![第三篇微生物在藥學中的運用_第1頁](http://file4.renrendoc.com/view/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee5/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee51.gif)
![第三篇微生物在藥學中的運用_第2頁](http://file4.renrendoc.com/view/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee5/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee52.gif)
![第三篇微生物在藥學中的運用_第3頁](http://file4.renrendoc.com/view/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee5/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee53.gif)
![第三篇微生物在藥學中的運用_第4頁](http://file4.renrendoc.com/view/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee5/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee54.gif)
![第三篇微生物在藥學中的運用_第5頁](http://file4.renrendoc.com/view/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee5/1bf5020bdf245a780f1f30e2c221dee55.gif)
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
第三篇微生物在藥學中的運用第一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
微生物與藥學的關系密切:1、許多抗生素是微生物的代謝產(chǎn)物,2、選用微生物來制造醫(yī)藥衛(wèi)生方面廣泛應用的藥物,如維生素,輔酶;
3、藥品衛(wèi)生質(zhì)量的控制需要進行微生物學檢驗;
4、藥品和生物制劑應用生物工程技術生產(chǎn)時,采用工程菌進行,如:胰島素、干擾素和生長因子等。第二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第十四章與微生物有關的藥物試劑抗生素維生素氨基酸酶及酶抑制劑菌體制劑及其他與微生物有關的制劑第三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
第一節(jié)抗生素共生現(xiàn)象:互相依存,作為整體如:根瘤菌與豆科植物拮抗:生活在一起,一種生物產(chǎn)生物質(zhì)抑制或殺滅另一種生物。抗生素就是拮抗現(xiàn)象的體現(xiàn)。Fleming于1929年首先發(fā)現(xiàn)從青霉菌中產(chǎn)生的青霉素(penicillin),Waksman于1944年發(fā)現(xiàn)從鏈霉菌中產(chǎn)生的鏈霉素(streotomycin)。第四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
抗生素的現(xiàn)狀目前從自然界發(fā)現(xiàn)和分離的抗生素已達10,000多種,實際應用于生產(chǎn)和醫(yī)療上的抗生素約有一百多種,連同各種半合成衍生物及其鹽類共約三百種。國外現(xiàn)有的主要抗生素在我國已有生產(chǎn),其中的慶大霉素用我國自行分離的菌種生產(chǎn)。國外沒有的抗生素如創(chuàng)新霉素國外雖有,但我國發(fā)現(xiàn)新的成分或新的用途如平陽霉素(或博來霉素)第五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(一)、抗生素的概念和分類抗生素是指青霉素、鏈霉素等一類化合物的總稱,是人類控制、治療感染性疾病,保障身體健康及用來防治動植物災害的重要化合物。原始含義:是指那些由微生物產(chǎn)生的、能抑制其微生物生長的物質(zhì)。習慣上:將那些由微生物產(chǎn)生的,極微量即具有選擇性地抑制其他微生物或腫瘤細胞的天然有機化合物稱為抗生素。一、抗生素的概念和分類
第六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日確切的含義:
抗生素是生物(包括微生物、植物和動物)在其生命活動中產(chǎn)生的(或由其他方法獲得的),能在低濃度下有選擇地抑制或影響其他生物機能的有機物。第七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)、抗生素的分類1、根據(jù)抗生素的產(chǎn)生來源(1)細菌產(chǎn)生的抗生素如多粘菌素和短桿菌肽(2)放線菌產(chǎn)生的抗生素主要來自鏈霉菌屬如:鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素(3)真菌產(chǎn)生的抗生素如青霉菌屬產(chǎn)生的青霉素,頭孢菌屬產(chǎn)生的頭孢菌素(4)植物和動物產(chǎn)生的抗生素如:地衣和藻類植物產(chǎn)生的地衣酸被子植物蒜中制得的蒜素動物臟器中制得的魚素第八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、據(jù)抗生素的化學結(jié)構和性質(zhì)分類(1)β-內(nèi)酰胺類抗生素
如:青霉素、頭孢菌素[特點]分子中有一個含四個原子的酰胺環(huán),化學上稱為β-內(nèi)酰胺環(huán)。[來源]它們起初是從真菌產(chǎn)黃青霉菌和頭孢菌屬中發(fā)現(xiàn),后來從放線菌的鏈霉菌屬和諾卡菌屬及其某些革蘭陰性菌中也發(fā)現(xiàn)。從生物合成角度看,被認為是從氨基酸聚合而衍生的。第九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
[機制]抑制細菌細胞壁基本成分肽聚糖的合成,導致不可逆轉(zhuǎn)的破壞,具有殺菌作用。早期的青霉素只對革蘭陽性和陰性菌有效。對真菌無用(細胞壁不含肽聚糖),對支原體無效(無細胞壁)[使用注意問題]
除個別外,此類抗生素的毒性非常低。有時出現(xiàn)極為嚴重的超敏反應。第十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(2)四環(huán)類抗生素如金霉素、土霉素和四環(huán)素[特點]
具有很廣的抗菌譜及較好的治療果[來源]不同種的鏈霉菌均能產(chǎn)生四環(huán)素類抗生素[結(jié)構特點]由乙酸和丙二酸單位縮合的鍵環(huán)化而形成;由四個環(huán)線形相連而組成。[作用特點]抑制核糖體蛋白的合成,其作用是可逆的,因此具有抑制作用??咕V廣即革蘭陽性與陰性菌、立克次體、衣原體和某些原蟲。由于其理化性質(zhì)(在中性PH條件下不溶水)所決定,天然產(chǎn)生的只能口服,化學半合成獲得了一些可用于注射的衍生物及作用周期較長的。第十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(3)氨基糖苷類抗生素(氨基環(huán)醇類)[來源]包括很廣的由鏈霉菌、小單孢菌和芽孢桿菌產(chǎn)生的物質(zhì)。[化學特征]具有環(huán)狀氨基醇和與之相連的氨基糖。葡萄糖是氨基醇和氨基糖的來源。[作用機制]以不可逆的方式作用于核糖體而抑制蛋白質(zhì)的合成,具有殺菌作用,主要作用革蘭陽性菌。第十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日[代表藥物]鏈霉素(第一個發(fā)現(xiàn),也是第一個對抗生素有效的抗生素)、卡那霉素、慶大霉素、妥布拉霉素和丁安卡那霉素。[特點]由于分子內(nèi)含許多羥基,此類抗生素水溶性非常好,因而不能口服,主要的副作用為腎和耳毒性。第十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(4)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[化學結(jié)構特點]具有一個由不少于12個碳原子,并由內(nèi)脂基團使其環(huán)化。他們是鏈霉菌的典型產(chǎn)物,其生物合成是由一系列乙酸和丙酸單位縮合而成。[分類與作用特點]分兩類
a、抗細菌大環(huán)內(nèi)酯類抗生素
由14-16個碳原子構成的內(nèi)酯環(huán),至少有兩個糖分子;具有抑菌作用;抗菌譜局限于革蘭陽性菌和支原體;典型代表是紅霉素、竹桃霉素;為改善口服吸收率,還半合成了一些新的衍生物。第十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(5)肽類抗生素
由氨基酸組成,經(jīng)常形成環(huán)狀結(jié)構;主要對革蘭陽性菌。短肽菌肽主要干擾細菌細胞膜功能;桿菌肽主要抑制細胞壁肽聚糖的合成。[代表藥物]多黏菌素---對革蘭陰性菌有效,作用于細胞膜;肽托霉素和雷膜拉寧—對細胞壁合成抑制作用。第十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
(6)安莎霉素類
60年代末期投入臨床使用,其典型結(jié)構是具有一條脂肪鏈,連接兩個相對的芳香環(huán),像是一條鏈子上的兩個籃子。它們由放線菌屬的多種類群所構成,由一系列乙酸和丙酸單位縮合而成。如利福霉素(對革蘭陽性菌及分枝桿菌有極強的作用)、利福平(對分枝桿菌及葡萄球菌效果尤佳)。第十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(7)糖肽類抗生素(二丙庚肽類)
代表藥物為萬古霉素和替考拉寧。主要對革蘭陽性細菌有效,尤其是對耐β-內(nèi)酰胺類抗生素的葡萄球菌有效。第十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(三)、醫(yī)療用抗生素的基本要求1、差異毒力大是指微生物或腫瘤細胞等靶體的抑制或殺滅作用,與其對機體損害程度的差異比較??股氐牟町惗玖τ螅瑒t愈有利于臨床應用。如青霉素能抑制細菌細胞壁的合成,而人及哺乳類動物細胞不具備細胞壁,因而青霉素的差異毒力大。一般的化學消毒劑對微生物和機體的毒力無明顯差異。2、生物活性強大、有不同的抗菌譜是指在極微量的抗生素就對微生物具有抑制或殺滅作用。第十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日抗菌作用的強弱用最低抑菌濃度(MIC)來表示,即能抑制微生物生長所需的最低濃度(以μg/ml為單位),數(shù)值越小,則作用越強??咕V:是指抗生素所能抑制或殺滅微生物的范圍和所需劑量。范圍廣者稱為廣譜抗生素,范圍窄稱為窄譜抗生素。良好的抗生素還應具有不易使病原菌產(chǎn)生抗藥性,毒副作用小,不易引起超敏反應,吸收快,血藥濃度高,不易被血清蛋白結(jié)合而失活。第十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、抗生素產(chǎn)生菌的分離與篩選
1、從自然界分離篩選新抗生素產(chǎn)生菌從土壤到海洋一般常見到極端微生物從微生物到植物、海洋生物。2、改造現(xiàn)有的已知抗生素的產(chǎn)生菌,再經(jīng)篩選獲得新得抗生素產(chǎn)生菌。3、從已知的抗生素進行結(jié)構改造,經(jīng)篩選獲得新的半合成抗生素。第二十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(一)土壤微生物的分離1、采土以春、秋兩季采土為宜。去除表土,采取5-10cm深處的土壤,裝入無菌容器。2、分離菌株將2-4克土壤均勻散布水中待其沉降,上清部分經(jīng)適當稀釋后(一般為10-3-104),涂布于適宜培養(yǎng)基中,并培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn),挑取單個菌落移種純培養(yǎng),根據(jù)菌落的特征,初步排除相同菌。第二十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)、土壤微生物的篩選
是指從大量待篩選微生物中,盡快地鑒別出有實用價值的抗生素產(chǎn)生菌的實驗過程。
1、篩選模型:是指篩選工作中所使用的實驗菌。為了避免感染病原菌的危險,盡可能選用非致病的、且能代表某些類型致病菌的微生物作為實驗菌。
第二十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
表17-1常用的實驗菌和代表的致病微生物
實驗菌代表的致病微生物
金黃色葡萄球菌革蘭陽性球菌枯草芽孢桿菌革蘭陽性桿菌恥垢分支桿菌結(jié)核分枝桿菌大腸埃希菌革蘭陰性桿菌白假絲酵母菌酵母狀真菌曲霉絲狀真菌噬菌體病毒、腫瘤細胞第二十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、篩選方法一般采用瓊脂擴散法。先制備含實驗菌的平板,然后以無菌濾紙片蘸先制先制備含實驗菌的平板,然后以無菌濾紙片蘸取各放線菌的搖瓶培養(yǎng)發(fā)酵液或切取一定大小的放線菌瓊脂培養(yǎng)塊,置于含菌平板上,培養(yǎng)后觀察有無抑菌圈產(chǎn)生。備含實驗菌的平板,然后以無菌濾紙片蘸取各放線菌的搖瓶培養(yǎng)發(fā)酵液或切取一定大小的放線菌瓊脂培養(yǎng)塊,置于含菌平板上,培養(yǎng)后觀察有無抑菌圈產(chǎn)生。取各放線菌的搖瓶培養(yǎng)發(fā)酵液或切取一定大小的放線菌瓊脂培養(yǎng)塊,置于含菌平板上,培養(yǎng)后觀察有無抑菌圈產(chǎn)生。
第二十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
三、早期鑒別
(三)、早期鑒別
經(jīng)過篩選的陽性菌應進一步做抗菌譜和抗藥譜的測定,對有價值的產(chǎn)生菌必須從產(chǎn)生菌及自該菌產(chǎn)生的抗生素兩方面進行鑒定。
1、抗生素產(chǎn)生菌的鑒別
通過形態(tài)、培養(yǎng)、生化反應等實驗對抗生素產(chǎn)生菌進行初步的分類鑒定。第二十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、抗生素的鑒別常用理化方法如:紙層析法測定抗生素的極性和在各種溶媒中的溶解度。紙電泳法判斷抗生素是酸性、堿性、中性或兩性。薄層層析法、高效液相層析法、紫外分光光度法等方法測定新抗生素的理化性質(zhì)和結(jié)構。
第二十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
四、分離精制
將可能產(chǎn)生新抗生素的放線菌進行擴大培養(yǎng),然后選擇合適的方法從培養(yǎng)液中提取有效抗生素,進一步精制純化。在此過程中,須跟綜測定抗生素的生物活性。第二十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
五、臨床前實驗研究
如:進行動物毒性實驗(急性、亞急性、慢性)動物治療保護性實驗臨床前藥效實驗和藥理實驗(抗生素在體內(nèi)吸收、分布、排泄),經(jīng)系列實驗認為確有前途的新抗生素經(jīng)有關部門審查合格后方可進行臨床實驗。國家制定了《藥品臨床前研究質(zhì)量管理規(guī)范》,(簡稱GLP)。第二十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
六、臨床實驗
《藥品臨床實驗管理規(guī)范》簡稱GCP,是臨床實驗的全過程,包括方案設計、組織實施、監(jiān)視、審核、記錄、分析、總結(jié)和報告的標準。第二十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日三、抗生素的制備
抗生素的制備分為發(fā)酵和提取兩個階段。
抗生素的發(fā)酵:是指抗生素產(chǎn)生菌在一定培養(yǎng)基條件下生物合成抗生素的過程,該過程又分為菌體生長和抗生素生物合成兩個部分。發(fā)酵后存在于發(fā)酵液中的抗生素需用一系列物理和化學方法進行提取和精制,得到抗生素成品。第三十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日抗生素生產(chǎn)大致分為二個階段:發(fā)酵和提取一般流程如下:
菌種→孢子制備→種子制備→發(fā)酵→發(fā)酵液預處理及壓濾→提取及精制→成品檢驗→成品包裝第三十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
一、發(fā)酵階段
(一)現(xiàn)代抗生素發(fā)酵的一般特點
1、需氧發(fā)酵抗生素產(chǎn)生菌多為需氧菌,需要在發(fā)酵的過程中不斷通入無菌空氣,并進行機械攪拌,以提供足夠氧來進行生物代謝和生物合成。
2、深層發(fā)酵(或為沉沒發(fā)酵),在大型發(fā)酵罐內(nèi)進行,可進行較大規(guī)模的生產(chǎn)。
3、純種發(fā)酵在純種培養(yǎng)的抗生素發(fā)酵工業(yè)中,應防止雜菌及噬菌體污染。第三十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)一般生產(chǎn)流程抗生素發(fā)酵階段一般主要包括:孢子制備、種子制備和發(fā)酵,這是進行微生物逐步擴大培養(yǎng)過程。1、孢子制備目的是將沙土管保存的菌種進行培養(yǎng),以制備大量孢子供下一步種子制備之用,一般于試管、扁瓶或搖瓶內(nèi)進行。2、種子制備目的是使有限數(shù)量的孢子發(fā)芽繁殖,獲得足夠菌絲體以供發(fā)酵之用。在種子罐內(nèi)進行。通過種子制備,可以縮短發(fā)酵罐內(nèi)菌絲體繁殖生長的時間,增加抗生素合成的時間。一般通過種子罐1-3次,再移種到發(fā)酵罐中,分別為二級、三級和四級發(fā)酵。第三十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
3、發(fā)酵關鍵階段目的是在人工培養(yǎng)條件下使菌絲體產(chǎn)生大量的抗生素。在發(fā)酵罐內(nèi)進行。發(fā)酵注意事項:
1、無菌操作污染雜菌主要是種子和空氣過濾系統(tǒng)污染,各部件滲漏及操作。在發(fā)酵的各階段應取樣進行雜菌檢查。
2、營養(yǎng)需要發(fā)酵培養(yǎng)基應供給微生物生產(chǎn)繁殖以及生物合成所需的營養(yǎng),其原料應盡可能價廉,來源要廣。
3、pH值:加入使培養(yǎng)基pH值恒定的化合物:硫酸銨、硝酸鈉。第三十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日4、溫度酶的催化需要合適的溫度??赏ㄟ^罐的夾套或蛇管導入冷水或熱水以控制罐溫。5、前體
前體→是抗生素分子的前身或其組成的一部分,直接參與抗生素的生物合成而自身無顯著變化。在一定條件下,加入前體可控制抗生素的合成方向,并增加產(chǎn)量。如:在青霉素G的生產(chǎn)中常加入苯乙酸或苯乙酰胺作為前體;在紅霉素生產(chǎn)中添加丙酸、丙醇鹽作為前體。但前體一般對產(chǎn)生菌有一定的毒性。第三十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
6、通氣、攪拌及消沫發(fā)酵過程中利用溶解氧,因此必須不斷經(jīng)空氣過濾系統(tǒng)輸入無菌空氣,同時在發(fā)酵罐內(nèi)設置攪拌和擋板以增加通氣效果。為防止泡沫造成的逃液和滲漏,需用消沫漿或消沫劑。7、發(fā)酵終點判斷定期取樣,測定抗生素含量、發(fā)酵液的pH值、含糖量和含氮量、菌絲含量及形態(tài)觀察。放罐應在產(chǎn)量的高峰期,過早或過遲都會影響抗生素含量。第三十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)、發(fā)酵液預處理及提取階段
預處理時應盡可能使抗生素轉(zhuǎn)入以后要處理的相中(多數(shù)是液相),可用調(diào)節(jié)pH值呈酸性或堿性的方法。預處理的主要任務是除去發(fā)酵液內(nèi)的雜質(zhì)(Ca、Mg、Fe)及蛋白質(zhì),并經(jīng)過過濾,使菌絲與濾液分開,便于進一步提取。第三十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日常用的提取方法主要有四類:
1、溶媒萃取法是用一種溶劑將物質(zhì)從另一種溶劑中提取出來的方法,這兩種溶劑不能互溶或只部分互溶,能形成便于分離的兩相。目前微生物制藥生產(chǎn)中常用的提取方法。先進的萃取設備:ABE-216萃取機
2、離子交換法離子樹脂交換法是應用離子交換樹脂作為吸附劑,將發(fā)酵液中物質(zhì)選擇性地吸附至離子交換樹脂上,然后用合適的洗脫劑將抗生素從樹脂上洗脫下來,達到分離、濃縮、提純的目的。由于費用較低,成為提取主要方法。如:鏈霉素和卡那霉素的生產(chǎn)。第三十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
3、沉淀法是利用等電點或能與酸、堿、金屬鹽類形成不溶性或溶解度極小的復鹽沉淀出抗生素。此法簡便、經(jīng)濟。如:四環(huán)素4、吸附法是利用適當?shù)奈絼谝欢ǖ腜H條件下,使發(fā)酵液中抗生素被吸附劑吸附,然后再以適當?shù)南疵搫⑽降目股貜奈絼┥舷疵撓聛?,達到濃縮和提純目的。隨著大網(wǎng)格聚合物吸附劑的合成成功,吸附法得到新的發(fā)展。第三十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日抗生素提取得到粗品后應加以精制,上述方法均可使用。
一般用多級溶劑萃取或多級吸附、洗脫或薄層層析、柱層法、葡聚糖凝膠過濾等。因一般抗生素的穩(wěn)定性差,應避免常壓蒸餾、升華、過酸或過堿等方法。第四十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日四、抗生素的主要作用機制
(一)、抑制細胞壁的合成
多種抗革蘭陽性菌的抗生素,主要與抑制肽聚糖的合成有關,而肽聚糖合成的阻斷,就使得細胞壁無法完全形成。第四十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)、影響細胞膜的功能
作用于細菌細胞膜抗生素對細菌有較強的殺傷作用,如:多黏菌素,屬多肽類抗生素,分子內(nèi)含堿性親水性(多肽)基團與親脂性脂肪酸鏈。親水性基團可以與細菌細胞膜磷脂上的磷酸基形成復合物,而親脂鏈可以插入細胞膜上的脂肪鏈之間,因而解聚細胞膜的結(jié)構,使細菌細胞膜的通透性增加,導致細菌細胞內(nèi)的主要成分如氨基酸、核酸和鉀離子等滲漏,細菌因而死亡。
第四十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
短桿菌肽:為多肽類抗生素,對革蘭陽性菌有較強的殺菌作用,其分子的氨基酸側(cè)鏈也有親水性和輸水性兩種基團,也可與細胞膜的脂蛋白或脂質(zhì)結(jié)合,影響細菌細胞膜的通透性和其他功能。兩性霉素B是一種抗真菌的抗生素,對新型隱球菌和白假絲酵母菌等具有良好的抗菌作用,其作用機制主要是能和敏感菌細胞膜上的甾醇部分結(jié)合而改變了膜的通透性,使細胞內(nèi)鉀離子和其他成分滲出膜外,從而抑制了真菌的生長。第四十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
(三)、干擾蛋白質(zhì)合成
抑制蛋白質(zhì)合成過程的抗生素較多,主要有氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類以及其他一些抗生素。它們作用于蛋白質(zhì)的起始、延長、終止各階段的不同環(huán)節(jié)。如:鏈霉素對蛋白質(zhì)的起始、延長、終止各階段均有影響,但其作用是能不可逆地與細菌核糖體30S亞基結(jié)合,抑制蛋白質(zhì)合成的起始及密碼子識別階段。
第四十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
四環(huán)素類與核糖核蛋白體30S亞基16SrRNA上靠近與氨基酰-tRNA連接的區(qū)域形成可逆復合物,使氨基酰-tRNA不能與結(jié)合部位結(jié)合,阻斷蛋白質(zhì)合成的肽鏈延長。這類抗生素對細菌有選擇性毒性,因為原核細胞中的主動轉(zhuǎn)運體系能使藥物特異性透過細胞,真核生物細胞卻能主動外排此類抗生素。
大環(huán)內(nèi)脂類抗生素如紅霉素與核糖核蛋白體50S亞基結(jié)合,選擇性地抑制原核細胞蛋白質(zhì)的合成林可霉素與核糖核蛋白體50S亞基結(jié)合,抑制蛋白質(zhì)合成的肽鏈的延長。第四十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(四)、抑制核酸的合成如:博來霉素是引起DNA單鏈斷裂,也可使DNA一條鏈上的脫氧核糖和磷酸連接部分斷裂,形成缺口,還可抑制DNA連接酶和DNA聚合酶,干擾DNA的復制。
第四十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日利福霉素和利福平可直接作用于RNA聚合酶而抑制RNA的合成,主要是特異性抑制RNA合成的初始步驟,對原核生物細胞RNA合成有選擇性抑制作用,低濃度可抑制細胞RNA聚合霉,而高濃度對DNA聚合酶幾乎無作用,利福霉素類抗生素還能抑制RNA指導的DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)和RNA復制酶。蒽環(huán)類抗生素:如阿霉素可致DNA斷裂、染色體交換率增高、染色體畸變、抑制DNA復制第四十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(五)干擾細胞的能量代謝和電子傳遞體系由于大多數(shù)毒性較強,限制在臨床上的廣乏應用。
如:抗霉素A是呼吸鏈電子傳遞體系的抑制劑,可以使細胞色素b變成還原狀態(tài),細胞色素c1變成氧化狀態(tài),抑制細胞色素b和細胞色素c1間的電子傳遞。另外,抗霉素還能抑制細胞能量代謝中的氧化磷酸化過程,其機制可能是阻抑電子傳遞體系放出的自由能形成高能中間體向ATP生成的過程。第四十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第二節(jié)維生素第四十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日維生素是人和動物為維持正常的生理功能而必須從食物中獲得的一類微量有機物質(zhì),在人體生長、代謝、發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。維生素既不參與構成人體細胞,也不為人體提供能量。第五十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、維生素C維生素C(英語:VitaminC,又稱L-抗壞血酸)是高等靈長類動物與其他少數(shù)生物的必需營養(yǎng)素??箟难嵩诖蠖嗟纳矬w可借由新陳代謝制造出來,但是人類是最顯著的例外。最廣為人知的是缺乏維生素C會造成壞血病。在生物體內(nèi),維生素C是一種抗氧化劑,保護身體免于自由基的威脅,維生素C同時也是一種輔酶。其廣泛的食物來源為各類新鮮蔬果。第五十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、維生素B2核黃素,水溶性。由D.T.Smith和E.G.Hendrick在1926年發(fā)現(xiàn)。也被稱為維生素G多存在于酵母、肝臟、蔬菜、蛋類。缺少維生素B2易患口舌炎癥(口腔潰瘍)等。第五十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日三、維生素B12水溶性。由KarlFolkers和AlexanderTodd在1948年發(fā)現(xiàn)。也被稱為氰鈷胺或輔酶B12。多存在于肝臟、魚肉、肉類、蛋類。是治療兒童惡性貧血的首選藥物。第五十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第三節(jié)、氨基酸含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位,是構成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。是含有一個堿性氨基和一個酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質(zhì)的氨基酸均為α-氨基酸。目前已知的20多種氨基酸基本上均能用維生素進行發(fā)酵生產(chǎn)。產(chǎn)量最大的為谷氨酸和賴氨酸。第五十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、谷氨酸醫(yī)學上谷氨酸主要用于治療肝性昏迷,還用于改善兒童智力發(fā)育。食品工業(yè)上,味精是常用的食品增鮮劑,其主要成分是谷氨酸鈉鹽。過去生產(chǎn)味精主要用小麥面筋(谷蛋白)水解法進行,現(xiàn)改用微生物發(fā)酵法來進行大規(guī)模生產(chǎn)。谷氨酸是生物機體內(nèi)氮代謝的基本氨基酸之一,在代謝上具有重要意義。L-谷氨酸是蛋白質(zhì)的主要構成成分,谷氨酸鹽在自然界普遍存在的。多種食品以及人體內(nèi)都含有谷氨酸鹽,它即是蛋白質(zhì)或肽的結(jié)構氨基酸之一,又是游離氨基酸,L型氨基酸美味較濃。L-谷氨酸又名“麩酸”或?qū)懽鳌胺蛩帷?,發(fā)酵制造L-谷氨酸是以糖質(zhì)為原料經(jīng)微生物發(fā)酵,采用“等電點提取”加上“離子交換樹脂”分離的方法而制得。第五十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、賴氨酸用作食品強化劑和飼料添加劑,黑麥、米、玉米、花生粉等所含賴氨酸為限制氨基酸,小麥、芝麻、燕麥等所含賴氨酸為第一限制氨基酸。第五十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第四節(jié)、酶及酶抑制劑酶是指具有生物催化功能的高分子物質(zhì)。將酶加工成不同純度和劑型(包括固定化酶和固定化細胞)的生物制劑是酶制劑。動、植物和微生物產(chǎn)生的許多酶都能制成酶制劑。第五十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、酶制劑(一)鏈激酶和鏈道酶鏈激酶是從β-溶血性鏈球菌培養(yǎng)液中提純精制而成的一種高純度酶,白色或類白色凍干粉,易溶于水及生理鹽水,其稀溶液不穩(wěn)定。具有促進體內(nèi)纖維蛋白溶解系統(tǒng)的活力,使纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚缘睦w維蛋白溶酶,引進血栓內(nèi)部崩解和血栓表面溶解。臨床用于血栓性疾病治療。第五十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日鏈道酶是從β-溶血性鏈球菌培養(yǎng)液中分離出來的一種脫氧核糖核酸酶,在Mg2+存在下,能促使退變的白細胞和受傷組織細胞中的脫氧核糖核酸和脫氧核糖核蛋白解聚,分離為小單位,從而使化膿性分泌物的黏稠性下降,易于清除。對活細胞則無作用。用于:(1)支氣管擴張、肺膿腫或其他呼吸道感染痰液濃稠的情況;(2)胸膜腔纖維蛋白膜塊沉積或黏性滲出物堵塞,其他部位的膿瘡或血腫;(3)腦膜炎。第五十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)、透明質(zhì)酸酶為一種能水解透明質(zhì)酸的酶(透明質(zhì)酸為組織基質(zhì)中具有限制水分及其它細胞外物質(zhì)擴散作用的成分),用于人體能暫時降低細胞間質(zhì)的粘性,可促使皮下輸液、局部積貯的滲出液或血液加快擴散而利于吸收,為一種重要的藥物擴散劑。臨床用作藥物滲透劑,促進藥物的吸收,促進手術及創(chuàng)傷后局部水腫或血腫消散。第六十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(三)、天冬氨酸酶治療白血病及某些腫瘤第六十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(四)、青霉素酰化酶又稱為青霉素酰胺酶或青霉素氨基水解酶。主要從大腸埃希菌胞內(nèi)酶和巨大芽孢桿菌胞外酶獲得,該酶已大規(guī)模應用于工業(yè)生產(chǎn)β-內(nèi)酰胺類抗生素的關鍵中間體和半合成β-內(nèi)酰胺類抗生素。第六十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、酶抑制劑小分子化合物增強人的免疫力克拉維酸和阿莫西林制成復合制劑,用于臨床抗細菌感染第六十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第五節(jié)、菌體制劑及其他與微生物有關的制劑
藥用酵母活菌制劑其他與微生物有關的制劑第六十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、藥用酵母是經(jīng)高溫干燥處理的酵母。第六十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
二、活菌制劑三、其他與微生物有關的制劑1、核酸類藥物2、生物堿3、微生物多糖第六十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第十五章
微生物與藥物變質(zhì)
第六十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日學習的重要性藥物制劑的原料及生產(chǎn)過程中都很容易被微生物污染導致藥品帶有微生物或者被微生物的代謝產(chǎn)物污染使藥物變質(zhì)微生物影響藥品的質(zhì)量,使藥品失去療效并對病人造成不良反應甚至有些藥品被污染后產(chǎn)生了毒素,人吃了以后會中毒,威脅到生命第六十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第一節(jié)
藥物中微生物污染的來源第六十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日1.藥物原材料原材料可能將大量的微生物帶入藥物制劑中。因此選用較少微生物的原材料有助于控制藥品和環(huán)境中的污染情況。動物來源的原料如明膠、胰臟等都可能被動物性病原菌所污染,植物來源的原料如瓊脂、大黃、淀粉等可能被多種細菌、霉菌、酵母菌所污染。合成藥的原料,情況又好一點,通常不受微生物的侵蝕。傳統(tǒng)中藥中常會帶有土壤中的微生物。第七十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日藥物原材料處理的方法處理的方法因藥物的類型而有所區(qū)別:許多我們可以用各種消毒或滅菌處理。植物藥材可通過晾曬、烘烤的方法使它們充分干燥,減少微生物繁殖。原材料貯藏過程中也必須注意環(huán)境條件,如固體原材料應保持干燥,液體藥物要加防腐劑。溫度要低溫,通風狀況要好一些,這些對于保藏藥物及藥物原材料都是很重要的。第七十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2.制藥用水
水是制藥工業(yè)中微生物污染的重要來源。水在制藥工業(yè)中的用途包括:洗滌、冷卻、溶解等。水中本身就有大量的微生物,比如假單胞菌、產(chǎn)堿桿菌、產(chǎn)色細菌等,它們都是對營養(yǎng)要求不是很高的細菌,所以能在水中很好地生長,另外如果這水被糞便污染的話,就會含有大腸桿菌、變形桿菌等腸道菌。水有天然水、自來水、軟化水、去離子水、蒸餾水等,在制藥過程中,我們會根據(jù)不同需要來選用,比如制備注射劑或口服制劑中的配方用水必須同采用蒸餾水或去離子水。水的消毒方法和空氣中的一樣可以采取過濾、化學消毒劑和紫外線照射三種方法。其中以化學消毒劑方法最佳。第七十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日3.空氣含有大量的細菌、霉菌和酵母菌,比如各種桿菌、梭狀芽胞桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等??諝庵械奈⑸镏饕獊碜曰覊m,或者人的皮膚、衣服,或者由我們談話、咳嗽、打噴嚏時飛沫中帶的微生物減少空氣中的微生物數(shù)量的方法總括起來有三種方法:過濾、化學消毒劑和紫外線照射。第七十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日3.空氣含有大量的細菌、霉菌和酵母菌,比如各種桿菌、梭狀芽胞桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等??諝庵械奈⑸镏饕獊碜曰覊m,或者人的皮膚、衣服,或者由我們談話、咳嗽、打噴嚏時飛沫中帶的微生物減少空氣中的微生物數(shù)量的方法總括起來有三種方法:過濾、化學消毒劑和紫外線照射。第七十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日4.操作人員在制藥過程中,操作人員不注意個人衛(wèi)生,也會通過手、傷口、咳嗽、打噴嚏以及衣服、頭發(fā)等各種渠道將微生物轉(zhuǎn)移到藥物上。在口服藥和局部藥制備過程中,要求操作人員清洗和消毒雙手,穿上專用工作衣帽進行操作,即可減少微生物污染。在制備無菌要求高的注射劑和眼用、耳用溶液時要求操作人員操作前,穿上全套的工作衣帽包括操作衣、褲、靴子、帽、面罩和手套。不允許帶菌者操作。第七十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日5.制藥設備及包裝物包裝物的作用,一是包裹藥物,二是為了防止外界微生物進入到藥物中。如果這一步處理不當?shù)脑?,在藥物貯藏和運輸過程中就很容易引起污染,使微生物繁殖或其他有毒代謝產(chǎn)物就會大量積累,造成嚴重后果。包裝藥品的包裝材料要求嚴格,比如包裝紙和運輸紙要求表面光滑、堅固、平整、沒有裂縫。所有包裝容器、紙箱、紙盒、瓶子都要清潔或要消毒處理,并進行合理封裝。原則是盡量減少微生物數(shù)量。第七十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日廠房建筑與制藥設備生產(chǎn)部門所有的建筑包括廠房、車間、庫房、實驗室都必須清潔和整齊。房子不能漏水所有設備最好能便于拆卸,結(jié)構簡單,這樣就容易清潔和消毒了。第七十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第二節(jié)
微生物引起藥物變質(zhì)第七十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、藥物中微生物的限定標準將藥物被微生物污染的限度劃為兩大類:1.規(guī)定滅菌藥物2.非規(guī)定滅菌藥物根據(jù)此,書本提到了兩個表:表14-1
WHO對藥物制劑染菌限度評定標準表14-2我國藥品衛(wèi)生標準對藥品中微生物的限定第七十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日藥物被微生物污染后的表現(xiàn)不同的藥物,如果出現(xiàn)了下列任何一種情況,我們就認為這種藥物已經(jīng)被微生物污染了:
在無菌制劑中有活的微生物存在在非規(guī)定的滅菌藥物中,污染的微生物的總數(shù)超過一定的限量。各種不同的藥物制劑應該按《藥品衛(wèi)生檢驗方法》進行檢驗。各種微生物的數(shù)量應該在規(guī)定的限度內(nèi),不然就是不合格的藥物。有致病菌存在有微生物的代謝產(chǎn)物,如熱原質(zhì)、毒素等存在藥物發(fā)生了物理性質(zhì)或化學性質(zhì)的改變。第八十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、藥物被微生物污染
后理化性質(zhì)的改變藥物受到各種微生物污染后就會在物理或化學性質(zhì)上表現(xiàn)出變質(zhì)的一些現(xiàn)象。第八十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日藥物被微生物污染后物理性質(zhì)的改變微生物在污染藥物后,在藥物上就會生長繁殖,所以我們在藥物上就會看到藥物的外觀、顏色、氣味、硬度、粘性、透明度等物理性狀就會發(fā)生很大的改變。液體的制劑受到微生物污染后,澄清的液體就會混濁或在液面上有菌膜產(chǎn)生。藥物的片劑、丸劑等固體制劑被微生物污染后會變色、發(fā)潮、粘連在一起或有各種顏色的斑點、有異味等,膏狀的制劑受污染后,表面光澤度,油度就會消失,藥物表面也會出現(xiàn)白色斑點。第八十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日藥物被微生物污染后化學性質(zhì)的改變微生物污染藥物后,還可以通過各種化學作用,使藥物的化學性質(zhì)發(fā)生改變。液體藥物的某些成分被微生物降解后,有時會產(chǎn)生一些很難聞的氣味,這就是藥物受微生物污染的早期標志,微生物在降解藥物,同時進行自己的代謝活動,它把大分子的藥物分解成一些有毒、有害的物質(zhì),比如說阿司匹林被微生物轉(zhuǎn)化為有刺激性的水楊酸使它變質(zhì)。另外有些微生物代謝過程中還會產(chǎn)生一些氣體,引起裝的玻璃瓶爆炸。所以藥物被微生物污染后發(fā)生化學變化,引起的后果都是比較嚴重的。第八十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日三、變質(zhì)藥物對人體的危害有人用了變質(zhì)的藥物后,因為藥物中有可能存在致病性微生物而導致某些疾病,或者因為藥物有一些毒性物質(zhì)而且中毒,這樣就對人體產(chǎn)生很大的危害。無菌制劑的輸液劑,被微生物污染后,注入人體內(nèi),就會引起局部甚至全身的感染。軟膏制劑如果被金黃色葡萄球菌污染的話,涂在患處,可能就會引起局部化膿性炎癥,嚴重的金黃色葡萄球菌可進入到血液中引起敗血癥。眼藥膏、眼藥水如果被綠膿桿菌污染的話,患者用了后就會引起眼部感染,甚至導致眼角膜潰瘍、甚至穿孔,失明。第八十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日四、影響藥物變質(zhì)的因素1.污染藥物的微生物數(shù)量微生物數(shù)量應控制在最低限度,從經(jīng)濟角度考慮,除了注射劑、輸液劑等無菌制劑,必須保證絕對無菌外,其他的藥物制劑只要微生物的數(shù)量能控制在規(guī)定的范圍內(nèi),不會出現(xiàn)變質(zhì)失效的現(xiàn)象。因此,控制進入藥物的微生物數(shù)量,將有利于藥物制劑的穩(wěn)定性。第八十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2.藥物本身營養(yǎng)因素許多藥劑配方成分中往往含有微生物生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì),比如各種碳源、氮源、無機鹽等,如果有足夠的營養(yǎng)物質(zhì)存在時,就會使微生物大量生長起來,引起藥物變質(zhì)失效。水分的含量各種藥物制劑都有一定含水量的限定標準,如果藥物中的含水量超過標準,遇到適宜的溫度,微生物又會大量生長繁殖,影響藥物質(zhì)量。第八十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日貯藏溫度和PH溫度:在-5-60℃這一范圍內(nèi),微生物都可以生長而引起藥物變質(zhì),在這一范圍外,微生物生長就受到抑制,所以我們貯藏藥物可以選擇這一溫度范圍外。PH值:各種微生物需要的最適PH值是不一樣的,多數(shù)細菌、放線菌適宜于中性、偏堿性的環(huán)境(),而大多數(shù)的真菌是比較喜歡酸性的環(huán)境的(PH3-6),過酸過堿對微生物生長繁殖都是不利的,所以根據(jù)這點我們可以通過控制PH來防止藥物變質(zhì)。第八十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日3.包裝設計如果我們使用單個包裝或小包裝避免或減少微生物對藥物的污染,但是這樣成本就會高一些,而且操作復雜得多,這就要我們衡量一下是否值得采用避免染菌的包裝了。第八十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日4.其他因素其他因素影響著藥物的變質(zhì),比如氧化還原電位、在藥物中是否有加入防腐劑或抗菌劑等等。第八十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第三節(jié)防止微生物污染藥物的措施為了防止由微生物污染引起的藥物變質(zhì),國際上在70年代初就提出了藥物生產(chǎn)的優(yōu)良生產(chǎn)操作規(guī)程,對藥物生產(chǎn)進行GMP管理,詳細了解污染的來源,從而設計一個完好的配方和生產(chǎn)工藝,制定出合理的規(guī)章制度,從各個環(huán)節(jié)采取防止微生物污染藥物,用各種消毒和衛(wèi)生措施來防止微生物污染,使各類產(chǎn)品達到所要求的衛(wèi)生質(zhì)量(包括穩(wěn)定性及各種微生物參數(shù))。主要的措施和方法包括:第九十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、加強藥物生產(chǎn)的管理藥物和生產(chǎn)的環(huán)境應符合衛(wèi)生要求控制原、輔材料的質(zhì)量加強生產(chǎn)過程的管理合理的包裝設計與貯存第九十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、加強衛(wèi)生管理措施提高對藥品衛(wèi)生質(zhì)量重要性的認識建立健全各項衛(wèi)生制度加強衛(wèi)生監(jiān)督和產(chǎn)品檢驗第九十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日三、使用合適的防腐劑與抑菌劑加入防腐劑(抗菌劑)來保存藥物,以抑制在重復使用時進入產(chǎn)品的微生物,這類藥物的理想要求是:有良好的抗菌活性對病人沒有毒性或刺激性有足夠的穩(wěn)定性不受處方其他成分的影響第九十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日常用的防腐劑實際上現(xiàn)有的防腐劑都不是特別理想,常用的防腐劑有:用于口服或外用藥物的防腐劑:對羥基苯甲酸酯類(尼泊金類):苯甲酸:苯甲酸鈉:乙醇:季銨鹽類:山梨酸:第九十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日用于無菌制劑中的防腐劑:苯酚:甲酚:三氯叔丁醇:硝酸苯汞(或醋酸苯汞):
第九十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第一節(jié)藥物的抗菌試驗
藥物的體外抗菌試驗包括用于區(qū)別藥物是抑菌或殺菌藥物的抑菌試驗;測定藥物殺菌活性的殺菌試驗;以及檢查兩種藥物聯(lián)合作用的聯(lián)合抗菌試驗等。一般抑菌藥物只能抑制微生物生長,不能殺死微生物,抑菌藥物被除去,微生物又可以恢復繼續(xù)生長。殺菌藥物能殺死微生物,殺菌藥物除去后,微生物仍然不能生長。
第二十章藥物制劑的微生物學檢查第九十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
藥物的抑菌作用或殺菌作用是在一定條件下相對而言的。在我們檢測時,藥物的作用受到用藥時培養(yǎng)基的組成、溫度、PH值及所用的菌種、菌量等各個因素有關。雖然說體外抗菌試驗有很多優(yōu)點,但是由于體外抗菌試驗沒有復雜的體內(nèi)因素影響,因此藥物體外抗菌試驗和體內(nèi)抗菌試驗可能會出現(xiàn)不一致的結(jié)果。所以,一般我們在體外對藥物進行測試后,有效的藥再要進行體內(nèi)試驗,如果體內(nèi)試驗再次證實此藥有效的話,才能推薦應用到臨床。第九十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、藥物的體外抑菌試驗(一)體外抑菌試驗
藥物的體外抑菌試驗是常用抗菌試驗方法,其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴散法。
1、連續(xù)稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法(斜面法)兩種。這兩種方法都可以用來測定藥物的最小抑菌濃度(MIC):是指該藥物能抑制細菌生長的最低濃度,通常用μg∕ml或U/ml表示。
第九十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(1)液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法第九十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(2)固定培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法
1)平板法將系列濃度的藥物混入瓊脂平板,用微量加樣器或多點接種儀接種試驗菌,可在一組平板上測定多種試驗菌的MIC。2)斜面法將不同濃度的藥物混入培養(yǎng)基中制成斜面,然后在斜面接種一定量試驗菌,培養(yǎng)后觀察其MIC值。第一百頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2.瓊脂擴散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散,并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細菌生長的原理進行的。一般用于細菌和酵母菌的藥敏試驗。1)
濾紙片法(紙碟法)濾紙片法是最常用的方法,適用于新藥的初篩試驗(初步藥物是否有抗菌作用)及臨床的藥敏試驗。濾紙片分濕、干兩種,可以在試驗時用無菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面,也以預先做成一定濃度的干燥紙片。一般來說預先做成的干燥紙片實用一些而且準確一些。第一百零一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評定標準,在標準實驗條件下根據(jù)抑菌圈大小來判斷,比如:抗生素或化療藥物抑菌圈直徑(mm)耐藥中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18紅霉素≤1314-17≥18四環(huán)素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18第一百零二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(2)挖溝法(3)打孔法第一百零三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(二)體外殺菌試驗殺菌試驗是用來評價藥物對微生物的致死活性的。
1、最低殺菌濃度(MBC)(最小致死濃度MLC)的測定按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測定藥物的MIC。然后把未長出菌的各個試管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上,培養(yǎng)后凡是平板上無菌生長的藥物最低濃度就是最小致死濃度(MLC)。如果是細菌的話可以稱為最小殺菌濃度(MBC)。第一百零四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、
活菌計數(shù)法將定量的試驗菌加入到一定濃度的定量藥物中,作用一定時間后,取樣進行活菌數(shù)計數(shù),從存活的微生物數(shù)量計算出藥物對試驗菌的致死率,從而判斷藥物的殺菌能力。活菌計數(shù)一般是將定量的藥物與試驗菌作用后混合液稀釋后,混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板,培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù),由于一個菌落是由一個細菌繁殖而來的,所以可以用菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù),計算出混合液中存活的細菌數(shù)。第一百零五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日3、酚系數(shù)測定(石炭酸系數(shù)測定)酚系數(shù)是以酚為標準,將待測的化學消毒劑與殺菌效力相比較,所得的就是殺菌效力的比值。由于各種化學消毒劑殺菌原理各不相同,因而這種方法僅僅適用于酚類消毒劑殺菌效力的測定。具體的測定方法是分別將酚及待測化學消毒劑按不同比例稀釋,各取5ml放到試管中,再加入經(jīng)24小時培養(yǎng)后的菌懸液各0.5ml,混勻后放入20℃水浴中,5、10、15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另一支5ml的肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24小時記錄生長情況。第一百零六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第一百零七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(三)聯(lián)合抗菌試驗聯(lián)合抗菌試驗主要用于測定兩種抗菌藥物聯(lián)合應用時的相互影響。兩種抗菌藥聯(lián)合應用時抗菌作用加強的稱為協(xié)同作用;抗菌作用減弱的稱為拮抗作用;相互無影響的稱為無關。常用的聯(lián)合抗菌試驗的方法有以下幾種。第一百零八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日出現(xiàn)4種結(jié)果:①無關作用小,兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨活性;②拮抗作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨抗菌活性;③累加作用,兩種藥物聯(lián)合作用時的活性等于兩種單獨抗菌活性之和;④協(xié)同作用,兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨作用的總和。第一百零九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日1、棋盤稀釋法常用的定量方法,首先分別測定擬聯(lián)合的抗菌藥物對檢測菌的MIC。藥物最高濃度為MIC的2倍,對倍稀釋。兩種藥物的稀釋分別在方陣的縱列和橫列進行,這樣在每管(孔)中可得到不同濃度組合的兩種藥物混合液。接種菌量為5×105CUF/ml,35℃孵育18h后觀察結(jié)果。計算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)。第一百一十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第一百一十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日FIC指數(shù)
0.5為協(xié)同作用;
0.5-1為相加作用;
1~2為無關作用;>2為拮抗作用。第一百一十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日[棋盤法的設計]
棋盤法的主要優(yōu)點在于甲、乙兩藥的每個藥物濃度都有單獨的和與另一個藥物不同濃度的聯(lián)合,因此能精確測定兩種抗菌藥物在適當濃度的比例下所產(chǎn)生的相互作用。在進行棋盤法之前應先測定兩種抗菌藥物單獨對受試菌的MIC,然后以兩藥MIC的8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC的1/2、1/4、1/8濃度(或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4濃度)分別進行聯(lián)合??梢娕e例,如表—1的青霉素G與鏈霉素聯(lián)合藥敏實驗。第一百一十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日藥物及濃度青霉素G(IU/m1)鏈霉素單藥對照
4210.50.25鏈霉素(μg/ml)
64------32------16------8---+++4---+++
青霉素G單藥對照---++細菌對照-:無細菌生長+:有細菌生長FIC指數(shù)=1/1+16/16=2——無關第一百一十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
2.紙條試驗在含菌平板上垂直放兩條浸有不同藥液的濾紙條,培養(yǎng)后觀察兩藥形成的抑菌區(qū)的圖形來判斷兩藥聯(lián)合應用時,是無關、協(xié)同還是拮抗作用。
第一百一十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、藥物的體內(nèi)抗菌試驗
藥物的體內(nèi)抗菌試驗又稱為動物實驗治療試驗或保護力試驗。當抗菌藥物進入機體后,其效力的發(fā)揮要受體內(nèi)各種因素的影響。如血液及組織內(nèi)的蛋白質(zhì)或磷脂、膿汁內(nèi)的核酸均與藥物結(jié)合,降低藥物的活性;壞死組織內(nèi)的酸性環(huán)境也能影響藥物的活性。機體內(nèi)的微生物,代謝活動較低,對藥物的敏感性降低,有時還可形成細胞壁缺陷型細菌,對某些藥物不敏感。機體內(nèi)各組織中藥物的吸收,分布不同,使藥物的濃度難以恒定。因此在評定新藥的藥效時除做體外抗菌試驗外還需要做體內(nèi)的抗菌試驗。第一百一十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日三、影響抗菌試驗的因素
1、試驗菌種在抗菌試驗中所用到的菌種,必需是國家衛(wèi)生部生物制品檢定所菌各保藏中心專門提供的標準菌株。在特殊情況下,也可以采用臨床新分離的并經(jīng)過鑒定、純化及合理保藏的菌株。而且我們要用到的試驗菌種應該選擇是對數(shù)期生長的菌。因為那時菌種生命力最旺盛,這對于我試驗測定的結(jié)果也會準確些。第一百一十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、培養(yǎng)基試驗所有到的培養(yǎng)基應按各試驗菌的營養(yǎng)要求進行配制,嚴格控制各種原料、成分的質(zhì)量及培養(yǎng)基的配制過程。要注意當有些藥物具有抗代謝作用時,培養(yǎng)應不能存在代謝物,否則抑菌作用將會被消除。培養(yǎng)基內(nèi)如果含有血清等蛋白質(zhì)時,有可能與某些抗菌藥物結(jié)合,使抗菌藥物失去,所以就要避免培養(yǎng)基混進這類營養(yǎng)物。第一百一十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日3、供試藥物藥物的物理狀態(tài)、濃度、稀釋方法等都會直接影響抗菌試驗的結(jié)果,必需精確配制。如果是固體藥物,必需使藥物溶解或使藥物呈均勻懸液。PH值應調(diào)至中性,以確保藥物的穩(wěn)定性和不影響細菌的生長。中草藥因為有顏色和含有鞣質(zhì),結(jié)果的判斷,應特別注意。
第一百一十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日4、對照試驗為確保試驗結(jié)果的科學性和準確性,試驗時應同時進行各種對照試驗。試驗菌對照:在無藥情況下,應能在培養(yǎng)基內(nèi)正常生長。溶劑及稀釋液對照:配制抗菌藥物時所用的溶劑及稀釋液均應無抗菌作用。已知藥物對照:應使已知抗菌藥物對標準菌株出現(xiàn)抗菌效應。第一百二十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第二節(jié)滅菌制劑的無菌檢驗
無菌檢查是指檢查藥物制劑是否有活的微生物的一種方法。各種注射液(如針劑、輸液)、手術及眼科制劑都必須保證絕對不含有任何活的微生物才視為合格,否則在臨床使用時將會導致不良后果。第一百二十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
一、無菌檢查的基本原則
基本原則:是采用嚴格的無菌操作方法,將被檢查的藥品取一定量分別接種于適合各種微生物生長的不同培養(yǎng)基中(通常為需氧菌培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基和真菌培養(yǎng)基),置適宜溫度下培養(yǎng)一定時間后,觀察有無微生物生長,以判斷被檢藥品是否合格。由于無菌檢查是用部分抽樣結(jié)果推斷整體的含菌情況,故被檢樣品的取樣及程序必須按國家藥典標準。第一百二十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日二、無菌檢查的基本方法
(一)一般藥品的無菌檢查
一般藥品的無菌檢查屬于直接接種法,即將檢品按規(guī)定量直接分別接種于適宜需氧菌、厭氧菌和真菌生長繁殖的一定量的培養(yǎng)基中,同時以同樣培養(yǎng)基作陽性對照試驗。陽性對照實驗是證明微生物確實可在應用的實驗條件下生長。第一百二十三頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
我國藥典規(guī)定以金黃色葡萄球CMCC(B)26003、生孢梭狀芽孢桿菌CMCC(B)64941、白假絲酵母菌CMCC(F)98001作為需氧菌、厭氧菌和真菌的陽性對照株。
然后按不同的需要條件培養(yǎng)一定時間,如需氧菌、厭氧菌在30-35℃培養(yǎng)5天,真菌在20-25℃培養(yǎng)7天。觀察結(jié)果時,陽性對照必須長菌,才能判定檢品是否合格,若陽性對照管不長菌,說明該藥物可能有抗菌作用、或是油劑等特殊制劑。檢品如是液體,可直接加入培養(yǎng)基;若是固體藥物,按規(guī)定加入一定量的無菌生理鹽水或無菌水使藥物溶解成均勻的檢品溶液,然后進行無菌檢查。第一百二十四頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
(二)特殊藥品的無菌檢查
如果陽性對照管不長菌,則必須進行特殊處理后方可按照一般藥品的無菌檢查進行。
1、油類藥物的無菌檢查一般油劑因與常規(guī)培養(yǎng)基不混溶,藥品中的微生物不易生長,所以一般可采用吐溫培養(yǎng)基,其余同一般藥品無菌檢查法。吐溫培養(yǎng)基的特點是培養(yǎng)基中吐溫80使油類藥物均勻分散,增強培養(yǎng)基的機會,便于檢出微生物。第一百二十五頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日2、抗菌藥物或含防腐劑藥物的檢查
如果被檢藥品具有抗菌作用,陽性對照管及實驗管均可能不長菌,因此在進行無菌檢查前必須采用方法除去藥物本身的抗菌作用,然后再進行無菌檢查。(1)加入滅活劑或稱對消劑,去除或抵消抗菌藥物的抗菌作用。但滅活劑本身必須對微生物沒有毒性,同時滅活劑與抗菌藥物相互作用后的產(chǎn)物對微生物也沒有毒性,滅活劑的作用必須迅速而完全。如青霉素在進行無菌檢查時加入使青霉素滅活的無菌青霉素酶溶液。第一百二十六頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
(2)微孔濾膜法被檢藥品先加入無菌生理鹽水稀釋,然后用無菌微孔濾膜器(孔徑μm)過濾,用無菌生理鹽水充分洗滌后,取出濾膜,分成若干片分別放入各種培養(yǎng)基中進行檢查.(3)稀釋法先測出被檢藥品的最小抑菌濃度(MIC),然后將藥品移種入大量培養(yǎng)基中,使藥品稀釋至不具有抑菌作用的濃度進行判定.(4)離心沉淀法取規(guī)定量的供試液,離心(3000r/min),棄去上清夜,留底部濃縮菌液越2ml,再稀釋成一定量進行檢驗.第一百二十七頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日(四)、無菌檢驗的復試藥物無菌檢驗中發(fā)現(xiàn)有細菌或真菌生長時,必須進行復試,才能做出最后的判斷。第一百二十八頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日第二節(jié)口服藥及外用藥的微生物學檢查
目前,對口服藥及外用藥的微生物學檢驗主要是微生物限量檢驗,即限制口服藥及外用藥的微生物總數(shù)和限制病原微生物種類的系列測定項目.
我國規(guī)定的項目有:細菌總數(shù)測定,霉菌總數(shù)測定,病原菌(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌和破傷風梭菌)的檢驗和活螨的檢驗。第一百二十九頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日判斷合格與否的標準是:口服藥及外用藥中微生物總量須低于規(guī)定限量外,并須在口服藥物每克或每毫升中不得含有大腸桿菌、沙門菌;
外用藥物每克或每毫升中不得含有銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和破傷風桿菌,此外均不得檢出活螨。第一百三十頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日一、細菌總數(shù)的測定
是了解被檢藥品在單位重量或體積(每克或每毫升)內(nèi)所含有的活菌數(shù)(實際是需氧菌的活菌數(shù)),以判斷供試藥物被細菌污染的程度,是對該藥品整個生產(chǎn)過程的衛(wèi)生學總評的一個重要依據(jù)。
第一百三十一頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
測定方法采用瓊脂頃注平皿計數(shù)法
取一定量的供試藥物以無菌生理鹽水按比例進行系數(shù)稀釋,加入定量的稀釋液于無菌平皿中,再加入一定量的已融化的、溫度在35℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混勻,凝固后,37℃培養(yǎng)24-48小時,記數(shù)平板內(nèi)菌落。一般選取菌落數(shù)在30-300之間的平板進行記數(shù),然后乘以稀釋倍數(shù)即可得到每克或每毫升供試藥物中的活菌總數(shù)。第一百三十二頁,共一百四十六頁,2022年,8月28日
二、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定
是考察供試藥物中每克或每毫升所含的活霉菌和酵母菌的總數(shù),以判明檢品被真菌污染的程度。測定方法與細菌總數(shù)的測定方法相同,使用適合霉菌生長的虎紅培養(yǎng)基。在25-28℃培養(yǎng)72小時,選取平皿中生長的菌落數(shù)在5-50個范圍為宜,乘以稀釋倍數(shù),即可得單位重量(或體積)中的真菌總數(shù)。第一百三十三頁,共一百四十六頁,2022年,8
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 擔保付款三方協(xié)議書范本(3篇)
- 2025年度航空貨品運輸合同(含貨物重量與體積計算)
- 2025年度知識產(chǎn)權居間轉(zhuǎn)讓合同模板
- 2025年度國際廣告代理合同規(guī)范
- 2025年度國際教育項目合作合同
- 深度學習在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟分析中的應用探討
- 激發(fā)教育科技力量師生之間的高效互動之道
- 構建移動公司員工的安全文化-教育的力量
- 現(xiàn)代物流科技在智能倉儲中的應用研究
- 生態(tài)保護與環(huán)境監(jiān)測技術的融合發(fā)展
- 2025年個人土地承包合同樣本(2篇)
- 2024-2025學年教科版八年級物理下冊 第12章 機械能 綜合素質(zhì)評價卷(含答案)
- 網(wǎng)絡貨運行業(yè)研究報告
- 【人教版化學】選擇性必修1 知識點默寫小紙條(答案背誦版)
- 人教版七年級英語上冊單元重難點易錯題Unit 2 單元話題完形填空練習(含答案)
- 00015-英語二自學教程-unit1
- 新版建設工程工程量清單計價標準解讀
- 云南省昆明市盤龍區(qū)2023-2024學年三年級上學期語文期末試卷
- 2024-2025年突發(fā)緊急事故(急救護理學)基礎知識考試題庫與答案
- 左心耳封堵術護理
- 2024年部編版八年級語文上冊電子課本(高清版)
評論
0/150
提交評論