GMP質(zhì)量體系顯微鑒別法

PAGE3PAGE1目的：建立顯微鑒別法的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范顯微鑒別法的操作。范圍：適用于顯微鑒別法。職責(zé)：檢驗(yàn)室主任、檢驗(yàn)員。規(guī)程：1儀器和用具：1.1儀器生物光學(xué)顯微鏡。1.2用具1.2.1放大鏡、刀片、鑷子、剪、解剖針。1.2.2載玻片、蓋玻片。1.2.3培養(yǎng)皿、酒精燈、鐵三角架、石棉網(wǎng)、滴瓶、試管、試管架、滴管、玻璃棒、乳缽、量筒。1.2.4帶蓋搪瓷盤、紗布、濾紙、火柴等。2試液與染液2.1試液2.1.1水合氯醛試液取水合氯醛50g，加水15ml與甘油10ml使溶解，即得。此液為透化劑，可使干縮的細(xì)胞壁膨脹而透明，并能溶解淀粉粒、樹脂、蛋白質(zhì)及揮發(fā)油等。2.1.2甘油醋酸試液（斯氏液）取甘油、冰醋酸與水各等份，混合即得。此液專用于觀察淀粉形態(tài)，可使淀粉粒不膨脹變形，便于測(cè)量其大小。2.2染液2.2.1甲紫染液（Hucker液）2.2.2革蘭碘液：取碘化鉀2g以5-10ml蒸餾水充分溶解后，加碘1g，待完全溶解后，加水至300ml。2.2.3脫色液：95%乙醇，或95%乙醇7份與丙酮3份混合液。2.2.4番紅復(fù)染液：2.5%番紅（沙黃）乙醇液3顯微標(biāo)本片的制作3.1切片制作標(biāo)本片(橫切或縱切)3.1.1藥材的預(yù)處理：先將藥材表面泥沙刷洗干凈，將應(yīng)觀察的部位，切成適當(dāng)大小的塊或段，一般以寬1cm、長3cm為宜，切面平整。3.1.2徒手切片：在檢驗(yàn)工作中，此法最常用，操作簡(jiǎn)便,迅速，制成的切片保持其細(xì)胞內(nèi)含物的固有形態(tài)，便于進(jìn)行各種顯微化學(xué)反應(yīng)觀察。3.1.3切片：右手持刀片，左手拇指和食指夾持藥材，中指托著藥材的底部，使藥材略高出食、拇二指，肘關(guān)節(jié)應(yīng)固定，使藥材的切面保持水平，刀口向內(nèi)并使刀刃自左前方向右后方切削，即可切得薄片。操作時(shí)，材料的切面和刀刃須經(jīng)常加水或50%乙醇保持濕潤,防止切片黏在刀片上。切好的切片用毛筆蘸水輕輕從刀片上推入盛有水或50%乙醇的培養(yǎng)皿中。3.1.4裝片：選取薄而平整的切片置載玻片上，根據(jù)所要觀察的內(nèi)容要求，滴加適宜的試液1～2滴，蓋好蓋玻片，即可在顯微鏡下觀察。3.2粉末制片：主要用于粉末狀的藥材及藥材粉末制成的成方制劑觀察。3.2.1粉末制備：藥材要先干燥，磨或銼成細(xì)粉，裝瓶，貼上標(biāo)簽。粉末制備時(shí),注意取樣的代表性，應(yīng)注意各部位的全面性。3.2.2制片法：用解剖針挑取粉末少許，置載玻片的中央偏右的位置，加適宜的試液1滴，用針攪勻(如為酸或堿時(shí)應(yīng)用細(xì)玻棒代替針)，待液體滲入粉末時(shí),用左手食指與拇指夾持玻片的邊緣，使其左側(cè)與藥液層左側(cè)接觸，再用右手持小鑷子或解剖針托住蓋玻片的右側(cè)，輕輕下放，則液體逐漸擴(kuò)延充滿蓋玻片下方。3.2.3中藥成方制劑的鑒別：按劑型不同,分別將樣品處理后,按粉末制片法觀察。3.2.3.1散劑、膠囊劑，可直接取出粉末裝片或透經(jīng)裝片。3.2.3.2片劑，可取2～3片研細(xì)后，取粉末適量裝片或透化片裝片。4革蘭染色法4.1方法4.1.1將甲紫染液滴加在已固定的涂片上，染1min，水洗干凈。4.1.2滴加革蘭碘液作用1min，水洗，瀝干。4.1.3滴加95%乙醇（或乙醇丙酮混合液）脫色，側(cè)動(dòng)玻片，至無紫色脫落為止（約20-30s），水洗。4.1.4滴加番紅染液復(fù)染30s-1min。水洗，待干。油鏡檢查。4.2結(jié)果：革蘭陽性菌，菌體呈藍(lán)紫色；革蘭陰性菌，菌體呈紅色。5注意事項(xiàng)5.1粉碎用具用畢后，必須處理干凈，干燥后才能使用于另一種藥材。5.2所用蓋玻片和載玻片應(yīng)絕對(duì)干凈。新片要用洗液浸泡或用肥皂水煮半小時(shí)，用水沖洗，再用蒸餾水沖洗1～2次，置于70%～90%乙醇中，取出，烘干。5.3為提高顯微鑒別的正確性，可與對(duì)照藥材或已經(jīng)鑒定品種的藥材對(duì)照觀察。5.4成方制劑鑒別前，應(yīng)了解處方組成，分析處方中各種藥材的主要鑒別特征及其量的多少，進(jìn)行顯微觀察時(shí)，至少觀察5片以上，使特征不致遺漏。6記錄要求詳細(xì)、清晰、明確、真實(shí)。6.1組織特征的記錄，應(yīng)從外至內(nèi)的次序進(jìn)行，對(duì)有鑒別意義的特征需詳細(xì)地描述，并要繪制簡(jiǎn)圖。6.2粉末顯徽鑒別時(shí)，先記錄原粉末的色澤、氣味。然后邊觀察、邊記錄。注意觀察的全面性。觀察每張粉末片時(shí)，應(yīng)自上左至下右，呈“之”字形掃描，逐漸移動(dòng)粉末片，全面觀察應(yīng)找的特征，將每個(gè)特征一一描述及繪圖，在觀察與描繪時(shí)，即應(yīng)測(cè)定其長度，一一作記錄，分析統(tǒng)計(jì)其長度（最小量值、多風(fēng)量值、最大量值。描述特征時(shí)，應(yīng)根據(jù)先多數(shù)后少數(shù)的