油脂中磷脂測(cè)定方法

油脂中磷脂測(cè)定方法檢測(cè)意義磷脂廣泛存在于油料作物的細(xì)胞組織中，是食品工業(yè)上的添加劑，油料種子中的磷脂隨著制油過(guò)程進(jìn)入油品中，盡管在煉油工藝中進(jìn)行水化脫磷處理，但由于磷脂具有脂溶性和水溶性二種屬性，故精煉過(guò)程中很難處理徹底。磷脂耐溫性能差，高溫時(shí)易炭化，使油脂溢沫變黑，影響油脂的食用品質(zhì)，同時(shí)，油品中磷脂含量過(guò)高時(shí)，也影響油脂貯藏穩(wěn)定性，而毛油中的磷脂含量則是確定油脂水化過(guò)程中加水量的依據(jù)，所以，檢驗(yàn)毛油和成品油中的磷脂含量，對(duì)于掌握生產(chǎn)操作和保證油脂質(zhì)量都是不可缺少的。一.定性法：（加熱試驗(yàn)）（根據(jù)弓日5531-85）儀器和用具萬(wàn)用電爐；石棉網(wǎng)；lOOml燒杯；300?350T溫度計(jì)；鐵架臺(tái)等。操作方法取混勻試樣約50m1注入100m1燒杯內(nèi)，置于帶有石棉網(wǎng)的電爐上加熱，用鐵架臺(tái)懸掛溫度計(jì)，使水銀球恰在試樣中心，加熱，在16?18min內(nèi)使試樣溫度升至280T（亞麻油加熱至289。。，取下燒杯，趁熱觀察析出物多少和油色深淺情況。待冷卻至室溫后，再觀察一次。試驗(yàn)結(jié)果植物油脂加熱試驗(yàn)僅是鑒別油脂中磷脂含量的簡(jiǎn)易方法，不是定量分析，因此試驗(yàn)結(jié)果以"油色不變”、"油色變深”、"油色變黑”、"無(wú)析出物”、"有微量析出物"、"有多量析出物"以及"有刺激性異味"等表示。微量析出物：有析出物懸??；多量析出物：析出物成串、成片結(jié)團(tuán)。二定■法：（根據(jù)GB5537-85）一）鉬藍(lán)比色法：檢驗(yàn)原理：將含有磷脂的試樣與氧化鋅一起灼燒，使磷的有機(jī)化合物轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)化合物，以磷酸鹽（主要是磷酸鋅）的形式留在灰分中，再加酸溶解，使磷酸根離子與鉬酸鈉作用生成磷鉬酸鈉，遇硫酸聯(lián)氨被還原成藍(lán)色的絡(luò)合物鉬藍(lán)。產(chǎn)生藍(lán)色的深度與磷的含量成正比。將被測(cè)液與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同條件下比色定量，即可測(cè)得磷的含量。將磷的含量再乘以適當(dāng)?shù)膿Q算系數(shù)，即得磷脂的含量。反應(yīng)方程式：CH2OCOR1CHOCOR2OO P f\ ttnjKTiVn，件iFZn（PO）+CO+NO+HOCH C^lC^lN^l+zn人/c'人//。丁丁1、、^c丁工且c、^、-x—―） jx、-xj-—―?—、—a?，▲且/、v/〉u342222oHZn3（PO4）2+6HCl=2H3PO4+3ZnCl22HPO+24NaMoO+21HsO=2（Na^PO廣12MoO）+21NaSO+24HONa3PO4?12MoO3硫酸聯(lián)胺―oO2?4MoO3-H3PO4?4H2O（鉬藍(lán)）儀器和用具瓷坩堝；紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)（721或UV2401PC）;帶塞的50ml比色管;移液管（5、10m1）;電爐；高溫爐；容量瓶（100、500、1000m1）;表面皿；燒杯；量筒；恒溫水浴鍋；漏斗；坩堝鉗；試劑瓶等。試劑1）50%氫氧化鉀溶液；）鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙；）0.015%硫酸聯(lián)氨溶液：稱(chēng)取0.15g硫酸聯(lián)氨溶液于250ml燒瓶中，加蒸餾水200ml，用玻璃棒使之溶解.轉(zhuǎn)至1000ml容量瓶中，用蒸餾水沖洗3次內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)至容量瓶3/4處搖勻.定容刻度線搖勻，轉(zhuǎn)至細(xì)口瓶中備用.）2.5%鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，搖勻，令卻至室溫，加入12.5g鉬酸鈉，溶解后加水至500m1，搖勻，靜置24h備用。5）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取無(wú)水的磷酸二氫鉀0.4391g溶于1000m1水中，作為l號(hào)液（含磷0.1mg/ml）,吸取1號(hào)液lOml,加水稀釋至lOOml,含磷0.01mg/m1,作為2號(hào)液，比色用。操作方法1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取6只50m1比色管，編成0,1,2,4,6,8五個(gè)號(hào)碼，按號(hào)碼|1順序分別注入磷標(biāo)準(zhǔn)2號(hào)液0,1,2,4,6,8m1，再按|1順序分別加水10,9,8,6,4,2m1。接著向6只管內(nèi)各加0.015%硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.Oml,加塞、搖勻。去塞，將6只管置于正在沸騰的水浴中加熱10min,取出令卻至室溫，用水稀釋至50m1,充分搖勻，經(jīng)10min后，用UV2401PC（或721）分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用1cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，分別測(cè)定消化值。以消化值為縱坐標(biāo)，以磷量（0.00、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2）制備被測(cè)液：用坩堝稱(chēng)取試樣約10g（準(zhǔn)確至0.00lg）,加氧化鋅0.5g，先在電爐上加熱炭化，然后送入550?600OC的高溫爐中灼燒至灰化（白色），灼燒時(shí)間約2h，取出坩堝冷卻至室溫，用熱鹽酸（1:1）10m1溶解灰分，并加熱微沸5min,將溶解液過(guò)濾注入100ml容量瓶中，用熱水沖洗坩堝和濾紙，待濾液冷卻至室溫后，用50%氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)渾濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀釋至刻度，搖勻。3）比色：用移液管吸取被測(cè)液10ml注入50ml比色管中，加入0.015%硫酸聯(lián)氨8.Oml，加2.Oml鉬酸鈉稀硫酸溶液，加塞，搖勻。去塞，將比色管置于正在沸騰的水浴中加熱lOmin取出冷卻至室溫用水稀釋至50ml，充分搖勻，經(jīng)lOmin后，用UV2401PC（或721）分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用1cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，測(cè)定消光值。結(jié)果計(jì)算根據(jù)被測(cè)液的消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷量（P）。1） 按下式計(jì)算油中含磷：含磷（ppm）=P!WX104式中：P-----標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的含磷量，mg;W 樣重，g。2） 按下式計(jì)算磷脂含量：磷脂（%）=（P*V2/V1）*26.31*100/（W*1000）式中：P-----標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的磷量，mg;V2——樣品灰化后稀釋的體積，ml；V1——比色時(shí)所取的被測(cè)液體積，ml;26.31——每毫克磷相當(dāng)于磷脂的毫克數(shù)；W——試樣重量，g。雙試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過(guò)0.04%,求其平均數(shù)，即為測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果取小數(shù)點(diǎn)后第二位。注意事項(xiàng)：）灼燒過(guò)程溫度不要過(guò)高，不應(yīng)有泡沫益出，否則會(huì)影響測(cè)定結(jié)果）灼燒灰化過(guò)程中均應(yīng)給坩堝蓋上蓋，并保持微開(kāi)，以免結(jié)果偏小3） 用熱鹽酸溶解灰分時(shí)，應(yīng)保持微沸，并注意控制微沸時(shí)間，防止溶液燒干，影響測(cè)定結(jié)果4）KOH不能加得太渾濁，否則用鹽酸回滴糾正終點(diǎn)的操作就無(wú)法進(jìn)行5） 定容時(shí)溶液應(yīng)振搖均勻，移液應(yīng)準(zhǔn)確6） 新坩堝以1:4HC1煮過(guò)洗凈，用三氯化鐵藍(lán)墨水溶液編號(hào)，放入高溫爐550±20°C灼燒至恒重（1hr）;二）比濁法：方法來(lái)源:AOCS適用范圍：豆油儀器：千分之一天平，HATCH2100AN^S?試劑：丙酮（分析純）操作方法：1）接通濁度儀電源，讓儀器預(yù)熱30min（如經(jīng)常使用可保持24小時(shí)開(kāi)機(jī)）1） 取混勻油樣于濁度瓶（毛油水分較高，先放入微波爐高火加熱2min）2） 加丙酮至刻度線3） 搖勻，用濾紙吸干后用擦鏡紙擦凈外壁（手拿住瓶頸蓋和底部）4） 放入比色架內(nèi)，蓋上艙蓋5） 按ENTER鍵，待數(shù)據(jù)顯示穩(wěn)定后讀取NTU（約5min）試樣重■（g）及結(jié)果計(jì)算（ppm）:油品名稱(chēng)試樣重量計(jì)算公式脫臭油5.01gP=(1.72XNTU)-0.528脫色油5.01gP=(1.27XNTU)-0.225中和油1.002gP=(8.26XNTU)-4.49脫膠油1.002gP=(5.32XNTU)+3.38毛油0.198gP=(5.89XNTU)+316.4文件名稱(chēng)：檢驗(yàn)規(guī)程 編號(hào)：QC-GW-010 生效時(shí)間:2004-06-10注意事項(xiàng)：1） 樣品瓶應(yīng)固定位置插入，以便消除系統(tǒng)誤差，有助于生產(chǎn)分析2） 稱(chēng)量應(yīng)力求精確3） 搖勻油樣時(shí)，手拿住瓶頸蓋和底部，不要碰觸瓶身，以免留下指印影響測(cè)定結(jié)果4） 計(jì)算公式只對(duì)大豆油適用三）重量法儀器和用具玻璃漏斗、漏斗架；lOOml燒杯；錐形瓶、濾紙等。試劑：丙酮。操作方法取混勻的樣品約100ml，加熱約90T時(shí)進(jìn)行過(guò)濾。用燒杯稱(chēng)取試樣25g，加熱至80T,加水2?2.5m1，充分?jǐn)嚢枋怪?，在室溫下靜置過(guò)夜，或進(jìn)行離心沉淀，