微生物金黃色葡萄球菌

微生物金黃色葡萄球菌第一頁，共二十五頁，2022年，8月28日大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，故稱金黃色葡萄球菌。第二頁，共二十五頁，2022年，8月28日大多數(shù)菌株最適生長溫度30-37℃，最適pH為；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長。一般用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或7.5%氯化鈉肉湯增菌。第三頁，共二十五頁，2022年，8月28日

所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動(dòng)物來源的菌株通常可凝固兔、人、馬和豬的血漿。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白并釋放脂肪酸。在BP平板產(chǎn)生磷脂環(huán)。第四頁，共二十五頁，2022年，8月28日生物學(xué)特性——致病性

金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素：外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；在血平板培養(yǎng)出現(xiàn)溶血環(huán)。b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。d.脫氧核糖核酸酶（DNA酶）

e.腸毒素：引起急性胃腸炎。第五頁，共二十五頁，2022年，8月28日

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。

第六頁，共二十五頁，2022年，8月28日葡萄球菌皮膚感染第七頁，共二十五頁，2022年，8月28日

葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8-10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。第八頁，共二十五頁，2022年，8月28日二、檢驗(yàn)程序與操作方法根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)：《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》GB4789.10-94

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)第九頁，共二十五頁，2022年，8月28日檢樣25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水國標(biāo)：金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序直接計(jì)數(shù)方法增菌培養(yǎng)方法Baird-parker（貝爾德-帕克）0.3ml、0.3ml、0.4ml7．5％氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯血平板血平板，Baird-parker涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗(yàn)報(bào)告36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

第十頁，共二十五頁，2022年，8月28日檢驗(yàn)程序——增菌培養(yǎng)

利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯或7.5%氯化鈉肉湯增菌。置37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。第十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。典型菌落：呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)。第十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)第十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日血平板制作成分：豆粉瓊脂（或營養(yǎng)瓊脂）100mL，脫纖維羊血（或兔血）5-10mL。制法：加熱融化瓊脂，冷至50℃，以無菌操作加入脫纖維羊血或兔血，搖勻，傾注平板?；蚍盅b滅菌試管，擺成斜面。第十四頁，共二十五頁，2022年，8月28日BP（貝爾德-帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢驗(yàn)程序——分離培養(yǎng)第十五頁，共二十五頁，2022年，8月28日

在BP平板上典型菌落為：灰色到黑玉色，圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，邊緣常為淡色（米黃色或灰色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。第十六頁，共二十五頁，2022年，8月28日B-P平板第十七頁，共二十五頁，2022年，8月28日革蘭氏陽性，球形，組成葡萄狀檢驗(yàn)程序——鑒定之革蘭氏染色鏡檢第十八頁，共二十五頁，2022年，8月28日檢驗(yàn)程序——鑒定之凝固酶試驗(yàn)

金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生血漿凝固酶，因此對其鑒別的主要試驗(yàn)是測定其凝固酶。方法一：試管法吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，放36±1℃恒溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。第十九頁，共二十五頁，2022年，8月28日試管法第二十頁，共二十五頁，2022年，8月28日陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動(dòng)第二十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日有凝塊血漿均勻混濁生理鹽水方法二：玻片法在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合（設(shè)陽性和陰性對照）制成菌懸液，若經(jīng)10~20s內(nèi)無自凝現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)（不用稀釋），與菌懸液混合，觀察結(jié)果。第二十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日

兔血漿制備成分：檸檬酸鈉0.106mol/L（31.3gNa3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸餾水中）制法：一份加兔血9份混合后離心2000rpm，10min吸取上清液即為兔血漿。第二十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日葡萄糖肉浸液肉湯的制備成分：絞碎牛肉500g，氯化鈉5g，蛋白胨10g，磷酸氫二鉀2g，葡萄糖10g，蒸餾水1000mL，pH7.4～7.6。制法：將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g，與蒸餾水混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH，煮沸并過濾、分裝，121℃30min高壓滅菌。第二十四頁，共二十五頁，2022年，8月28日25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10