串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀

血串聯(lián)質(zhì)譜及尿氣相色譜質(zhì)譜

檢測結(jié)果解讀串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第1頁主要內(nèi)容遺傳代謝病介紹串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)介紹血串聯(lián)質(zhì)譜檢測結(jié)果解讀氣相質(zhì)譜技術(shù)介紹尿氣相質(zhì)譜檢測結(jié)果解讀串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第2頁遺傳代謝病介紹基因突變造成維持機體正常代謝所必需一些酶、受體或載體等缺乏發(fā)生疾病多為單基因遺傳病大部分屬于常染色體隱形遺傳病，部分屬于伴性遺傳遺傳代謝病病種繁多，當前已發(fā)覺近3000余，單病發(fā)病率低，但總體發(fā)病率可達活產(chǎn)嬰兒1/500串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第3頁遺傳代謝病發(fā)病機制正常代謝路徑代謝物（A）代謝物（B）X酶代謝物（A1）代謝物（A2）異常代謝路徑輔酶（C）代謝物（C1）代謝物（C2）代謝物（B1）代謝物（B2）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第4頁遺傳代謝病分類氨基酸代謝病：苯丙酮尿癥、楓糖尿病、酪氨酸血癥、同型胱氨酸尿癥、非酮性高甘氨酸血癥尿素循環(huán)障礙：鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥、瓜氨酸血癥、精氨酸琥珀酸血癥、精氨酸血癥有機酸代謝病：甲基丙二酸血癥、丙酸血癥、異戊酸血癥、戊二酸血癥、各種羧化酶缺乏癥等脂肪酸代謝（

β氧化）病：短鏈、中鏈、極長鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥，原發(fā)性肉堿缺乏癥等糖代謝?。禾窃鄯e病、G6PD缺乏癥、半乳糖血癥等溶酶體貯積癥：粘多糖病、戈謝病、尼曼皮克病等其它：先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥、肝豆狀核變性等串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第5頁串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)

（tandemmassspectrometry，MS/MS）質(zhì)譜儀：經(jīng)過檢測物質(zhì)質(zhì)量與電荷比（m/z），對物質(zhì)進行定性和定量分析儀器串聯(lián)質(zhì)譜儀：有兩個質(zhì)譜串聯(lián)而成二級質(zhì)譜串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第6頁串聯(lián)質(zhì)譜遺傳代謝病檢測

樣品處理方法-衍生法3mm(3.2ul全血)血濾紙片（96孔過濾板）100ul甲醇（含內(nèi)標），輕搖20min(萃取)離心至另一96孔聚丙烯板55℃吹干60ul鹽酸正丁醇，65℃,15min（衍生，丁酯化）55℃吹干100ul乙腈：水（80:20）上機進樣（每次20ul）檢測（2min檢測1個樣品）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第7頁串聯(lián)質(zhì)譜檢測結(jié)果檢測60余種氨基酸和?；鈮A可設(shè)置40余個氨基酸或酰基肉堿之間比值篩查或檢測45種疾病國際：1991年（美國）國內(nèi)：年（新華醫(yī)院，兒研所）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第8頁血氨基酸檢測結(jié)果血氨基酸增高：不一樣氨基酸增高，可代表一個疾病或幾個疾病一個疾病可有各種氨基酸增高血氨基酸降低：多繼發(fā)于營養(yǎng)不良（蛋氨酸及瓜氨酸除外）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第9頁苯丙氨酸增高

（Phe、Phe/Tyr）高苯丙氨酸血癥（單純Phe增高）希特林蛋白缺乏癥（同時Cit、Met增高）酪氨酸血癥（同時Tyr增高）靜滴氨基酸（伴各種氨基酸增高）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第10頁高苯丙氨酸血癥（HPA）□發(fā)病機制：苯丙氨酸（Phe）酪氨酸（Tyr）苯丙氨酸羥化酶X四氫生物蝶呤（BH4）苯丙酮酸多巴苯乙酸苯乳酸黑色素多巴胺腎上腺素□患病率：1:10,000串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第11頁酪氨酸增高

（Tyr、Tyr/Phe）酪氨酸血癥I，II，III型希特林蛋白缺乏癥（同時Cit、Met增高）甲基丙二酸血癥（同時C3、C3/C2增高）繼發(fā)于肝功效損傷新生兒暫時性酪氨酸血癥（篩查發(fā)覺）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第12頁酪氨酸酪氨酸血癥4-羥-苯丙酮酸發(fā)病機制4-羥苯乳酸4-羥苯乙酸尿黑酸馬來酰乙酰乙酸延胡索酸乙酰乙酸乙酰乙酸延胡索酸琥珀酸乙酰乙酸琥珀酰丙酮I型酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶4-羥-苯丙酮酸過氧化物酶尿黑酸氧化酶延胡索酸乙酰乙酸水解酶xII型III型xxX尿黑酸尿癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第13頁蛋氨酸增高

（Met、Met/Phe）希特林蛋白缺乏癥（同時Cit增高）同型半胱氨酸血癥（血同型半胱氨酸增高）高蛋氨酸血癥酪氨酸血癥（同時Tyr增高）繼發(fā)于肝功效損傷串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第14頁瓜氨酸增高

（Cit、Cit/Arg、Cit/Phe）希特林蛋白缺乏癥（同時Met、Tyr增高）瓜氨酸血癥-I型（血氨顯著增高）精氨琥珀酸尿癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第15頁精氨酸增高

（Arg、Ayg/Orn、Arg/Phe）希特林蛋白缺乏癥（同時Cit、Met增高）精氨酸血癥溶血串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第16頁亮氨酸/異亮氨酸、纈氨酸增高

（Leu、Leu/Phe）楓糖尿病繼發(fā)于早產(chǎn)兒串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第17頁楓糖尿病發(fā)病機制E1：decarboxylase（羥色氨酸脫羧酶），E2：acyltransferase；E3：flavoproteinlipoamidedehydrogenase（黃素蛋白2-氧（代）異戊酸脫氫酶）亮氨酸2-酮異已酸異戊酰-CoA支鏈ɑ-酮酸脫氫酶（BCKD）復合體X異亮氨酸2-酮-3-甲基戊酸2-甲酰丁酰-CoAX支鏈ɑ-酮酸脫氫酶（BCKB）復合體纈氨酸2-酮異戊酸異丁酰-CoAX支鏈ɑ-酮酸脫氫酶（BCKB）復合體串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第18頁丙氨酸及甘氨酸增高丙氨酸：線粒體疾?。焊未?，乳酸增高，低血糖甘氨酸：非酮性高甘氨酸血癥，丙酸血癥，MMA串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第19頁血氨基酸檢測結(jié)果降低□瓜氨酸降低

?鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)氨酶缺乏癥（尿乳清酸及尿嘧啶增高）

?氨甲酰磷酸合成酶缺乏癥□蛋氨酸降低

?甲基丙二酸血癥（cblC型多見）

?同型半胱氨酸血癥□各種氨基酸降低：繼發(fā)于營養(yǎng)不良串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第20頁甲基丙二酸血癥發(fā)病機制甲基丙二酰輔酶A甲基丙二酰CoA變位酶琥珀酰輔酶A腺苷鈷胺素鈷胺素腺苷轉(zhuǎn)移酶cblBCbI

Ⅰ鈷胺素還原酶cblA，cblH溶酶體CbI

ⅠCbI

ⅢcblC,cbID甲基鈷胺素蛋氨酸合成酶，cbIE同型半胱氨酸蛋氨酸X蛋氨酸合成酶，cbIG線粒體

X串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第21頁血游離肉堿及?；鈮A

檢測結(jié)果解讀串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第22頁游離肉堿及?；鈮A生理功效促進脂肪氧化代謝：與?；o酶A結(jié)合成?；鈮A，幫助中長鏈脂肪酸進入線粒體內(nèi)進行

β氧化，為細胞提供能量，尤其是在饑餓、應激時與其它?；o酶A結(jié)合成?；鈮A，幫助有機酸代謝促進丙氨酸代謝，降低乳酸在肌肉中堆積維持體液中?；鵆OA水平，以利于各種代謝與體內(nèi)過多?；鵆oA結(jié)合成酰基肉堿，進入肝腎代謝，以防體內(nèi)酰基CoA過多，造成毒性串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第23頁游離肉堿及?；鈮A檢測結(jié)果

解讀游離肉堿及?；鈮A增高

?不一樣?；鈮A增高，可代表一個疾病或幾個疾病

?一個疾病可能有各種?；鈮A增高游離肉堿及?；鈮A降低

?多為繼發(fā)于營養(yǎng)不良（游離肉堿除外）

串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第24頁有機酸血癥相關(guān)酰基肉堿

（短鏈?；鈮A）C3：丙酰肉堿C3DC：丙二酰肉堿C4：丁酰肉堿C4OH：3-羥基丁酰肉堿C5：異戊酰肉堿C5OH：3-羥基異戊酰肉堿C5DC：戊二酰肉堿C5:1:異戊烯酰肉堿串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第25頁發(fā)病機制有機酸血癥亮氨酸異亮氨酸纈氨酸2-氧代異乙酸2-氧代-3-甲基戊酸2-氧代異戊酸異戊酰CoA2-甲基丁酰CoA異丁酰CoA3-甲基巴豆酰CoA甲基巴豆酰CoA甲丙烯酰CoA3-甲基戊烯二酰CoA2-甲基-3-羥基丁酰CoA3-羥異丁酰CoA3-羥-3-甲基戊二酰CoA2-甲基-3-氧代丁酰CoA丙酰CoA乙酰乙酸乙酰CoA甲基丙二酸CoA琥珀酰CoA鈷胺素同型胱氨酸蛋氨酸生物胞素生物素丙酮酸草酰乙酸XXXXXXXXXXXXX楓糖尿病串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第26頁丙酰肉堿增高

（C3、C3/C2）甲基丙二酸血癥（常伴Met降低）丙酸血癥（常伴Gly增高）各種羥化酶缺乏癥（伴C5-OH顯著增高）繼發(fā)于酸中毒串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第27頁丁酰肉堿增高

（C4、C4/C3）短鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥乙基丙二酸腦病異丁酰輔酶A脫氫酶缺乏癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第28頁異戊酰肉堿增高

（C5、C5/C2）異戊酸血癥（尿異戊酰甘氨酸增高）繼發(fā)于丙戊酸類藥品使用繼發(fā)于特戊酸鹽類抗生素（頭孢類藥品）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第29頁戊二酰堿增高

（C5DC、C5DC/C2、C5DC/C8）戊二酸血癥-I型（不伴有其它?；鈮A增高）戊二酸血癥-II型（伴其它各種?；鈮A增高）色氨酸賴氨酸酵母氨酸2-氨基已二烯半醛2-氨基已二半醛2-氧代已二酸戊二酰CoA戊二酸戊二酰肉堿GA-I戊二酰CoA脫氫酶戊烯二酰CoA巴豆酰CoA3-羥戊烯二酸串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第30頁3-羥基異戊酰肉堿增高

（C5-OH、C5-OH/C3）各種羥化酶缺乏癥（生物素酶缺乏癥，醛縮化酶合成酶缺乏癥）3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥3-羥-3-甲基戊二酸尿癥3-甲基戊烯二酸尿癥丙酸血癥（伴C3顯著增高）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第31頁脂肪酸氧化代謝病相關(guān)酰基肉堿

（中鏈、長鏈?；鈮A）C0：游離肉堿C8：辛酰肉堿C10：葵酰肉堿C12：月桂酰肉堿C14：肉豆蔻酰基肉堿C14:1：肉豆蔻烯?；鈮AC16：棕櫚酰基肉堿C16OH：3-羥基棕櫚?；鈮AC18：十八碳?；鈮AC18OH：3-羥基十八碳?；鈮A串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第32頁線粒體脂肪酸

β-氧化代謝路徑細胞膜胞漿肉堿轉(zhuǎn)運蛋白脂肪酸肉堿肉堿C12-C16注：小于C8脂肪酸不需肉堿傳遞？串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第33頁游離肉堿

[C0、C0/(C16+C18)]□C0增高

?肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-I缺乏癥（其它?；鈮A正常，或降低）

?繼發(fā)于肝功效損傷（伴其它各種?；鈮A增高）

?靜滴或口服左旋肉堿

□C0降低?原發(fā)性肉堿缺乏癥（伴各種?；鈮A降低）?繼發(fā)于營養(yǎng)不良，有機酸血癥，脂肪酸氧化代謝病，母源性肉堿缺乏癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第34頁辛酰肉堿增高

（C8、C8/C3）□中鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥

（C8增高，C10正常，C8/C10增高）□各種?；o酶A脫氫酶缺乏癥（C8、C10均增高，C8/C10正常）

串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第35頁各種?；鈮A增高

（C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18）各種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II缺乏癥肉堿/?；鈮A移位酶缺乏癥繼發(fā)于肝功損傷（伴C0、C2增高）串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第36頁肉豆蔻烯酰肉堿增高

（C14:1、C14:1/C8:1、C14:1/C16）□極長鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥（C14:1增高為主）□各種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第37頁3-羥基棕櫚酰肉堿增高

（C16-OH、C16-OH/C3）極長鏈3-羥酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥各種?；o酶A脫氫酶缺乏癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第38頁進行了串聯(lián)質(zhì)譜檢測，為何還要進行氣相色譜質(zhì)譜檢測？串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第39頁串聯(lián)質(zhì)譜檢測部分疾病需要氣相質(zhì)譜驗證及判別

串聯(lián)質(zhì)譜檢測氣相質(zhì)譜檢測MMA丙酰肉堿升高甲基丙二酸，甲基枸櫞酸PA甲基枸櫞酸，3-羥基丙酸OTCD瓜氨酸降低乳清酸，尿嘧啶CPS正常MCC3-羥基異戊酰肉堿增高3-甲基巴豆酰甘酸HMG3-羥-3-甲基戊二酸MGA3-甲基戊烯二酸Tyr-I酪氨酸增高琥珀酰丙酮增高串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第40頁氣相質(zhì)譜檢測疾病串聯(lián)質(zhì)譜檢測

血結(jié)果正常鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥：尿乳清酸、尿嘧啶增高甘油激酶缺乏癥：尿甘油酸顯著增高海綿體狀腦白質(zhì)病變營養(yǎng)不良：N-乙酰天冬氨酸尿黑酸尿癥：尿黑酸顯著增高甲羥戊酸尿癥：甲羥戊酸增高延胡索酸尿癥:延胡索酸增高串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第41頁GC-MS在遺傳代謝病檢測中應用應用現(xiàn)實狀況：國際（日本，1966）；國內(nèi)（華中科技大，同濟醫(yī)院，）應用步驟：樣品處理，GC-MS檢測、結(jié)果分析判斷檢測疾?。?0-40種串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第42頁尿液前處理方法取相當于0.2mg肌酐尿樣，加入尿素酶20ul混勻，37℃溫育30min加入托品酸、17烷酸、24烷酸各40ug加入5%鹽酸羥銨500ul、2.5N氫氧化鈉400ul，調(diào)PH12-14混勻，室溫靜置60min加入60N鹽酸350ul，混勻，調(diào)PH1.0，離心，取上清液加入乙酸乙酯5ml，混勻，離心，分取上清液，重復3次，離心3000轉(zhuǎn)，5分鐘加入無水硫酸鈉5g，混勻，離心3000轉(zhuǎn)，5min，取上清液，60℃用氮氣儀吹干加入BSTFA與TMCS混合物100ul，80℃,30min（總時間：6h）1ulQPGCMS串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第43頁半定量分析-Screen軟件定性：依據(jù)保留時間（色譜）和參考離子（2個，質(zhì)譜）定量原理：依據(jù)內(nèi)標17-烷酸量，經(jīng)過檢測物封面積與17-烷酸峰面積比定量性質(zhì)：半定量定量種類：134種有機酸，其中2種為內(nèi)標定量表示形式：文本格式串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第44頁氣相質(zhì)譜檢測結(jié)果分析

（與有機酸血癥相關(guān)）乳酸：酮尿；乳酸血癥3-羥基丁酸、丙酮酸及乙酰乙酸：酮尿甲基丙二酸：甲基丙二酸血癥；繼發(fā)性改變甲基枸櫞酸：甲基丙二酸血癥；丙酸血癥3-羥基丙酸：丙酸血癥；各種羧化酶缺乏癥，酮尿異戊酰甘氨酸：異戊酸血癥；3-羥-3-甲基戊二酸尿血癥3-羥基異戊酸：各種羧化酶缺乏癥甲基巴豆酰甘氨酸：各種羧化酶缺乏癥；丙酸血癥；3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥；

β-酮硫解酶缺乏癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第45頁氣相質(zhì)譜檢測結(jié)果分析

（與有機酸血癥相關(guān)）3-羥-甲基戊二酸：3-羥-3-甲基戊二酸尿癥3-羥基戊二酸：3-羥-3-甲基戊二酸尿癥3-甲基戊烯二酸：3-羥-3-甲基戊二酸尿癥；3-甲基戊烯二酸尿癥2-甲基-3-羥基丁酸：

β-酮硫解酶缺乏癥4-羥基丁酸：4-羥基丁酸尿癥尿黑酸：尿黑酸尿癥；繼發(fā)性甘油酸：甘油酸激酶缺乏癥；繼發(fā)性丙二酸：丙二酸血癥；甲基丙二酸血癥甲羥戊酸內(nèi)酯：甲羥戊酸尿癥；戊二酸血癥-I型延胡索酸：延胡索酸尿癥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第46頁氣相質(zhì)譜檢測結(jié)果分析

（與氨基酸代謝病相關(guān)）苯乙酸、苯乳酸及苯丙酮酸：高苯丙氨酸血癥；繼發(fā)性4-羥基苯乙酸、4-羥基苯乳酸、4-羥基苯丙酮酸：Citrin蛋白缺乏癥；酪氨酸血癥；繼發(fā)于肝損傷尿嘧啶：鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥，瓜氨酸血癥-I型；精氨酸血癥；繼發(fā)性乳清酸：鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥，瓜氨酸血癥-I型；精氨酸血癥；乳清酸尿癥2-羥基異戊酸、2-酮-異戊酸、2-酮-3-甲基戊酸、2-酮-異已酸：楓糖尿病琥珀酰丙酮：酪氨酸血癥-I型串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第47頁氣相質(zhì)譜檢測結(jié)果分析

（與脂肪酸氧化代謝病相關(guān)及其它）乙基丙二酸：短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；乙基丙二酸腦病；各種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥已二酸、辛二酸、庚二酸、葵二酸：各種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥、原發(fā)性肉堿缺乏癥等脂肪酸代謝病；繼發(fā)性N-乙酰門氡氨酸：海綿狀腦白質(zhì)營養(yǎng)不良丙戊酸及其相關(guān)有機酸：抗癲癇藥串聯(lián)質(zhì)譜氣相色譜質(zhì)譜結(jié)果解讀第48頁GC-MS檢測遺傳代謝病種類甲基丙二酸血癥甲基丙二酸，甲基枸櫞酸丙酸血癥甲基枸櫞酸，3-羥基丙酸丙二酸血癥丙二酸異戊酸血癥異戊酰甘氨酸戊二酸血癥I型戊二酸各種輔酶A羧化酶缺乏癥3-羥基異戊酸，3-羥基丙酸，3-甲基巴豆酰甘氨酸3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺失癥3-甲基巴豆酰甘氨酸3-甲基戊烯二酸尿癥3-甲基戊烯二酸3-羥