酵母菌實驗報告

姓名鄭沖沖系年級08級生科一班組別同組者學(xué)號200800140207題目酵母菌的培養(yǎng)、形態(tài)觀察、死活鑒定和子囊孢子的觀察一、 目的要求1、 掌握酵母培養(yǎng)基的配置和酵母菌的接種方法2、 觀察酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及出芽生殖方式。3、 學(xué)習(xí)掌握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的實驗方法。4、 學(xué)習(xí)并掌握酵母菌子囊抱子的觀察方法。二、 基本原理1、 培養(yǎng)基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)。但實驗要求不是很嚴(yán)格時，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培養(yǎng)基來培養(yǎng)；但酵母菌子囊抱子的觀察要用麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基，其有利于子囊抱子的形成。2、 酵母菌的形態(tài)：酵母菌是多形的、不運動的單細(xì)胞真核微生物，菌體比細(xì)菌大。繁殖方式也較復(fù)雜，無性繁殖主要是出芽生殖；有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊抱子。本實驗通過用美藍染色浸片和水-碘液來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。3、 美藍染色液：美藍為無毒性染料，其氧化型為藍色，而還原型為無色。用它對酵母菌染色時，由于活細(xì)胞的新陳代謝作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無色；對于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。4、 水-碘液染色液：該染液將革蘭氏染液用碘液用水稀釋4倍后得到的，亦可用于酵母形態(tài)和出芽生殖的觀察。4、子囊抱子的觀察：酵母菌形成子囊抱子需要一定的條件，麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基有利于釀酒酵母子囊抱子的形成，能否形成子囊抱子及其形態(tài)是酵母菌分類鑒定的重要依據(jù)之一。三、 實驗器材菌種：釀酒酵母培養(yǎng)數(shù)天的酵母-麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基斜面溶液與試劑：0.1%呂氏堿性美藍染液，5%孔雀綠，0.5%沙黃、95%乙醇，水-碘染液培養(yǎng)基：酵母液體培養(yǎng)基，麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基。儀器或其他用具：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，酒精燈、接種環(huán)等。四、 實驗步驟1、 酵母培養(yǎng)基的配置：蛋白質(zhì)2%，酵母膏1%葡萄糖2%，加冷水100M1，自然PH，在115°C下高壓蒸汽滅菌30min。2、 接種和培養(yǎng)：無菌操作下，在滅菌的培養(yǎng)基中倒入少許酵母菌液即可。在28C下培養(yǎng)48h左右。3、 美藍染色操作：1＞在載玻片中央加一滴呂氏堿性美藍染色液，用接種環(huán)挑取少量酵母菌液，混合均勻；2＞用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上，避免產(chǎn)生氣泡；3＞將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。4＞染色開始到過30min期間，觀察死活細(xì)胞數(shù)量的變化；4、 水-碘液浸片法：滴加一滴水-碘液在載玻片的中央，無菌操作挑取少許酵母菌液至于染液中涂勻，蓋上蓋玻片后鏡檢。5、子囊抱子的觀察：1>.制片：取經(jīng)產(chǎn)抱培養(yǎng)的酵母斜面培養(yǎng)物，在潔凈載玻片上按常規(guī)涂片、干燥固定。2>.染色：滴加孔雀綠染液染色1min，水洗。3>.脫色：用95%的乙醇脫色30s，水洗。4>.復(fù)染：用番紅復(fù)染1min，水洗，干燥。5>.鏡檢：干后用油鏡觀察子囊抱子的形態(tài)。五、實驗結(jié)果及分析顯微鏡下的觀察圖片酵母菌的形態(tài)：10X，40X子囊抱子的形態(tài)：10X，40X實1、經(jīng)過染色后，顯微鏡下菌體有藍色和1、子囊抱子呈綠色，橢圓形，邊緣光滑，一驗無色兩種，其中藍色是死菌，無色為般有2~4在一塊。結(jié)活菌。2、呈紅色的是還未釋放的子囊抱子囊，個體果2、隨染色時間增長，發(fā)現(xiàn)藍色的菌體會較大，顏色較淡的是抱子釋放以后的留下描述和分析逐漸增多，說明由于環(huán)境的改變，死菌的數(shù)量在增加。3、 酵母菌的菌體比較大，一般成橢圓形，不運動；水碘液染色后，菌體中可以看到有藍色的顆粒，這是儲存在菌體里的淀