核酸分子雜交技術(shù)

..其次章 核酸雜交技術(shù)〔一〕名詞解釋原位雜交核酸分子雜交技術(shù)探針反向點(diǎn)雜交缺口平移標(biāo)記法隨機(jī)引物標(biāo)記法末端標(biāo)記法8．Southernblot9．熒光原位雜交10．菌落雜交〔二〕選擇題【A型題】鏈的Tm值主要取決于核酸分子的〔 A G－C含量BA－TCA－GDA－CET－G液相雜交是以下哪一種〔〕ASouthemBNorthemCDotDSlot爭論得最早的核酸分子雜交種類是〔 〕菌落雜交Southern雜交C Northern雜交

D E 原位雜交Southern雜交通常是指〔 A DNA和RNA雜交B DNA和DNA雜交C RNA和RNA雜交D 蛋白質(zhì)雜交E DNA和蛋白質(zhì)雜交最簡潔降解的核酸探針是( )cDNA探針B 探針C ssDNA探針D gDNA探針E:RNA探針基因芯片技術(shù)的本質(zhì)就是〔 A 核酸分子雜交技術(shù)子雜交技術(shù)C 聚合酶鏈反響技術(shù)D 基因重組技術(shù)E 酶切技術(shù)DNA探針的長度通常為( A 1000～2023個(gè)堿基B 500～1000C 400～500D 100～400E.<100個(gè)堿基8．寡核苷酸探針的最大的優(yōu)勢是〔 A 雜化分子穩(wěn)定B 分僅僅一個(gè)堿基差異的靶序列C 易標(biāo)記易合成易分解9．在Southern印跡中常用的核酸變性劑是( A 甲醛B 乙醛C氫氧化鈉D 碳酸鈉E 鹽酸10．鹽酸硝酸纖維素膜最大的優(yōu)點(diǎn)是〔 A 脆性大本底低共價(jià)鍵結(jié)合結(jié)合E 高結(jié)合力最常用的DNA探針標(biāo)記方法是( )A 物B 切口平移C3′-末端標(biāo)記D5′-末端標(biāo)記EPCR針，重復(fù)使用濾膜，以下哪種狀況不行以發(fā)生〔 〕過過浴過洗過

記過13．5′一末端的DNA探針標(biāo)記主要依靠的酶是( )A B 末端轉(zhuǎn)移酶AKPDNApolⅡE DNApol14．血友病是一種〔 〕染色體病X代謝缺陷病D 先天畸形E 常染色體隠性遺傳病15．預(yù)雜交中最常用的封閉劑是( A 溶液B 5×TBE1×TBE1×TAE1×TPE檢測目標(biāo)是RNA的技術(shù)是〔 A Southern雜交B Western雜交C Northern雜交D Eastern雜交E 雜交淋巴瘤檢測靶序列是DNA的技術(shù)是〔 A Southern雜交WesternNorthern雜交D Eastern雜交E 雜交淋巴瘤DNA雙螺旋之間氫鍵斷裂雙螺旋解開〕變性復(fù)性簡單性雜交探針具有堿基互補(bǔ)區(qū)域的單鏈又可以重結(jié)合形〕變性復(fù)性簡單性雜交探針一種標(biāo)記核酸與另一種核酸單鏈進(jìn)展配對形鏈，這一過程稱〔 〕變性復(fù)性簡單性雜交探針點(diǎn)/狹縫雜交可以用于〔〕A快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息

因定位分析D 陽性菌落的篩選E 蛋白水平的檢測放射自顯影時(shí)反射光產(chǎn)生的潛影在低溫下較穩(wěn)定，最適溫度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E4℃Southern〔〕 不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息C用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測ATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T)Northern〔〕A快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息RNA用于基因定位分析E 熒光原位雜交可以用于〔 〕A 否存在目的基因B 檢測的目標(biāo)是RNAC用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測以等位基因特異的寡核苷酸探針雜交法診斷某常染色體隱性遺傳病時(shí)，假設(shè)能與突變探針及正常探針接合，則該樣本為〔〕正常人雜合體患者C純合體患者D攜帶者E不能確定Tm()ApH3～5BpH4～5CpH5～6DpH5～9EpH8～11一般來說設(shè)計(jì)的寡核苷酸探針的長度〔 A 2-10bpB 17-50bpC D E 200-300bp

變性劑可使核酸的Tm值降低，常用的變性劑是( )A 甲酰胺B 鈉C 濃鹽酸稀鹽酸甲醇以下有關(guān)cDNA探針的描述不正確的為〔 A 利用mRNA通過RT-PCR在體外反轉(zhuǎn)錄可制備大量的cDNA探針cDNAcDNAA〔T，有可能產(chǎn)生非特異性雜交的問題cDNA度進(jìn)展( )A B 10～15℃C 5～10℃D E 40～50℃33．對于寡核苷酸探針，雜交溫度一般般低于其值( )A30～40℃B20～30℃C15～30℃D10～15℃E 5℃一般狀況下，不含變性劑甲酰胺時(shí)，雜交反響常在多少℃下進(jìn)展( A 9080756858在含50%甲酰胺時(shí)，雜交反響在多少℃進(jìn)展()A70B65C55D42E35雜交時(shí)的溫度與錯(cuò)配率有關(guān)，錯(cuò)配率每增加則Tm值下降( A 0.5℃B1～1.5℃C2～2.5℃D3～3.S℃E4～4.5℃交體的Tm值一般應(yīng)增加( A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D E 20～25℃雜交的時(shí)間一般為t的( A l倍B1～3C3～5

D 5～8倍E 為封閉非特異性雜交位點(diǎn)，可在預(yù)雜交液中參加( )ssDNA1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE隨機(jī)引物法標(biāo)記探針常用的AGT聚體的數(shù)目是( )4681012【X以下哪些是影響DNA復(fù)性的因素( A DNA濃度B C 溫度堿基組成DNADNA探針的優(yōu)點(diǎn)有〔 A 制備方法簡潔DNA擇粒載體中，可以無限生殖，取之不盡E 單鏈，不存在競爭性的自身復(fù)性以下哪些方法可以用于探針的全程標(biāo)記〔 A DNA加尾法B 記法C 隨機(jī)引物標(biāo)記法D E 尾端標(biāo)記關(guān)于DNA變性的描述正確的選項(xiàng)是( )A 二級構(gòu)造破B 壞C 黏度降低D E 浮力密度增加以下哪些因素可以使DNA變性〔 A 增加溶液的濃度加熱轉(zhuǎn)變?nèi)芤旱膒H值D 有機(jī)溶劑E 冷藏46．預(yù)雜交中，以下能起封閉作用的是( ssDNABSAD 脫脂奶粉E DTT變性的DNA會(huì)發(fā)生哪些理化性質(zhì)的變〔 A 粘度下降B 加C 浮力下降D 增加E 紫外光吸取削減

以下物質(zhì)適于非放射性探針標(biāo)記的是()A AKPACP生物素地高辛熒光素關(guān)于人工合成的寡核苷酸探針，以下描述正確的選項(xiàng)是)特異性高基酸序列推想其序列C 分子量小D 基因挨次差異性分析E 可用末端轉(zhuǎn)移酶進(jìn)展5′端標(biāo)記通過哪些措施可以提高雜交反響的速度〔 A 承受大片段探針B 反響體積C 高反響溫度不斷的振搖大量的反響體積51．DNAC 可標(biāo)記超螺旋DNAD 雙鏈DNAE 可標(biāo)記隨機(jī)引物以下哪些方法可以用于從凝膠上轉(zhuǎn)移 DNA〔 〕A毛細(xì)轉(zhuǎn)移B真空轉(zhuǎn)移C負(fù)壓轉(zhuǎn)移D E 冷凍轉(zhuǎn)移關(guān)于隨機(jī)引物法標(biāo)記探針下述正確的選項(xiàng)是()A可標(biāo)記單鏈DNAB可標(biāo)記雙鏈RNAC可標(biāo)記單鏈RNAD比活性高達(dá)108cpm／μgDNAE常經(jīng)過SephadexG-50可以承受哪些方法來標(biāo)記探針〔〕A雜交標(biāo)記法B切口平移標(biāo)記法C5’-末端的標(biāo)記D3’-末端的標(biāo)記E化學(xué)法延長標(biāo)記整個(gè)雜交反響主要以下哪些步驟組成〔〕A預(yù)雜交雜交洗脫固定轉(zhuǎn)移56．放射自顯影可以被分為〔 A 直接放射自顯影B 氧化顯影C D 自顯影E 固定顯影關(guān)于電轉(zhuǎn)移以下描述正確的選項(xiàng)是( )A 快速、高效B 設(shè)備TBE

可產(chǎn)生高溫E常用NC預(yù)雜交的主要目的是〔 A 平衡濾膜B封閉非特異性雜交的位置C提高雜交信號的檢測效率D便于從濾膜上除去探針E 去除用于雜交反響檢測的顯色物質(zhì)關(guān)于非放射性探針標(biāo)記以下描述正確的選項(xiàng)是( A 對人體危害小B 需要特別設(shè)備C 間使用D 如放射性探針E 重雜交探比較簡潔DNA失或插入產(chǎn)生，或由于限制性酶切位點(diǎn)轉(zhuǎn)變而導(dǎo)致〔〕APCRRAPDSouthermDNorthern印跡雜交E以上都不是DNADNA〔〕菌落印跡雜交NorthernCWesternD原位雜交E斑點(diǎn)雜交關(guān)于RNA探針的描述以下正確的選項(xiàng)是()A 可用于隨機(jī)引物標(biāo)記B 特異性高C D 位素標(biāo)記法標(biāo)記E 不易降解以下哪些可以作為核酸探針使用〔 A microRNAB C 寡核苷酸D mRNAE 雙鏈RNA64．A B 可以是RNA可用放射性標(biāo)記射性標(biāo)記E 必需是單鏈核酸〔三〕問答題1．依據(jù)哪三種不同的分類標(biāo)準(zhǔn)可以將雜交分為哪幾類？2．簡述反義核酸技術(shù)的根本原理及其應(yīng)用范圍3．試述Northernblot雜交的操作步驟？4．什么是肽核酸？并簡述其應(yīng)用？5．請舉例說明雜交技術(shù)在臨床檢驗(yàn)科基因診斷方面的應(yīng)用。6．請表達(dá)雜交探針標(biāo)記方法的種類。7．簡述直接放射自顯影的原理。〔一〕 名詞解釋

參考答案

退火溫度下，能與各種單鏈DNA模板結(jié)合。首先1．原位雜交：是首先應(yīng)用核酸探針與組織或細(xì)胞中的核酸按堿基互補(bǔ)配對原則進(jìn)展特異性結(jié)合形在顯微鏡下進(jìn)展細(xì)胞內(nèi)基因定位或基因表達(dá)的檢測技術(shù)。2．核酸分子雜交技術(shù)：單鏈的核酸分子在適宜的交檢測靶序列的一類技術(shù)稱核酸分子雜交技術(shù)。3．探針：是一段單鏈或雙鏈核苷酸，用放射性核針。4．反向點(diǎn)雜交：是將多種探針固定在同一膜上，4．反向點(diǎn)雜交：是將多種探針固定在同一膜上，性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統(tǒng)的雜交性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統(tǒng)的雜交法，一次僅能檢測一個(gè)未知序列。法，一次僅能檢測一個(gè)未知序列。5．缺口平移標(biāo)記法：該法是利用低濃度DNaseIDNAE.coliDNAI5’35’dNTP的探針。6．隨機(jī)引物標(biāo)記法：隨機(jī)引物是各種可能序列的

DNA引物結(jié)合于兩條單鏈模板上，當(dāng)反響液中存在的4種dNTP中有一種帶放射性核素標(biāo)記時(shí)，在DNADNA后經(jīng)純化即可得到標(biāo)記的DNA探針。7．末端標(biāo)記法：寡核苷酸探針由于較其他類型的探DNA5’端本身即為羥基。其原理是利用多核苷酸激酶將P分子上7位磷酸基轉(zhuǎn)移至寡核苷酸鏈53’端進(jìn)展。技術(shù)，在遺傳診斷、DNAPCR析等方面有重要價(jià)值。Southern印跡雜交的方法是將標(biāo)本DNA用限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)瓊脂糖電泳分別各酶切片段，接著，使酶切片段DNA發(fā)生變性并轉(zhuǎn)印到一固相支持物(通常是硝酸纖維素這種方法不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點(diǎn)分布的信息。9．熒光原位雜交：是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進(jìn)展檢測的技術(shù)。它將熒光信號的高靈敏度、安全性，熒光信號的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來，通過熒光標(biāo)記的DNA探針與待測樣本的DNA進(jìn)展原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進(jìn)展區(qū)分和計(jì)數(shù)，從而對染色體或據(jù)。稱菌落雜交，主要步驟包括：①菌落平板培育；②濾膜滅菌后放到細(xì)菌平板上，是菌落粘附到經(jīng)適當(dāng)飽和的吸水紙上；③菌斑溶解產(chǎn)生單練的DNA、

1．依據(jù)哪三種不同的分類標(biāo)準(zhǔn)可以將雜交分為哪幾類？DNADNARNARNA與RNA固定A，用

標(biāo)記的探針與菌落進(jìn)展雜交；

相雜交又可以分為菌落雜交、 Southern雜交、平板相比較，就可以確定陽性菌落?！捕尺x擇題【A

Northern雜交、點(diǎn)雜交和狹縫雜交。反義核酸技術(shù)是近幾年進(jìn)展起來的一項(xiàng)的1A 2E 3D 4B 5E 6A A7C 8B 9C 0B 1A 2A 技術(shù)及核酶技術(shù)。13．A 14．B 15．A 16．C 17．A 18．A 3．Northernblot雜交的操作步驟？19．B 20．D 21．A 22．A 23．A 24．A ①RNA5C 6C 7DD 9B 0A 膜放在含有A電泳條帶的凝膠上；③轉(zhuǎn)印盤中31．E 32．A 33．E 34．D 35．D 的轉(zhuǎn)移緩沖液將漸漸為膠和膜上掩蓋的吸水紙吸36．B 37．E 38．B 39．A 40.B【X

收，從而利用④毛細(xì)作用將膠中的變性RNA分子轉(zhuǎn)移到硝酸纖維薄膜上；⑤轉(zhuǎn)印完成后，使RNA41．ABCD47．ABD53．ABCD59．ABCD〔三〕問答題

42．ACD48．ACDE54．BCD60．AC

43．BC49．ABCD55．ABC61．ADE

4針雜交；0D2D交區(qū)帶。4．什么是肽核酸？并簡述其應(yīng)用？56．AD 57．ABCD 58．AB肽核酸是一種全的DNA類似物，在20世20年月由4以中性的DNA通過堿基互補(bǔ)配對的形式識別并結(jié)合DNARNA序列，形成穩(wěn)定的雙螺旋構(gòu)造。由于PNA不帶電荷，與DNA和RNA之間不存在靜電斥力，因而結(jié)合的穩(wěn)定性和特異性都大為提高；PNA與DNA或RNADNADNA或DNA、RNA雜交，表現(xiàn)在很高的雜交穩(wěn)定性、優(yōu)良的特異性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鑒于科技領(lǐng)域。如：病原體、遺傳病的檢測，抗癌、抗病毒反義核酸的爭論和應(yīng)用。特別是PNA可取代核酸用于基因芯片的制備，被認(rèn)為是基因芯片的升PNA還可用于定量PCRPNAA為寬闊的應(yīng)用前景。5．請舉例說明雜交技術(shù)在臨床檢驗(yàn)科基因診斷方面的應(yīng)用是鐮狀細(xì)胞貧血病的基因診斷。鏈第6位的谷氨酸被纈氨酸取代，表示為6(A3)谷→6GAAGTA，