)果農(nóng)藥殘留超標(biāo)。抑制率在50%左右為可疑樣品(yàngpǐn)，超標(biāo)樣品(yàngpǐn)、可疑樣品(yàngpǐn)需要重復(fù)檢驗2次以上。第十七頁，共20頁。4、注意事項1、儀器開機之后最好預(yù)熱10分鐘以上。開機、關(guān)機之間間隔1分鐘以上。2、配試劑需按照說明進(jìn)行操作。3、實驗要求的蒸餾水可以用純凈水代替，但是不能用礦泉水，天然飲用水。4、酶液、顯色劑與底物切忌長時間室溫下放置，用后應(yīng)立即放入冷藏室內(nèi)（0-4℃）。5、提取液可以放置常溫下保存。（從冰箱中拿出的酶液要等他恢復(fù)(huīfù)到室溫才能使用，不然會導(dǎo)致酶的活性不夠，酶的活性最適溫度37攝氏度）。第十八頁，共20頁。5、韭菜、生姜、蔥、蒜、辣椒等刺激性氣味蔬菜中，含有對酶活性有影響的物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株蔬菜浸泡。6、避免交叉污染(wūrǎn)，每次取不同的樣品，清洗采樣器具。7、先做對照檢測，再做樣品檢測。對照樣品吸光度值△AC應(yīng)該在如下區(qū)間：實驗室溫度在25°C以上