金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!概況金黃色葡萄球菌(StaphyloccocusaureusRosenbach)是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），可引起多種嚴(yán)重感染。有“嗜肉菌"的別稱。

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無(wú)芽胞、鞭毛，大多數(shù)無(wú)莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性。

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血?？僧a(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗(yàn)、VP試驗(yàn)多為陽(yáng)性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!Baird-Parker瓊脂平板金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶而可見無(wú)混濁帶和透明圈的非典型菌落。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!金黃色葡萄球菌的重要鑒定-

血漿凝固酶試驗(yàn)

試驗(yàn)原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著于細(xì)菌表面，產(chǎn)生凝固。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細(xì)胞壁結(jié)合的凝固酶，為結(jié)合凝固酶；另一種是菌細(xì)胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!同時(shí)以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對(duì)照。結(jié)果如可疑，挑取營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復(fù)實(shí)驗(yàn)。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!法:平板計(jì)數(shù)法金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!典型菌落計(jì)數(shù)與計(jì)算公式的應(yīng)用計(jì)數(shù)范圍要求：選擇合計(jì)菌落數(shù)在20~200的平板，計(jì)數(shù)典型菌落。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!公式二的使用范圍：平板菌落數(shù)均在20cfu～200cfu之間。N=∑T/1.1d∑T：兩個(gè)稀釋度平板上確認(rèn)的金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)之和；d：稀釋因子(稀釋度)。公式引用于ISO6888-1:1999(E)公式二金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!第二法MPN法金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!結(jié)果報(bào)告計(jì)算血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性菌落對(duì)應(yīng)的管數(shù)，查MPN檢索表。結(jié)果報(bào)告：MPN/g或MPN/mL金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!適用范圍PetrifilmTM測(cè)試片法適用于肉及其制品，奶制品等。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!金黃色葡萄球菌PetrifilmTM測(cè)試片，含具有顯色功能、經(jīng)改良的Baird-Parker培養(yǎng)基，對(duì)金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)有很強(qiáng)的選擇。金黃色葡萄球菌在測(cè)試片上生成為暗紫紅色的菌落，可以直接完成鑒定和計(jì)數(shù)。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!培養(yǎng)特性：易培養(yǎng)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。需氧或兼性厭氧。最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4。耐鹽性強(qiáng)，在含10～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長(zhǎng)，可用于篩選菌種。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落?？僧a(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培養(yǎng)中。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!金黃色葡萄球菌的檢測(cè)程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯36±1℃Baird-Parker平板，血平板涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗(yàn)報(bào)告血平板18~24h，Baird-Parker平板18~24h或45~48h。BHI肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面36±1℃18~24h金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時(shí)也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!血漿凝固酶試驗(yàn)挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個(gè)或以上，分別接種到5mLBHI和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽(yáng)性結(jié)果。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!結(jié)果報(bào)告如血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性，可判定為金黃色葡萄球菌。報(bào)告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!檢驗(yàn)程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液10倍稀釋選擇三個(gè)連續(xù)的適宜濃度的樣品勻液，接種Baird-Parker平板計(jì)數(shù)及血漿酶試驗(yàn)報(bào)告36±1℃45~48h金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!公式一T=AB/CdT:樣品中金黃色葡萄球菌落數(shù)；A:某一稀釋度典型菌落的總數(shù)；B:某一稀釋度血漿凝固酶陽(yáng)性的菌落數(shù)；C:某一稀釋度用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)；d:某一稀釋度。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!結(jié)果報(bào)告單位：cfu/g或者cfu/mL；若T或者N為0，報(bào)告<1d-1

cfu/mL(g)。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!MPN檢驗(yàn)程序25g(mL)檢樣+225mL稀釋液，勻質(zhì)10倍系列稀釋選擇3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，吸1mL樣液，每稀釋度各接種3管胰酪胨大豆肉湯，樣品的最高稀釋度，能達(dá)到獲得陰性終點(diǎn)36±1℃45~48h接種Baird-Parker平板血漿凝固酶試驗(yàn)45~48h36±1℃查MPN表報(bào)告結(jié)果金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!第三法PetrifilmTM測(cè)試片法金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)與計(jì)數(shù)共26頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!PetrifilmTM測(cè)試片法檢驗(yàn)程序檢樣25g(mL)+225mL稀釋，勻質(zhì)，10倍系列稀釋選擇適宜稀釋度的樣品勻液，各取1mL分別加入紙片36±1℃24±2h判讀沒有