常見(jiàn)有毒有害物質(zhì)的測(cè)定(選用)

關(guān)于常見(jiàn)有毒有害物質(zhì)的測(cè)定(選用)第1頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三內(nèi)容簡(jiǎn)介本章講述了食品中常見(jiàn)有害有毒物質(zhì)如有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥、黃曲霉毒素等的測(cè)定方法以及各種測(cè)定方法的注意事項(xiàng)。第七章食品常見(jiàn)有害有毒物質(zhì)的檢測(cè)第2頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定第三節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定本章目錄第七章食品常見(jiàn)有害有毒物質(zhì)的檢測(cè)第一節(jié)概述第3頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)概述有害物質(zhì)的來(lái)源一、按污染途徑分1、環(huán)境污染造成的食品原料污染；2、食品在貯藏、包裝、銷(xiāo)售、運(yùn)輸、烹調(diào)和加工過(guò)程中被污染。二、按污染性質(zhì)分1、生物性污染物質(zhì)；2、化學(xué)性污染物質(zhì)；（主要地位）3、放射性污染物質(zhì)。第4頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)概述常見(jiàn)的有害物質(zhì)1.農(nóng)藥2.亞硝胺和硝基苯3.黃曲霉毒素4.苯酚和氰化物5.非金屬毒物6.金屬類(lèi)毒物7.動(dòng)植物毒素8.一些添加劑的鑒定9.獸藥第5頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)概述有害物質(zhì)的檢測(cè)一、定性分析

化學(xué)分析方法，設(shè)備簡(jiǎn)單、試劑品種少。二、定量分析

有害物質(zhì)的含量為百萬(wàn)分之一到億萬(wàn)分之一，常用儀器分析方法進(jìn)行測(cè)定。第6頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、氣相色譜法[原理]樣品中的有機(jī)氯農(nóng)藥經(jīng)石油醚提取、硅藻土柱層析凈化后，采用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰和保留時(shí)間定性、外標(biāo)法定量。1、農(nóng)藥提取2、凈化3、測(cè)定（1）氣相色譜參考條件色譜柱：內(nèi)徑3～4mm，長(zhǎng)1.2～2m的玻璃柱，內(nèi)裝涂以O(shè)V-7（15g/L）和QF-1（20g/L）的混合固定液的80～100目硅藻土。第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定第7頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（2）電子捕獲檢測(cè)器汽化室溫度：215℃；色譜柱溫度：195℃；檢測(cè)器溫度：225℃；載氣（氮?dú)猓┝魉伲?0ml/min；（3）色譜圖（4）計(jì)算第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定第8頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、薄層色譜法[原理]樣品中的有機(jī)氯農(nóng)藥經(jīng)提取、凈化、濃縮、點(diǎn)樣后，在氧化鋁薄層上被分離，用硝酸銀顯色后，經(jīng)紫外線照射可生成黑色斑，與標(biāo)準(zhǔn)品比較定性和半定量。Rf=斑點(diǎn)移動(dòng)距離/溶劑前沿距離具體測(cè)定步驟見(jiàn)教材P226-231。第二節(jié)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定第9頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三氣相色譜法

[原理]樣品中殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥經(jīng)有機(jī)溶劑提取，并經(jīng)液-液分配，微型柱凈化等步驟除去干擾物質(zhì)，采用氣相色譜-氮磷檢測(cè)器法檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制2.試樣制備3.有機(jī)磷農(nóng)藥提取4.有機(jī)磷農(nóng)藥凈化第三節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定第10頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三5.測(cè)定（1）氣相色譜條件；色譜柱：①玻璃柱2.6m×3mm（i·d），填裝涂有4.5％DC200＋2.5％OV－17的ChromosorbWAWDMCS（80～100目）的擔(dān)體。②玻璃柱2.6m×3mm（i·d），填裝涂有1.5％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）DCOE－1的ChromosorbWAWDMCS（60～80目）氣體速度：氮?dú)猓∟2）50mL／min、氫氣（H2）100ml/min、空氣50mL／min。溫度：柱溫240℃、汽化室260℃、檢測(cè)器270℃．

第三節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定第11頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（2）測(cè)定。吸取2～5μL混合標(biāo)準(zhǔn)液及樣品凈化液，注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性。以試樣的峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。6、結(jié)果計(jì)算第三節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定第12頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三7、16種有機(jī)磷農(nóng)藥的色譜圖第三節(jié)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定第13頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三黃曲霉毒素（Aflatoxins,AFT）是黃曲霉、寄生曲霉及溫特曲霉等產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物。分為B、G兩大類(lèi)。B大類(lèi)在氧化鋁薄層板上紫外線照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。G大類(lèi)呈現(xiàn)綠色熒光。

AFTB1毒性大，含量多，所以食品常以AFTB1為主要指標(biāo)。

第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第14頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三黃曲霉毒素，是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物。已分離鑒定出12種，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定黃曲霉毒素B1黃曲霉毒素B2黃曲霉毒素B3黃曲霉毒素B4黃曲霉毒素B5黃曲霉毒素B6第15頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三表1中國(guó)對(duì)食品中黃曲霉毒素的最高允許含量第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定食物名稱(chēng)最高允許含量/(ug/kg)玉米、花生、花生油、堅(jiān)果和干果(核桃、杏仁)20(黃曲霉毒素B1)玉米、花生仁制品(按原料折算)20(黃曲霉毒素B1)大米、其他食用油(香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油)10(黃曲霉毒素B1)其他糧食(麥類(lèi)、面粉、薯干)、發(fā)酵食品(醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品)、淀粉類(lèi)制品(糕點(diǎn)、餅干、面包、裱花蛋糕)5黃曲霉毒素B1)牛乳及其制品(消毒牛奶、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油)、黃油、新鮮豬組織(肝、腎、血、瘦肉)0.5(黃曲霉毒素M1)第16頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三薄層層析法

1、儀器

小型粉碎機(jī)、樣篩、電動(dòng)振蕩器、玻璃濃縮器、玻璃板5cm×20cm、薄層板涂布器、展開(kāi)槽(25cm×6cm×4cm)、紫外光燈100—125W、波長(zhǎng)365nm濾光片、微量注射器。2、測(cè)定方法

(一)樣品處理(二)黃曲霉毒素提取第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第17頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(三)測(cè)定

1．單向展開(kāi)法

(1)薄板制備：稱(chēng)取3g硅膠G，加2～3倍量的水，研磨1～2min呈糊狀后，倒入涂布器推成5cm×20cm，厚度約0.25mm的薄層板3塊。在空氣中干燥15min，在100℃活化2h，取出，放干燥器中保存。一般可保存2～3d，若放置時(shí)間較長(zhǎng)，可再活化后使。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第18頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(2)點(diǎn)樣在距薄層板下端3cm的基線上用微量注射器或血紅素吸管滴加樣液。第一點(diǎn)：10μlAFTB,標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.04μg／ml)。第二點(diǎn)：20μl樣液。第三節(jié)：20μl樣液+10μL0.04μg／mlAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：20μl樣液+10μL0.02μg／mlAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第19頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

(3)展開(kāi)與觀察在展開(kāi)槽內(nèi)加10mL無(wú)水乙醚，預(yù)展12cm，取出揮干。再于另一展開(kāi)槽內(nèi)加10mL丙酮—三氯甲烷(8+92)，展開(kāi)10～12cm，取出，在紫外光下觀察結(jié)果.方法如下：

a．由于樣液上加滴了AFTB1標(biāo)準(zhǔn)，可使AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)與樣液中AFTB1，熒光點(diǎn)重疊。若樣液為陰性，薄板上第三點(diǎn)AFTB1為0.0004μg，可用作檢查樣液中AFTB1最低檢出量是否正常出現(xiàn)；若樣液為陽(yáng)性；則起定性作用。薄層板上第四點(diǎn)AFTB1標(biāo)準(zhǔn)為0.002μg，主要起定位作用。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第20頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三b．若第二點(diǎn)與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的相應(yīng)位置上無(wú)藍(lán)色熒光點(diǎn)，則表示樣品中AFTB1含量＜5μg／kg；若在相應(yīng)位置上有藍(lán)色熒光點(diǎn)，則需進(jìn)行確證試驗(yàn)。

(4)確證試驗(yàn)：為確認(rèn)薄層樣上樣液熒光系由黃曲霉毒素B1產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，產(chǎn)生AFTB1的衍生物，展開(kāi)后此衍生物的比移值約在0.1左右。于薄層板左邊依次滴加兩個(gè)點(diǎn)。第一點(diǎn)：10μL0.04μg／mLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第二點(diǎn)：20μL樣液第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第21頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三于以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反應(yīng)5min后，用吹風(fēng)機(jī)吹熱風(fēng)2min(板上溫度不高于40℃)，再于薄層板上滴加以下兩點(diǎn)。第三點(diǎn)：10μL0.04μg／mLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：20μL樣液。按上法展開(kāi)并觀察，樣液是否產(chǎn)生與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四兩點(diǎn)，可依次作為標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)的衍生物空白對(duì)照。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第22頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（5）稀釋定量：樣液中的AFTB1熒光點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，如與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)最低檢出量（0.0004μg）的熒光強(qiáng)度一致，則樣品中AFTB1含量為即為5μg／kg。若樣液中熒光強(qiáng)度比最低檢出量強(qiáng)，則根據(jù)強(qiáng)度估計(jì)，減少滴加微升數(shù)，或?qū)右合♂尯笤俚渭硬煌⑸龜?shù)，直至樣液的熒光強(qiáng)度與最低檢出量的熒光強(qiáng)度一致為止。滴加式樣如下：第一點(diǎn)：10μLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.04μg／mL）。第二點(diǎn)；根據(jù)情況滴加10μL樣液。第三點(diǎn)：根據(jù)情況滴加15μL樣液。第四點(diǎn)：根據(jù)情況滴加20μL樣液。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第23頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（6）結(jié)果計(jì)算第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定式中X——樣品中AFTB1的含量，μy/kg；

V1——加入苯一乙睛混合液的體積，mL；

V2——出現(xiàn)最低熒光時(shí)滴加樣液的體積，mL；

D——樣液的總稀釋倍數(shù)；m1——加入苯一乙腈混合液溶解時(shí)相當(dāng)樣品的質(zhì)量，g；0.0004——AFTB1的最低檢出限量，μg。第24頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

2．雙向展開(kāi)法(1)點(diǎn)樣：取薄層板三塊，在距下端3cm基線上，在距左邊緣0.8～lcm處，各滴加10μLAFTB1(0.04μg／mL)標(biāo)準(zhǔn)液，在距左邊緣2.8～3cm處，各滴加20μL樣液。然后在第二塊板的樣液點(diǎn)上加滴10μLAFTB1(0.04μg／mL)標(biāo)準(zhǔn)液，在第三塊板的樣液點(diǎn)上加滴10μLAFTB1(0.02μg／mL)標(biāo)準(zhǔn)液。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第25頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(2)展開(kāi)a．橫向展開(kāi)：在展開(kāi)槽內(nèi)的長(zhǎng)邊置一玻璃支架，加10mL無(wú)水乙醇，將上述點(diǎn)好的薄層板靠標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的長(zhǎng)邊，置于展開(kāi)槽內(nèi)展開(kāi)，展至板端后，取出揮干。根據(jù)情況，需要時(shí)，可再重復(fù)1～2次。b．縱向展開(kāi)：揮干的薄層板以丙酮—三氯甲烷(8:92)展開(kāi)至10～l2cm為止。丙酮與氯甲烷的比例，根據(jù)不同條件自行調(diào)節(jié)。第四節(jié)黃曲霉毒素的測(cè)定第26頁(yè)，共30頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

(3)觀察與評(píng)定結(jié)果:a．在紫外光下觀察第一、二塊板，若第二塊板在AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的相應(yīng)處出現(xiàn)最低檢出量，而在第一板與第二板的相同位置上未出現(xiàn)熒光，則樣品中AFTB1含量＜5μg／kg。b．若第一塊板與第二塊板的相同位置上出現(xiàn)熒光點(diǎn)，則將第一塊板與第三塊板比較，著第三塊板上第二點(diǎn)與第一塊板上第二點(diǎn)的相同位置上的熒光點(diǎn)是否與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)重疊，如果重疊，再進(jìn)行確證試驗(yàn)。在具體測(cè)定中，三塊板可以同時(shí)做，也可按順序做。當(dāng)?shù)谝粔K板出現(xiàn)陰性時(shí)，第三塊板可以省略，如第一塊板為陽(yáng)性,