輸血八項臨床意義及常見問題分析

輸血八項臨床意義及常見問題分析第一頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的臨床檢測策略丙型肝炎病毒檢測策略變HIV的臨床檢測策略乙肝五項檢測第二頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBV感染的臨床轉歸急性乙肝病毒感染慢性HBV感染5%成人期獲得的感染95%嬰兒期獲得的感染肝硬化慢性肝炎5年中發(fā)生率12～25%肝功能衰竭肝細胞肝癌肝臟移植5年中發(fā)生率6～15%5年發(fā)生率20～23%急性乙型肝炎通常是自限的，但部分病人可能會進展為慢性乙型肝炎中國慢性乙肝攜帶者超過一億10-30%的患者可能會進展為肝硬化與肝衰竭，甚至肝癌第三頁，共七十一頁，2022年，8月28日乙肝病毒的形態(tài)和結構乙型肝炎病毒簡稱乙肝病毒。是一種DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）。完整的乙肝病毒成顆粒狀，稱為Dane顆粒。第四頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBV在肝細胞內的復制A(n)mRNAcccDNAHBsAg

包膜負鏈DNA包裹后的前基因

mRNA傳染性HBV病毒顆粒傳染性HBV病毒顆粒部分雙鏈DNA逆轉錄酶DNA聚合酶肝細胞第五頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBV的基本（電鏡）結構大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒小球形顆粒小球形及管狀顆粒均為過剩的病毒外殼第六頁，共七十一頁，2022年，8月28日乙肝病毒結構一個完整的乙肝病毒顆粒，也叫Dane顆粒，直徑只有42納米.乙肝病毒有外殼和核心兩個部分即核衣殼結構.外部為7-8納米，是由脂質雙層和蛋白質組成的包膜.包膜內含有S抗原、前S1和前S2抗原，它們一起又構成了外殼上大（L蛋白，包括S抗原、前S1和前S2抗原）、中（M蛋白，包括S抗原和前S2抗原）、小（S蛋白）三種蛋白形式，統(tǒng)稱為乙肝表面抗原（HBsAg），也就是人們俗稱的澳抗(澳大利亞抗原)。第七頁，共七十一頁，2022年，8月28日Dane顆粒的基本結構示意圖HBsAgHBcAgDNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）HBVDNA第八頁，共七十一頁，2022年，8月28日

HBV基因結構pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBVDNA3.2kbpre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S1第九頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBV感染檢查的項目肝功能(主要為丙氨酸氨基轉移酶ALT)乙肝病毒感染標志物

※HBV-DNA※兩對半:

抗原抗體外膜——————HBsAgHBsAb

核殼分泌蛋白——HBeAgHBeAb

核殼結構蛋白——（HBcAg）HBcAb

肝組織病理學檢查AFP影像學第十頁，共七十一頁，2022年，8月28日（1）HBsAg●出現時間：一般HBV感染后4～6周可以檢出●持續(xù)時間：急性自限性肝炎：6個月內可消失慢性肝炎或慢性HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽性HBV感染最重要的標記之一第十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日●HBsAg有抗原性而無傳染性HBVS基因整合肝細胞DNA持續(xù)表達“空心湯團”HBsAg●HBsAg的亞型adradwayrayw長江以北長江以南新疆、西藏、內蒙等第十二頁，共七十一頁，2022年，8月28日（2）抗-HBs出現時間：急性感染后期、HBsAg消失后和注射疫苗后正常的免疫應答者抗-HBs為保護性抗體（中和抗體）其出現標志著HBV感染進入恢復期和注射乙肝疫苗后產生正常的免疫應答抗-HBs對相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對不同亞型的HBV保護力不完全。第十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日●HBeAg是病毒復制和傳染性的標志血清HBeAg與HBVDNA的含量成正相關，符合率達到95%以上。（3）HBeAg第十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日（4）抗-HBe●出現時間：隨著HBeAg的消失而出現●抗-HBe的出現標志著病毒復制減少、傳染性降低第十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝細胞內或DANE顆粒核心中一般血清學方法檢測不到HBcAg，而只能檢測到抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動的標志抗HBc-IgG：凡“有過”HBV感染者均可陽性HBcAg的免疫原性最強持續(xù)時間：6～18個月可終身陽性第十六頁，共七十一頁，2022年，8月28日Pre–S1檢測的臨床價值前S1蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆粒上，在HBV感染宿主細胞過程及在病毒復制和刺激機體產生免疫反應中起重要作用；前S1抗原與HBeAg之間有高度相關性，并可區(qū)別因變異種及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假陰性，可作為HBeAg假陰性補充，從而準確反映患者體內病毒復制情況；可作為HBV感染及復制的標注，與其它血清標志物聯(lián)合檢測，相互補充。第十七頁，共七十一頁，2022年，8月28日常規(guī)檢測的HBV血清標志物的基本解釋HBsAgHBV感染最重要的標志之一抗HBs感染后免疫；對疫苗的免疫應答；或HBIG的被動免疫HBeAg反映HBV復制，有病毒血癥，血液高傳染性抗HBeHBV低復制，HBsAg(+)血液低傳染性?？笻Bc低滴度表示過去感染；高滴度表示現行感染。IgM抗HBc高滴度表示急性或近期感染來源：駱抗先，乙型肝炎基礎和臨床，第二版第十八頁，共七十一頁，2022年，8月28日定量檢測意義監(jiān)測疾病發(fā)展評估藥物療效指導疫苗接種第十九頁，共七十一頁，2022年，8月28日1急性乙肝痊愈過程各主要標志物濃度變化乙型肝炎基礎與臨床第三版駱抗先主編人民衛(wèi)生出版社第二十頁，共七十一頁，2022年，8月28日2慢性無癥狀攜帶者各標志物濃度變化《乙型肝炎基礎與臨床》第三版駱抗先主編人民衛(wèi)生出版社第二十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日世界標準未完全統(tǒng)一，目前普遍認為普通人群表面抗體濃度值≥10mIU/ml，就有足夠的保護作用高危人群表面抗體濃度值≥100mIU/ml，具有足夠的保護作用肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測表面抗體濃度值，每次檢測值≥100mIU/ml為宜3表面抗體定量檢測在疫苗效果監(jiān)測、高危人群保護作用分析COMPARISONOFANTI-HBsASSAYS，JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Apr.2008,p.1298–1306Vol.46,No.4

摘自《慢性乙型肝炎防治指南》第二十二頁，共七十一頁，2022年，8月28日模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc臨床意義1+-+-+俗稱“大三陽”。急性或慢性乙肝；病毒在復制，傳染性強。2+--++俗稱“小三陽”。急性或慢性乙肝；傳染性低。這種模式在慢性無癥狀攜帶者以及急性感染人群中較常見，病毒復制可能仍在進行。3+---+急性或慢性乙肝感染，有傳染性4---++既往感染5----+處于HBsAg和HBeAg消失與Anti-HBe和Anti-HBs出現之間的一個缺口時期；既往感染6-+--+感染恢復期；既往感染，有免疫力7-+-++感染恢復期；既往感染8-+---主動免疫9-----未感染HBV,屬易感者第二十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日序號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb乙肝兩對半常見結果分析俗稱1234510+----1.急性HBV感染早期，急性HBV感染潛伏期；2.慢性HBV攜帶者，傳染性弱。乙肝兩對半1陽性11+--+-1.慢性HBsAg攜帶者易轉陰；2.急性HBV感染趨向恢復。乙肝兩對半14陽性12+-+--急性HBV感染早期或慢性攜帶者，傳染性強。乙肝兩對半13陽性13+-+++1.急性HBV感染趨向恢復；2.慢性攜帶者。乙肝兩對半1345陽性14++---1.亞臨床型HBV感染早期；2.不同亞型HBV二次感染。乙肝兩對半12陽性15++--+1.亞臨床型HBV感染早期；2.不同亞型HBV二次感染。乙肝兩對半125陽性16++-+-亞臨床型或非典型性感染。乙肝兩對半124陽性17++-++亞臨床型或非典型性感染。

18+++-+1.亞臨床型或非典型性感染早期。2.HBsAg免疫復合物，新的不同亞型感染。

19--+--1.非典型性急性感染；2.見于抗-HBc出現之前的感染早期，HBsAg滴度低而呈陰性，或呈假陽性。乙肝兩對半3陽性20--+-+非典型性急性感染。

21--+++急性HBV感染中期。

22-+-+-HBV感染后已恢復。

23-++--非典型性或亞臨床型HBV感染。

24-++-+非典型性或亞臨床型HBV感染。

25---+-急性HBV感染趨向恢復。

16種少見模式第二十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日序號HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb乙肝兩對半常見結果分析1234526+++++①一種亞型的HBsAg及異型的抗HBs（常見）；②血清從HBsAg轉化為抗HBs的過程（少見）。27-+++-28-++++29--++-30+-++-31+++--32++++-7種罕見模式第二十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日

乙肝兩對半特殊模式及原因分析第二十六頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBsAg與抗HBs共存★可出現在HBV感染的恢復期，此時HBsAg未消失，抗HBs已產生，大部分歸功于檢測敏感性的提高。★S基因發(fā)生變異，野生株抗HBs不能將其清除；★抗HBs陽性者感染了不同亞型HBV免疫逃避株?！颒BsAg假陽性第二十七頁，共七十一頁，2022年，8月28日HBeAg與抗HBe共存

★血清轉換過程中?！餀z測敏感性提高?！镆吧昱c變異株同時存在。第二十八頁，共七十一頁，2022年，8月28日為什么血清HBsAg陰性不能排除HBV感染？★檢測試劑不夠敏感。大部分試劑盒由ad亞型抗體和抗原制備，對ay亞型的靈敏度較低?！?/p>

S基因變異（抗原性發(fā)生改變）?！?/p>

X基因變異（轉錄受抑制）。★重疊HCV感染（干擾HBsAg合成）。第二十九頁，共七十一頁，2022年，8月28日能導致HBsAg陰性的S區(qū)變異

★

aa124半胱氨酸酪氨酸★

aa129谷氨酸天冬氨酸★

aa131蘇氨酸天冬氨酸

★

aa131蛋氨酸蘇氨酸

★

aa122-124插入氨基酸

★前S1/S2部分缺失第三十頁，共七十一頁，2022年，8月28日抗HBc陰性的HBV感染

★免疫耐受。★檢測試劑原因，目前試劑準確性約85%。★C區(qū)突變。第三十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日乙肝五項常見問題處理1.跳孔2.假陽性（臨界值附近結果處理）3.質控失控或臨床偏差較大4.超限稀釋問題5.核心抗體模式選擇6.參考值選擇7.HBV-DNA與乙肝五項模式解讀第三十二頁，共七十一頁，2022年，8月28日1.跳孔問題1、BF2、試劑針內洗凈3、加樣針內外洗凈4、底物溫度高5、溫育盤溫度高6、加樣位置7、混勻高度與強度8、前處理盤位置9、溫育盤加酶的位置10、測光（PMT）11、機械手位置12、反應杯質量13、定量不準14、洗液15、水16、樣本處理方法17、是否加到紅細胞18、是否加到纖維蛋白

跳孔現象主要在HBsAg和HBeAg兩個項目出現，即初測為弱陽性，復測為陰性，實驗室的驗證結果兩個項目均為1%以下，客服中心可通過乙肝五項的模式判斷陰陽性，若出現跳孔率高于1%的情況請查找原因，原因主要如下：2.質第三十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日跳孔問題定標！第三十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日2.假陽性多次復測結果均為弱陽性特殊模式新生兒黃疸血脂血公司驗證第三十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日3.質控失控或臨床偏差較大

質控品問題、人員操作、試劑、儀器4.超限稀釋問題

第三十六頁，共七十一頁，2022年，8月28日5.HBcAb模式選擇：安圖磁微粒HBeAb試劑支持以下兩種模式：1、原倍樣本檢測：檢測結果為流行病學意義，臨界值為0.7PEIU/ml，用于與國外廠家（雅培、羅氏）進行對比，或替換國外廠家；2、1/30稀釋檢測：檢測結果為臨床意義，臨界值為0.7PEIU/ml，用于與國內廠家（科華、新創(chuàng)、萬泰等）進行對比，或替換國內廠家。在進行1/30稀釋檢測的時候，要先檢測A2000的稀釋功能的準確性。第三十七頁，共七十一頁，2022年，8月28日6.參考值選擇HBeAg模式選擇：

1、0.1PEIU/ml：為有無反應性的臨界值；2、0.3PEIU/ml：為陰陽性的臨界值；HBeAb模式選擇：

1、高陽性率模式：臨界值為0.15PEIU/ml，用于與國外廠家（雅培、羅氏）進行對比，或替換國外廠家；2、低陽性率模式：臨界值為0.4PEIU/ml，用于與國內廠家（科華、新創(chuàng)、萬泰等）進行對比，或替換國內廠家。第三十八頁，共七十一頁，2022年，8月28日7.HBV-DNA與乙肝五項模式解讀第三十九頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的臨床檢測策略丙型肝炎病毒檢測策略變HIV的臨床檢測策略乙肝五項檢測第四十頁，共七十一頁，2022年，8月28日起草單位：中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心使用范圍：全國所有的HIV檢測實驗室解釋權：中國疾病預防控制中心實施：衛(wèi)生部授權，中國疾病預防控制中心發(fā)布實施《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》第四十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日

以診斷為目的的檢測策略常規(guī)HIV抗體檢測的方法和程序分為篩查試驗（包括初篩和復檢）和確證試驗。ELISA、化學發(fā)光或免疫熒光試驗、快速檢測（RT）及其它檢測試驗。第四十二頁，共七十一頁，2022年，8月28日HIV抗體篩查檢測流程第四十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日篩查試驗結果的報告HIV抗體篩查試驗陰性反應報告為“HIV抗體陰性（-）”；陽性反應報告為“HIV抗體待復檢”。需要核對身份，補充個人信息（如姓名和身份證號碼），必要時采集第2份血樣，持HIV抗體篩查報告，送當地艾滋病篩查中心實驗室，或直接送確證實驗室復檢。第四十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日常見問題反饋安圖陽性，其它廠家陰性1.復測、檢查定標發(fā)光值2.公司驗證

人類免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）進行檢測確認，此為抗體檢測判定金標準。顯現條帶分析結果沒有病毒的特異性條帶陰性只檢測出p17抗體，無其他條帶陰性檢測出2條ENV（gp160/gp41/gp120）及GAG（p17/p24/p55）或POL（p31/p51/p66）HIV-1陽性檢測出2條ENV（gp160/gp41/gp120）及GAG（p17/p24/p55）或POL（p31/p51/p66）且HIV-2特異性條帶清晰可見HIV-1陽性且提示HIV-2陽性感染出現任何特異性條帶，但不足于被判斷為陽性不確定出現任何特異性條帶，但不足于被判斷為陽性，且HIV-2特異性條帶清晰可見不確定，但提示HIV-2陽性感染第四十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日常見問題反饋安圖陰性，其它廠家陽性1.復測，檢查定標發(fā)光值2.驗證第四十六頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的臨床檢測策略丙型肝炎病毒檢測策略HIV的臨床檢測策略乙肝五項檢測第四十七頁，共七十一頁，2022年，8月28日Alberti,JHepatol1999;31:17-24Seef,Hepatology2002;36:S35-46Fanetal,WorldJGastroenterol2004;10:2867-2869感染后20年HCV感染患者比例100%慢性丙肝患者比例85%肝硬化患者比例10-50%肝癌患者比例1-23%丙肝相關死亡率患者比例4-15%在全球，丙肝是死亡率第十的傳染性疾病在中國，丙肝是死亡率第五的傳染性疾病丙肝：高危害第四十八頁，共七十一頁，2022年，8月28日丙肝：無預防性疫苗，但可治愈丙肝疾病將是中國的沉重經濟負擔:1170-2160億元/年乙型肝炎疫苗的推廣，新感染病例顯著下降；由于丙型肝炎缺乏有效的預防性疫苗，有可能成為影響人民健康的主要肝臟疾病我國首部《丙肝防治指南》所指出的，通過聚乙二醇干擾素+利巴韋林，使用足夠劑量治療一年，丙肝的治愈率可以達到七、八成左右，這也是目前國際上丙肝治療的最佳方案。GhanyM,etal.Hepatology2009;49:1335–74第四十九頁，共七十一頁，2022年，8月28日衛(wèi)生部2009年度全國法定傳染病疫情丙肝報告病例逐年上升2009年報告的發(fā)病人數是2003年的6倍多!第五十頁，共七十一頁，2022年，8月28日《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術規(guī)范》起草單位：中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心使用范圍：全國所有的丙型肝炎病毒檢測實驗室解釋權：中國疾病預防控制中心實施：衛(wèi)生部授權，中國疾病預防控制中心發(fā)布實施第五十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日在臨床診斷中規(guī)定了HCV抗體篩查陽性反應后必須進行補充實驗（免疫印跡或NAT）在臨床診斷中引入S/CO比值的使用明確了丙肝檢測實驗室質量控制第五十二頁，共七十一頁，2022年，8月28日HCV抗體的檢測方法篩查試驗：

酶聯(lián)免疫吸附試驗，膠體金快速試驗、化學發(fā)光試驗、免疫熒光試驗補充實驗：

免疫印跡試驗第五十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日篩查試劑樣品陰性反應初篩試驗陽性反應復檢試驗均陰性反應一陰一陽均陽性反應補充試驗原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理（或廠家）試劑報告陰性丙肝病毒臨床診斷篩查檢測流程第五十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日復檢陽性樣品陽性反應免疫印跡試驗陰性反應報告抗HCV陰性臨床診斷補充試驗檢測流程不確定報告抗HCV不確定報告抗HCV陽性2.復檢呈陽性反應的樣品，進行補充試驗。第五十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日檢測結果的解釋第五十六頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的臨床檢測策略丙型肝炎病毒檢測策略變HIV的臨床檢測策略乙肝五項檢測第五十七頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的診斷梅毒的診斷必須依靠病史、癥狀及實驗檢查進行綜合分析。梅毒的實驗室檢查結果對診斷有決定性意義。第五十八頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒的實驗室檢測方法病原學檢測：

（1）暗視野顯微鏡檢查（2）鍍銀染色檢查血清學檢測：

非梅毒螺旋體抗原血清試驗

（1）VDRL(性病研究實驗室試驗)：需滅活（2）USR（不加熱血清反應素試驗）（3）RPR(加速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗)

（4）TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗)

梅毒螺旋體抗原血清試驗（1）FTA-ABS

（2）TPPA/TPHA

（3）TP-ELISA

（4）發(fā)光法（5）膠體金法

第五十九頁，共七十一頁，2022年，8月28日病原學檢測主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法，對皮損部位組織液或淋巴結穿刺液，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，快速、方便、易操作。是診斷早期現癥梅毒的最佳方法。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第六十頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒血清學檢測分類兩類方法(1)非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（非特異性梅毒試驗）(2)梅毒螺旋體抗原血清學試驗（特異性梅毒試驗）第六十一頁，共七十一頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗

宿主對螺旋體表面的脂質作出免疫應答，在3周-4周產生抗類脂抗原的抗體（反應素）。未經治療反應素可長期存在。正規(guī)治療后，反應素可以逐漸減少至轉為陰性方法包括：

VDRL→USR→RPR/TRUST

（1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)

（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗(VDRL)等?？乖境煞忠粯樱舾行院吞禺愋韵嗨频诹?，共七十一頁，2022年，8月28日RPR/TRUST第六十三頁，共七十一頁，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義抗類脂抗原的抗體，可長期存在于未經治療的梅毒患者體內，可作為區(qū)分既往感染和現癥感染的診斷參考依據經治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。可以在非梅毒患者（如自身免疫性疾病患者等）體內檢測到，所以非梅毒螺旋體血清試驗陽性者需經梅毒螺旋體血清試驗進一步復檢，排除其假陽性。

RPR、TRUST和VDRL的原理及敏感性、特異性基本相同，臨床上可以選用其中任何一種方法，但對患者進行療效觀察時應采用同一種檢測方法做定量檢測。第六十四頁，共七十一頁，2022年，8月28日非梅毒患者的梅毒血清反應呈陽性，此現象稱為梅毒血清反應假陽性。

①技術性假陽性反應由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成。經過重復試驗即可除外。

②生物學假陽性反應是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現陽性，但一般滴度不大于1:8。應做TPHA（TPPA）等試驗進行排除。風疹、水痘、傳染性單核細胞增多癥、傳染性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、病毒性肺炎、牛痘疹、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自家免疫性溶血性貧血、盤狀紅斑狼瘡、結節(jié)性多動脈炎、類風濕性關節(jié)炎、橋本氏甲狀腺炎、風濕性心臟病、干燥綜合征、毒品癮者、慢性腎炎、肝硬化、老年、妊娠

第六十五頁，共七十一頁，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性。梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）梅毒免