實驗三培養(yǎng)基的配制與滅菌

實驗三培養(yǎng)基的配制與滅菌第一頁，共十頁，2022年，8月28日凝固劑一般是瓊脂(洋菜)，也有用硅膠與明膠。一般來說，培養(yǎng)基包括有水份、碳源、氮源、無機鹽類以及生長因素等五大類營養(yǎng)成份。此外還得有適宜的pH值，一定的滲透壓（即濃度）以及氧化還原電位等。三、實驗材料：三角瓶、試管、燒杯、分裝器、玻棒、天平、藥匙、pH試紙，搪瓷杯、量筒、紗布、棉花、橡皮筋、牛皮紙、角匙、稱量紙、各種生化試劑等。第二頁，共十頁，2022年，8月28日1、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨10gNaCl5g葡萄糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水

將蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加熱調pH至，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。2、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨20g乳糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水溶液

將蛋白胨、乳糖加入水中，加熱調pH至，加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。3、M.R.與V.P.試驗培養(yǎng)基蛋白胨5g葡萄糖5gK2HPO45g水1000mL

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。第三頁，共十頁，2022年，8月28日4、明膠培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g明膠150g水

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。5、硝酸鹽培養(yǎng)基蛋白胨10gNaNO31g水1000mLpH7.6

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。6、產生H2S試驗的培養(yǎng)基牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10gFeSO40.2gNaCl5g硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12g水1000mLpH7.4

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。第四頁，共十頁，2022年，8月28日7、吲哚試驗培養(yǎng)基牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g水1000mLpH7.2

分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。8、檸檬酸鹽培養(yǎng)基檸檬酸鈉5gNaCl5gMgSO42gK2HPO41g(NH4)2HPO41g瓊脂20g1%溴百里酚蘭液8mL水1000mLpH6.8

調pH后，加入1%溴百里酚蘭液，分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。9、淀粉培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨5gNaCl5g可溶性淀粉2g瓊脂15g水1000mLpH7.2

分裝三角瓶，塞上硅膠塞，滅菌。第五頁，共十頁，2022年，8月28日四、方法步驟1、培養(yǎng)基的配制：稱藥溶解調pH加指示劑分裝塞棉花裝入竹簍高壓蒸汽滅菌2、高壓蒸汽滅菌具體操作步驟：1.加入足夠量的水于滅菌鍋中(至水位線)。2.擺入上述包裝好的待滅菌培養(yǎng)基，但不能擺得太擠，以免影響蒸汽通過和滅菌效果。3.加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣(若為手提式應對角螺旋均勻旋緊)。第六頁，共十頁，2022年，8月28日4.打開排氣閥，通入熱源，自開始產生蒸汽至蒸汽猛烈的噴出而無空氣時關緊放氣閥。5.升溫升壓：繼續(xù)加熱，至壓力計讀數達0.1Mpa(121.5°)后保持30分鐘。6.到時間后停止加熱，待壓力下降至常壓后，慢慢打開排汽口，然后打開鍋蓋，取出滅菌物。注意在壓力未降至0時，切勿打開鍋蓋，否則突然降壓，會招致玻璃器皿破損或培養(yǎng)基沸騰，沾濕棉塞沖出管外7.取出滅菌物后，若試管應在瓊脂未凝固之時將試管擺成斜面。應用此法滅菌是否徹底的一個關鍵是在壓力上升之前必須將鍋內的冷空氣完全驅盡，否則壓力表指