三實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)

三實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)第1頁/共100頁第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)

和寄生蟲學(xué)等級分類第三節(jié)合格動(dòng)物群中常見

微生物和寄生蟲污染*第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量檢測第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物傳染病流行的基本環(huán)節(jié)及衛(wèi)生防疫第1頁/共99頁第2頁/共100頁第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物傳染病流行的基本環(huán)節(jié)及衛(wèi)生防疫

第2頁/共99頁第3頁/共100頁

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體表、粘膜和消化道內(nèi)容物中微生物共生微生物叢病原體條件致病烈性傳染病對宿主有益對動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生不良影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群全部毀滅影響人類健康第3頁/共99頁第4頁/共100頁傳染源傳播途徑易感動(dòng)物傳染病流行的基本環(huán)節(jié)第4頁/共99頁第5頁/共100頁一、傳染源（1）人源性（2）動(dòng)物源性引起傳染的條件（1）要有病原性和一定的毒力（2）侵入體內(nèi)的病原體要達(dá)到一定的數(shù)量（3）病原體要有適當(dāng)?shù)那秩腴T戶第5頁/共99頁第6頁/共100頁二、傳播途徑

（1）直接傳染：健康動(dòng)物與患病動(dòng)物（包括攜帶病原體動(dòng)物）直接接觸而感染。如狂犬病毒、猴B病毒、艾滋病病毒等。

①水平傳播：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體中互相的傳播。傳播途徑包括消化道、呼吸道或皮膚粘膜創(chuàng)傷等。如沙門氏菌常經(jīng)消化道感染；仙臺(tái)病毒常經(jīng)呼吸道；布氏桿菌病常由配種直接感染等。②垂直傳播：由母體通過胎盤將病原體傳給胎兒，例如支原體、細(xì)小病毒等。第6頁/共99頁第7頁/共100頁（2）間接傳播——非生物性傳播：a、經(jīng)空氣飛沫、塵埃傳播；b、以飼料、墊料傳播；c、經(jīng)飲水和飲水用具傳播；d、經(jīng)籠器具傳播?！镄詡鞑ィ篴、節(jié)肢動(dòng)物：蒼蠅、蚊子、蟑螂、蚤、虱、蜱、螨等。b、野生動(dòng)物：野生嚙齒類動(dòng)物，常攜帶各種病原體，例如攜帶流行性出血熱病毒的野鼠污染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的墊料、飼料。c、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：從外部購入的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，未經(jīng)嚴(yán)格檢疫和隔離。d、操作人員不注意衛(wèi)生防疫傳染病原體；有些人獸共患病，也可經(jīng)人傳播給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，例如結(jié)核、布氏桿菌病等。第7頁/共99頁第8頁/共100頁——切斷傳播途徑是控制傳染病的主要措施。第8頁/共99頁第9頁/共100頁三、易感動(dòng)物——與下列因素有關(guān)1）種類（品系、品種）

2）年齡

3）營養(yǎng)狀況

4）機(jī)體的抵抗力5）機(jī)體防御器官狀況第9頁/共99頁第10頁/共100頁

傳染源、傳播途徑和易感動(dòng)物是傳染病傳播的三個(gè)基本環(huán)節(jié)，缺少任何一個(gè)環(huán)節(jié)，新的傳染病就不可能發(fā)生，也不可能造成傳染病在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的流行。而當(dāng)傳染病流行已經(jīng)形成時(shí)，切斷任何一個(gè)環(huán)節(jié)，流行即告終止。傳染源傳播途徑易感動(dòng)物第10頁/共99頁第11頁/共100頁

疫苗接種和藥物治療是預(yù)防傳染病的有效手段。

但是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般不采取疫苗接種和藥物治療，主要由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特殊性：

1、應(yīng)用疫苗或治療制劑可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2、經(jīng)過治療或免疫的動(dòng)物，外表健康，但可能是帶菌或帶毒者，可能成為潛在的傳染源。

3、對小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，治療措施可能在經(jīng)濟(jì)上不適宜。第11頁/共99頁第12頁/共100頁四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物衛(wèi)生防疫主要包括以下幾個(gè)方面的內(nèi)容：

1、平時(shí)的預(yù)防措施

2、發(fā)生疫病時(shí)的撲滅措施

3、消毒措施

4、隔離措施第12頁/共99頁第13頁/共100頁消毒滅菌主要方法物理性滅菌消毒（1）高壓蒸汽滅菌：飼料、墊料、器具等消毒。

預(yù)真空蒸汽：131℃，4’；

一般蒸汽滅菌：121℃，20-25’。（2）高熱煮沸：器械、籠具、水瓶等消毒100℃(20min)。（3）干烤消毒：可達(dá)180-280℃(15min~30min)

。（4）火焰消毒：溫度可達(dá)300℃，主要用于不銹鋼籠具、金屬器械、墻壁的消毒。（5）照射消毒滅菌：紫外線、γ-射線等，用于空氣、飼料、墊料和器具的消毒。（6）微波滅菌：工業(yè)微波爐，家用微波爐。小包裝飼料。第13頁/共99頁第14頁/共100頁

化學(xué)消毒

是使用化學(xué)藥物噴灑、浸泡、擦拭、熏蒸等，以達(dá)到消毒滅菌的目的。常用化學(xué)消毒方法包括液體消毒和蒸汽消毒。

（1）液體消毒劑：包括石炭酸、過氧乙酸、來蘇水、次氯酸等。（2）熏蒸消毒：包括福爾馬林和三聚甲醛等。第14頁/共99頁第15頁/共100頁第二節(jié)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)

和寄生蟲學(xué)等級分類第15頁/共99頁第16頁/共100頁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)等級分類1.普通動(dòng)物（conventionalanimal）CV2.清潔動(dòng)物（cleananimal）CL3.無特定病原體動(dòng)物（specificpathogenfreeanimal)SPF4.無菌動(dòng)物（germfreeanimal）GF和悉生動(dòng)物（gnotobioticanimal)GN第16頁/共99頁第17頁/共100頁一、普通動(dòng)物

conventionalanimal(CV)

必須是不攜帶主要人獸共患病原體和動(dòng)物烈性傳染病的病原體。第17頁/共99頁第18頁/共100頁

普通動(dòng)物

——飼育在開放環(huán)境里,使用的墊料和飼料,只消毒不滅菌;其飲水須符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)。

——普通動(dòng)物只能用于教學(xué)實(shí)驗(yàn)和某些科研工作的預(yù)實(shí)驗(yàn)。第18頁/共99頁第19頁/共100頁

清潔動(dòng)物

cleananimal(CN)

必須是不攜帶主要人獸共患病原體和動(dòng)物烈性傳染病的病原體，

又不攜帶對動(dòng)物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原體。

亦稱最少疾病動(dòng)物,MinimalDiseaseanimal(MD)。第19頁/共99頁第20頁/共100頁清潔動(dòng)物

——生活在屏障環(huán)境中?！玫膲|料，飼料，飲水，手術(shù)器械和用具等均應(yīng)經(jīng)過高壓蒸汽消毒?！ぷ魅藛T需穿無菌服裝才能進(jìn)行飼育或?qū)嶒?yàn)操作。第20頁/共99頁第21頁/共100頁無特定病原體動(dòng)物

SpecificpathogenfreeAnimal(SPF)

又不攜帶對動(dòng)物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原體；

還不攜帶主要潛在感染或條件致病菌和對科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原體的動(dòng)物。

不攜帶主要人獸共患病原體和動(dòng)物烈性傳染病的病原體；第21頁/共99頁第22頁/共100頁

SPF動(dòng)物的飼育通常是:——先培育出無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物;然后,再將其后代轉(zhuǎn)移到屏障環(huán)境內(nèi)飼育繁殖建群。第22頁/共99頁第23頁/共100頁

無菌動(dòng)物

germfreeanimal(GF)

動(dòng)物體內(nèi)外無可檢出的一切生命體的動(dòng)物。

此種動(dòng)物在自然界中并不存在,必須用人為的方法培育。第23頁/共99頁第24頁/共100頁無菌動(dòng)物的取得和飼育環(huán)境——子宮摘除術(shù)（剖腹產(chǎn)）——飼育在隔離環(huán)境（隔離器內(nèi)）——一切用品經(jīng)過嚴(yán)格包裝、嚴(yán)格滅菌后，通過傳遞倉送入隔離器——通過手套進(jìn)行間接實(shí)驗(yàn)操作第24頁/共99頁第25頁/共100頁悉生動(dòng)物gnotobioticanimal(GN)

—?jiǎng)游矬w內(nèi)外所攜帶的生命體是已知的。

——此種動(dòng)物原是無菌動(dòng)物人為的將指定微生物叢定居其體內(nèi)外。第25頁/共99頁第26頁/共100頁GF、GN和SPF隔離環(huán)境GF動(dòng)物植入GN動(dòng)物污染GF動(dòng)物

植入污染屏障環(huán)境SPF動(dòng)物第26頁/共99頁第27頁/共100頁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)分類模擬圖人獸共患病原體、動(dòng)物烈性傳染病病原體動(dòng)物主要傳染病原體、對實(shí)驗(yàn)干擾大的病原體條件致病病原體、影響實(shí)驗(yàn)德微生物所有微生物已知微生物普通級動(dòng)物清潔級動(dòng)物SPF級動(dòng)物無菌動(dòng)物悉生動(dòng)物第27頁/共99頁第28頁/共100頁不同微生物學(xué)等級的

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較項(xiàng)目GFSPFCV傳染病無無有或可能有寄生蟲無很少有或可能有實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確較準(zhǔn)確有疑問應(yīng)用動(dòng)物數(shù)少量少量多或大量長期實(shí)驗(yàn)效果可能好可能好困難死亡率很低低高長期實(shí)驗(yàn)存活率約100％約90％40％左右實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)可能可能不可能統(tǒng)計(jì)價(jià)值很好較好不準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果的價(jià)值很高高有疑問第28頁/共99頁第29頁/共100頁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)國家或國際組織動(dòng)物應(yīng)排除病毒項(xiàng)目ICLAS小鼠/大鼠14/9中國小鼠/大鼠5+6/7芬蘭小鼠/大鼠16/8日本小鼠/大鼠8/9美國小鼠/大鼠（9）10/8澳大利亞小鼠/大鼠13/8荷蘭小鼠/大鼠11/10第29頁/共99頁第30頁/共100頁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)國家或國際組織動(dòng)物細(xì)菌真菌支原體ICLAS小鼠/大鼠13/12中國小鼠/大鼠8+8/9+7芬蘭小鼠/大鼠11+9/10+9日本小鼠/大鼠10/10美國小鼠/大鼠（16）13/12澳大利亞小鼠/大鼠12/12荷蘭小鼠/大鼠7/18第30頁/共99頁第31頁/共100頁小鼠應(yīng)排除病毒項(xiàng)目

淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒漢坦病毒鼠痘病毒小鼠肝炎病毒仙臺(tái)病毒小鼠肺炎病毒呼腸孤病毒III型小鼠細(xì)小病毒小鼠腦脊髓炎病毒小鼠腺病毒多瘤病毒LymphocyticChoriomeningitisVirusHantavirusEctromeliaVirusMouseHepatitisVirusSendaiVirusPneumoniaVirusofMiceReovirustypeIIIMinuteVirusofmiceTheiler’sMouseEncephalomyelitisVirusMouseAdenovirusPolyomaVirus第31頁/共99頁第32頁/共100頁大鼠應(yīng)排除病毒項(xiàng)目

漢坦病毒仙臺(tái)病毒小鼠肺炎病毒呼腸孤病毒III型大鼠細(xì)小病毒RV株大鼠細(xì)小病毒H-1株大鼠冠狀病毒/大鼠延淚腺炎病毒HantavirusSendaiVirusPneumoniaVirusofMiceReovirustypeIIIRatParvovirusRatParvovirusRatCoronavirus/SialodacryoadenitisVirus第32頁/共99頁第33頁/共100頁第三節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群中常見微生物

和寄生蟲污染及其控制一.普通級動(dòng)物中弓形蟲污染

二.清潔級動(dòng)物中的仙臺(tái)病毒和小鼠肝炎病毒的污染三.SPF級動(dòng)物中綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌細(xì)菌的污染第33頁/共99頁第34頁/共100頁

弓形蟲是一種人畜共患的寄生蟲，小鼠，大鼠，地鼠，豚鼠，家兔和非人靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及貓，牛，羊，豬等都能感染。一.普通級合格動(dòng)物中弓形蟲污染第34頁/共99頁第35頁/共100頁

弓形蟲是細(xì)胞內(nèi)寄生蟲，根據(jù)不同發(fā)育階段分為五型：滋養(yǎng)體和包囊出現(xiàn)在中間宿主體內(nèi)，裂殖體，配子體和卵囊只出現(xiàn)在終宿主－－貓?bào)w內(nèi)。第35頁/共99頁第36頁/共100頁滋養(yǎng)體排出體外,發(fā)育成熟,具感染性卵囊口,鼻,咽,呼吸道粘膜,眼結(jié)膜和皮膚機(jī)體有免適疫宜

發(fā)育宿主體內(nèi)無性繁殖,引起發(fā)病急性力條無件癥下終宿主受精

宿主產(chǎn)生狀免疫力感染腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)育包囊裂殖體合子雌雄配子體滋養(yǎng)體經(jīng)貓消化道侵入腸上皮細(xì)胞發(fā)育繁殖第36頁/共99頁第37頁/共100頁

危害性：

——弓形蟲感染可引起腸粘膜和腸系膜淋巴，心、眼、腎上腺、脾、腦、肺、肝、胎盤及肌肉組織的壞死和損傷。

——小鼠感染后會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

——影響妊娠期胎兒發(fā)育。第37頁/共99頁第38頁/共100頁

在病畜和帶蟲者的肉、內(nèi)臟、血液、滲出液和排泄物中均有弓形蟲，甚至從乳汁中也能分離出弓形蟲，也可引起感染。第38頁/共99頁第39頁/共100頁弓形蟲污染的預(yù)防

——實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施內(nèi)要保持清潔，定期消毒?！獓?yán)格阻斷貓及其排泄物對設(shè)施、飼料、墊料和飲水的污染?！麥缫笆?，驅(qū)走野貓，不飼養(yǎng)一切寵物。第39頁/共99頁第40頁/共100頁二.清潔級合格動(dòng)物中的仙臺(tái)病毒和小鼠肝炎

病毒的污染第40頁/共99頁第41頁/共100頁

仙臺(tái)病毒屬于副粘病毒科,副粘病毒屬。

現(xiàn)在認(rèn)為:嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是仙臺(tái)病毒唯一自然宿主。第41頁/共99頁第42頁/共100頁

傳播途徑：仙臺(tái)病毒除了鼻內(nèi)途徑外，其它途徑均不引起小鼠的自然感染。

偶爾可在腎、肝、脾、等器官發(fā)現(xiàn)病毒，但在尿、血和腸內(nèi)則沒有病毒。第42頁/共99頁第43頁/共100頁不同品系小鼠對仙臺(tái)病毒感染的易感性和敏感性明顯不同。在自發(fā)性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0％，高度易感小鼠如Swiss裸鼠則可接近100％。感染的裸鼠其疾病癥狀出現(xiàn)的時(shí)間比有免疫機(jī)能的小鼠稍晚，并伴有進(jìn)行性消瘦。在較長的時(shí)間里陸續(xù)死亡。第43頁/共99頁第44頁/共100頁

普通級鼠群中仙臺(tái)病毒感染是最難控制的病毒感染之一。

凡新引進(jìn)的動(dòng)物必須經(jīng)8周檢疫(檢查引入動(dòng)物和“哨兵”動(dòng)物的病毒抗體)。"哨兵動(dòng)物"第44頁/共99頁第45頁/共100頁

一旦在屏障環(huán)境內(nèi)的

鼠群中檢出仙臺(tái)病毒抗體陽性，若不及時(shí)清除所有被感染動(dòng)物，將導(dǎo)致屏障設(shè)施的失敗。第45頁/共99頁第46頁/共100頁防疫：兩種方法

1.消滅已感染鼠群,重引符合標(biāo)準(zhǔn)的種鼠或用無菌技術(shù)剖腹取胎重建繁殖群。2.暫停繁殖，在相對靜止條件下保存這種非繁殖群直至感染消除(約2個(gè)月)，然后恢復(fù)繁殖。第46頁/共99頁第47頁/共100頁小鼠肝炎病毒

(micehepatitisvirusMHV)

屬冠狀病毒科，冠狀病毒屬，與人冠狀病毒(普通感冒可有肺炎)，大鼠冠狀病毒(新生大鼠肺炎)，大鼠唾液腺病毒(唾液腺，淚腺炎)同屬。有多種毒株。第47頁/共99頁第48頁/共100頁

消瘦型肝炎病毒是實(shí)驗(yàn)小鼠最重要的病毒感染之一。

臨床表現(xiàn)為肝炎，腦炎和腸炎。

多數(shù)情況下是亞臨床感染或慢性感染。

呈世界范圍性分布，無明顯的季節(jié)性差異。第48頁/共99頁第49頁/共100頁

MHV傳播方式有經(jīng)空氣和接觸兩種。

小鼠是唯一能自然感染MHV;通過腦內(nèi)接種,可實(shí)驗(yàn)感染棉鼠,大鼠和地鼠,但兔和豚鼠無反應(yīng)。第49頁/共99頁第50頁/共100頁

MHV是普通級實(shí)驗(yàn)小鼠難以清除的病毒之一。

唯有對小鼠進(jìn)行剖腹取胎術(shù),結(jié)合屏障環(huán)境內(nèi)維持飼養(yǎng),才能培育無MHV感染的清潔級以上小鼠。

必須注意MHV垂直傳播的可能性。第50頁/共99頁第51頁/共100頁防疫通過定期檢測,有利及時(shí)發(fā)現(xiàn)屏障環(huán)境內(nèi)的鼠群中鼠肝炎病毒感染。及時(shí)消滅被感染的鼠群,

重新引進(jìn)符合標(biāo)準(zhǔn)的種群。

同步交配代乳方法重建繁殖群。

用無菌技術(shù)剖腹取胎重建繁殖群。

暫停繁殖方法重建繁殖群。第51頁/共99頁第52頁/共100頁同步交配----把MHV陽性鼠群中懷孕母鼠自然分娩的新生鼠在分娩后的24小時(shí)內(nèi)傳給符合標(biāo)準(zhǔn)的代乳鼠帶乳。然后在代乳鼠3周齡,6周齡和12周齡進(jìn)行血清學(xué)檢測,可獲MHV陰性小鼠。第52頁/共99頁第53頁/共100頁

暫停繁殖法：從感染群中移去所有新生鼠,離乳鼠和妊娠鼠。停止繁殖15周,可排除感染。

15周后出生的第一代新生鼠在3－4周齡MHV血清陽性,四周后因從母方獲得的抗體衰退而血清陰性。

在第二代小鼠3－9周齡MHV血清陰性。第53頁/共99頁第54頁/共100頁三.SPF級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的細(xì)菌污染

2.金黃色葡萄球菌

3.肺炎克雷伯氏桿菌

1.綠膿桿菌第54頁/共99頁第55頁/共100頁

綠膿桿菌是動(dòng)物和人類胃腸道的一種常在菌。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可經(jīng)口咽和胃腸途徑感染；

常可在小鼠的口咽部和腸道發(fā)現(xiàn)。第55頁/共99頁第56頁/共100頁

該菌可導(dǎo)致封閉群小鼠(Swiss-Webster)和近交系小鼠(C3H)斜頸和轉(zhuǎn)圈癥狀，被看作是小鼠疾患的主要細(xì)菌病原。

對免疫環(huán)境遭受損害或抑制的宿主，綠膿桿菌可穿過局部淋巴環(huán)境和血管環(huán)境，導(dǎo)致致死性敗血癥。第56頁/共99頁第57頁/共100頁由工作人員帶入屏障環(huán)境。

在常規(guī)小鼠群的飲水器中能檢到綠膿桿菌。

在溫暖、潮濕的環(huán)境中(如SPF小鼠飼養(yǎng)室的淋浴更衣處)也常檢到這種菌。綠膿桿菌來源第57頁/共99頁第58頁/共100頁

要預(yù)防綠膿桿菌,就必須定期對SPF小鼠進(jìn)行微生物學(xué)監(jiān)測，及時(shí)淘汰被感染的鼠群。通過酸化(用鹽酸調(diào)PH2.5)氯化(10ppm)飲水來預(yù)防飲水器對SPF小鼠的感染;對屏障環(huán)境的淋浴更衣室常規(guī)進(jìn)行徹底打掃消毒滅菌，并要求進(jìn)入屏障環(huán)境的工作人員嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程和個(gè)人防護(hù)用品的穿戴。第58頁/共99頁第59頁/共100頁金黃色葡萄球菌

在小鼠皮膚和粘膜上，常檢到致病的金黃色葡萄球菌和一般不致病的表皮葡萄球菌。雖然金黃色葡萄球菌還沒有被廣泛看作實(shí)驗(yàn)小鼠的原發(fā)性疾病，但有些文獻(xiàn)中報(bào)道了其作為皮膚感染，淋巴感染或粘膜感染病原學(xué)因子。第59頁/共99頁第60頁/共100頁小鼠自發(fā)性葡萄球菌感染與

幼鼠比成鼠易感。

無胸腺裸小鼠因缺少保護(hù)性被毛并缺乏T－細(xì)胞而經(jīng)常發(fā)生皮膚和眼窩的葡萄球菌感染。

屏障環(huán)境的操作管理有關(guān)。營養(yǎng)及小鼠品系，第60頁/共99頁第61頁/共100頁

據(jù)對SPF設(shè)施的細(xì)菌學(xué)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，從健康SPF小鼠分離的金黃色葡萄球菌的噬菌體型常與從動(dòng)物管理員體表分離的品系一致。第61頁/共99頁第62頁/共100頁

通常不能治療或根除金黃色葡萄球菌，

飼養(yǎng)人員和實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行隔離措施和操作細(xì)則。唯有通過定期檢測及時(shí)淘汰患鼠；酸化飲水；飼料和墊料徹底滅菌；經(jīng)常更換墊料；

防疫第62頁/共99頁第63頁/共100頁克雷伯氏菌

人和動(dòng)物的腸道常在菌，是與人和動(dòng)物泌尿，呼吸道感染有關(guān)的條件性致病菌。

小鼠自發(fā)爆發(fā)的疾病臨床癥狀是：食欲不振，弓背，被毛粗亂，打噴嚏及呼吸深快。第63頁/共99頁第64頁/共100頁

為了從受感染的小鼠中清除這種病原體，就需要進(jìn)行剖腹產(chǎn)和嚴(yán)格的屏障環(huán)境操作、管理。第64頁/共99頁第65頁/共100頁第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)

和寄生蟲學(xué)質(zhì)量檢測一.檢測目的二.檢測方法三.檢測規(guī)則第65頁/共99頁第66頁/共100頁一、檢測目的第66頁/共99頁第67頁/共100頁1.排除人獸共患病，確保從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)的飼養(yǎng)人員和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的科研或教學(xué)人員身體健康。第67頁/共99頁第68頁/共100頁2.排除危害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的常見病多發(fā)病，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群的健康，為生命科學(xué)研究提供合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。第68頁/共99頁第69頁/共100頁1〕對新引進(jìn)的普通級動(dòng)物進(jìn)行檢疫，防止人獸共患病原體或動(dòng)物烈性傳染病帶入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群，或傳播給實(shí)驗(yàn)人員。第69頁/共99頁第70頁/共100頁2〕定期對生產(chǎn)繁殖的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群進(jìn)行抽樣檢測，及時(shí)了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)群體中微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量；必要時(shí)作出淘汰或降級處理。第70頁/共99頁第71頁/共100頁3〕當(dāng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群發(fā)生傳染病流行時(shí)，檢出感染途徑，提出控制或預(yù)防措施。4〕對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)設(shè)施進(jìn)行靜態(tài)和動(dòng)態(tài)檢測，及時(shí)掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境條件，了解是否符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)。第71頁/共99頁第72頁/共100頁

3.研究確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)等級標(biāo)準(zhǔn)的劃分，和不同等級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量指標(biāo)。第72頁/共99頁第73頁/共100頁4.確保使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作檢測的藥品和生物制品的質(zhì)量，保證進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的科學(xué)研究成果和各種動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和重復(fù)性。第73頁/共99頁第74頁/共100頁二.

檢測方法第74頁/共99頁第75頁/共100頁原則——

1.國內(nèi)外通用,比較成熟,便于交流。

2.可操作性強(qiáng)，檢測結(jié)果易判斷，檢測率較高。

3.易實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化，便于推廣。第75頁/共99頁第76頁/共100頁國家推薦性標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)檢測方法1～4》GB/T14926.1～14926.64－2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)檢測方法》GB/T18448.1～18448.10－2001

第76頁/共99頁第77頁/共100頁1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒學(xué)檢測方法目前我國對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒學(xué)檢測通常使用血清學(xué)方法，包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫熒光試驗(yàn)（IFA）免疫酶染色試驗(yàn)（IEA）血球凝集（HA）和血球凝集抑制（HI）試驗(yàn)第77頁/共99頁第78頁/共100頁2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測方法

通常采用細(xì)菌分離和培養(yǎng)方法。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落特征，將分離到的可疑菌落作生化鑒定。第78頁/共99頁第79頁/共100頁檢測人員的實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，直接影響到其對檢測結(jié)果的判斷準(zhǔn)確性。對部分細(xì)菌，如沙門氏菌，支原體等已開展血清學(xué)方法檢測。第79頁/共99頁第80頁/共100頁3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)檢測方法

通常在光學(xué)顯微鏡下查找寄生蟲的蟲體、蟲卵或孢子。對人獸共患的弓形蟲，則采用各種血清學(xué)的方法進(jìn)行檢測。第80頁/共99頁第81頁/共100頁三.檢測規(guī)則1.檢測頻率以間隔23個(gè)月為宜。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的國家標(biāo)準(zhǔn)中，即規(guī)定：每3個(gè)月至少檢測1次。第81頁/共99頁第82頁/共100頁

病原體剛侵入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體時(shí),較易分離到病原體;而當(dāng)流行趨于平靜可能分離不到病原體,但特異性抗體的檢出率上升。通常在23個(gè)月內(nèi)，抗體檢出率不會(huì)下降太大。隨著時(shí)間的推移，某些個(gè)體的抗體效價(jià)水平會(huì)下降，以及新生的非感染動(dòng)物增加，使抗體陽性動(dòng)物的檢出大量減少。第82頁/共99頁第83頁/共100頁2.取樣數(shù)量通常對于動(dòng)物群體中感染率高的病原體，只需少量采樣就能檢出；而當(dāng)感染動(dòng)物比例低時(shí)，若不增加取樣數(shù)量，就可能漏檢。因此，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體中病原體的感染率決定取樣數(shù)量。如病原體感染率為1％，要檢出感染動(dòng)物至少應(yīng)取樣100只。第83頁/共99頁第84頁/共100頁病原體檢測取樣數(shù)量感染率%檢測可信度99％95％90％9022180322704326054350754409653013972021141110442922第84頁/共99頁第85頁/共100頁

達(dá)標(biāo)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物須排除的病原體感染率應(yīng)為“0”,取樣數(shù)量須達(dá)60-90%以上，其檢測結(jié)果的可信度方可達(dá)到95-99%。

而嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采樣，通常都犧牲被檢測動(dòng)物;

且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)質(zhì)量檢測通常與微生物學(xué)質(zhì)量檢測同時(shí)進(jìn)行，而病原體的感染率不可能相同。

因此,在標(biāo)準(zhǔn)中采用的取樣數(shù)量和取樣方法，將適當(dāng)參考實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體大小，兼顧絕大多數(shù)病原體的感染率，以決定取樣數(shù)量;并規(guī)定取樣點(diǎn)。第85頁/共99頁第86頁/共100頁實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同生產(chǎn)群體取樣數(shù)群體規(guī)模，只取樣數(shù)量，只<100>5100～500>10>500>20每只隔離器檢測2只第86頁/共99頁第87頁/共100頁活體取樣

對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的活體取樣未作規(guī)定。無特殊要求時(shí)，對雞、兔、犬和猴的活體取樣，可在生產(chǎn)繁殖設(shè)施內(nèi)進(jìn)行。第87頁/共99頁第88頁/共100頁第十章

生物安全第88頁/共99頁第89頁/共100頁一、生物安全的概念針對生物醫(yī)學(xué)專業(yè)或現(xiàn)代生物技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用，造成對人體健康和生態(tài)環(huán)境的潛在威脅，而應(yīng)采取的一系列有效預(yù)防和控制的措施。第89頁/共99頁第90頁/共100頁二、廣義的生物安全(1)人類的健康與安全;(2)人類賴以生存的農(nóng)業(yè)生物的安全;(3)與人類生存息息相關(guān)的生物多樣性，即環(huán)境生物安全。第90頁/共99頁第91頁/共100頁野生動(dòng)物所感染的各種微生物生物危害實(shí)驗(yàn)人員或飼養(yǎng)人員生活環(huán)境的污染生態(tài)環(huán)境、生物多樣性存在著潛在著威脅不合格實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所攜帶的各種人獸共患病的病原體第91頁/共99頁第92頁/共100頁三、忽視生物安全的行為

1.午餐與標(biāo)本同存于實(shí)驗(yàn)室冰箱內(nèi)；

2.在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)抽煙、進(jìn)食、喝飲料；

3.不戴手套清洗未消毒的玻璃器皿；

4.穿著實(shí)驗(yàn)服去食堂午餐、到會(huì)場開會(huì)；

5.隨意使用來源不清，質(zhì)量不明的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；

6.生物垃圾與生活垃圾混淆一起處理；

7.堅(jiān)持使用傳統(tǒng)的超凈工作臺(tái)，不添置生物安全柜；第92頁/共99頁第93頁/共100頁超凈臺(tái)Ⅰ級生物安全柜Ⅱ級生物安全柜四、超凈臺(tái)與生物安全柜第93頁/共99頁第94頁/共100頁五、WHO對感染性微生物分類標(biāo)準(zhǔn)等級危險(xiǎn)度傳播結(jié)果Ⅰ對人和城鄉(xiāng)社會(huì)的危險(xiǎn)度低。不可能引起人類疾病，或引起獸醫(yī)學(xué)上重要?jiǎng)游锛膊〉奈⑸?。Ⅱ?qū)θ擞兄械任ｋU(xiǎn)度，對城鄉(xiāng)社會(huì)有輕微危險(xiǎn)性。對人或動(dòng)物雖有致病性，但對實(shí)驗(yàn)室工作人員，對社會(huì)、家畜、環(huán)境等不會(huì)造成重大災(zāi)害的病原體。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)接觸可能發(fā)生嚴(yán)重感染，但有有效的防治方法，傳播可能性不大。Ⅲ對人危險(xiǎn)度高，對城鄉(xiāng)危險(xiǎn)性低。人感染了會(huì)引起重癥疾病，但傳播給其他人的可能性低Ⅳ對人和地區(qū)社會(huì)有高度危險(xiǎn)性能引起人或動(dòng)物的重癥疾病，患者易于直接或間接傳播給其他人。第94頁/共99頁第95頁/共100頁六、中國對病原體危害性分級危險(xiǎn)級別危害程度第1類病原體實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)多，感染后發(fā)病的可能性大，癥狀重并可危及人員生命，缺乏有效的預(yù)防措施；傳染性強(qiáng)，對人群危害性大的烈性傳染病，包括國內(nèi)未發(fā)現(xiàn)的或雖已發(fā)現(xiàn)，但無有效防治的傳染病病原體第2類病原體實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)多，感染后癥狀較重，可危及人員生命，發(fā)病后不易治療，