動物生理學(xué)實驗指導(dǎo)

緒言動物生理學(xué)是一門實驗性學(xué)科。因此學(xué)習(xí)動物生理學(xué)必須通過做一定的實驗，才能更好地理解和掌握生理學(xué)的基本理論知識和知識。是生理學(xué)教學(xué)中的一個重要組成部分。一．實驗課的目的生理學(xué)實驗是以活的動物或人體為對象和材料進行實驗，以此來了解和獲得生理學(xué)知識的科學(xué)方法。通過實驗可以驗證、鞏固和加深課堂中生理學(xué)基本理論和知識。同時，可通過生理實驗，初步掌握生理學(xué)實驗的基本技能和基本操作。培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維方法和嚴(yán)肅的科學(xué)實驗態(tài)度。通過實驗訓(xùn)練，可提高學(xué)生對各種生理現(xiàn)象的觀察分析能力，以與解決問題的能力。同時還可以培養(yǎng)學(xué)生的獨立思考能力。二．實驗課的要求實驗前，必須詳細閱讀實驗指導(dǎo)，了解實驗?zāi)康?、原理和基本操作步驟。并結(jié)合其基本理論，做到充分理解，心中有數(shù)。并能預(yù)測實驗的正確結(jié)果和可能出現(xiàn)的問題。實驗過程中，實驗器材力求安放整齊，布局合理，便于操作。同時要保持桌面清潔。隨時清除實驗中的污物。公用儀器、藥品等不得隨意挪動。要愛護儀器。節(jié)省實驗動物和藥品。實驗中還應(yīng)注意實驗分工交換，人人動手，使每個學(xué)生都有學(xué)習(xí)各種操作的機會。實驗時要認(rèn)真、仔細、耐心地觀察實驗中出現(xiàn)的現(xiàn)象，并如實記錄。同時應(yīng)對各種變化的原因進行分析和處理。另外儀器發(fā)生故障應(yīng)與時報告。不得自行拆動。實驗用品損壞也應(yīng)與時報告和登記。實驗后，將所用物品與器材進行整理和清洗。實驗用過的動物處死后，放在指定處。最后要認(rèn)真寫出實驗報告，與時上交。三．實驗結(jié)果的處理實驗過程所得的結(jié)果都要分析和整理。凡是屬于測量性質(zhì)的結(jié)果，如高低、長短、快慢、輕重、多少等，均應(yīng)以正確的單位和數(shù)值定量。凡有曲線記錄的實驗應(yīng)盡量用曲線記錄實驗結(jié)果，并在曲線上標(biāo)明各個變化。如刺激標(biāo)記，時間標(biāo)記等。有些結(jié)果為了比較和分析之便，可用表格或繪圖表示。制表時要全面而又簡單明確。繪圖時應(yīng)標(biāo)出各坐標(biāo)的意義。非連續(xù)變化可用柱形圖表示。例如：對幾個（組）實驗對象，分別進行同樣系列的實驗觀察所得結(jié)果，最宜制成表格。通常表格要有一“標(biāo)題”即表格名稱。用以說明表格的內(nèi)容。表左端為“主欄”，填寫實驗對象或代號，右端為“賓欄”填寫觀察項目和結(jié)果。表格要有“頂線”和“底線”，即最上面和最下面的橫線。表的左右兩端不必劃線。表內(nèi)需注釋說明時，用“*”等注角，在表外附注。若對變量分布、對比、構(gòu)成、變異、動態(tài)等的結(jié)果，可用平面幾何圖來表達。這種表現(xiàn)生動確切，一目了然。常用有條圖，圓面圖，自然線圖和點圖等。條圖和圓面圖只能表達沒有連續(xù)性變化的數(shù)據(jù)。線圖則可顯示連續(xù)變化的趨勢和相關(guān)規(guī)律。四．實驗報告的寫作要求每一次實驗后，每人均要寫出每一次實驗內(nèi)容的實驗報告，要求統(tǒng)一格式的實驗報告本填寫。報告要在實驗后定時完成。以便下次實驗時由教師總結(jié)和討論其中的問題。實驗報告的格式：1．實驗號和題目：標(biāo)出實驗序號和實驗的名稱。同時填寫實驗時間。2．實驗?zāi)康模汉唵味笠獙懗鰧嶒災(zāi)康摹?．實驗原理：簡單扼要寫出設(shè)計該實驗的理論依據(jù)。3．實驗材料和設(shè)備：簡單描述實驗所用的動物、儀器、設(shè)備等。4．實驗方法與步驟：簡單敘述實驗所用方法和實驗步驟。必要時，可用實驗裝置圖來表示。5．實驗結(jié)果：是實驗中最重要的內(nèi)容，主要是整理實驗中的記錄結(jié)果。若是描記曲線，需找出能客觀而概括反映實驗結(jié)果的部分，加以拼接整理后，打印、粘貼在實驗報告中的適當(dāng)位置，并加以標(biāo)注。6．討論和結(jié)論：以實驗結(jié)果為依據(jù)，分析和討論其生理學(xué)意義。若實驗結(jié)果與預(yù)期結(jié)果不同，則應(yīng)分析造成這種結(jié)果的可能原因。若實驗結(jié)果正確，則要簡明總結(jié)這一實驗所能驗證的概念或理論，作為實驗結(jié)論。未能充分證實的結(jié)果，不能列入結(jié)論中，討論和結(jié)論都是有根據(jù)的，不能隨意推測，應(yīng)嚴(yán)肅對待。五．實驗動物規(guī)則1．不得隨意在動物體上實驗，更不得隨意殺死動物。2．對動物實驗時，盡量使動物不感到疼痛，應(yīng)適當(dāng)?shù)亟o以麻醉，并注意細心操作。3．實驗結(jié)束后，除特殊要求外，必須盡量無痛地處死動物。4．對待動物，無論是實驗還是抓取，都要使動物的不適減少到最低限度。六．實驗室守則1．遵守學(xué)習(xí)紀(jì)律，按時到達實驗室。有事須請假，并在以后補做。2．實驗室內(nèi)保持安靜，認(rèn)真實驗，不得進行任何與實驗無關(guān)的談話或活動。3．各組的儀器和用品由本組使用，不得隨意調(diào)換，如遇損壞或丟失，應(yīng)與時報告。4．節(jié)約實驗器材和用品，包括實驗動物。要愛護公共財物，愛護實驗動物。5．保持實驗室整潔，隨時清除污物。不必要的物品不得帶入實驗室。實驗結(jié)束后。各組將自己使用的器材、用品清洗干凈，儀器收拾妥當(dāng)，經(jīng)清點數(shù)量后放回原處。經(jīng)教師允許方可離開實驗室。6．按組依次值日。

實驗1生物信號采集處理系統(tǒng)的原理與使用方法【實驗?zāi)康摹苛私狻渡镄盘柌杉到y(tǒng)》的基本原理，熟練掌握系統(tǒng)的操作方法。認(rèn)識實驗儀器的刺激系統(tǒng)、引導(dǎo)換能系統(tǒng)、信號調(diào)節(jié)放大系統(tǒng)、顯示記錄系統(tǒng)以與生命維持系統(tǒng)，熟悉其中各種設(shè)備的結(jié)構(gòu)、功能與使用方法?！緦嶒炘怼吭趧游锷韺W(xué)實驗中，各種現(xiàn)象均需要進行記錄，以便觀察、測量和分析。傳統(tǒng)的顯示記錄設(shè)備為記紋鼓、二（四）道生理記錄儀和示波器等儀器。目前，計算機生物信號采集系統(tǒng)以其完備的功能和強大的后處理能力，在動物生理實驗中取代傳統(tǒng)記錄設(shè)備得到了廣泛的應(yīng)用。生物信號采集處理系統(tǒng)是應(yīng)用大規(guī)模集成電路、計算機硬件和軟件技術(shù)開發(fā)的一種集生物信號的放大、采集、顯示、處理、存儲和分析的電機一體化儀器。具有刺激器、放大器、示波器、記錄儀和分析處理等多種儀器的組合功能。廣泛應(yīng)用于生理學(xué)、藥理學(xué)和病理生理學(xué)等方面的教學(xué)與科研實驗。目前我國的計算機生物信號采集處理系統(tǒng)多達十余種，其發(fā)展程度取決于PC機技術(shù)水平，現(xiàn)階段多以采用Windows為操作系統(tǒng)為主界面、并以USB技術(shù)為硬件安置方式的四通道生物信號采集系統(tǒng)為主。計算機生物信號采集處理系統(tǒng)由硬件和軟件兩大部分組成。硬件主要完成對各種生物電信號（如心電、肌電、腦電）與非電生物信號（如血壓、張力、呼吸）的采集。并對采集到的信號進行調(diào)理、放大，進而對信號進行模／數(shù)（A/D）轉(zhuǎn)換，使之進入計算機。軟件主要用來對已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號進行顯示、記錄、存儲、處理與存盤、打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進行控制，與操作者進行人機對話（圖1.1-1）。傳感器傳感器計算機顯示記錄分析處理存儲生物信號采集系統(tǒng)刺激器放大-模/數(shù)生物體生物電信號非電生物信號存盤打印輸出程控刺激圖1.1-1計算機生物信號采集處理系統(tǒng)的基本組成和工作原理【材料與設(shè)備】計算機；LabTutor生物信號采集系統(tǒng)；指脈傳感器；同學(xué)【方法和步驟】圖1.1手指脈搏實驗裝置連接1．打開計算機，進入“LabTutor實驗”，打開“LabTutor介紹”，按系統(tǒng)程序提示步驟，了解、熟悉儀器設(shè)備與操作方法。并通過手指脈搏實驗，加深了解。圖1.1手指脈搏實驗裝置連接2.連接計算機、PowerLab、指脈傳感器與實驗對象(圖1.1)。3.調(diào)整儀器，觀察、記錄指脈波形曲線。【實驗結(jié)果】打印指脈波形圖，記錄手指脈搏，詳細的描述PowerLab實際記錄到的數(shù)據(jù)資料，以與在LabTutor顯示的內(nèi)容?！舅伎碱}】實驗小組成員的測量結(jié)果是否一致？

實驗2感覺生理實驗【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)視力測定的方法和原理。學(xué)習(xí)視野計的使用方法和視野的檢查方法。學(xué)習(xí)盲點的測定方法，證實盲點的存在。了解色盲檢查原理和方法。了解聲音的空氣傳導(dǎo)和骨傳導(dǎo)途徑，比較兩種途徑的特點。通過破壞迷路，了解迷路在維持姿勢平衡中的作用。【實驗原理】視力又稱視敏度，是指眼分辨物體細微結(jié)構(gòu)的能力。以能分辨空間二點間最小距離為衡量標(biāo)準(zhǔn)。臨床規(guī)定，當(dāng)視角為1分時，能辨別出這兩點，表示視力正常，視力表就是根據(jù)視角的原理制成的。常用的國際標(biāo)準(zhǔn)視力表就是以離表5m處，第10行字每一筆劃兩邊發(fā)出的光線在眼球恰好形成1分視角。此時的視力就規(guī)定為1.0。這二點間距離約1.5mm視野就是單眼固定注視前方一點時所能看到的空間范圍。通過視野計可測出視野。正常人單眼視野鼻側(cè)和上側(cè)較窄小，而顳側(cè)和下側(cè)較寬闊。在同一光亮條件下，白色視野最大，其次為黃、蘭，再次為紅色，綠色最小。所測視野可在視野圖紙上繪成視野圖。3.視網(wǎng)膜上能感光的成分只有視錐細胞和視桿細胞兩種。在視網(wǎng)膜后部有一視神經(jīng)的集中穿出部位，稱視神經(jīng)乳頭。此處沒有視錐和視桿細胞。因此外來光線成像在此處時，不能引起視覺，故稱此點為生理盲點。根據(jù)物體成像規(guī)律，通過測定盲點投射區(qū)的位置和范圍，可計算出盲點所在視網(wǎng)膜上的位置和范圍。4.視覺三原色學(xué)說認(rèn)為：視網(wǎng)膜上存在著分別對紅、綠、藍色光特別敏感的三種視錐細胞。如果缺乏某種視錐細胞或其對相應(yīng)的色光敏感性下降，就會使辨別顏色的能力缺失或下降。這就稱為色盲或色弱。色盲常見的有紅色盲、綠色盲。全色盲很少見。色盲檢查圖就是根據(jù)不同顏色組成一定的圖形、圖案等，來鑒定色盲。色盲者不能辨認(rèn)出某些圖形或圖案。5.聲波經(jīng)外耳、鼓膜和聽小骨傳至內(nèi)耳，這是聲音傳導(dǎo)的主要途徑，稱為空氣傳導(dǎo)。聲波也可經(jīng)顱骨，耳蝸骨壁傳入內(nèi)耳，此途徑稱骨傳導(dǎo)。骨傳導(dǎo)的效果遠較空氣傳導(dǎo)差。振動音叉,先將其置于顱骨，然后再置于外耳道口處，就可區(qū)別出兩種傳導(dǎo)途徑的特點。6.迷路包括前庭和半規(guī)管兩個部分，它在維持肌緊張方面起著重要的作用。若將迷路破壞，則身體位置的改變將不能引起動物對肌緊張的反射性調(diào)節(jié)，而使姿勢失去平衡。實驗2.1視力測定【實驗器材】視力表，遮眼板，指示棒，米尺?！痉椒ê筒襟E】1．在光線充足的地方，使受試者距離視力表5m2．用遮眼板遮住一眼，于5m【實驗結(jié)果】確定實驗者的視力?！舅伎碱}】視力表的原理是什么？實驗2.2視野的測定【實驗器材】視野計，各色視標(biāo)，視野圖紙?！痉椒ê筒襟E】1．視野計構(gòu)造圖圖2.2－1視野計圖2.2－2左眼視野圖視野計（圖2.2－１）是安在支架上的一個半圓弧形金屬板，它可繞水平軸作360度轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)的角度可從分度盤讀出。圓弧外面有刻度，表示由該點射向視網(wǎng)膜周邊的光線視軸所夾的角度。視野界限就以此角度表示。圓弧內(nèi)面中央裝有一固定的小圓鏡。對面支架上有一托頜架，和一個眼眶托。托頜架可上下移動。2．視野的測定①受試者面對視野計而坐。將下頜放于托頜架上。眼眶下緣靠在眼眶托上，調(diào)整托架高度，使眼與弧架的中心點在同一水平。遮住一眼，另一眼凝視弧架中心的小鏡。②主試者從周邊向中央緩緩移動緊貼弧架的白色標(biāo)，直到受試者剛能看到為止。記下此時視標(biāo)所在弧架上的度數(shù)。退回視標(biāo)重復(fù)測試一次，得出一致結(jié)果后，將結(jié)果標(biāo)在視野圖中相應(yīng)的經(jīng)緯度上。同法再測出對側(cè)的度數(shù)。③將弧架依次轉(zhuǎn)動45o角，測定出不同經(jīng)緯度上的度數(shù)，并記錄到視野圖相應(yīng)位置。最后將得到的8個點連接成一曲線圖。便得到了白色視野圖。④用同法測出該眼的紅、綠色視野。⑤用同法測另一眼白、紅、綠色視野?！緦嶒灲Y(jié)果】粘貼實驗者的視野圖。【思考題】正常人對不同色標(biāo)的視野范圍不同，為什么？實驗2.3盲點的測定【實驗器材】帶“十”【方法和步驟】1．將帶“十”字白紙貼在光線明亮均勻的墻上，受試者立于紙前，使右眼與“十”字相平行，距離為50cm。遮住左眼，右眼注視“十見視標(biāo)的點將其依次相連，即得一橢圓形盲點投射區(qū)。如圖2.3－１。圖2.3－１盲點投射原理圖2.3－１盲點投射原理“＋”至投射區(qū)的距離＋2．盲點與中央凹的距離與盲點直徑的計算：盲點與中央凹的距離=投射區(qū)至“＋”的距離×15/500盲點直徑＝盲點投射區(qū)直徑×15/500?！緦嶒灲Y(jié)果】粘貼測定結(jié)果?！舅伎碱}】盲點的解剖學(xué)基礎(chǔ)是什么？日常注視物體時，為什么沒有感覺到盲點的存在？實驗2.4色盲的測定【實驗器材】計算機；LabTutor生物信號采集系統(tǒng)【方法和步驟】打開計算機，進入“LabTutor實驗“，選擇“感覺生理”，下拉菜單點擊“色盲”實驗。按系統(tǒng)程序提示步驟進行實驗?！緦嶒灲Y(jié)果】實驗者有無色盲？如果有，是那種色盲【思考題】描述每一種色盲的色彩缺失？實驗2.5聲音的傳導(dǎo)途徑【實驗器材】音叉；棉花；一米長乳膠管【方法和步驟】圖2.5-1音叉的使用方法1．保持室內(nèi)肅靜，受試者取坐位。主試者用手敲響音叉后，立即將音叉柄置于受試者一側(cè)顳骨乳突處，當(dāng)受試者剛聽不到音叉響聲時，將音叉移到同側(cè)外耳道口處，使音叉振動方向正對向外耳道口。檢查兩種途徑的傳導(dǎo)效果。反之，先將音叉置于外耳道口處，到聽不到響聲時，再移至顳骨乳突處，檢查傳導(dǎo)效果（圖2.5-1）圖2.5-1音叉的使用方法2．用棉球塞住受試者外耳道，重復(fù)上述實驗過程，記錄測試結(jié)果。3．將振動音叉置于受試者前額正中發(fā)際處，注意兩耳聽到的聲音強度是否相同。4.用棉球塞住一側(cè)外耳道，重復(fù)3，有何變化。5.將膠管一端塞入A受試者一側(cè)耳孔，另一端塞入B受試者某側(cè)耳孔，然后將音叉柄置于B受試者同側(cè)乳突上，測A受試者是否聽到聲音?！緦嶒灲Y(jié)果】測定氣傳導(dǎo)和骨傳導(dǎo)的區(qū)別?！舅伎碱}】為何氣導(dǎo)的功效大于骨導(dǎo)？如何通過實驗鑒別傳導(dǎo)性耳聾和神經(jīng)性耳聾？實驗2.6迷路破壞的效應(yīng)【材料和設(shè)備】牛蛙、小鼠、常規(guī)手術(shù)器械、蛙板、紗布、水盆、氯仿、乙醚?！痉椒ê筒襟E】1.牛蛙迷路破壞的效應(yīng)(1)觀察蛙的正常姿勢：將蛙放在蛙板上，順時針或逆時針轉(zhuǎn)動，觀察蛙頭部與四肢的狀態(tài)；抬高蛙板的前后左右，使蛙呈各種不同的傾斜角度，觀察蛙的姿勢；觀察蛙停止、爬行、跳躍和游泳時的正常姿勢。(2)破壞一側(cè)迷路：將蛙用紗布包起，握于手中。用鑷子夾住蛙的下頜并向下翻轉(zhuǎn)，使其口張開。用手術(shù)刀或剪刀沿顱底骨切開，剪除上頜黏膜，看到“十”字形的副蝶骨(圖2.6-1)。副蝶骨左右兩側(cè)有兩個橫突，到顱底骨兩側(cè)橫向的半顱底骨，用手術(shù)刀圖2.6-1迷路位置突骨質(zhì)削去一部分，就能看到一顆粟粒大小的小圖2.6-1迷路位置白丘，這是迷路所在位置，用蛙針刺入約2mm將其破壞（不要刺入太深，以免損傷中樞神經(jīng)）。重復(fù)（1)的各項實驗，觀察有何變化？(3)破壞雙側(cè)迷路：用以上方法繼續(xù)破壞另一側(cè)迷路，靜待數(shù)分鐘，然后重復(fù)(1)的各項實驗，觀察其變化。2．小鼠迷路破壞的效應(yīng)(1)觀察小鼠的正常姿勢：將小鼠放在籠內(nèi)或桌上觀察小鼠自由活動的情況；觀察正常情況下小鼠眼球活動情況。(2)破壞一側(cè)迷路：使小鼠側(cè)臥，拽住一側(cè)耳廓，用滴管向外耳道深處滴人氯仿1～2滴，使該側(cè)迷路機能消失。10～15min后，可觀察小鼠頭部是否偏向滴人氯仿一側(cè)？是否出現(xiàn)眼球震顫？小鼠是否作回旋運動?！緦嶒灲Y(jié)果】測定迷路破壞后動物的活動變化，并說明原因？【思考題】依據(jù)實驗結(jié)果說明迷路有何生理功能？

實驗3血液生理實驗【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)鑒定血型的方法和原理，學(xué)會觀察細胞凝集現(xiàn)象。學(xué)習(xí)出血和凝血時間的測定方法?！緦嶒炘怼?.血型是指紅細胞的血型。是根據(jù)紅細胞膜外表面存在的特異性抗原（凝集原）來確定的。這種抗原（凝集原）是由遺傳性決定的。通常抗原有兩種，A和B抗原。而與抗原相應(yīng)的有兩種抗體（凝集素），抗A和抗B，抗體存在于血清中?？笰只和A抗原發(fā)生凝集反應(yīng)。而抗B只和B抗原發(fā)生凝集反應(yīng)。將受試者紅細胞分別與標(biāo)準(zhǔn)血清A（含抗B）和標(biāo)準(zhǔn)血清B（含抗A）混合。觀察有無凝集現(xiàn)象，即可鑒定出受試者的血型。2.出血時間就是指小血管受到破損后血液流出至小血管封閉自行停止出血所需的時間，有時又稱止血時間。止血的發(fā)生主要與小血管的收縮封住出血口，血小板粘附、聚集和釋放血小板活性物質(zhì)等一系列生理反應(yīng)過程有關(guān)。觀察出血時間是檢測毛細血管功能和血小板數(shù)量與功能狀態(tài)是否正常的簡便而有效的方法。正常人出血時間約為1-4min，出血時間延長見于血小板數(shù)量減少或毛細血管功能缺損等情況。血液流出血管后，受到刺激的血小板就會釋放出一系列凝血因子，使血中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成網(wǎng)狀的纖維蛋白，血液發(fā)生凝固。測定凝血時間可反映血液本身的凝血因子是否缺乏或減少。實驗3.1ABO血型的鑒定【實驗器材】顯微鏡，載玻片，消毒酒精，消毒牙簽，采血針，A和B標(biāo)準(zhǔn)血清【方法和步驟】1．標(biāo)記：取一潔凈的載玻片，用玻璃鉛筆在載玻片兩端分別標(biāo)寫A和B字。2．滴加標(biāo)準(zhǔn)血清：將載玻片寫字面反轉(zhuǎn)成底面，在其上面于A字端滴加標(biāo)準(zhǔn)血清A一滴，B字端滴加標(biāo)準(zhǔn)血清B一滴。圖3.1-1血型鑒定示意3．采血：用75%酒精棉球消毒人體左手無名指指端或耳垂邊緣采血部位，待酒精揮發(fā)后，用消毒后的采血針刺破取血部位。擦去第一滴血，待第二滴血流出時，圖3.1-1血型鑒定示意4．觀察：靜置幾分鐘后，觀察有無凝集現(xiàn)象。根據(jù)凝集現(xiàn)象確定所測血細胞的血型。(如圖3.1-1)若抗原較弱而凝集反應(yīng)不明顯時，可在低倍顯微鏡下觀察確定。另外，凝集和凝聚可通過滴加生理鹽水而區(qū)別：凝聚后滴加生理鹽水可解凝聚而成分散，凝集后則不會發(fā)生逆轉(zhuǎn)而分散。實驗3.2出血和凝血時間的測定【材料與設(shè)備】實驗者；小燒杯；乙醚棉球；常用手術(shù)器件；酒精棉球；采血針；濾紙片；秒表；毛細玻璃管【方法和步驟】觀察出血時間：用75%酒精棉球消毒人體左手無名指指端或耳垂邊緣采血部位，待酒精揮發(fā)后，用消毒后的采血針刺破取血部位皮下，讓血自動流出，立即記下時間，每隔30s，用濾紙輕觸血液，吸去流出的血，使濾紙上的血滴依次排列，直到無血流出為止，記下出血時間。（人的正常出血時間為1-4min）。觀察凝血時間；按上述方法，用采血針刺人皮下，讓血自動流出，用棉球吸去第一滴血，用毛細玻璃管吸血，盡量吸滿管腔，記錄時間。然后每隔半分鐘折斷毛細管一小段（5mm左右），直至折斷處拉出血絲（表示血液凝固）為止。從血液進入毛細玻璃管起至血液凝固時止，所用時間為凝血時間?！咀⒁馐马棥?.將小鼠麻醉時，小鼠可能會掙扎，此時不要松手；乙醚麻醉時間不要過長，以免造成小鼠死亡。2.采血時應(yīng)讓血自然流出，不要擠壓。3.如受試者出血時間超過15min，應(yīng)進行止血處理。【實驗結(jié)果】測定受試者的出血和凝血時間。【思考題】1．論述正常生理性止血過程。2．出血時間長短與哪種因素有關(guān)？3.血液凝固對機體有何生理意義？

實驗4循環(huán)生理實驗【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)人體間接法測定血壓的原理和方法。了解動脈血壓的某些影響因素。學(xué)習(xí)人體心電圖的知識，并掌握心電圖的測量方法。了解人體正常心電圖各波的波形與其生理意義。論證機體內(nèi)容積導(dǎo)體的存在，從而了解由體表引導(dǎo)器官或組織活動的導(dǎo)電規(guī)律?！緦嶒炘怼?.血管內(nèi)流動的血液對血管壁所施加的側(cè)壓力稱血壓。血壓與血量多少、血流快慢、管壁彈性、血管的舒縮等有關(guān)。通常血流在血管內(nèi)流動時并沒有聲音。但若給血管施加壓力而使血管變窄時，血液形成渦流，此時則可發(fā)出聲音即血管音。用常規(guī)血壓計測量人體血壓時，就是用壓脈帶打氣法來給肱動脈加壓，以阻斷動脈血流。當(dāng)外加壓力大于動脈壓時，血流完全阻斷，而此時用聽診器在肱動脈處聽不到任何聲音。若外加壓力低于動脈收縮壓而高于舒張壓時，心臟收縮血液通過動脈，心臟舒張血流受阻，此時可在肱動脈處聽到斷續(xù)的血管音。外加壓力小于舒張壓時，心臟收縮和舒張，血流都可通過動脈，此時血管音消失或突然減弱。這樣測定出的第一次血管音出現(xiàn)時的外加壓力和血管音消失時的外加壓力。恰好正對應(yīng)于心臟收縮時的收縮壓和舒張時的舒張壓。在正常情況下，人或哺乳動物的血壓是相對恒定的。但血壓的穩(wěn)定是動態(tài)的，受人體體位、運動、呼吸以與溫度等因素的影響，處于不斷變化和調(diào)節(jié)之中。2.心臟收縮之前，首先產(chǎn)生電位變化。這種心電變化由竇房結(jié)開始，按一定的順序傳遍整個心臟。在興奮傳播過程中，出現(xiàn)的一系列規(guī)律性電位變化，可通過體內(nèi)組織和體液這一導(dǎo)體反映到人體表面。通過心電記錄儀器，在動物體表面可記錄出這種綜合性的電位變化，記錄出的圖形就稱為心電圖。心電圖可反映心臟內(nèi)綜合電位變化的發(fā)生、傳導(dǎo)和消失過程。但不代表心臟收縮活動。正常人體心電圖包括P、QRS和T三個波群。其中P波表示心房去極化；QRS波表示心室去極化；T波表示心室復(fù)極化；P—Q間期表示興奮從心房傳到心室的時間；S—T間期表示心室完全去極化持續(xù)時間。3.體液有導(dǎo)電能力，稱為容積導(dǎo)體。由于機體任何組織與器官都處于體液的包圍之中，而體液作為導(dǎo)電性能良好的容積導(dǎo)體，可將組織和器官活動時所產(chǎn)生的生物電變化傳至體表。故在體表或容積導(dǎo)體中的遠隔部位可記錄出某一器官或組織活動的電變化。如心臟活動所產(chǎn)生的生物電變化，可通過置于體表不同部位的引導(dǎo)電極記錄下來，即心電圖。改變探測電極的位置，可改變心電的波形和方向。圖圖4.1-1血壓計使用法實驗4.1人體動脈壓的測定【材料與設(shè)備】血壓計；聽診器；冰水【方法和步驟】1．常規(guī)血壓計的結(jié)構(gòu)血壓計由檢壓計、壓脈帶和打氣球三部分組成。檢壓計一側(cè)與大氣相通，另一側(cè)由水銀柱和膠管與壓脈帶內(nèi)囊相通。內(nèi)囊又與打氣球相連（圖5.1-1）。2．動脈血壓測定方法（1）受試者脫去左臂衣袖,手掌向上平放在桌面上，靜坐于實驗桌旁約5分鐘。（2）主試者松開打氣球端側(cè)的螺絲帽，驅(qū)出壓脈帶內(nèi)殘留的氣體，將壓脈帶纏在左上臂，壓脈帶邊緣至少位于肘關(guān)節(jié)上2厘米，纏得不能太緊，也不能太松，以能伸入兩個手指為度。然后將螺絲帽旋緊。（3）使測量部位高度與心臟位置一致，將聽診器頭輕壓在肱動脈脈搏所在處。聽診器耳器按照與外耳道一致的彎曲方向塞入外耳道。（4）旋開檢壓計開關(guān)，使水銀貯存池的水銀與玻璃管相通，且液面恰在零處時，可開始打氣加壓。握球打氣時，食指與拇指需能放置螺絲帽。（5）通?？杉訅旱?50mmHg高。然后，旋開螺絲帽，使壓脈帶內(nèi)氣體放出而減壓。減壓時要慢。當(dāng)聽到第一次血管音時，記錄觀察到的水銀柱高度。此時的壓力就代表收縮壓。繼續(xù)減壓，到血管音突然變?nèi)趸蛳r，記錄水銀柱高度，此時的高度就是舒張壓。一般血管音由突然變?nèi)醯酵耆Ъs5—10mmHg高。有的規(guī)定以聲音變?nèi)鯙槭鎻垑?，有的?guī)定以聲音消失作為舒張壓。通常以前者為舒張壓。初學(xué)者要重復(fù)測三次。其中收縮壓取最大值，舒張壓取最小值。血壓記錄常以收縮壓/舒張壓（mmHg或Kpa）表示。3.分析影響血壓的因素（1）呼吸：受試者作緩慢的深呼吸1分鐘，后即刻測量其血壓；受試者作一次極深的吸氣后緊閉聲門，在可能堅持的時間內(nèi)測其血壓。（2）運動：受試者作原地蹲起運動，以1分鐘內(nèi)完成30次為好，做2分鐘后，立即測其血壓。之后每隔30秒測一次。直到恢復(fù)正常。（3）溫度：受試者手浸入4℃左右的冰水中至腕部以上，經(jīng)30—4．脈搏測量在做上面血壓測量時，可用聽診器記錄每分鐘心搏次數(shù)即脈搏?！咀⒁馐马棥?．測量期間，保持室內(nèi)安靜，以便準(zhǔn)確聽診血管音和測脈搏。2．測量時壓脈帶應(yīng)與心臟保持同一水平。3．壓脈帶松緊要適宜。聽診器聽診時，松緊也要適宜。4．戴聽診器時，務(wù)使耳器彎曲方向與外耳道一致。5．重復(fù)測量時，需把壓脈帶內(nèi)氣體放盡，使水銀柱面接近零位?！緦嶒灲Y(jié)果】將上述測量結(jié)果，自行繪圖或制表表示?！舅伎碱}】可能有哪些原因造成這種血壓測量技術(shù)中的誤差和變異？附1：生物信號采集系統(tǒng)測量血壓【實驗?zāi)康摹苛私鈒abtutor測量動脈血壓的原理和方法。【實驗原理】labtutor測量動脈血壓的基本原理同常規(guī)水銀血壓計完全相同。只是通過微音器代替聽診器，將識別的血管音經(jīng)換能器轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號，并直接在計算機上顯示出來。它可同時顯示出血壓和脈搏。儀器不用聽筒。采用自動減壓裝置，只須把換能器扣在肱動脈位置，纏好袖帶，就可打氣加壓?！痉椒ê筒襟E】打開計算機，進入“l(fā)abtutor實驗”，選擇“血壓”按照系統(tǒng)程序提示步驟進行操作。實驗4.2人體心電圖描記【實驗器材】生物信號采集系統(tǒng)；診斷床；導(dǎo)電糊；酒清棉球【方法和步驟】打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“心電圖和心音”按系統(tǒng)程序提示步驟進行實驗操作。實驗項目：1.記錄平靜狀態(tài)下的心電圖圖4.2-1正常體表心電圖（1）心電圖的初步分析：用不同導(dǎo)聯(lián)（見附表1、2）記錄的心電圖在波形、方向、振幅等方面各不相同，但它們都有P,Q,R,S,T五個基本波形（圖4.2-1)。測量Ⅱ?qū)?lián)P波、QRS波群、T波振幅，P-R,R-R和Q-T間期，心臟活動每一個心動周期的記錄正好是心電圖的五個基本波形。初學(xué)者應(yīng)先識別這五個波形，然后分析各波的方向、形狀，計算各波的電壓（振幅）、經(jīng)歷時間以與各波之間的間期。計算振幅時測量從基線（等電位線）開始到波峰頂端的距離，每小格代表0.1mv圖4.2-1正常體表心電圖（2）心率的計算：量出一P波開始至下一P波開始所經(jīng)歷的時間，除60s，即得心率。公式是：心率＝60/(P-P間期）（次／分）。如相鄰的P-P間期不等，可取5個相鄰的P-P間期的平均值計算之。2.心電圖變化記錄組內(nèi)若干成員在平靜狀態(tài)下的心電圖，然后比較不同人之間心電圖中的各波幅和持續(xù)時間的異同?！咀⒁馐马棥?．在每次變換導(dǎo)聯(lián)時必須先切斷輸入開關(guān)，然后再開啟。每換一次導(dǎo)聯(lián)，均須觀察基線是否平穩(wěn)與有無干擾，如有干擾，須調(diào)整或排除后再作記錄。2．儀器使用完畢后，應(yīng)擦凈并將每個操作鈕恢復(fù)原位，最后切斷電源。3．一般不正常心電圖記錄的糾正：（1）交流干擾的排除：室內(nèi)有交流電纜線離人體太近，或室內(nèi)有大的電器，應(yīng)去除上述干擾；儀器本身接地不良或受試者與地絕緣不良，均可造成干擾，安裝電極與人體表接觸不良也可造成干擾，應(yīng)排除；導(dǎo)聯(lián)線斷線則干擾波更大，換線可排除。（2）肌電干擾的排除：受試者過分緊張，先應(yīng)放松肌肉再做；四肢電極綁帶綁得太緊，應(yīng)松緊適中；室溫太低，受試者肌肉顫動而造成。（3）基線漂移：受試者躁動不安，身體移動或過度呼吸都會造成基線漂移，應(yīng)穩(wěn)定情緒后再測；四肢電極安裝不穩(wěn)定，四肢電極導(dǎo)電不良，也能引起基線漂移，應(yīng)重新安裝；導(dǎo)聯(lián)線斷線或松脫，換線重裝后再測。心電圖波形不穩(wěn)定原因很多，具體問題還須具體實驗時分析解決。【實驗結(jié)果】1.剪貼記錄曲線：平靜狀態(tài)下的心電圖，指出P波、QRS波群和T波；計算其心率。2．P波與心房收縮有何關(guān)系？說明心電圖各組成部分代表的生理學(xué)意義。3.粘貼各受試者的心電圖，分析比較結(jié)果?！舅伎碱}】在不同的心動周期內(nèi)，波形的幅度大小有什么變化？P波和QRS波群分別代表心房和心室的去極化，為什么其中QRS波群的幅度最大？不同人之間的心電圖數(shù)據(jù)中的波幅度和持續(xù)時間是不是相似？在不同的受試者之間，你觀察到他們的心率有什么不同？【附表1】電導(dǎo)聯(lián)的鏈接種類導(dǎo)聯(lián)符號導(dǎo)聯(lián)名稱導(dǎo)聯(lián)部位與極性（+）（－）標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)Ⅰ第一導(dǎo)聯(lián)左手右手Ⅱ第二導(dǎo)聯(lián)左腿右手Ⅲ第三導(dǎo)聯(lián)左腿左手單肢加壓aVRGoidberger導(dǎo)聯(lián)（右手）右手左手和左腿中點aVLCoikberger導(dǎo)聯(lián)（左手）左手右手和左腿中點aVFGoidberger導(dǎo)聯(lián)（左腿）左手右手和左手中點胸導(dǎo)聯(lián)VAWilson單極導(dǎo)聯(lián)胸電極V1Wilson組合法VBV2VCV3實驗4.3容積導(dǎo)體與心電傳導(dǎo)【材料與設(shè)備】牛蛙；生物信號采集系統(tǒng)；蛙類手術(shù)器械；培養(yǎng)皿；鱷魚夾；任氏液【實驗方法和步驟】1.破壞蛙的腦和脊髓：剪切線圖4.3-2剪頭法圖4.3-1蛙的枕骨大孔位置取蛙一只，用自來水沖洗干凈（勿用手搓）。左手握住蛙身，使其背部向上，中指與食指夾緊頭部，用拇指后壓使頭前俯（以頭顱后緣稍稍拱起為宜）。右手持探針由頭顱后緣的枕骨大孔處垂直刺入椎管（圖4.3-1)。然后將探針改向前刺入顱腔內(nèi)，左右攪動探針，搗毀腦組織。探針在顱腔內(nèi)，應(yīng)有碰與顱底骨的感覺（毀蛙腦也可用剪頭法，即用剪刀于口角處，經(jīng)過聽囊，將蛙的上頜連同顱蓋骨一起剪下，如圖4.3-2）。再將探針退回至枕骨大孔，使針尖轉(zhuǎn)向后端，保持脊柱平直剪切線圖4.3-2剪頭法圖4.3-1蛙的枕骨大孔位置然后，將其背位固定于蛙板上，剝?nèi)バ夭科つw，剪掉胸骨，暴露心臟。2.標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)：即將連有導(dǎo)線的鱷魚夾分別固定到牛蛙四肢的蛙釘上，（見附表1）負(fù)極接右前肢，正極接左后肢，右后肢接地線（圖4.3-3），輸出導(dǎo)線接至Powerlab的BioAmp輸入插孔。圖4.3-3標(biāo)準(zhǔn)圖4.3-3標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)Powerlab（1）記錄蛙正常心電波形。（2）將引導(dǎo)電極隨意放置蛙體各部位，開啟儀器后能否記錄到心電圖？是否有變化？（3）剪開心包膜，用鑷子夾住主動脈干提起心臟，連同靜脈竇一起剪下放入盛任氏液的培養(yǎng)皿中。開動儀器，再觀察有無心電波形？（4）將蛙心再放回胸腔，觀察有無心電波形？（5）將蛙心倒置，使心尖朝上，觀察有無心電波形？波形方向有何改變？圖4.3-4離體心導(dǎo)聯(lián)（6）模擬標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)（見附表1），將導(dǎo)聯(lián)線通過鱷魚夾夾在培養(yǎng)皿四邊（圖4.3-4圖4.3-4離體心導(dǎo)聯(lián)12345圖4.3-5蛙心容積導(dǎo)體心電描記1.正常波形；2.剪去心臟；3.將心臟放回原位；4.倒置心臟；5.將心臟置于培養(yǎng)皿任氏液中12345圖4.3-5蛙心容積導(dǎo)體心電描記1.正常波形；2.剪去心臟；3.將心臟放回原位；4.倒置心臟；5.將心臟置于培養(yǎng)皿任氏液中【注意事項】1.剪取心臟時切忌勿傷與靜脈竇。2．培養(yǎng)皿中的任氏液溫度最好保持在30℃3．儀器必須接地良好，以克服干擾。如果按標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)Ⅱ連接，出現(xiàn)干擾時，可將左前肢也與儀器的右前肢導(dǎo)聯(lián)線連接起來，即可克服干擾?！緦嶒灲Y(jié)果】剪貼記錄曲線，根據(jù)實驗結(jié)果總結(jié)容積導(dǎo)體的導(dǎo)電規(guī)律?！舅伎碱}】1．將引導(dǎo)電極置于體表或體內(nèi)任何部位，為什么均可記錄到心臟的生物電活動？2．如果將心臟取出，結(jié)果又將如何？為什么？3．若在將心臟放回胸腔，此時又將如何變化？為什么？4．如將心臟放置于培養(yǎng)皿的任氏液中浸泡，并通過培養(yǎng)皿中的任氏液能否引導(dǎo)記錄到心電變化？為什么？【附】任氏液的配制:NaCIKCICaCI2NaHCO3NaH2PO4葡萄糖蒸餾水PH值6.5g0.14g0.12g0.2g0.01g2.0g1000ml7.2

實驗5牛蛙坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)生理實驗基本的組織分離技術(shù)；掌握制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的方法?！緦嶒炘怼績蓷愐恍┗镜纳顒雍蜕砉δ芘c恒溫動物類似，但離體組織器官可存活較長時間，且所需的存活條件比較簡單，若將蛙的神經(jīng)-肌肉標(biāo)本放在任氏液中，其興奮性在幾個小時內(nèi)可保持不變。若給神經(jīng)或肌肉一次適宜刺激，可在神經(jīng)和肌肉上產(chǎn)生一個動作電位，肉眼可看到肌肉收縮和舒張一次，表明神經(jīng)和肌肉產(chǎn)生了一次興奮。在生理學(xué)實驗中常利用蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本研究神經(jīng)、肌肉的興奮性和刺激與反應(yīng)的關(guān)系以與肌肉收縮的特征等。制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的一項基本操作技術(shù)。【材料與設(shè)備】牛蛙；任氏液；濾紙；普通剪刀；手術(shù)剪；眼科鑷；金屬探針；玻璃分針；蛙板（或玻璃板）；蛙釘；細線；培養(yǎng)皿；滴管；鋅銅弓（或電子刺激器）【方法和步驟】1．毀腦、脊髓：見實驗4.4方法和步驟1。圖5.1-1剪斷脊柱2.剝制脊柱-后肢標(biāo)本：用左手捏住蛙的脊柱（圖5.1-1圖5.1-1剪斷脊柱圖5.1-2撕掉皮3．剝皮：（圖5圖5.1-2撕掉皮4．分離兩腿：用鑷子取出標(biāo)本，將脊柱腹側(cè)向上，左手的兩個手指捏住脊柱斷端的橫突，另一手指將兩后肢擔(dān)起，形成一個平面。此時用粗剪刀沿正中線將脊柱盆骨分為兩半（注意勿傷坐骨神經(jīng)）。將一半后肢標(biāo)本置任氏液中備用，另一半放在蛙板上進行下列操作。5.1-3蛙后肢肌腹面觀背面觀5.辨認(rèn)主要肌肉：如圖6.1-3，蛙類的坐骨神經(jīng)是由第7,8,9對脊神經(jīng)從相對應(yīng)的椎間孔穿出匯合而成，行走于尾椎骨的兩側(cè)，到尾端（肛門處）繞過坐骨聯(lián)合，到達后肢背側(cè)，行走于梨狀肌下的股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝內(nèi)，到達膝關(guān)節(jié)腘窩處分兩支(脛神經(jīng)和腓神經(jīng))5.1-3蛙后肢肌腹面觀背面觀6．游離坐骨神經(jīng)和腓腸?。河猛茚敾蜃笫值膬蓚€手指將標(biāo)本繃直、固定。先在腹腔面用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng)，然后在標(biāo)本的背側(cè)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)與周邊的結(jié)締組織分離直到腘窩，但不要傷與神經(jīng)，其分支待以后用手術(shù)剪剪斷。用玻璃分針將腓腸肌與其下的結(jié)締組織分離并在其跟腱處穿線、結(jié)扎。7.剪去其他不用的組織(操作從脊柱向小腿方向進行)：ABCD圖5.1-4分離坐骨神經(jīng)-腓腸肌脛神經(jīng)腓神經(jīng)腓腸肌坐骨神經(jīng)坐骨神經(jīng)脊柱骨脊柱骨股骨股骨坐骨神經(jīng)骨二頭肌半膜肌(1)剪去多余的脊柱和肌肉：將后肢標(biāo)本腹面向上，將坐骨神經(jīng)連同ABCD圖5.1-4分離坐骨神經(jīng)-腓腸肌脛神經(jīng)腓神經(jīng)腓腸肌坐骨神經(jīng)坐骨神經(jīng)脊柱骨脊柱骨股骨股骨坐骨神經(jīng)骨二頭肌半膜肌(2)完成坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本:將脊椎和坐骨神經(jīng)從腓腸肌上取下，提起腓腸肌的結(jié)扎線剪斷跟腱。用粗剪刀剪去膝關(guān)節(jié)以下部位，便制成了坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本（圖5.1-4C)8．檢驗標(biāo)本：用沾有任氏液的鋅銅弓觸與（或電刺激刺激）或用鑷子夾持坐骨神經(jīng)中樞端，如腓腸肌發(fā)生迅速而明顯的收縮，說明標(biāo)本的興奮性良好。標(biāo)本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中備用?！咀⒁馐马棥?．避免血液污染標(biāo)本，一旦污染不可水沖洗。防止壓擠、牽拉損傷標(biāo)本，不可用手與金屬器械觸碰神經(jīng)干。2．在操作過程中，應(yīng)隨時給神經(jīng)和肌肉滴加任氏液，防止表面干燥，以免影響標(biāo)本的興奮性。3．標(biāo)本制成后須放在任氏液中浸泡數(shù)分鐘，使標(biāo)本興奮性穩(wěn)定，實驗效果會較好?！舅伎碱}】1．用各種刺激檢驗標(biāo)本興奮性時，為什么要從中樞端開始？2.為什么不可用水沖洗標(biāo)本？3.為什么鋅銅弓可以檢測神經(jīng)-肌肉的興奮性？

實驗6神經(jīng)反射生理實驗【實驗?zāi)康摹?.通過對脊蛙的屈肌反射的分析，證明反射弧的組成，探討反射弧的完整性與反射活動的關(guān)系；學(xué)習(xí)掌握反射時的測定方法；以蛙的屈肌反射為指標(biāo)，觀察脊髓反射中樞活動的某些基本特征，并分析它們產(chǎn)生可能的神經(jīng)機制。2.學(xué)習(xí)暴露脊髓和分離脊神經(jīng)背、腹根的方法，了解背根和腹根的不同機能。【實驗原理】1.在中樞神經(jīng)的參與下，機體對刺激所引起的反應(yīng)過程稱為反射。反射的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是反射弧，它包括感受器、傳入神經(jīng)、反射中樞、傳出神經(jīng)、效應(yīng)器等五個部分。有腦中樞整合的反射比較復(fù)雜，僅有脊髓中樞的反射為單純反射，反射活動比較簡單，便于觀察、分析。反射弧的任何一個部分受到破壞，反射活動均不能實現(xiàn)。從刺激作用于感受器開始到效應(yīng)器出現(xiàn)反射性反應(yīng)為止所需要的時間叫反射時。不同程度的刺激引起的反射時是不同的，刺激越弱，反射時越長，刺激越強，反射時越短。2.在完成反射活動中，脊神經(jīng)的背根和腹根分別起著傳入和傳出機能。背根是由傳入神經(jīng)纖維組成，腹根是由傳出神經(jīng)纖維組成。分別刺激背根和腹根就會出現(xiàn)相應(yīng)的反應(yīng)。實驗6.1脊髓反射的基本特征和反射弧分析【材料和設(shè)備】蛙；蛙類手術(shù)器械；鐵支架、刺激電極、棉球、紗布、濾紙片、燒杯、培養(yǎng)皿；小燒杯；秒表；硫酸（0.1%、0.3%、0.5%、1%）；【方法和步驟】1．制備脊蛙：用刺針或剪頭毀腦（見實驗5.4方法和步驟1），但要保留脊髓，故名脊蛙。用一小棉球塞入創(chuàng)口止血.將脊蛙俯臥位放在蛙板上，剪開右側(cè)大腿皮膚，分離出坐骨神經(jīng)，在其下方穿雙線備用。然后用線穿過（或用夾子夾住）蛙的下頜，懸掛在鐵支架上（圖6.1-1），待蛙四肢松軟后，進行以下實驗。圖6.1-1脊蛙反射實驗2．屈腿反射觀察：用盛在小燒杯中的0.1%圖6.1-1脊蛙反射實驗3．反射時測定：將脊蛙右后肢趾尖浸于0.1%硫酸溶液中，同時用秒表記錄從浸入時起至腿發(fā)生屈曲時所需要的時間。重復(fù)三次，每次都需洗凈、擦干，求其平均值，此值為反射時。4.不同刺激的反射時比較：按步驟3所述方法依次測定0.3%、0.5%、1%硫酸刺激所引起的屈肌反射的反射時。列表比較4種濃度的硫酸所測得的反射時是否相同。5.剝?nèi)テつw效應(yīng)：在左側(cè)膝關(guān)節(jié)處將皮膚作一環(huán)形切口，剝掉足部皮膚（注意剝凈），再用1%硫酸溶液刺激足趾，觀察是否出現(xiàn)屈腿反射。洗凈、擦干。5.剪斷右側(cè)坐骨神經(jīng)效應(yīng)：分離右側(cè)坐骨神經(jīng)，并將其作雙結(jié)扎，從中間剪斷，再用0.1%硫酸溶液刺激右側(cè)足趾，觀察是否出現(xiàn)屈腿反射。6．刺激神經(jīng)中樞和外周端的比較：刺激右側(cè)坐骨神經(jīng)的中樞端，觀察動物的同側(cè)和對側(cè)后肢活動有何不同。刺激右側(cè)坐骨神經(jīng)的外周端，觀察同側(cè)和對側(cè)后肢有何反應(yīng)。7．騷撓反射：將浸過0.1%硫酸溶液的濾紙片貼在蛙的腹部，觀察動物的反應(yīng)。洗凈硫酸。8.搗毀脊髓效應(yīng)：用毀髓針徹底搗毀脊髓，再重復(fù)以上實驗，觀察有何反應(yīng)?！咀⒁馐马棥?．制備脊蛙時，顱腦離斷的部位要適當(dāng)，太高因保留部分腦組織而可能出現(xiàn)自主活動，太低又可能影響反射的產(chǎn)生。2．用硫酸溶液或浸有硫酸的紙片處理蛙的皮膚后，應(yīng)迅速用自來水清洗，以清除皮膚上殘存的硫酸，并用紗布擦干，以保護皮膚并防止沖淡后續(xù)實驗硫酸溶液的濃度。3．浸入硫酸溶液的部位應(yīng)限于一個趾尖，每次浸泡范圍、深度也應(yīng)一致，切勿浸入太多?！緦嶒灲Y(jié)果】1.總結(jié)各項實驗結(jié)果，分析其形成機制。2.指出各項反射活動的反射弧組成?！舅伎碱}】1.簡述反射時與刺激強度之間的關(guān)系。2．右側(cè)坐骨神經(jīng)被剪斷后，動物的反射活動發(fā)生了什么變化？這是損傷了反射弧的哪一部分？3．剝?nèi)ブ宏P(guān)節(jié)以下皮膚后，不再出現(xiàn)原有的反射活動，為什么？4.刺激坐骨神經(jīng)中樞端和外周端，反應(yīng)有何不同？為什么刺激坐骨神經(jīng)中樞端，同側(cè)和對側(cè)后肢表現(xiàn)出不同的反應(yīng)？【可能出現(xiàn)的問題】在測反射時，有可能出現(xiàn)硫酸的濃度低，反而反射時短。這是因為隨著實驗進程，標(biāo)本產(chǎn)生了適應(yīng)性，反應(yīng)靈敏性下降，因此濃度低時，反射時有可能更短。也可能是標(biāo)本本身興奮性就很低?！靖健坑蒙镄盘柌杉到y(tǒng)測定反射時1．制備脊蛙，懸于萬能支架上。2．將一細塑料皮導(dǎo)線以膠布固定在一后肢踝關(guān)節(jié)下，并將導(dǎo)線固定于支架上，但以不影響后肢屈曲為宜。導(dǎo)線一端與后肢被刺激的腳趾平齊。導(dǎo)線另一端與儀器的外接標(biāo)記插孔上的輸入線組中白色線的負(fù)極鱷魚夾相連。3．將標(biāo)記線正極的鱷魚夾夾住盛0.1%硫酸的培養(yǎng)皿邊緣，同時夾住金屬導(dǎo)線一端，并使金屬導(dǎo)線浸入硫酸液中，構(gòu)成標(biāo)記電路。這樣當(dāng)開啟儀器后，脊蛙腳趾浸入硫酸液時，標(biāo)記電路接通，標(biāo)記“上移”并記出一直線。當(dāng)脊蛙因刺激而出現(xiàn)曲反射時，趾尖離開硫酸溶液，回路中斷，標(biāo)記線又回到原位。根據(jù)上移直線的長度和走紙速度，可計算出反射時。用同樣方法重復(fù)測三次，求出平均值。4．改用0.3%、0.5%、1%的硫酸溶液，分別重復(fù)測定三次，計算出平均值。這樣測定的反射時較為準(zhǔn)確，但應(yīng)注意：（1）掛脊蛙的器具必須是絕緣的，以免因電流刺激而引起反射。（2）固定于后肢的導(dǎo)線，也必須與后肢絕緣。（3）刺激時，讓后肢的導(dǎo)線盡可能靠近培養(yǎng)皿內(nèi)夾的導(dǎo)線，或者讓其接觸。切勿使后肢置于兩電極之間。否則就會電流通過腳趾而構(gòu)成電刺激。實驗6.2脊髓背根和腹根的機能【材料與設(shè)備】蛙；蛙手術(shù)器械；彎頭金冠剪；刺激器；刺激電極；蛙板；蛙釘；滴管；任氏液；黑白細絲線【方法和步驟】1．制備脊蛙:見實驗6.1。2.剝離脊柱骨：將脊蛙俯臥位固定于蛙板上。沿背部中線剪開皮膚，向前開口至耳后腺之間，向后開口至尾桿骨中段，把皮膚翻向兩側(cè)。用剪刀小心剪去脊椎兩側(cè)縱行的肌肉與椎間肌肉，露出椎柱骨（圖6.2-1）。圖6.2-1脊柱及椎骨結(jié)構(gòu)圖6.2-2示意脊髓及神經(jīng)2．顯露脊髓：用金冠剪從頭端，先環(huán)形剪斷環(huán)椎，然后將彎頭金冠剪小心伸入椎管，自前向后剪斷兩側(cè)椎弓圖6.2-1脊柱及椎骨結(jié)構(gòu)圖6.2-2示意脊髓及神經(jīng)3．分離脊神經(jīng)：用眼科鑷輕輕挑開灰黑色脊膜，用吸管吸取任氏液沖洗馬尾部，小心識別第7—10對脊神經(jīng)。辨認(rèn)出相應(yīng)的背根和腹根。背根發(fā)自脊髓背側(cè)，腹根發(fā)自脊髓的腹側(cè)。背根在近椎間孔附近，形成膨大的背根節(jié)。背根在形成背根節(jié)后，便與腹根相互合并。隨后就又分成不同的二支。用玻璃針分離出一側(cè)的一對背、腹根。將背根穿兩條白色絲線，腹根穿兩條色絲線備用。放松后肢。4．刺激背根效應(yīng)：提起白色絲線，輕輕用電極鉤起背根給以較弱單脈沖刺激，觀察反應(yīng)，記錄結(jié)果。5．刺激腹根效應(yīng)：用同樣方法，刺激腹根并觀察反應(yīng)，記錄結(jié)果。6．刺激背根中樞端和外周端效應(yīng)：將兩條白線雙結(jié)扎背根后，從結(jié)間剪斷，然后用電刺激背根的中樞端和外周端，并觀察反應(yīng)，記錄結(jié)果。7．刺激腹根中樞端和外周端效應(yīng)：用同樣方法雙結(jié)扎并剪斷腹根，分別用電刺激背根的中樞端和外周端以與腹根的中樞端和外周端。觀察反應(yīng)，記錄結(jié)果。【注意事項】背、腹根極易拉斷，實驗時必須小心，應(yīng)保持其濕潤。所有電刺激應(yīng)用同一強度。刺激時，周圍組織不應(yīng)過分潮濕，以免電流擴散。3．選用的背、腹根必須是同一脊髓節(jié)段的一對神經(jīng)根，否則不能比較其作用，同一節(jié)段的背根或腹根有一損壞，必須換另一節(jié)段的同一對背、腹根?！緦嶒灲Y(jié)果】總結(jié)各項實驗結(jié)果，解釋各種反應(yīng)現(xiàn)象。【思考題】根據(jù)實驗結(jié)果，說明背、腹根的機能。

實驗7牛蛙骨骼肌生理實驗【實驗?zāi)康摹?.學(xué)習(xí)神經(jīng)-肌肉實驗的電刺激方法和記錄肌肉收縮的方法；觀察刺激強度與肌肉收縮之間的關(guān)系；掌握閾刺激、閾下刺激、閾上刺激、最大（最適）刺激等概念。2.觀察用不同頻率的最適刺激刺激坐骨神經(jīng)對腓腸肌收縮形式的影響與其特征。了解和掌握單收縮、復(fù)合收縮、強直收縮特征和形成的基本原理。【實驗原理】1.神經(jīng)和肌肉都具有興奮性，受刺激時肌肉便會有收縮反應(yīng)。對于單根神經(jīng)纖維或肌纖維來說，對刺激的反應(yīng)具有“全或無”的特性。神經(jīng)-肌肉標(biāo)本由許多興奮性不同的神經(jīng)纖維、肌纖維組成，在保持足夠的刺激時間（脈沖波寬）不變時，過小刺激強度，不能引起肌肉收縮反應(yīng)。隨著刺激強度增加，少數(shù)興奮性較高的運動單位興奮，導(dǎo)致少數(shù)肌纖維收縮，刺激強度增加到某一臨界值，肌肉表現(xiàn)出較小的張力變化，此時的刺激強度為閾強度，具有閾強度的刺激稱閾刺激。此后，隨著刺激強度的繼續(xù)增加，會有較多的運動單位興奮，肌肉收縮幅度與產(chǎn)生的張力也不斷增加，此時的刺激均稱為閾上刺激。當(dāng)刺激強度增大到某一臨界值時，所有的運動單位都被興奮，引起肌肉最大幅度的收縮，產(chǎn)生的張力也最大，此后再增加刺激強度，也不會再引起反應(yīng)的繼續(xù)增加，這樣，可引起神經(jīng)、肌肉最大反應(yīng)的最小刺激強度為最適刺激強度，該刺激叫最大刺激或最適刺激。2.若給予標(biāo)本相繼兩個最適刺激，使兩次刺激的間隔小于該肌肉收縮的總時程時，則會出現(xiàn)一連續(xù)的收縮，稱復(fù)合收縮（或收縮總和）。若兩個刺激的時間間隔短于肌肉收縮總時程，而長于肌肉收縮的潛伏期和縮短期時程，使后一刺激落在前一刺激引起肌肉收縮的舒張期內(nèi)，則出現(xiàn)一次收縮尚未完全舒張又引起一次收縮；若兩次刺激的間隔短于肌肉收縮的縮短期，使后一刺激落在前一次刺激引起收縮的縮短期內(nèi)，則出現(xiàn)一次收縮正在進行接著又產(chǎn)生一次收縮，收縮的幅度高于單收縮的幅度。根據(jù)這個原理，若給予標(biāo)本一連串的最適刺激，則因刺激頻率不同會得到一連串的單收縮、不完全強直收縮或完全強直收縮的復(fù)合收縮。實驗7.1刺激強度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙類手術(shù)器械；生物信號采集處理系統(tǒng)；刺激電極；肌槽；蛙板；蛙釘；張力換能器；滴管；任氏液；黑白細絲線【方法和步驟】1．坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備離體的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備：方法見實驗5。在體的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備：步驟如下：(1)取一只牛蛙，洗凈，破壞腦和脊髓。(2)剝離右后腿至根部的全部皮膚，然后將蛙腹位固定于蛙板上。(3)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)游離，并在神經(jīng)下穿線備用。然后分離腓腸肌的跟腱穿線結(jié)扎，連同結(jié)扎線將跟腱剪斷，一直將腓腸肌分離到膝關(guān)節(jié)。(4)在膝關(guān)節(jié)旁釘蛙釘，以固定住膝關(guān)節(jié)。完成在體坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本制備。2．儀器與標(biāo)本的連接有以下兩種方式：(1)對于離體標(biāo)本，將肌槽、張力換能器用雙凹夾固定于支架上；標(biāo)本的股骨殘端插入肌槽的小孔內(nèi)并固定之；腓腸肌跟腱上的連線連于張力換能器的應(yīng)變片上（暫不要將線拉緊）。夾住脊椎骨碎片將坐骨神經(jīng)輕輕平搭在肌槽的刺激電極上（圖7.1-1)。肌槽電極神經(jīng)-肌肉標(biāo)本(2)對于在體標(biāo)本，將腓腸肌跟腱扎線連于張力換能器的應(yīng)變片上（暫不要將線拉緊）；將穿有線的坐骨神經(jīng)輕輕提起，放在保護電極上，并保證神經(jīng)與電極接觸良好（圖7.1-2肌槽電極神經(jīng)-肌肉標(biāo)本神經(jīng)-肌肉標(biāo)本電極換能器橋式放大器Powerlab拉長的狀態(tài)（不宜過緊，但也不要太松）。將張力換能器的插頭插入生物信號采集處理系統(tǒng)的橋式放大器端口，再將其輸出插頭插人Powerlab的輸入通道插座（如Input1神經(jīng)-肌肉標(biāo)本電極換能器橋式放大器Powerlab3.實驗項目打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“蛙骨骼肌實驗”，下拉菜單點擊“實驗1骨骼肌單收縮”。按系統(tǒng)程序提示步驟進行實驗操作與記錄實驗結(jié)果。【注意事項】1．刺激之后必須讓標(biāo)本休息一段時間，約0.5-1min。實驗過程中標(biāo)本的興奮性會發(fā)生改變，因此還要抓緊時間進行實驗。2．整個實驗過程中要不斷給標(biāo)本滴加任氏液，防止標(biāo)本干燥，保持其興奮性。【可能出現(xiàn)的問題與解釋】(1)未能找出最大刺激：雖已調(diào)至刺激器的最大刺激強度，但經(jīng)液體介質(zhì)短路后輸出，強度有所降低，對刺激的神經(jīng)仍不能達到最大刺激強度，此時可增大刺激波寬。(2)單收縮曲線忽高忽低：標(biāo)本在任氏液中浸泡的時間不夠，興奮性不穩(wěn)定；肌槽上液體堆積過多，造成短路使刺激強度不穩(wěn)。(3)標(biāo)本發(fā)生不規(guī)則收縮或痙攣：肌槽不干凈，留有刺激物（如鹽漬）；周圍環(huán)境有干擾；儀器接地不良或人體感應(yīng)帶電，接觸潮濕臺面或支架等?！緦嶒灲Y(jié)果】1．標(biāo)記刺激強度與肌肉收縮張力之間的關(guān)系曲線，剪輯、打印。2.分析骨骼肌單收縮波，確定閾下刺激、閾刺激、閾上刺激和最適刺激的數(shù)值?！舅伎碱}】1．引起骨骼肌組織興奮的刺激必須具備哪些條件？2．何謂閾下刺激、閾刺激、閾上刺激和最適刺激？在閾刺激和最適刺激之間為什么肌肉的收縮隨刺激強度增加而增加？3．實驗過程中標(biāo)本的閾值是否會改變？為什么？實驗7.2骨骼肌收縮特性（單收縮、復(fù)合收縮、強直收縮）【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙類手術(shù)器械；生物信號采集處理系統(tǒng)；刺激電極；肌槽；蛙板；蛙腿夾；張力換能器；滴管；任氏液；黑白細絲線【方法和步驟】1．制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本(見實驗5或?qū)嶒?.1-1)。2．儀器與標(biāo)本的連接(見實驗7.1-1、7.1-2)。3.實驗項目打開計算機，進人“LabTutor實驗”，選擇“蛙骨骼肌實驗”，下拉菜單分別點擊“實驗3肌肉收縮的總和”和“實驗4強直收縮”。按系統(tǒng)程序提示步驟進行實驗操作與記錄實驗結(jié)果。參考步驟：4.以波寬為1ms，從最小刺激強度開始逐漸增加刺激強度對肌肉進行刺激，找到剛剛引起肌肉最大收縮的刺激強度，即為該標(biāo)本的最適刺激強度，整個實驗過程中均固定在此刺激強度上（一般為5-7.5V)。5．用單刺激作用于坐骨神經(jīng)，可記錄到肌肉的單收縮曲線。圖7.2-1刺激時間間隔、頻率對骨骼肌收縮的影響復(fù)合收縮單收縮不完全強直收縮完全強直收縮刺激頻率刺激時間間隔6．用雙刺激作用于坐骨神經(jīng)，使兩次刺激間隔時間為0.06—0.08s圖7.2-1刺激時間間隔、頻率對骨骼肌收縮的影響復(fù)合收縮單收縮不完全強直收縮完全強直收縮刺激頻率刺激時間間隔7．將刺激方式置于“連續(xù)”或“串刺激”，其余參數(shù)固定不變，用頻率為1、6、10、15、20、30Hz的連續(xù)刺激作用于坐骨神經(jīng)，可記錄到單收縮、不完全強直收縮和完全強直收縮曲線（紙速2-10mm/s)（圖8.2-1【注意事項】1．經(jīng)常給標(biāo)本滴加任氏液，保持標(biāo)本良好的興奮性。2．連續(xù)刺激時，每次刺激持續(xù)時間要保持一致，不得超過3-4s（為什么？），每次刺激后要休息30s以免標(biāo)本疲勞。3．若刺激神經(jīng)引起的肌肉收縮不穩(wěn)定時，可直接刺激肌肉。4．可根據(jù)實際需要調(diào)整刺激頻率?！究赡艹霈F(xiàn)的問題與解釋】1．隨著刺激頻率增加，肌肉復(fù)合收縮的幅度不是逐漸升高，而是下降。這是由于標(biāo)本保護不當(dāng)，肌肉受損或疲勞，或刺激頻率過高造成的。2．其余的參見實驗8.1?！緦嶒灲Y(jié)果】標(biāo)記單收縮、收縮總和、不完全強直收縮和完全強直收縮曲線，然后進行剪輯、打印、分析?！舅伎碱}】1．何為單收縮？單收縮的潛伏期包括了哪些時間因素？對有神經(jīng)和無神經(jīng)的標(biāo)本有何差異？2．何為收縮總和、不完全強直收縮和完全強直收縮？它們是如何形成的？3．此次實驗為什么要將刺激強度固定在最適刺激強度？4．為什么刺激頻率增高，肌肉收縮的幅度也增高？

實驗8牛蛙坐骨神經(jīng)干生理實驗【實驗?zāi)康摹?.觀察蛙類坐骨神經(jīng)干的單相、雙相動作電位。識別、分析神經(jīng)干動作電位的基本波形，測量其潛伏期、幅值以與時程。2.掌握測定坐骨神經(jīng)干動作電位的絕對不應(yīng)期和相對不應(yīng)期的方法，并了解神經(jīng)在興奮過程中其興奮性的規(guī)律性變化。3.掌握神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的測定方法以與低溫對神經(jīng)沖動傳導(dǎo)速度的影響，理解興奮傳導(dǎo)的概念。【實驗原理】1.在有效刺激作用下，神經(jīng)纖維膜內(nèi)外產(chǎn)生去極化，當(dāng)其極化達到閾電位時，能誘發(fā)膜產(chǎn)生一次在神經(jīng)纖維上可傳導(dǎo)的快速電位反轉(zhuǎn)，此即為動作電位（AP)。神經(jīng)干動作電位是神經(jīng)興奮的客觀標(biāo)志，處于興奮狀態(tài)的部位相對靜止部位而言，膜外電位呈負(fù)電性質(zhì)，二者之間出現(xiàn)一個電位差。當(dāng)神經(jīng)沖動通過以后，膜外電位又恢復(fù)到靜止時水平。如果兩個引導(dǎo)電極置于正常完整的神經(jīng)干表面，當(dāng)神經(jīng)干的一端興奮之后，興奮波先后通過兩個電極處，便引導(dǎo)出兩個方向相反的電位偏轉(zhuǎn)，稱為雙相動作電位。如果兩個引導(dǎo)電極之間神經(jīng)組織有損傷，興奮波只通過第一個引導(dǎo)電極，不能傳至第二個引導(dǎo)電極，則只能引導(dǎo)出一個方向的電位偏轉(zhuǎn)波形，稱為單相動作電位。坐骨神經(jīng)干包括多種類型的神經(jīng)纖維成分，因此記錄到的動作電位是它們電位變化的總和，因此神經(jīng)干動作電位是一種復(fù)合動作電位。由于各類神經(jīng)纖維的興奮閾值各不相同，所以記錄到的動作電位幅值在一定范圍內(nèi)可隨刺激強度的變化而改變，這一點不同于單根神經(jīng)纖維的動作電位。能使動作電位幅值達到最大的刺激強度為頂強度。2.刺激器輸出兩個電脈沖，通過調(diào)節(jié)兩刺激脈沖間隔，可測得坐骨神經(jīng)的絕對不應(yīng)期和相對不應(yīng)期。將兩刺激脈沖間隔由最小逐漸增大時，開始只有第一個刺激脈沖產(chǎn)生動作電位，第二個刺激脈沖不產(chǎn)生動作電位，當(dāng)兩刺激脈沖間隔達到一定值時，此時第二個刺激脈沖剛好能引起一極小的動作電位，這時兩刺激脈沖間隔即為絕對不應(yīng)期。繼續(xù)增大刺激脈沖間隔，這時由第二個刺激脈沖產(chǎn)生的動作電位逐漸增大，當(dāng)兩刺激間隔達到某一值時，此時由第二個刺激脈沖產(chǎn)生的動作電位，其大小剛好和由第一個刺激產(chǎn)生的動作電位相同，這時兩刺激脈沖間隔即為相對不應(yīng)期。繼續(xù)增大刺激間隔，此時由兩刺激脈沖產(chǎn)生的動作電位將始終保持完全一致。3.動作電位在神經(jīng)纖維上的傳導(dǎo)有一定的速度。不同類型的神經(jīng)纖維動作電位傳導(dǎo)速度各不相同。神經(jīng)纖維越粗則傳導(dǎo)速度越快。蛙類坐骨神經(jīng)干傳導(dǎo)速度（V）大約為35-40m/s。測定神經(jīng)沖動在神經(jīng)干上傳導(dǎo)的距離（s)與通過這段距離所需的時間（t)，然后根據(jù)V=s/t實驗8.1神經(jīng)干動作電位的觀察【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙類手術(shù)器械；生物信號采集處理系統(tǒng)；神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒；蛙板；刺激電極；蛙釘；張力換能器；滴管；任氏液；黑白細絲線【方法和步驟】1．坐骨-脛、腓神經(jīng)標(biāo)本的制備制作方法基本同“坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本”的制備（見實驗5.1)，但無需保留股骨和腓腸肌。坐骨神經(jīng)干要求盡可能長些。在脊椎附近將神經(jīng)主干結(jié)扎剪斷。提起線頭剪去神經(jīng)干的所有分支和結(jié)締組織，到達胭窩后，可繼續(xù)分離出腓神經(jīng)或脛神經(jīng)，在靠近趾部剪斷神經(jīng)（見圖5.1-4D)。將制備好的“坐骨-脛、腓神經(jīng)標(biāo)本”浸泡在任氏液中數(shù)分鐘，待其興奮性穩(wěn)定后開始實驗。2.儀器與標(biāo)本的連接神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒Powerlab神經(jīng)標(biāo)本圖8.1-1神經(jīng)干動作電位觀察的裝置連接(1)用浸有任氏液的棉球擦拭神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒上的電極，標(biāo)本盒內(nèi)放置一塊濕潤的濾紙片，以防標(biāo)本干燥。將兩對記錄電極分別連接到Powerlab的Input輸入通道1和2，（通道1只在實驗9.3中用）刺激電極連接到Powerlab的Ouput神經(jīng)標(biāo)本屏蔽盒Powerlab神經(jīng)標(biāo)本圖8.1-1神經(jīng)干動作電位觀察的裝置連接(2)將標(biāo)本放在濾紙上片吸去過多的任氏液，然后平搭在屏蔽盒刺激電極、接地電極和引導(dǎo)電極上，并且使其近中樞端置于刺激電極上，遠中樞端置于記錄電極上（圖8.1-1）。打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“蛙神經(jīng)”，下拉實驗菜單，點擊“實驗項目一測量神經(jīng)興奮閾值”。按系統(tǒng)程序提示操作實驗。參考實驗步驟：3.觀察和測定雙相動作電位(1)測定閾刺激和最大刺激：調(diào)節(jié)刺激強度，觀察動作電位波形的變化。讀出波寬為某一數(shù)值時的閾刺激和最大刺激（頂強度）。圖8.1-2雙相動作電位波形O:觸發(fā)掃描開始；S:刺激偽跡；A:動作電位(2）測定動作電位振幅與時值：仔細觀察雙相動作電位的波形（圖8圖8.1-2雙相動作電位波形O:觸發(fā)掃描開始；S:刺激偽跡；A:動作電位(3）測定神經(jīng)干的方向性：將神經(jīng)干標(biāo)本放置的方向倒換后，雙相動作電位的波形有無變化？(4）測定電極的極性影響：電極將兩根引導(dǎo)電極（r2、r2’）4．觀察單相動作電位測定單相動作電位的幅值和時值：用鑷子將兩個引導(dǎo)電極（r2、r2’）之間的神經(jīng)夾傷，或用一小塊浸有3mol/LKCl溶液的濾紙片貼在第二個引導(dǎo)電極(r2【注意事項】1．各儀器應(yīng)妥善接地，儀器之間、標(biāo)本與電極之間應(yīng)接觸良好。2．制備標(biāo)本時，神經(jīng)纖維應(yīng)盡可能長一些，將附著于神經(jīng)干上的結(jié)締組織膜與血管清除干凈，但不能損傷神經(jīng)干。3．經(jīng)常滴加任氏液，保持神經(jīng)標(biāo)本濕潤，但要用濾紙片吸去神經(jīng)干上過多的任氏液。4．神經(jīng)干不能與標(biāo)本盒壁相接觸，也不要把神經(jīng)干兩端折疊放置在電極上，以免影響動作電位的波形?！緦嶒灲Y(jié)果】觀察雙相動作電位和單相動作電位的波形，描述雙相動作電位和單相動作電位特征？【思考題】1．什么叫刺激偽跡，是怎樣發(fā)生的？怎樣鑒別刺激偽跡和神經(jīng)干動作電位？2．神經(jīng)被夾傷或經(jīng)KC1溶液處理后，動作電位的第二相為何消失？3．神經(jīng)干動作電位與刺激強度有何關(guān)系？它與神經(jīng)動作電位的“全或無”特性有矛盾嗎？為什么？4．引導(dǎo)電極調(diào)換位置后，動作電位波形有無變化？為什么？實驗8.2絕對不應(yīng)期和相對不應(yīng)期測定【材料與設(shè)備】見實驗8.1【方法和步驟】1.坐骨-脛、腓神經(jīng)標(biāo)本的制備（方法見實驗8.1）2．儀器連接和調(diào)試同實驗8.1，只是刺激器方式需用“自動間隔調(diào)節(jié)”。打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“蛙神經(jīng)”，下拉實驗菜單，點擊“實驗項目二測量神經(jīng)興奮不應(yīng)期的變化”。按系統(tǒng)程序提示操作實驗。參考實驗步驟：3．測定項目(1)頂強度的測定：用“自動幅度調(diào)節(jié)”刺激方式，找出該坐骨神經(jīng)的刺激最大強度。動作電位刺激脈沖圖8.2-1神經(jīng)興奮性測定相對不應(yīng)期絕對不應(yīng)期(2)絕對不應(yīng)期的測定：用“自動間隔調(diào)節(jié)”方式刺激標(biāo)本，強度為頂強度，當(dāng)串間隔從最小逐漸動作電位刺激脈沖圖8.2-1神經(jīng)興奮性測定相對不應(yīng)期絕對不應(yīng)期(3)相對不應(yīng)期的測定：在觀察項目（2)的基礎(chǔ)上進一步增大串間隔，這時由第二個刺激脈沖引起的動作電位幅度逐漸增大，當(dāng)?shù)诙€動作電位幅值剛好達到第一個動作電位幅值大小時，此時的串間隔即為相對不應(yīng)期（圖8.2-1）。(4)相對不應(yīng)期與刺激強度的關(guān)系：重復(fù)以上實驗，在相對不應(yīng)期內(nèi)增大測試刺激的強度，縮小的第二個動作電位幅度可達到第一個的水平。但如果是在絕對不應(yīng)期內(nèi)，雖然增大刺激強度，卻不能引起神經(jīng)的第二次興奮。【注意事項】同實驗8.1.【實驗結(jié)果】觀察神經(jīng)不應(yīng)期波形，整理打印結(jié)果，并標(biāo)出不應(yīng)期?！舅伎碱}】1．何謂不應(yīng)期？不應(yīng)期長短有何生理意義？2．神經(jīng)干不應(yīng)期與單根神經(jīng)纖維不應(yīng)期有何不同？3.如果刺激強度過大，能否測出相對不應(yīng)期？實驗8.3神經(jīng)干動作電位傳導(dǎo)速度測定【材料與設(shè)備】見實驗8.1【方法和步驟】1.坐骨-脛、腓神經(jīng)標(biāo)本的制備（方法見實驗8.1）2．儀器連接和調(diào)試：同實驗8.1，只是需要兩個通道同時記錄。打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“蛙神經(jīng)”，下拉實驗菜單，點擊“實驗項目三傳導(dǎo)速度”。按系統(tǒng)程序提示操作實驗。參考實驗步驟：3．動作電位傳導(dǎo)速度的測定t1t2t1t2t圖8.3-1動作電位傳導(dǎo)速度測定(1)分別測量從刺激偽跡到兩個動作電位起始點的時間，設(shè)上線的為t1下線的為t2（或可直接測量兩個動作電位起點的間隔時間），求出t2-t1的時間差值。(2)測量標(biāo)本屏蔽盒中兩對引導(dǎo)電極相應(yīng)的電極之間的距離s（即測定r1～r2的間距）。(3)將神經(jīng)干標(biāo)本置于4℃的任氏液中浸泡5min【注意事項】同實驗9.1。測定動作電位傳導(dǎo)速度時，兩對引導(dǎo)電極間的距離應(yīng)盡可能大?！緦嶒灲Y(jié)果】分別計算正常的神經(jīng)干和低溫浸泡后的神經(jīng)干上動作電位傳導(dǎo)速度：V=s/(t2-t1)?！舅伎碱}】1．為什么不用從刺激電極的陰極到第一個引導(dǎo)電極的距離除以t，直接計算神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度？用一對引導(dǎo)電極能否測定神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度？2．根據(jù)你的結(jié)果可推斷蛙的坐骨神經(jīng)干中的神經(jīng)纖維主要屬于哪種類型？3．將神經(jīng)干標(biāo)本置于4℃

實驗9牛蛙心搏生理實驗【實驗?zāi)康摹?.用結(jié)扎法觀察牛蛙心臟的起搏點和心臟不同部位傳導(dǎo)系統(tǒng)的自動節(jié)律性高低與興奮傳導(dǎo)的方向。2.學(xué)習(xí)蛙類心臟活動描記的方法，觀察心肌收縮的特點并與骨骼肌加以比較。3.掌握離體蛙心灌流的方法，了解各種理化因素和藥物對心臟活動的影響?！緦嶒炘怼?.心臟的特殊傳導(dǎo)系統(tǒng)具有自動節(jié)律性，但各部分的自動節(jié)律性高低不同。兩棲類動物的心臟起搏點是靜脈竇（哺乳動物的是竇房結(jié)）。正常情況下，靜脈竇（竇房結(jié)）的自律性最高，能自動產(chǎn)生節(jié)律性興奮，并依次傳到心房、房室交界區(qū)、心室，引起整個心臟興奮和收縮，因此靜脈竇（竇房結(jié)）是主導(dǎo)整個心臟興奮和搏動的正常部位，被稱為正常起搏點；其他部位的自律組織僅起著興奮傳導(dǎo)作用，若阻斷心臟的正常傳導(dǎo)，它們也可起到起搏點的作用，故稱之為潛在起搏點。2.心肌屬于橫紋肌，因具其絕對不應(yīng)期特別長，幾乎占據(jù)了整個收縮期和舒張早期，在此期間內(nèi)任何刺激均不能引起心肌的收縮，因此心肌不會產(chǎn)生強直收縮，心臟總是有節(jié)律的舒縮。心臟舒張早期之后則處于相對不應(yīng)期，此時，給心室肌一次有效的刺激（閾上刺激），會引起心臟一次期前收縮，緊接著出現(xiàn)一次較長的間歇，稱代償性間歇。代償間歇的出現(xiàn)是由于期前收縮也有絕對不應(yīng)期，從靜脈竇傳來的正常節(jié)律性興奮常落在期前收縮的絕對不應(yīng)期中，也不能引起心臟收縮，要等下一個正常節(jié)律性興奮傳來，才能引起心臟收縮。這樣，在期前收縮后有一個較長時間的代償間歇。由于心肌細胞有分支，相鄰心肌細胞之間以閏盤聯(lián)結(jié)；同時在心臟中有特殊的傳導(dǎo)系統(tǒng)能將心肌的興奮迅速傳導(dǎo)到整個心臟。因此，心臟的收縮表現(xiàn)出功能合胞體的特征。3.心臟的正常節(jié)律性活動需要一個適宜的內(nèi)環(huán)境（如Na+,K+,Ca＋等的濃度與比例、PH和溫度），而內(nèi)環(huán)境的變化則直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動。在體心臟還受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配，交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，使心肌收縮力加強，傳導(dǎo)速度加快，心率加快；迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率減慢。將失去神經(jīng)支配的離體心臟保持于適宜的理化環(huán)境中（如任氏液），在一定時間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動節(jié)律性興奮和收縮。而改變?nèi)问弦旱慕M成成分，離體心臟的活動就會受到影響。實驗9.1蛙心起搏過程的觀察與分析【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙手術(shù)器械；彎頭金冠剪；蛙板；蛙釘；滴管；任氏液；黑白細絲線；秒表【方法和步驟】1.在體蛙心的制備取蛙一只，破壞腦、脊髓后，背位固定于蛙板上，左手持鑷子提起胸骨后端的皮膚剪一小口，然后向左、右兩側(cè)鎖骨外側(cè)剪開皮膚。把游離的皮膚掀向頭端。再用鑷子提起胸骨后方的腹肌，剪開一小口后，剪刀伸人胸腔（勿傷與心臟和血管），沿皮膚切口剪開胸壁，剪斷左右烏喙骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形，充分暴露心臟部位。持眼科鑷提起心包膜并用眼科剪剪開心包膜，暴露心臟。2.觀察心臟的結(jié)構(gòu)心室右主動脈左主動脈動脈圓錐新房右肝靜脈心房心室靜脈竇左肝靜脈前腔靜脈后腔靜脈圖9.1-1蛙心臟結(jié)構(gòu)心臟腹面觀心臟背面觀自心臟腹面可觀察到心室、心房，動脈球和主動脈（圖9.1-1心室右主動脈左主動脈動脈圓錐新房右肝靜脈心房心室靜脈竇左肝靜脈前腔靜脈后腔靜脈圖9.1-1蛙心臟結(jié)構(gòu)心臟腹面觀心臟背面觀3．觀察心搏頻率用蛙心夾提起心臟，從心臟背面觀察靜脈竇、心房和心室的跳動與心搏順序。并記錄每分鐘搏動次數(shù)。4．斯氏第一結(jié)扎圖9.1-2斯氏結(jié)扎部位分離主動脈干基部，在其下穿黑、白兩條線，將心臟翻向頭端，用黑線在心房和靜脈竇之間（竇房溝）結(jié)扎，此結(jié)扎稱為斯氏第一結(jié)扎（圖9.1-2a)，以阻斷靜脈竇與心房之間的傳導(dǎo)。此時心房、心室搏動均停止，但靜脈竇仍搏動，記錄其頻率有無變化？如心房和心室出現(xiàn)搏動（復(fù)跳）時圖9.1-2斯氏結(jié)扎部位斯氏第二結(jié)扎再用白線在心房和心室之間（房室溝）結(jié)扎，此結(jié)扎稱為斯氏第二結(jié)扎（圖9.1-2b)。此時心室搏動停止，但心房和靜脈竇仍然搏動，記錄各自的跳動頻率。經(jīng)過較長時間的間歇，如心室出現(xiàn)復(fù)跳，記錄其間歇時間？記錄心臟各部位跳動頻率，有何變化？為什么？【注意事項】1.經(jīng)常用任氏液潤濕心臟，避免其干燥。2．如蛙心活動減弱時，可先在溫任氏液中浸泡數(shù)分鐘。3.結(jié)扎部位要準(zhǔn)確地落在相鄰部位的交界處，結(jié)扎時用力逐漸增加，直到心房或心室搏動停止。3．斯氏第一結(jié)扎后，若心室長時間不恢復(fù)跳動，進行斯氏第二結(jié)扎時則可能使心室恢復(fù)跳動?！緦嶒灲Y(jié)果】記錄并分析各項觀察結(jié)果。頻率：次/min頻率：次/min實驗項目正常第一扎第二扎靜脈竇心房心室【思考題】1．分析蛙心興奮的正常起搏點與傳導(dǎo)方向，各部分自律性的高低。2．何謂斯氏第一結(jié)扎和第二結(jié)扎？蛙心進行第一結(jié)扎之后為何出現(xiàn)較長時間的停搏？兩次斯氏結(jié)扎之后，靜脈竇、心房和心室搏動頻率有何不同，為什么？3．如何證明蛙類心臟的起搏點是靜脈竇？實驗9.2蛙心的期前收縮與代償間歇；【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙手術(shù)器械；生物信號采集系統(tǒng)；張力換能器；雙極刺激電極；蛙板；蛙釘；滴管；任氏液；黑白細絲線【方法和步驟】1．在體蛙心的制備：見實驗9.1。2.連接實驗裝置于心舒張時迅速夾住蛙心尖（心收縮期夾取容易損傷蛙心），將蛙心夾上的細線與張力換能器相連，換能器插頭插入橋式放大器，其輸出插頭插入Powerlab的pod輸入通道。將雙極刺激電極與心室接觸良好并固定穩(wěn)妥后，與Powerlab的刺激輸出連接（圖9.2-1）。圖9.2-1在體蛙心肌收縮實驗儀器連接方式張力換能器刺激電極Powerlab橋式放大器打開計算機，進入“LabTutor實驗”，選擇“蛙心”，下拉實驗菜單圖9.2-1在體蛙心肌收縮實驗儀器連接方式張力換能器刺激電極Powerlab橋式放大器參考實驗步驟：3．實驗項目(1)描記正常心搏曲線，觀察曲線的收縮相和舒張相。圖9.2-2期前收縮與代償間歇E．期前收縮；P．代償間隙；a和圖9.2-2期前收縮與代償間歇E．期前收縮；P．代償間隙；a和b：刺激落在有效不應(yīng)期，無反應(yīng)；c和d：刺激都落在相對不應(yīng)期，產(chǎn)生期前收縮與代償間隙(3)用同等強度的單個閾上刺激在心室舒張早期之后的不同時段刺激心室，觀察有無期前收縮出現(xiàn)。(4)以上刺激若能引起期前收縮，觀察其后有無代償間歇出現(xiàn)（圖9.2-2P）？(5)短時間內(nèi)改變刺激強度在心室舒張早期之后的同一時段，刺激心室，觀察心室收縮的幅度是否發(fā)生變化？(6)用連續(xù)的刺激刺激心室肌，觀察心臟是否會出現(xiàn)強直收縮？【注意事項】1．經(jīng)常給心臟滴加任氏液，以保持心臟適宜的環(huán)境。2．張力傳感器與蛙心夾之間的細線應(yīng)保持適宜的緊張度。3．雙極刺激電極與心室接觸良好的同時，還應(yīng)盡量不讓其阻礙心臟的自發(fā)收縮。4．實驗項目(5)要嚴(yán)格掌握刺激時間和時段。5．夾蛙心夾時，不宜夾的面積太大，以免影響或損傷心室，而夾的面積太小，又容易滑脫?！緦嶒灲Y(jié)果】1．剪貼記錄曲線，做好標(biāo)記，并分析討論。2．如果以刺激強度為橫坐標(biāo)，心臟收縮幅度為縱坐標(biāo)，作心臟收縮強度曲線，該曲線應(yīng)有何特點？為什么？【思考題】1．何謂期前收縮和代償間隙？心肌有較長的不應(yīng)期有何生理意義？2．代償間隙是如何產(chǎn)生的，期前收縮之后一定有代償間隙嗎？實驗9.3牛蛙離體心臟灌流【材料與設(shè)備】牛蛙；蛙手術(shù)器械；蛙心夾；蛙心套管；生物信號采集系統(tǒng)；蛙板；滴管；試管夾；黑白細絲線；任氏液；