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文檔簡介
BCA法測蛋白的學習教案第1頁/共12頁【原理】:堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。
第2頁/共12頁【主要特點】1.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。2.檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬氏亮藍。3.快速:45分鐘內完成測定。4.準確靈敏,線性范圍廣。5.經濟實用:在微孔板中進行測定,可大大節(jié)約樣品和試劑用量。
第3頁/共12頁【實驗器材與試劑】1.器材:
分光光度計、恒溫水浴鍋。2.試劑:BCA試劑盒;待測樣品。第4頁/共12頁【操作步驟】1.配制BCA工作液:根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。
2.稀釋標準品:用生理鹽水稀釋蛋白標準品BSA。實驗步驟第5頁/共12頁實驗步驟200第6頁/共12頁蛋白液稀釋第7頁/共12頁第8頁/共12頁5、按上表,將稀釋好的A-GBSA標準品和待測蛋白樣品(原液,1:10,1:100稀釋液)各150μl分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。6、向每個試管中各加入3mlBCA工作液,充分混勻,37℃水浴中孵育30分鐘,將各管冷卻至室溫,須在3-5分鐘內完成檢測。7、用分光光度計在562nm處,測定每個樣品及BSA標準品的吸光值,同時做好記錄。8、繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。第9頁/共12頁【注意事項】:
1.標本的充分混勻。
2.要得到更為精確的蛋白濃度結果,每個蛋白樣品均需做復孔,每次均應做標準曲線。
3.使用水浴箱溫育時,應注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測結果。第10
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