革蘭氏染色法的過程原理

革蘭氏染色法的過程及原理之勘阻及廣創(chuàng)作一，過程．涂片將培育的分歧菌分別作涂片（注意涂片切不可過于濃重），干燥、固定。固準時經(jīng)過分焰l一2次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。．染色(1）初染加草酸鉸結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗。(2）媒染滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約一分鐘，水洗。(3）脫色將載玻片上邊的水甩凈，并襯以白布景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛才不出現(xiàn)紫色時為止，約20一30秒鐘，立刻用水沖凈酒精。(4）復(fù)染用番紅液染1一2分鐘，水洗。(5）鏡檢干燥后，置油鏡察看．革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分別開的細菌的革蘭氏染色反響為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。(6)同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混淆制片，作革蘭氏染色對照。二，原理革蘭氏染色法（Gramstain）不只能察看到細菌的形態(tài)并且還可將全部細菌劃分為兩大類：染色反響呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G＋示意：染色反響呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G一示意。細菌關(guān)于革蘭氏染色的分歧反響，是因為它們細胞壁的成分和構(gòu)造分歧而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主假如由膚聚糖形成的網(wǎng)狀構(gòu)造構(gòu)成的，在染色過程中，當用乙醇辦理時，因為脫水而惹起網(wǎng)狀構(gòu)造中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物被保留在細胞內(nèi)而不簡單脫色，所以，體現(xiàn)藍紫色；革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當用乙醇辦理時，脂類物質(zhì)溶解，細胞壁的通透性增添，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，而后又被染上了復(fù)染液（番紅）的顏色，所以體現(xiàn)紅色。革蘭氏染色的重點在于嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過分，則陽性菌可被誤染為陰性菌：而脫色，不敷時，陰性菌可被誤染為陽性菌。別的，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培育時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反響。青霉素作用體制擾亂細菌細胞壁的合成。青霉素你的結(jié)果與細胞壁的成分粘肽構(gòu)造中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可與后者競爭轉(zhuǎn)肽酶，阻擋你粘肽的形成，造成細胞壁的缺損，使細菌失掉細胞壁的浸透屏障，對細菌起到殺滅作用。溶菌酶與青霉素對細菌細胞壁的作用溶菌酶作用體制：是一種能水解致病菌種黏多糖的堿性酶，只需經(jīng)過損壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的B-1，4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，致使細胞壁破碎內(nèi)容物流出而使細菌溶解，溶菌酶還能夠和帶負電荷的病毒蛋白直接聯(lián)合，與DNA，RNA，脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活，所以該酶擁有抗菌消炎，抗病毒等作用判斷細菌有無鞭毛的方法電鏡察看，鞭毛染色，半固體穿刺培育，菌落形態(tài)察看描繪細菌與古細菌在細胞膜上的主要化學(xué)差異在革蘭氏陰性菌的表層，有由肽葡聚糖形成的細胞壁，在壁的外面，又有由蛋白質(zhì)、磷脂質(zhì)、脂多糖形成的膜層，與里面的細胞質(zhì)膜相對應(yīng)，特稱此層為細菌外膜。外膜比細胞質(zhì)膜的磷脂質(zhì)含量低，但脂多糖的含量則比較高。外膜的蛋白質(zhì)與細胞質(zhì)膜分歧，主要部分為數(shù)種蛋白質(zhì)所構(gòu)成。其主要蛋白質(zhì)的部分與特異的內(nèi)面的肽葡聚糖以共價鍵聯(lián)合。脂多糖存在于外膜的最外層。在外膜中僅知有磷脂酶，在細胞與外界的聯(lián)系中，已看到有很多功能的蛋白質(zhì)，即有各樣噬菌體、維生素B12、大腸桿菌素等的受體存在，而其一部分蛋白質(zhì)則與DNA的復(fù)制、細胞分裂相關(guān)，別的，外膜對水溶性低分子物質(zhì)簡單透過，但抗衡菌物質(zhì)則是透過的屏障，它對革蘭氏陰性菌間的透過性帶來很大的差異。關(guān)于古細菌來說，細胞壁不含肽聚糖，有的以蛋白質(zhì)為主，有的含雜多糖，有的近似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸。缺少細胞壁的原核生物，除了自然界天然存在的缺壁細胞，比方支原體外，實驗室菌種的突變、人為克制新細胞壁合成、和對現(xiàn)成細胞壁進行酶解都能夠獲得缺壁細胞。缺壁細胞主要有四類：Ｌ型細菌，原生質(zhì)體，球狀體，以及支原體。Ｌ型細菌；形成；實驗室或宿主體內(nèi)經(jīng)過自覺性突變而形成的遺傳性穩(wěn)固的細胞壁缺點菌株特色；細胞膨大，對浸透敏感，在培育基上可形成油煎蛋狀菌落，擁有正常的生殖能力實踐意義；沒有了細胞壁的機械固定，細胞及其柔韌，呈多樣性，成為“濾過型細菌”。原生質(zhì)體，球狀體；形成；用溶菌酶除盡原有的細胞壁，再用青霉素克制重生細胞壁的合成，最后獲得一層僅有細胞膜包裹的圓球狀浸透敏感細胞特色；無完好的細胞壁，細胞呈球狀，對浸透壓極其敏感，革蘭氏染色陰性，細胞不克不及分裂，對相應(yīng)噬菌體不敏感，無生殖能力實踐意義；比正常有細胞壁的細菌更簡單導(dǎo)入外源遺傳物質(zhì)，究遺傳規(guī)律和進行原生質(zhì)體交融育種的優(yōu)秀資料

是研支原體；形成；在長久進化中形成，適應(yīng)自然生活條件