中藥制劑的含量測定技術

關于中藥制劑的含量測定技術第1頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.定義紫外-可見分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）系指通過測定被測物質在紫外-可見光區(qū)(200～760nm)對光的吸光度或發(fā)光強度，進行物質定性定量分析的方法。

2.特點設備簡單、操作簡便、靈敏度和準確度較高等。3.適用范圍中藥制劑定性鑒別、雜質檢查及含量測定。第2頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二一、儀器工作原理（一）紫外-可見分光光度儀的構造光源單色器吸收池檢測器數據處理系統(tǒng)第3頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.光源（輻射源)

（1）可見光光源：為熱輻射光源，如鹵鎢燈、碘鎢燈、鎢絲燈（白熾燈）。（2）紫外光源：多為氣體放電光源，如氫、氘、氙放電燈及汞燈等。2.單色器是能從光源的復合光中分出測量所需波長單色光的光學裝置。（1）棱鏡單色器：有玻璃和石英兩種材料。是依據光的折射率不同，而將其分成不同波長的單色光。第4頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（2）光柵單色器：是利用光的衍射和干涉作用制成的。可用于紫外、可見和近紅外光譜區(qū)域，具有良好的、幾乎均勻一致的色散率，且具有適用波長范圍寬、分辨本領高、成本低、便于保存和易于制作等優(yōu)點，是目前常用的色散元件。缺點是各級光譜會重疊而產生干擾。3.吸收池又叫比色皿。是用于盛放分析試液并提供一定吸光厚度的器皿。一臺分光光度計配有幾組厚度不同的吸收池，吸收池的大小規(guī)格從幾毫米到幾厘米不等，最常用的是1厘米的吸收池。

（1）石英池：適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)。

（2）玻璃吸收池：只能用于可見光區(qū)。第5頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二4.檢測器

是通過光電轉換元件檢測透過光的光通量大小，并將光信號轉變成電信號的裝置。檢測器應在測量的光譜范圍內具有高的靈敏度；線性關系好、線性范圍寬；對不同波長的輻射響應性能相同且可靠；有好的穩(wěn)定性和低的噪音水平等特點。（1）光電池：常用的光電池有硒電池和硅光電池。（2）光電管：它以一彎成半圓柱且內表面涂上一層光敏材料的鎳片作為陰極，而置于圓柱形中心的一金屬絲作為陽極，密封于高真空的玻璃或石英中構成的，當光照到陰極的光敏材料時，陰極發(fā)射出電子，被陽極收集而產生光電流。真空光電二極管

第6頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（3）光電倍增管：光電倍增管是一種加上多級倍增電極的光電管，其外殼由玻璃或石英制成，陰極表面涂上光敏物質，在陰極、陽極間裝有一系列次級電子發(fā)射極，D1、D2……等。光電倍增管工作原理圖

第7頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二5.信號指示系統(tǒng)

是把檢測到的信號以適當的方式顯示或記錄下來。常用的信號指示裝置有直讀檢流計、電位調節(jié)指零裝置以及數字顯示或自動記錄裝置等。常用的顯示方式有數字顯示、熒光屏顯示、曲線掃描及結果打印等多種。高性能的儀器還帶有數據站，即可對分光光度計進行操作控制，又可進行數據處理。第8頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）紫外-可見分光光度計的工作原理

1.單光束分光光度計的工作原理國產722型、751型、724型、英國SP500型以及BackmanDU-8型等均屬于此類光度計。光學系統(tǒng)工作原理圖

第9頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二單波長雙光束分光光度計原理圖

2.單波長雙光束分光光度計的工作原理儀器有國產710型、730型、740型等。第10頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

3.雙波長分光光度計的工作原理紫外分光光度計（200～400nm）、可見分光光度計（400～800nm）和紫外-可見分光光度計（200～1000nm）。雙波長分光光度計光路示意圖

第11頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二二、儀器操作通法（一）操作通法1.儀器接通電源，預熱。2.根據測定波長，選擇相應光源，繼續(xù)預熱（各型號儀器在操作順序上略有區(qū)別）。3.靈敏度鈕置1檔。4.將盛有供試品溶液及空白（參比）溶液的吸收池放入吸收池架，使空白（參比）溶液置光路位置，蓋好供試品室蓋。5.量程選擇鈕置T位置。第12頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二6.斷開光路調節(jié)儀器零點，使顯示為0。打開光路調節(jié)儀器透光率，使顯示為100%。7.量程選擇鈕置A位置。8.將供試品置于光路中，讀取供試品的吸光度值。9.儀器使用完畢，取出吸收池，關機，登記。10.不同型號的紫外分光光度計其操作方法和要求亦有所不同，使用前應詳細閱讀使用說明書。第13頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）注意事項1.量瓶、移液管及吸收池均應經洗凈、校正后使用。2.吸收池的校正3.吸收池使用方法①使用前的處理；②吸收池使用；③使用后的處理。4.狹縫寬度的選擇5.吸光度的測定6.制劑含量的測定第14頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二三、含量測定（一）基本原理紫外-可見分光光度法的定量分析依據是朗伯-比爾定律。數學表達式為：A=KCLA為吸光度；K為吸收系數；C為溶液濃度；L為液層厚度。吸收系數：百分吸收系數、摩爾吸收系數?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?。第15頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）操作步驟

1.對照溶液品與供試品溶液的制備

2.紫外可見分光光度計的校正

（1）波長準確度的校正吸光度準確度的標準范圍波長（nm）吸收強度百分吸收系數相對偏差范圍235257313350最小最大最小最大124.5144.048.62106.6

123.0～126.0142.5～146.047.0～50.3105.5～108.5第16頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（2）吸光度的校正鉻酸鉀溶液的吸光度λ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度A200.45593100.15183800.92814600.01732300.16753100.04583900.68414700.00832400.29333200.06204000.38724800.00352500.49623300.14574100.19724900.00092600.63453400.31434200.12615000.00002700.74473500.55284300.0841

2800.72353600.82974400.535

2900.42953700.99144500.0325

第17頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（3）雜散光的檢查

雜散光的檢查試劑名稱試劑濃（g/100ml）測定用波長（nm）透光率（%）碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.8第18頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二3.選擇測量條件

顯色反應的條件、消除干擾物質的方法、測量波長、參比溶液、及測量波長、吸光度范圍及儀器狹縫寬度的選擇。4.進樣測試5.含量計算第19頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（三）含量測定的方法

1.單組分樣品的定量分析（1）吸收系數法：按藥品標準規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度（A），根據A=K·C·L與藥品標準規(guī)定的被測物質的百分吸收系數，計算供試品溶液的濃度C供（g/100ml）。

含量（W/W）=C供×D供×V樣100×W供第20頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二如《中國藥典》駐車丸中總生物堿的含量測定、前列舒丸中牡丹皮的含量測定等采用本法。先計算C供，再計算出藥品中被測成分的含量（W/W）。含量計算公式有兩種：①含量（mg/丸）=C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）W樣（g）②含量（標示量%）=C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）W樣（g)×標示含量（mg/丸）×100%第21頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（2）對照品比較法：按藥品標準的規(guī)定，在相同條件下，在規(guī)定波長處分別測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度，按計算供試品溶液中待測組分的濃度。式中：AR為對照品溶液的吸光度；AX為供試品溶液的吸光度；CR為對照品溶液的濃度；CX為供試品溶液的濃度?！吨袊幍洹啡A山參片中生物堿的含量測定、黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D的含量測定均采用本法。第22頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（3）標準曲線法（工作曲線法）：配制一系列不同濃度的對照品溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下分別測定各對照品溶液的吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制A-C曲線，稱為標準曲線或工作曲線。然后在完全相同的條件下測定樣品溶液的吸光度，從標準曲線(或回歸直線)上查出樣品溶液的對應濃度，或代入回歸方程，求出樣品溶液的濃度。標準曲線第23頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二在做精密測量時，用對照品溶液的濃度進行線性回歸，求出回歸直線方程（相關系數r≥0.999），繪出回歸直線代替標準曲線，以盡量消除偶然誤差。亦可利用計算器將一系列對照品溶液的濃度與相應的吸光度進行一元線性回歸，求出回歸方程（相關系數≥0.9990），將供試品溶液的吸光度代入回歸方程，算出供試品溶液的濃度。回歸方程：A=a+bC

式中，A為被測溶液吸光度；C為被測溶液濃（g/ml）；a為截距；b為斜率。

《中國藥典》槐米中蘆丁及青黛中靛藍的含量測定，復方皂礬丸中的硫酸亞鐵，獨一味膠囊、益心酮片、消咳喘糖漿和排石顆粒中的總黃酮，桂林西瓜霜中的總生物堿的含量測定等均使用該法。第24頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

2.混合物的測定方法

當待測組分彼此不發(fā)生化學反應時，根據吸收定律的加和性，不需化學分離，可同時測定樣品中兩種或多種組分的含量。當溶液中同時存在兩組分a和b時，它們的吸收峰相互重疊的程度有三種情況，如圖所示?；旌辖M份吸收光譜重疊示意圖

第25頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

（1）在最大吸收峰處互不重疊：如圖(1)，可分別在λ1和λ2處用單組分樣品的測定方法，先后測定組分a和b的濃度。（2）在最大吸收峰處部分重疊：如圖(2)，在λ1處，組分b無吸收，在λ2處，組分a和b均有吸收。則可先在λ1處用單組分樣品的測量方法，測定樣品溶液中組分a的濃度；然后在λ2處測定樣品溶液的吸光度Aa＋b2，根據吸光度的加和性原則，計算組分b的濃度。

（3）兩組分在最大吸收峰處相互重疊：如圖(3)，常采用解線性方程組法。選擇兩個測定波長λ1和λ2，首先測定兩組分在兩波長處的吸收系數的值，然后在兩波長處測定樣品溶液的吸光度，最后用解線性方程組的方法求出兩組分的濃度。第26頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（4）等吸收雙波長測定法：對于圖(3)的情況，可利用等吸收雙波長測定法對其中一種組分或兩種組分同時進行測定。操作步驟：①選擇參比與測定波長；②繪制標準曲線；③含量測定等吸收雙波長測定法示意圖

第27頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

（5）導數光譜法：導數光譜法又稱微分光譜法，是一種消除光譜干擾的方法。以吸光度A對波長λ的吸收光譜稱為零階光譜，對吸收光譜進行一級微分，即可得到(dA/dλ)-λ曲線，稱為一階導數光譜，以同樣方法可得到二階導數光譜(d2A/dλ2)-λ曲線，三階導數光譜(d3A/dλ3)-λ曲線，四階導數光譜(d4A/dλ4)-λ曲線。各階倒數光譜的基本曲線圖1.零階2.一階3.二階4.三階5.四階第28頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二原理：在導數光譜中，導數信號與濃度成正比，即：dA/dλ∝C，d2A/dλ2∝C，d3A/dλ3∝C，d4A/dλ4∝C。信號對濃度的靈敏度取決于吸收系數在特定波長下的變化率，即：dε/dλ，d2ε/dλ2，d3ε/dλ3，d4ε/dλ4，導數光譜的測量法有幾何法和代數法。在幾何法中，導數光譜的定量參數是振幅。導數光譜的微分階數n越大，峰形越尖銳、分辨率越強，但信噪比將降低，通常不超過四階。操作步驟：①干擾情況考查；②選擇測定條件；③繪制標準曲線；④樣品測定。第29頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

（6）差示光譜法(ΔA)法：先選定一個理想的參比溶液，使待測組分發(fā)生特征光譜變化，而共存組分不發(fā)生光譜變化，由此消除其干擾。一般是取兩份相等的供試液，在一份中加酸或堿，形成不同的酸堿介質環(huán)境；或加入能與待測組分發(fā)生反應的試劑，使待測組分以不同的形式存在，吸收光譜發(fā)生顯著變化，將兩份供試液稀釋至同樣濃度，分別置于樣品池與參比池中，于選定波長處測其吸光度差值ΔA，在一定濃度范圍內，ΔA與待測組分濃度C呈線性關系，可作為物質定量分析的依據。第30頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二原理：導數光譜的微分階數n越大，峰形越尖銳、分辨率越強，但信噪比將降低，通常不超過四階。導數光譜的波長間隔△λ越大，靈敏度越高，但分辨率降低。一般選1～2nm為宜。導數光譜的中間波長λm的選擇原則是：干擾組分在此波長處的導數值最好為零，而且通過選擇適宜的波長和求導條件，可消除背景吸收、雜質和共存物的干擾。操作步驟：①干擾情況考查；②選擇測定條件；③繪制標準曲線；④供試品測定；第31頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二四、案例（一）六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定供試品溶液的制備參比溶液的制備紫外—分光光度計含量計算

取本品約2g，精密稱定，用水蒸氣蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度。照紫外－分光光度法，在274nm波長處測定吸光度，按丹皮酚(C9H10O3)的吸收系數為862計算，即得。本品每袋含牡丹皮按丹皮酚(C9H10O3)計，不得少于6.0mg。第32頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）獨一味膠囊中總黃酮的含量測定

本品每粒含總黃酮以無水蘆丁(C27H30O16)計，不得少于26mg。獨一味膠囊中總黃酮的含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？對照品溶液的制備標準曲線的制備吸光度的測定含量計算供試品溶液的制備課堂互動第33頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（三）黃楊寧片中黃楊寧的含量測定藥品標準規(guī)定每片含黃楊寧以環(huán)維黃楊星D（C26H46N2O）計算，應為標示量的90.0%～110.0%。供試品溶液的制備對照品溶液的制備吸光度的測定含量計算黃楊寧片中黃楊寧的含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？課堂互動第34頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.定義薄層掃描法是供試品經薄層分離后,用一束波長、強度一定的紫外線或可見光對薄層板進行掃描，通過測定薄層板上的斑點對光的吸收強度或斑點經激發(fā)后所產生的熒光強度,將掃描得到的圖譜及積分數據進行定量的方法。

2.特點設備簡單、操作方便、分離快速、靈敏度及分辨率高、顯色劑選擇范圍廣、適用于多組分及微量組分定量等。第二節(jié)薄層掃描法第35頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二一、儀器工作原理（一）薄層色譜掃描法的基本原理

薄層色譜掃描法的測定原理是用長寬可以調整的一束波長、強度固定的光，對薄層板上的斑點進行掃描，通過測量斑點或被斑點反射的光束的強度變化，求出待測組分含量。薄層掃描法可分為吸收薄層掃描法和薄層熒光掃描法。第二節(jié)薄層掃描法第36頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.

吸收薄層掃描測定法

是用可見-紫外光的單色光對薄層板上色譜斑點進行掃描，根據掃描獲得的吸光度隨展開距離變化的圖譜及積分數據進行定量的方法。根據測光的方式不同，吸收掃描測定法又分為透射法和反射法兩種。

第二節(jié)薄層掃描法透射法是測定光透過供試品斑點后的吸收情況進行的定量方法透射法掃描

L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器第37頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二反射法是測定供試品斑點對光的反射情況進行的定量方法。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器反射法掃描

第二節(jié)薄層掃描法第38頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)薄層掃描法吸光度與物質的濃度及液層厚度間不呈線性關系的解決方法選擇曲線中的直線部分進行定量分析采用Kubelka-Munk方程利用非線性方程定量第39頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

2.薄層熒光掃描法是通過儀器對供試品吸收可見-紫外光后發(fā)射的熒光強度掃描得到的吸收光譜及積分數據，求出供試品含量的方法第二節(jié)薄層掃描法熒光反射法掃描L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點

PD-檢測器第40頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)薄層掃描法當樣品量很少時，斑點中組分的濃度與熒光強度呈線性關系，可按公式計算：F=2.3K/IoECL或F=KC式F=2.3K/IoECL中：F為熒光強度；Io為入射光強度；C為濃度；E為吸收系數；K為常數（與熒光效率有關）；L為薄層厚度。式F=KC中：C為濃度；

K為2.3K/IoEL之積。在薄層熒光掃描法中，常用斑點熒光強度的積分值（色譜峰面積）代替公式中的F，斑點中組份的含量代替公式中的C進行計算。第41頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）薄層掃描儀的構造薄層掃描儀主要由主機（光源、單色器、供試品室、薄層板臺架、檢測器）及工作站組成。

1.光源光源室能提供穩(wěn)定的、具有一定強度的所需波長范圍內的連續(xù)光源。包括紫外光源氘燈（200nm～370nm）；可見光源鎢燈（370nm～700nm）；熒光光源氙燈或汞燈（200nm～700nm），其中汞燈為線光源，可提供特征輻射光譜。第二節(jié)薄層掃描法第42頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二2.單色光器單色光器可以將光源發(fā)出的連續(xù)光分解為單色光。其主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件、平行光裝置（準直鏡）等部分構成。薄層掃描儀多采用光柵為色散元件。3.薄層板臺包括薄層板臺架及驅動裝置。4.檢測器檢測器是用來檢測和放大由供試品斑點透射、反射或發(fā)出熒光強度的裝置。5.工作站具有設定儀器參數、控制儀器工作條件和信號采集、處理計算和打印輸出等功能的裝置。第二節(jié)薄層掃描法第43頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（三）儀器性能的檢定

1.波長準確度的檢查一是利用汞燈的特征光譜線對儀器的波長進行準確度檢查。二用氘燈以反射方式對硅膠G的薄層板上的10mg/ml的膦酸氯喹水溶液斑點做光譜掃描，如在257±10nm和343±10nm有最大吸收峰，則準確度符合要求。

2.重復性測定系指同一薄層板上、同一供試品溶液相同濃度的數個斑點，掃描結果的相對標準偏差。以峰面積的積分值計算相對標準偏差。鋸齒掃描的相對標準偏差應≤1.5%，線性掃描的相對標準偏差應≤2.0%.第二節(jié)薄層掃描法第44頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（四）薄層掃描儀的工作流程

1.吸收薄層掃描法的薄層掃描儀工作原理以CS-9301PC型雙波長掃描儀為例。第二節(jié)薄層掃描法薄層掃描儀的光學系統(tǒng)結構示意圖第45頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

2.薄層熒光掃描法的薄層掃描儀工作流程以島津CS-9000型雙飛點掃描儀為例。第二節(jié)薄層掃描法

CS-9000型儀器的光學系統(tǒng)

第46頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二三、含量測定（一）概述1.原理薄層掃描法含量測定有外標法和內標法兩種方法，中國藥典僅采用外標法。2.類型根據對照品標準曲線性質的不同，外標法又分為外標一點法和外標兩點法。第二節(jié)薄層掃描法第47頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二供試品選擇檢測方法

含量計算薄層掃描發(fā)含量測定操作步驟溶液的制備薄層板點樣展開掃描掃描波長對照品系統(tǒng)適用性實驗

測定方式

掃描方式

第二節(jié)薄層掃描法第48頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）操作步驟和方法外表一點法和外標二點法的點樣操作。（1）外標一點法（2）外標兩點法外標兩點法點樣方法

第二節(jié)薄層掃描法第49頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

4.系統(tǒng)適用性實驗（1）靈敏度的檢測：（2）分離度：（3）重復性

5.上機掃描（1）檢測方法選擇（2）測定方式選擇:反射法和透射法

第二節(jié)薄層掃描法第50頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（3）掃描波長選擇：①單波長掃描法；②雙波長掃描法;③薄層熒光掃描波長的選擇第二節(jié)薄層掃描法單波長、單光束掃描儀光路圖單波長、雙光束掃描儀光路圖

第51頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

（4）掃描方式的選擇：①直式掃描（線性掃描)；②鋸齒掃描（飛點掃描）；③圓形掃描；④傾斜掃描。掃描時，應自下而上掃描，不可橫向掃描。掃描光束（點）的形狀和大小，可通過調整狹縫的高度和寬度實現。第二節(jié)薄層掃描法線性掃描圖

第52頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)薄層掃描法鋸齒掃描

第53頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

6.含量計算

（1）外標一點法：標準曲線通過原點。計算公式：C=F1·A

（2）外標兩點法(隨行標準法)：標準曲線不通過原點。計算公式：C=F1·A+F2

由C1=F1·A1+F2C2=F1·A2+F2得第二節(jié)薄層掃描法7.結果判斷將測定結果與2010年版《中國藥典》中的各品種項下標準進行對比，符合標準即為合格。8.注意事項

第54頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二四、案例（一）靈寶護心丹的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備薄層掃描含量計算本品每1g含牛黃以膽酸（C24H40O5）計，不得少于2.5mg。靈寶護心丹的膽酸含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？課堂互動第二節(jié)薄層掃描法第55頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.定義高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離并測定含量的方法。

2.特點分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣（供試品不需氣化，只需制成溶液即可）、流動相選擇性大、流出組分易收集、色譜柱可反復使用等特點。

3.范圍揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大、離子型化合物。第三節(jié)高效液相色譜法第56頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二一、儀器工作原理（一）儀器的構造第三節(jié)高效液相色譜法高壓輸液系統(tǒng)色譜分離系統(tǒng)數據處理系統(tǒng)進樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)高效液相色譜儀的構造第57頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法高效液相色譜儀1.貯液罐2.脫氣裝置3.梯度洗脫4.高壓輸液泵5.流動相流量顯示6.柱前壓力表7.輸液泵頭8.過濾器9.阻尼器10.進樣裝置11.色譜柱12.檢測器13.數據處理系統(tǒng)14.廢液貯罐第58頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法

1.高壓輸液系統(tǒng)由貯液罐、脫氣裝置、高壓輸液泵、過濾器、梯度洗脫裝置等組成。

（1）貯液罐：由玻璃、不銹鋼或氟塑料等化學惰性、耐腐蝕材料制成，有無色及棕色兩種貯液罐。（2）脫氣裝置：貯液瓶配有抽真空及吹入惰性氣體的脫氣裝置。①超聲波振動脫氣；②抽真空脫氣；③加熱回流脫氣；④吹氦脫氣；⑤真空在線脫氣。第59頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法（3）高壓輸液泵：完成流動相的輸送任務。柱塞往復泵示意圖

兩種連接方式的柱塞往復泵

第60頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法（4）過濾器：在流動相進入色譜柱之前，用于除去流動相中固體顆粒雜質的直徑為0.45μW濾膜裝置。（5）梯度洗脫系統(tǒng)：可分為高壓與低壓兩種梯度洗脫裝置。

三元高壓梯度洗脫系統(tǒng)示意圖

1，2，3-閥門驅動器；4，5，6-比例閥；7，8，9-溶劑貯罐；10-溶劑比例控制器；11-梯度洗脫程序；12-高壓泵；13-溶劑混合器第61頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法

2.進樣系統(tǒng)進樣器有高壓進樣閥、六通手動進樣閥及自動進樣器等裝置。（1）高壓進樣閥（2）六通閥進樣器六通進樣閥

1，4-定量管；

2-泵；

3-進入色譜柱

5，6-排液口（a）取樣（b）進樣第62頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法（3）自動進樣裝置

自動進樣器

1-沖洗液管；2-沖洗泵；3-電磁閥；4-單向閥；5-注射器；6-三通閥；7-六通閥；8-沖洗液；9-空氣間隙；10-樣品；11-采樣針頭；12-空氣；13-供試品瓶；14-沖洗瓶第63頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二3.色譜分離系統(tǒng)色譜分離系統(tǒng)由保護柱、色譜柱、恒溫裝置和連接閥等組成。（1）保護柱：具有防止供試品和進樣閥墊圈中的固體顆粒的進入分析柱作用。（2）色譜柱：色譜柱是高效液相色譜儀的重要部件，由柱管、接頭和過濾片組成。第三節(jié)高效液相色譜法第64頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)高效液相色譜法帶保護柱的PEEK色譜柱

1-柱接頭；2-PEEK保護柱；3-0.5μm鈦金屬濾過片；4-電解鋁外殼；5-PEEK色譜分析柱；6-0.5μm鈦金屬濾過片；7-柱接頭第65頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

柱管、接頭、過濾片第三節(jié)高效液相色譜法柱接頭的液流分配功能

內接式柱結構1-毛細連接管；2-壓緊螺絲；3，7-密封圈；4-濾過片；5-柱頭螺帽；6-鎖緊螺帽；8-柱管第66頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（4）恒溫裝置：恒溫裝置(恒溫箱)精確控制色譜柱溫度的裝置，具有調節(jié)溫度的功能。（5）色譜柱柱效的評價：硅膠柱、反相色譜法的色譜柱（ODS柱等）、正相色譜法的色譜柱（氰基或氨基柱）測各組分的W1/2及tR，計算理論塔板數n及相鄰組分的分離度R（≥1.5）第三節(jié)高效液相色譜法第67頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

4.檢測系統(tǒng)高效液相色譜檢測器通常分為兩類：通用性檢測器和選擇性檢測器。（1）通用性檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器。（2）選擇性檢測器：可見-紫外檢測器、二極管陳列檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器及質譜檢測器。第三節(jié)高效液相色譜法第68頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二紫外檢測器（Utravioletdetector，UV）：紫外檢測器是高效液相色譜法中使用最廣范的選擇性檢測器。分為固定波長、可變波長和二極管陣列檢測器三種類型。①固定波長檢測器；②可變波長檢測器；③二極管陣列檢測器（Diodearraydetector）。第三節(jié)高效液相色譜法熒光檢測器（Fluorophotometriedetector,FD電化學檢測器（Electrochemicaldetector,ECD）蒸發(fā)光散射檢測器（Evaporativelightscatteringdetector,ELSD）示差折光檢測器（Differentialrefractiveindex,RID）：第69頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

5.數據記錄與處理系統(tǒng)是將色譜系統(tǒng)的檢測信號進行記錄和處理成分析結果的裝置。

6.儀器性能衡量儀器性能的指標包括儀器的重復性、噪音、基線漂移、敏感度、線性、波長精度等。第三節(jié)高效液相色譜法第70頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

典型的高效液相色譜儀流程如圖所示第三節(jié)高效液相色譜法（二）儀器工作原理1.貯液罐2.脫氣裝置3.梯度洗脫4.高壓輸液泵

5.流動相流量顯示6.柱前壓力表7.輸液泵頭8.過濾器9.阻尼器10.進樣裝置11.色譜柱12.檢測器13.數據處理系統(tǒng)14.廢液貯罐第71頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.用流動相沖洗濾器，再把濾器浸入流動相中，啟動泵。2.打開泵的排放閥，用專用注射器從閥口抽出流動相約20ml，設置高流速（如9ml/min）或用沖洗鍵（PURGE）進行泵排氣，出口處流動相連續(xù)液流后，將流速逐步回零或停止沖洗，關閉排放閥。第三節(jié)高效液相色譜法二、儀器操作通法（一）泵的操作3.將流速調節(jié)至分析用流速，對色譜柱進行平衡，同時觀察壓力指示應穩(wěn)定，用干燥濾紙片的邊緣檢查柱管各連接處應無滲漏。初始平衡時間一般需約30分鐘。如為梯度洗脫，應在程序器上設置梯度狀態(tài)，用初始比例的流動相對色譜柱進行平衡。第72頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.開啟檢測器電源開關，選擇光源（鎢燈或氘燈），選定檢測波長，待穩(wěn)定后，測試參比和供試品光路的信號應符合要求，設置吸收度方式和檢測響應時間（一般不大于1秒），設置滿刻度吸收值（適用于記錄儀）。2.開啟色譜處理機，設定處理方法，初步設定衰減、紙速、記錄時間、最小峰面積等參數，或設定記錄儀的紙速或衰減。第三節(jié)高效液相色譜法（二）紫外-可見檢測器和色譜數據處理機的操作3.進行檢測器回零操作，檢查處理機的電平（LEVEL），應符合要求，或檢查記錄儀的筆應處在設定的起始位置，如有變動，可繼續(xù)回零操作直至符合要求。4.記錄基線，待穩(wěn)定后，進行處理機斜率測試，符合要求后方能進行操作。第73頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.六通閥式進樣器（1）進樣手柄置采樣位置（LOAD）。（2）用供試品溶液清洗配套的注射器，再抽取適量，如用定量環(huán)（LOOP）載樣，則注射器抽取量應不少于定量環(huán)容積的5倍，用微量注射器定容進樣時，進樣量不得多于環(huán)容積的50%。在排除氣泡后方能向進樣器中注入供試品溶液。（3）把注射器的平頭針直插至進樣器底部，注入供試品溶液，除另有規(guī)定外，注射器不應取下。（4）將手柄轉至進樣位置（INJECT），供試品被流動相帶入色譜柱。第三節(jié)高效液相色譜法（三）進樣操作第74頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

2.自動進樣器：自動進樣裝置有圓盤式自動進樣器、鏈式自動進樣器、坐標式自動進樣器等。（1）將供試品溶液用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液至進樣瓶中，蓋上帶有墊片的瓶蓋，順時針方向旋緊。為避免堵塞進樣器及損傷進樣器，一般應選擇與自動進樣器型號相配套的進樣瓶。（2）將進樣瓶依次放入貯樣室內，記錄瓶位置號（VIAL）。如果自動進樣器有控溫裝置，設置溫度參數。（3）對自動進樣器進行校正，使自動進樣器為默認位置、進樣針沖洗系統(tǒng)正常、管內無氣泡、有足夠的沖洗液和流動相。（4）設定自動進樣參數。即設定供試品溶液自動進樣的起始位置、進樣體積、稀釋倍數、數據文件名等，用START進樣。第三節(jié)高效液相色譜法第75頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.注樣同時啟動數據處理機，采集和處理色譜信息，如系記錄儀，則注樣同時按下記號鍵作起始記號。2.最后一峰出完后應繼續(xù)走一段基線，確認無組分流出后結束記錄。3.根據第一張預試的色譜圖，調整衰減、紙速、記錄時間等參數，使色譜峰信號在色譜圖上有一定強度。定量時，一般峰頂不超過記錄滿量程。再按3.（1）～4.（1）正式分析操作。

4.含量測定的對照品溶液和供試品溶液每份至少進樣2次，由全部進樣結果（n≥4）求得平均值，相對標準偏差（RSD）不應大于1.5%。5.系統(tǒng)適用性試驗應符合藥典規(guī)定。第三節(jié)高效液相色譜法（四）色譜數據的收集和處理第76頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二1.分析完畢，先關檢測器和數據處理機，再用經濾過和脫氣的適當溶劑清洗色譜系統(tǒng)，正相柱用正己烷，反相柱如使用過含鹽流動相，則先用水，然后用甲醇-水沖洗，沖洗前先按上述操作通法項下1（1）、1（2）操作，再用分析流速沖洗，各種沖洗劑一般沖洗15分鐘～30分鐘，特殊情況可延長沖洗時間，尤其是用過含鹽流動相的柱子，有時需沖洗數小時甚至更長時間。

2.沖洗完畢后逐步降低流速至0，關泵。進樣器也應用相應溶劑沖洗，可用進樣閥所附專用沖洗接頭。

3.關閉電源，作好使用登記，內容包括日期、檢品、色譜柱、柱壓、使用時間（小時）及儀器使用前后的狀態(tài)等。第三節(jié)高效液相色譜法（五）清洗和關機第77頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二外標法可分為工作曲線法、外標一點法、外標兩點法。

1.標準曲線法

2.外標一點法

第三節(jié)高效液相色譜法

三、含量測定（一）原理(外標法)第78頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

3.峰面積歸一化法按藥品標準有關項下進行峰面積歸一化法求組分的含量，按下式計算式中：∑Ai為待測組份峰面積；∑A未參與計算的全部峰面積（溶劑峰和其他干擾峰除外）之和。第三節(jié)高效液相色譜法第79頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

4.雜質檢查法（1）加校正因子的主成分自身對照法：測定雜質含量時，如在檢測波長下，雜質色譜峰位置與主成分色譜峰位置不同時，可將主成分作為內標物加到雜質的對照品溶液中，求出雜質相對于主成分的校正因子，然后根據供試品中主成分色譜峰和雜質色譜峰的面積，采用內標法計算雜質的含量。

（2）不加校正因子的主成分自身對照法：在雜質未知或未建立雜質對照品時，可采用不加校正因子的主成分自身對照法測定雜質的含量或限量。第三節(jié)高效液相色譜法第80頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.溶液的制備

2.系統(tǒng)適應性試驗

（1）色譜柱的理論塔板數（n）：

（2）分離度（R）：分離度應大于1.5。（3）重復性：相對標準偏差不大于2.0%。（4）拖尾因子（T）：T應在0.95～1.05之間。第三節(jié)高效液相色譜法（二）操作步驟和方法第81頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（5）色譜圖及其參數①保留時間tR；②峰高h；④峰寬W；⑤峰面積A。第三節(jié)高效液相色譜法色譜圖及其參數

3.進樣測試

4.含量計算（1）外標法：

5.結果判斷第82頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二四、案例（一）固本咳喘片中補骨脂素和異補骨脂素的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備高校液相色譜儀含量計算第三節(jié)高效液相色譜法【處方】黨參151g白術(麩炒)151g茯苓100g麥冬151g補骨脂（鹽炒）151g炙甘草75g五味子75g本品每片含補骨脂以補骨脂素（C11H6O3）和異補骨脂素（C11H6O3）的總量計，不得少于0.30mg。為什么選擇補骨脂素和異補骨脂素為指標性成分？第83頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）胃舒寧顆粒中甘草酸含量的測定【處方】甘草595g海螵蛸595g白芍464g白術310g延胡索310g黨參119g第三節(jié)高效液相色譜法為什么選擇甘草酸為指標性成分？供試品溶液的制備對照品溶液的制備高校液相色譜儀含量計算本品每袋含甘草以甘草酸（C42H62O16）計不得少于20mg。第84頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

1.定義以氣體為流動相（稱載氣）流經色譜柱，進行分離定量的色譜分析法稱氣相色譜法（GC）。2.特點分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快等特點

3.適用范圍具有揮發(fā)性，在常溫下可氣化或加熱后可氣化的物質的含量測定。第四節(jié)氣相色譜法第85頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二一、儀器工作原理（一）儀器的組成第四節(jié)氣相色譜法氣控系統(tǒng)進樣系統(tǒng)柱分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)信號處理系統(tǒng)溫控系統(tǒng)第86頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法氣相色譜儀結構示意圖

1.載氣鋼瓶（N2）2.氫氣鋼瓶3.空氣鋼瓶4.減壓閥5.干燥器6.穩(wěn)壓器7.壓力表8.針形閥9.轉子流量計10.進樣器及汽化室11.色譜柱（虛線表示恒溫室）12.氫火焰離子化檢測器（虛線表示恒溫室）13.微電流放大器14.記錄器第87頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法1.氣流控制系統(tǒng)包括氣源、氣體凈化裝置、氣體流速控制和測量裝置。氣體流量調節(jié)閥高壓閥減壓閥壓力表凈化器檢測器轉子流量計色譜柱放空氣化室第88頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（1）氣源及凈化：①氣源（載氣）：是氣相色譜儀載氣和輔助氣的來源，可以是高壓氣鋼瓶、氫氣發(fā)生器以及空氣壓縮機。（2）減壓閥：是指聯接在高壓鋼瓶和氣體流路之間中減壓裝置，將由高壓鋼瓶供給的氣體壓力降至0.2～0.5mPa。（3）穩(wěn)壓閥：又稱壓力調節(jié)器，可以為針形閥提供穩(wěn)定的氣壓；為它后邊的穩(wěn)流閥提供恒定的參考壓力。第89頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法減壓閥結構示意圖1-調節(jié)手柄；2-彈簧；3-隔膜；4-提升針閥；5-出口腔；6-入口腔；7-氣體入口；8-高壓壓力表；9-氣體出口；10-低壓壓力表穩(wěn)壓閥示意圖

1-閥座；2-針形閥（或平面閥）；3-波紋閥；4-彈簧；5-手柄；6-閥桿第90頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（4）壓力表：壓力顯示器，指示和監(jiān)測載氣流量的儀器。（5）凈化裝置：聯接在氣源與儀器之間的凈化載氣中的雜質和水分所用載氣的裝置。（6）氣體流量調節(jié)閥（穩(wěn)流閥）：調節(jié)載氣流量、穩(wěn)定氣體壓力的裝置。（7）轉子流量計：測定顯示載氣流速的儀器。穩(wěn)流閥示意圖

1-彈性膜片；2-上游反饋管；3-手柄；4-針閥第91頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法2.進樣系統(tǒng)供試品引入裝置（進樣器）和氣化室（進樣系統(tǒng)）溫度控制裝置組成。（1）進樣器：將供試品加到氣相色譜儀中的裝置，主要有手動微量注射器、自動進樣器及頂空進樣器。①氣體進樣器：六通閥或微量進樣閥、注射器；②液體進樣器：微量注射器或有分流裝置的氣化室。第92頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（2）進樣系統(tǒng)和進樣模式：①填充柱進樣系統(tǒng)；②分流進樣系統(tǒng)；③不分流進樣系統(tǒng)；④冷柱頭進樣；⑤程序升溫氣化進樣；⑥大體積進樣；⑦頂空進樣技術；⑧熱解進樣。靜態(tài)頂空進樣示意圖1-溫度計；2-注射器；3-恒溫??；4-容器；5-樣品；6-隔膜；7-螺母不分流進樣示意圖1-載氣入口；2-清掃器入口；3-墊圈；4-分流閥；5-分流器出口；6-緩沖器；7-毛細管柱第93頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法分流進樣示意圖1-隔膜；2，4-針形閥；3-分流點；5-毛細管；6-紅寶石；7-色譜柱1-錐形口；2-0.3mm通道；3-鋼杯；4-載氣入口；5-石墨墊；6-毛細管柱；7-冷卻空氣出口；8-冷卻空氣入口；9-停止閥冷柱頭進樣器示意圖第94頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法

程序升溫進樣器示意圖

1-注射器；2-裝有彈簧的O型密封圈；3-不銹鋼針管；4-轉動閥；5-閥柄；6-散熱片；7-載氣入口；8-玻璃插入管；9-外徑0.18mm內徑0.1mm的彈性石英毛細管；10-冷卻劑；11-溫度敏感元件；12-針閥；13-進樣器清洗器出口；14-柱箱；15-彈性石英毛細管；16-加熱器第95頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（3）氣化室：氣化室是將液體或固體供試品進行加熱氣化的裝置。（4）溫度控制系統(tǒng)：設置、控制、測量氣化室溫度的裝置。第96頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法3.分離系統(tǒng)包括色譜柱、柱室和柱溫箱。（1）色譜柱：色譜柱按柱內徑的大小和長度，可分為填充柱和毛細管柱；柱形有螺旋形、Ｕ形。①填充柱；②色譜柱填料；③固定液；④毛細管柱。（2）柱室：是指色譜柱內沒有被固定相填充的空間。（3）柱溫箱：設置、控制、測量色譜柱溫度的裝置。第97頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法4.檢測系統(tǒng)由檢測器微電流放大器等部件組成。是指示和測量載氣中被測組分及其量變化的一種裝置。（1）檢測器：是將流出色譜柱的載氣中被測組分的濃度（或質量）轉化為電信號變化的裝置。①積分型檢測器；②微分型檢測器；③濃度型檢測器；④質量型檢測器。

（2）溫控系統(tǒng)：設置、控制、測量檢測器溫度的裝置。5.數據處理系統(tǒng)由放大器、記錄儀、積分儀、數據處理系統(tǒng)組成。數據處理機或色譜工作站接收處理經放大的供試品濃度或質量的信號（色譜圖信息），打印出操作條件，由積分儀給出定性和定量分析結果。第98頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）儀器的工作流程第四節(jié)氣相色譜法由高壓瓶提供載氣，經壓力調節(jié)器調壓后，進入凈化干燥裝置除去載氣中的雜質及水分，再由穩(wěn)壓閥調制適宜的流量和流速后進入色譜柱。供試品（液體）用微量注射器或進樣閥由進樣器注入，進樣后的供試品瞬間氣化為氣體，被載氣帶入色譜柱。各組分在色譜柱內經分離后依次流出色譜柱進入檢測器，檢測器將各組分的濃度或質量信號轉變成電壓變化，經放大器放大后記錄在記錄儀上，得到色譜圖，供試品經檢測器后放空。第99頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二二、儀器操作通法（一）開機前的準備第四節(jié)氣相色譜法1.檢查儀器上電器開關，均處于“關”位置。2.選擇好合適的色譜柱，柱的兩端應有盲堵。3.取下盲堵，分清入口與出口端，套好石墨密封圈及固定螺母，小心裝于儀器上，擰緊固定螺絲，但也勿過緊，以不漏氣為度。換下的色譜柱，應堵上盲堵保存。

4.開啟載氣鋼瓶上總閥調節(jié)減壓閥至規(guī)定壓力。

5.用表面活性劑檢查柱連接處是否漏氣，如有漏氣應檢查柱兩端的石墨密封圈或再略加緊固定螺母。

6.如果儀器有恒流和恒壓閥調節(jié)氣流量，換柱后可不再調節(jié)，若有疑點可用皂膜流量計檢查和調節(jié)流量。第100頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）開機第四節(jié)氣相色譜法1.打開各部分電路開關及色譜站，設置進樣系統(tǒng)、氣化室、柱溫箱及檢測器溫度和載氣流量等色譜參數，并開始加熱。2.待各部分溫度恒定后，打開氫氣鋼瓶及空氣壓縮機總閥，同載氣操作。3.按下點火按鈕（FID檢測器）（有些儀器在檢測器溫度達到一定溫度后有自動點火功能），應有“卟”的點火聲，用玻璃片置氫火焰離子化檢測器（FID）氣體出口處，檢視玻璃片上如有水霧，表示已點著火，同時記錄器有響應。注意：對于有自動點火功能的儀器來說，有時工作站已顯示點火成功，但實際上沒有點火，所以每次試驗均應用玻璃片檢視4.調節(jié)儀器的放大器靈敏度等，走基線，待基線穩(wěn)定度達到可接受范圍內，即可進樣分析。第101頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（三）測定第四節(jié)氣相色譜法1.系統(tǒng)適用性試驗應符合藥品標準各品種項下的要求。2.預試驗初次測定藥品時，可先經預試驗以確定儀器參數，根據預試驗情況，可適當調節(jié)柱溫、載氣流速、進樣量等，使色譜峰的保留時間、分離度、峰面積或峰高的測量符合要求。如果用積分儀作峰面積積分時，對含量測定的色譜峰面積不得小于10000μV·s，否則應調節(jié)進樣量，也可調節(jié)FID的靈敏度，但應注意信噪比是否達到。第102頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法3.正式進樣測定每份校正因子測定溶液（或對照品溶液）及供試品溶液各進樣2次，2份共4個校正因子及4個供試品數據結果平均值的相對標準偏差（RSD）不得大于2.0%。用外標法測定同上，相對標準偏差不得大于2.5%。多份供試品測定時，每隔5批應再進對照品2次。

進樣注意事項：（1）要根據進樣量選用注射器（2）取樣前要先洗滌注射器（3）進樣方法：取樣后，一手持注射器，另一支手護住針頭，小心將針頭刺穿過隔墊，在將注射器插到底的同時，供試品也要迅速推進氣化室（注意針尖不要彎曲），并立即抽出注射器。第103頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（四）關機分析完畢后，待各組分流出后，先關閉氫氣和空氣，再進行降溫操作，將進樣系統(tǒng)、柱溫箱、檢測器、以及頂空進樣器的溫度均設為40℃或更低，待各組件的溫度降至40℃以下時，依次關閉載氣工作站、氣相色譜儀并斷電。若要取下色譜柱，則應將柱兩端用盲堵堵上，放在盒內，妥善保。

（五）填寫使用登記第104頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二三、含量測定（一）原理

第四節(jié)氣相色譜法利用色譜峰的峰面積或峰高與待測組分的濃度或質量成正比的原理，選用與檢測器相對應的純物質作標準物質（內標物），將內標物加到供試品中，用氣相色譜儀測得待測組分和內標物的峰面積或峰高，將待測組分和內標物的峰面積或峰高相比較進行定量的方法稱為內標法。內標法可分為內標一點法、校正因子法、工作曲線法。第105頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法1.峰面積的計算公式不同峰型的色譜峰，采用不同的計算公式。（1）對稱峰的峰面積計算公式：A=1.065h×W1/2

式中：A為峰面積，h為峰高，W1/2半峰寬（2）不對稱峰的峰面積計算公式：式中：A為峰面積；h為峰高；W0.15W0.85分別為0.15及0.85峰高處的峰寬。（3）用數字積分以計算峰面積：色譜專用微機處理機能自動記錄、儲存色譜峰高、面積等數據，并能進行定量運算，給出測量結果及打印報告等。

第106頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法2.定量校正因子為使峰面積或峰高與其濃度或質量相對應，因此必須引入校正因子。校正因子分為絕對校正因子和相對校正因子。（1）絕對校正因子：

Wi=fi×AiWi=Ai/Si

式中：fi為比例常數，稱為絕對校正因子，為單位峰面積或峰高代表的i組分的量；Wi為待測組分i的質量；Ai為待測組分i的峰面積或峰高；Si為單位待測組分i的峰面積或峰高，簡稱響應值；fi

、Si為絕對定量校正因子，單位相同時二者為倒數：fi=1/Si第107頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法（2）相對校正因子：相對校正因子是指某組分i與內標物s絕對校正因子的比值。面積相對質量校正因子又稱質量校正因子或相對校正因子：式中：fW為相對校正因子；fi

為待測組分i的絕對校正因子；fs

為內標物的絕對校正因子；Ai、AW和Wi、Ws分別代表待測組分i的純品和內標物s的峰面積和質量。

第108頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法3.定量分析方法

（1）工作曲線法：①用相同的方法配制對照品溶液與供試品溶液；②繪制標準曲線或求出回歸方程；③在標準曲線上查出供試品中待測組分的含量，或用回歸方程計算出供試品中待測組分的含量。（2）校正因子法：精密稱取供試品Wi克，加一定量精密稱取的內標物Ws克,由兩者的峰面積或峰高之比，用內標校正因子計算含量。由公式：得第109頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二計算供試品中待測組分量的公式：式中，為供試品中待測組分的濃度；為供試品峰面積（或峰高）；為供試品中內標物質的濃度；為相應內標物質的峰面積。第四節(jié)氣相色譜法(3)內標法加校正因子法（內標對比法）計算校正因子的公式：式中，為內標物質的峰面積（或峰高）；為對照品的峰面積（或峰高）；為內標物質的濃度；為對照品的濃度。第110頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法如果供試品溶液的濃度為C，則供試品中被測組分的百分含量用下式計算：第111頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）操作步驟和方法第四節(jié)氣相色譜法

1.測試溶液的制備（1）對照品溶液的配制：（2）供試品溶液的配制：

2.系統(tǒng)適應性試驗

3.進樣測試

4.相對校正因子的測定與計算

5.含量計算第112頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)氣相色譜法內標法計算公式：如供試品溶液的濃度為C，則供試品中被測組分的百分含量可用下式計算：

6.結果判斷將測定結果與藥品標準比較，若在規(guī)定的范圍之內，則判斷本品合格，否則為不合格。第113頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二四、案例（一）復方鮮竹瀝液

【處方】

鮮竹瀝400ml魚腥草150g生半夏25g生姜25g枇杷葉150g桔梗75g薄荷素油1ml本品每ml含薄荷素油以薄荷腦（C10H200）計，不得少于10μg。對照品、內標溶液的制備測定校正因子含量計算結果判定供試品溶液的制備無水蘆丁含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？第四節(jié)氣相色譜法課堂互動第114頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（二）保婦康栓

【處方】

莪術油82g冰片75g供試品溶液是如何制備的？本品每粒含莪術油以莪術醇（C15H24O2）計，不得少于10.0mg.對照品溶液的制備含量計算結果判定氣相色譜儀測定供試品溶液的制備第四節(jié)氣相色譜法課堂互動第115頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

浸出物測定法是以藥材浸出物的含量作為其質量標準的測定。一般用于該藥材的活性成分或指標性成分不清或含量很低或尚無精確的定量方法時采用?！吨袊幍洹肥蛰d了三種方法，分別是：水溶性浸出物測定法醇溶性浸出物測定法揮發(fā)性醚浸出物測定法第五節(jié)浸出物測定法第116頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二一、水溶性浸出物測定法

本法系以水為溶劑，對制劑中水溶性成分進行提取，并計算其在制劑中的含量。本法包括冷浸法和熱浸法。第五節(jié)浸出物測定法第117頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二

（一）冷浸法

取供試品約4g，精密稱定，置250～300ml的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸；前6小時內時時振搖，再靜置18小時，用干燥濾器迅速濾過，精密量取濾液20ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中；在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(W/W%)。第五節(jié)浸出物測定法第118頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第五節(jié)浸出物測定法

（二）熱浸法

取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml錐形瓶中，精密加水50～100ml，密塞，稱定重量；靜置1小時后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時；放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中；在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(W/W%)。第119頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（三）注意事項1.儀器應干凈、干燥。2.干燥時可參考水分測定法中烘干法的有關內容第五節(jié)浸出物測定法第120頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二（四）含量計算（五）結果判斷

將測定結果與藥品標準比較，若等于或高于限度則符合規(guī)定；否則不符合規(guī)定。第五節(jié)浸出物測定法第121頁，共139頁，2023年，2月20日，星期二第五節(jié)浸出物測定法（六）應用實例暑癥片的水溶性浸出物測定取20片，研細，稱取細粉約4g，置250ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時內時時振搖，再靜置18小時，用干燥濾器迅速濾過，棄去初濾液，精密量取濾液20ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于105℃干燥3小時，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量。《中國藥典》規(guī)定其含量不得少于25.0%已知稱取細粉的重量為0.2988g，得到浸出物重量為2.0019g，試計算暑癥片的水溶性浸出物含量，并判斷是否符合規(guī)定。課堂互動第122