基因工程的原理及技術(shù)終稿

（優(yōu)選）基因工程的原理及技術(shù)終稿當(dāng)前1頁，總共158頁?！拘隆繚h水丑生（侯偉新疆烏魯木齊新世紀(jì)外國語學(xué)校）組織者：【川】飛鴻翼（洪翼四川省瀘州市納溪中學(xué)）【魯】暖風(fēng)（王文芳山東省陽谷第三中學(xué)）

【魯】掌上的沙（袁慶軍山東鄆城高級中學(xué)）【渝】足教（王永洪重慶市大足中學(xué)）

【粵】handsome（賀海生廣東汕尾陸豐龍山中學(xué)）【陜】一哲（楊明輝陜西寶雞市天王高中）當(dāng)前2頁，總共158頁。基因工程的原理及技術(shù)魯【夢】（孟祥偉山東昌樂及第中學(xué)）當(dāng)前3頁，總共158頁。（2012山東）35、（8分）【生物—現(xiàn)代生物科技專題】毛角蛋白II型中間絲（KIFII）基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFII基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖（1）過程①中最常用的運載工具是________，所需要的酶是限制酶和_____________。（2）在過程②中，用________________________

處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養(yǎng)過程中，將成纖維細胞置于5%CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是________________。質(zhì)粒DNA連接酶胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）維持培養(yǎng)基（液）的PH“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前4頁，總共158頁。（3）在過程③中，用______________________處理以獲得更多的卵（母）細胞。成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行_______處理。（4）從重組細胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是______________。在胚胎移植前，通過____________技術(shù)可獲得較多胚胎。促性腺激素（或促濾泡素，孕馬血清）；

去核(早期)胚胎培養(yǎng)胚胎分割“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前5頁，總共158頁?！窘馕觥渴炀氄莆栈蚬こ毯团咛スこ痰幕局R就能解答本題.（1）運載工具（體）包括質(zhì)粒、噬菌體衍生物及動植物病毒,其中質(zhì)粒是主要運載體;所需工具酶是限制酶和DNA連接酶。（2）分散皮膚組織塊成單個細胞使用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）。在動物細胞培養(yǎng)過程中，CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH的相對穩(wěn)定。（3）要得到更多的卵（母）細胞需用促性腺激素進行超數(shù)排卵處理；成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要了來自供體核。（4）把重組細胞培養(yǎng)到早期胚胎叫早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)；在胚胎移植前，通過胚胎分割技術(shù)可獲得較多胚胎。當(dāng)前6頁，總共158頁。（2012天津）7.（13分）生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據(jù)圖回答：（1）過程①酶作用的部位是_____________鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA，過程②酶作用的部位是___________鍵。（2）①、②兩過程利用了酶的__________特性?！窘馕觥浚?）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。（2）①②過程利用了各種酶催化一種或一類化學(xué)反應(yīng)的特性，即專一性。肽鍵磷酸二酯鍵專一“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前7頁，總共158頁。（3）若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過程③的測序結(jié)果與__________________酶的識別序列進行對比，以確定選用何種酶。（4）如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合，則其識別、結(jié)合DNA序列位基因的_________________________?！窘馕觥浚?）DNA要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割，再與質(zhì)粒重組。（4）RNA聚合酶識別和結(jié)合在基因的啟動子上，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。啟動子（或轉(zhuǎn)錄起始區(qū)）限制性核酸內(nèi)切酶“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前8頁，總共158頁。【解析】（5）蛋白酶能特異性的酶解蛋白質(zhì)，分子雜交手段也是利用各物質(zhì)分子結(jié)合的特異性，抑制成熟基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA與催化成熟酶基因的mRNA堿基互補結(jié)合，也具有特異性，光和色素易溶于有機溶劑，與酒精并不是特異性的溶解，所以選ACD。（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有（多選）A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNAB.用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C．通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進行染色體定位D．將抑制成熟基因?qū)敕?，其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實成熟。ACD當(dāng)前9頁，總共158頁。（2012天津）8.（20分）黃曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進入動物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。某些微生物能表達AFB1解毒酶．將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性。(1)AFB1屬于________類致癌因子。(2)AFB1能結(jié)合在DNA的G上．使該位點受損傷變?yōu)镚'，在DNA復(fù)制中，G'會與A配對。現(xiàn)有受損傷部位的序列為，經(jīng)兩次復(fù)制后，該序列突變?yōu)開_____________。化學(xué)

當(dāng)前10頁，總共158頁?！窘馕觥奎S曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進入動物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。某些微生物能表達AFB1解毒酶．將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性。(1)黃曲霉毒素B1（AFB1）是化學(xué)物質(zhì)，AFB1屬于化學(xué)類致癌因子。

(2)AFB1能結(jié)合在DNA的G上．使該位點受損傷變?yōu)镚‘，在DNA復(fù)制中，G’會與A配對?，F(xiàn)有受損傷部位的序列為經(jīng)兩次復(fù)制后，該序列突變?yōu)?/p>

當(dāng)前11頁，總共158頁。(3）下圖為采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB1解毒酶的流程圖據(jù)圖回答問題：①在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB1解毒酶基因的菌株．經(jīng)測定．甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶：乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶．過程l應(yīng)選擇____________菌液的細胞提取總RNA，理由是___________________________________________________________________________________________________________________

②過程Ⅱ中，根據(jù)圖示，可以看出與引物結(jié)合的模版是________________________________________

③檢測酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，應(yīng)采用_____________________方法。甲甲菌液細胞的AFB1基因的表達已轉(zhuǎn)錄形成mRNA，而在已菌夜細胞中該基因未轉(zhuǎn)錄AFB1解毒酶基因的cDNA抗原-抗體雜交“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前12頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）①在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB1解毒酶基因的菌株．經(jīng)測定．甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶：乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶．過程l應(yīng)選擇甲菌液的細胞提取總RNA，理由是因為甲菌液細胞含解毒酶，意味著完成了基因的表達，所以應(yīng)選擇甲菌液的細胞提取總RNA②過程Ⅱ中，根據(jù)圖示，可以看出與引物結(jié)合的模版是cDNA.③檢測酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，檢測對象為蛋白質(zhì)，應(yīng)采用抗原-抗體雜交方法。當(dāng)前13頁，總共158頁。(4）選取不含AFB1的飼料和某種實驗動物為材料，探究該AFB1解毒酶在飼料中的解毒效果。實驗設(shè)計及測定結(jié)果見下表：[來源:中國教育出版網(wǎng)]據(jù)表回答問題： ①本實驗的兩個自變量，分別為________________________。②本實驗中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的對照組是_________________。③經(jīng)測定，某污染飼料中AFB1含量為100μg/kg，則每千克飼料應(yīng)添加______克AFB1解毒酶．解毒效果最好．同時節(jié)的了成本。AFB1的添加量和AFB1解毒酶的添加量B組（或B組+A組）5“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前14頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）①本實驗的兩個自變量，分別為AFB1的有無和AFB1解毒酶的含量。②本實驗中．反映AFB1解毒酶的解毒效果的對照組是B組。③經(jīng)測定，某污染飼料中AFB1含量為100μg/kg，則每千克飼料應(yīng)添加5克AFB1解毒酶．AFB1的殘留量最少，解毒效果最好．繼續(xù)添加AFB1解毒酶解解毒效果不變，因此節(jié)約了成本。當(dāng)前15頁，總共158頁。（5）采用蛋白質(zhì)工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高每的活性出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的___________________。【解析】（5）采用蛋白質(zhì)工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列。脫氧核苷酸序列當(dāng)前16頁，總共158頁。（2012浙江）6.天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍玫瑰，下列操作正確的是()A.提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的DNA，再擴增基因BB.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細胞A當(dāng)前17頁，總共158頁。【解析】提取矮牽牛藍色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫中的信息進行篩選對比即可，不需要用限制酶進行切割，B錯誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯誤；目的基因需要和運載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進行感染，而不是大腸桿菌，D錯誤。當(dāng)前18頁，總共158頁。（2012新課標(biāo)卷）40、[生物—選修3現(xiàn)代生物科技專題]（15分）根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：（1）限制性內(nèi)切酶切割ＤＮＡ分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有

和

。黏性末端平末端（2）質(zhì)粒運載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點是

。切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即

DNA連接酶和

DNA連接酶。大腸桿菌

T4當(dāng)前19頁，總共158頁。（5）基因工程中除質(zhì)粒外，

和

也可作為運載體。（4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是

，產(chǎn)物是

。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用

技術(shù)。（6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是

mRNA（或RNA）

cDNA（或DNA）噬菌體未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱

PCR動植物病毒等當(dāng)前20頁，總共158頁。(六)回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞和表達的問題。(10分)

（2012上海）55．如圖18所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的E-F區(qū)域(0.2kb)，那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2_______。

A．既能被E也能被F切開B．能被E但不能被F切開

C．既不能被E也不能被F切開D．能被F但不能被E切開A“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前21頁，總共158頁?！窘馕觥坑孟拗泼笍幕蚪MDNA上切下目的基因，并取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的E-F區(qū)域(0.2kb)，用DNA連接酶連接后形成重組質(zhì)粒，則在重組質(zhì)粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位點，形成的重組質(zhì)粒pZHZ2既能被E也能被F切開，故本題選A?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前22頁，總共158頁。（2012上海）56．已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點距限制酶E切割位點0．8kb，限制酶H切割位點距限制酶F切割位點O．5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品，據(jù)表4所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為

kb；并將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點標(biāo)注在圖19中。1.2當(dāng)前23頁，總共158頁?！窘馕觥扛鶕?jù)題中信息，原來質(zhì)粒長度為3.7kb切去EF之間的還有3.5kb，插入目的基因后構(gòu)成重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒長度為1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，可推導(dǎo)出目的基因長度為1.2kb。重組質(zhì)粒中G的切割位點距E的切割位點0.8kb，單獨用限制酶G切割后產(chǎn)生1.6kb和3.1kb的兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中除了圖中標(biāo)示出來的G酶識別位點外，還有一個G酶識別位點；H的酶切位點距F0.5kb，用H單獨酶切產(chǎn)生1.2kb和3.5kb兩種片段，說明在重組質(zhì)粒中含有另外一個H的酶切位點，根據(jù)題中信息提示“將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H的識別位點標(biāo)注在圖19中”，可確定在EF之間分別含有G和H的一個識別位點?？蓴喽℅的識別位點，在舉例E點右側(cè)0.8kb處，H的識別位點在距F左側(cè)0.7kb處。當(dāng)前24頁，總共158頁。（2012上海）57．若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入至山羊的______細胞中。若pZHZ2進入細胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是。受精卵【解析】將目的基因?qū)雱游锛毎?，通常以受精卵作為受體細胞，當(dāng)受精卵發(fā)育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表達產(chǎn)物。重組質(zhì)粒插入在一條染色體DNA上，可通過雌雄轉(zhuǎn)基因山羊雜交的方法來獲取轉(zhuǎn)基因純合子山羊。轉(zhuǎn)基因山羊間交配“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前25頁，總共158頁。（2012廣東）28．（16分）子葉黃色（Y，野生型）和綠色（y，突變型）是孟德爾研究的豌豆相對性狀之一。野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色。(1)在黑暗條件下，野生型和突變型豌豆的葉片總?cè)~綠素含量的變化見圖10。其中，反映突變型豌豆葉片總?cè)~綠素含量變化的曲線是______。A當(dāng)前26頁，總共158頁。（2）Y基因和y基因的翻譯產(chǎn)物分別是SGRY蛋白和SGRy蛋白，其部分氨基酸序列見圖11。據(jù)圖11推測，Y基因突變?yōu)閥基因的原因是發(fā)生了堿基對的_____和_______。進一步研究發(fā)現(xiàn)，SGRY蛋白和SGRy蛋白都能進入葉綠體?？赏茰y，位點_______的突變導(dǎo)致了該蛋白的功能異常，從而使該蛋白調(diào)控葉綠素降解的能力減弱，最終使突變型豌豆子葉和葉片維持“常綠”。（2012廣東）28．（16分）子葉黃色（Y，野生型）和綠色（y，突變型）是孟德爾研究的豌豆相對性狀之一。野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色。替換增加③“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前27頁，總共158頁。（3）水稻Y基因發(fā)生突變，也出現(xiàn)了類似的“常綠”突變植株y2，其葉片衰老后仍為綠色。為驗證水稻Y基因的功能，設(shè)計了以下實驗，請完善。（一）培育轉(zhuǎn)基因植株：Ⅰ．植株甲：用含有空載體的農(nóng)桿菌感染__________的細胞，培育并獲得純合植株。Ⅱ．植株乙：______________________________，培育并獲得含有目的基因的純合植株。（2012廣東）

28．（16分）子葉黃色（Y，野生型）和綠色（y，突變型）是孟德爾研究的豌豆相對性狀之一。野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色。突變植株y2用含有Y基因的農(nóng)桿菌感染純合突變植株y2

當(dāng)前28頁，總共158頁。（3）水稻Y基因發(fā)生突變，也出現(xiàn)了類似的“常綠”突變植株y2，其葉片衰老后仍為綠色。為驗證水稻Y基因的功能，設(shè)計了以下實驗，請完善。（二）預(yù)測轉(zhuǎn)基因植株的表現(xiàn)型：植株甲：________維持“常綠”；植株乙：________________。（三）推測結(jié)論：__________________________。（2012廣東）28．（16分）子葉黃色（Y，野生型）和綠色（y，突變型）是孟德爾研究的豌豆相對性狀之一。野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色。能不能維持“常綠”Y基因能使子葉由綠色變?yōu)辄S色當(dāng)前29頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）根據(jù)題干所給信息“野生型豌豆成熟后，子葉由綠色變?yōu)辄S色”，可推測出野生型豌豆成熟后，子葉發(fā)育成的葉片中葉綠素含量降低。分析圖10，B從第六天開始總?cè)~綠素含量明顯下降，因此B代表野生型豌豆，A為突變型豌豆。（2）根據(jù)圖11可以看出，突變型的SGRy蛋白和野生型的SGRY有3處變異，①處氨基酸由T變成S，②處氨基酸由N變成K，可以確定是基因相應(yīng)的堿基對發(fā)生了替換，③處多了一個氨基酸，所以可以確定是發(fā)生了堿基對的增添；從圖11中可以看出SGRY蛋白的第12和38個氨基酸所在的區(qū)域的功能是引導(dǎo)該蛋白進入葉綠體，根據(jù)題意，SGRy和SGRY都能進入葉綠體，說明①、②處的變異沒有改變其功能；所以突變型的SGRy蛋白功能的改變就是由③處變異引起的。當(dāng)前30頁，總共158頁?！窘馕觥?/p>

（3）本實驗通過具體情境考查對照實驗設(shè)計能力。欲通過轉(zhuǎn)基因?qū)嶒烌炞CY基因“能使子葉由綠色變?yōu)辄S色”的功能，首先應(yīng)培育純合的常綠突變植株y2，然后用含有Y基因的農(nóng)桿菌感染純合的常綠突變植株y2，培育出含有目的基因的純合植株觀察其葉片顏色變化。為了排除農(nóng)桿菌感染對植株的影響，應(yīng)用含有空載體的農(nóng)桿菌感染常綠突變植株y2作為對照。當(dāng)前31頁，總共158頁。（2012江蘇）32.（9分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由

連接。(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是

末端，其產(chǎn)物長度為

。脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖

平

537bp、790bp、661bp

“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前32頁，總共158頁。（2012江蘇）32.（9分）圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，產(chǎn)物中共有

種不同長度的DNA片段。4

“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前33頁，總共158頁。(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是

。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加

的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是

。BamHI

抗生素B

同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈接當(dāng)前34頁，總共158頁。【解析】（1）DNA單鏈中相鄰兩個堿基之間通過“脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖”連接。（2）SmaI識別的序列為GGGCCC，切割后會產(chǎn)生平末端；圖1所示的DNA分子中含有兩個SmaI的識別位點，第一個識別位點在左端534bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基對的位置，從這兩個位點切割后產(chǎn)生的DNA片段長度分別為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度分別為537bp、790bp和661bp。（3）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段。當(dāng)前35頁，總共158頁。（4）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamHI和識別序列為GATC的MboI，若使用MboI會同時破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達。當(dāng)前36頁，總共158頁。（2012福建）32．現(xiàn)代生物科技專題肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘毎麑崿F(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖１。（１）進行過程①時，需用

__________酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為

。限制性核酸內(nèi)切酶（或限制）_啟動子“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前37頁，總共158頁。（2012福建）

32．現(xiàn)代生物科技專題肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘毎麑嶒灡磉_，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖１。（２）進行過程②時，需用

酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。胰蛋白“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前38頁，總共158頁。（３）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖２。據(jù)圖分析，可從細胞中提取

進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞

（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。RNARAS蛋白“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前39頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）過程①表示基因表達載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點，RNA聚合酶結(jié)合到該位點，可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程。（2）過程②表示動物細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進行傳代培養(yǎng)。（3）判斷目的基因是否在受體細胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來進行，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導(dǎo)致細胞中的RAS蛋白質(zhì)含量減少進而導(dǎo)致癌細胞受抑制。當(dāng)前40頁，總共158頁。（2012安徽）31．（24分）甲型血友病是由X染色體上的隱性基因?qū)е碌倪z傳?。℉對h為顯性）。圖1中兩個家系都有血友病發(fā)病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一個性染色體組成是XXY的非血友病兒子（IV2），家系中的其他成員性染色體組成均正常?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。（1）根據(jù)圖1，

（填“能”或“不能”）確定IV2兩條X染色體的來源；III4與正常女子結(jié)婚，推斷其女兒患血友病的概率是

。0不能“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前41頁，總共158頁。（2）兩個家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ（簡稱F8，即抗血友病球蛋白）基因堿基對缺失所致。為探明IV2的病因，對家系的第Ⅲ、IV代成員F8基因的特異片段進行了PCR擴增，其產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2所示，結(jié)合圖1，推斷Ⅲ3的基因型是

。請用圖解和必要的文字說明IV2非血友病XXY的形成原因。XHXh

“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前42頁，總共158頁?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。圖解如下：在Ⅲ3形成卵細胞過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細胞同一極，形成XHXH的細胞，XHXH卵細胞與正常精子結(jié)合形成XHXHY受精卵當(dāng)前43頁，總共158頁。（3）現(xiàn)III3再次懷孕，產(chǎn)前診斷顯示胎兒（IV3）細胞的染色體為46，XY；F8基因的PCR檢測結(jié)果如圖2所示。由此建議III3

?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。（4）補給F8可治療甲型血友病。采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長時間，其目的是

；若F8比某些雜蛋白先收集到，說明F8的相對分子質(zhì)量較這些雜蛋白

。洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密終止妊娠大“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前44頁，總共158頁。（6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細胞核注入

，構(gòu)成重組胚胎進行繁殖。（5）利用轉(zhuǎn)基因豬乳腺生物反應(yīng)器可生產(chǎn)F8。要使乳腺細胞合成F8，構(gòu)建表達載體時，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的

等調(diào)控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒有

。內(nèi)含子啟動子去核的卵母細胞“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前45頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）因為Ⅳ2的染色體組成可能是XHXH，也可能是XHXhY，所以不能確定，Ⅲ4的基因型為XHY，所以后代女性中沒有患病個體。（2）由圖可知第一條帶是顯性，第二條帶是隱性，所以Ⅲ3基因型為XHXh，圖解如下：在III3形成卵細胞過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細胞的同一極，形成XHXH卵細胞，XHXH卵細胞與正常精子結(jié)合形成XHXHY受精卵?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前46頁，總共158頁。說明：Ⅲ2產(chǎn)生正常的Y精子和Ⅲ3產(chǎn)生異常的卵細胞XHXh結(jié)合而成XHXhY“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前47頁，總共158頁。說明：Ⅲ2產(chǎn)生異常的XhY精子和Ⅲ3產(chǎn)生正常的卵細胞XH結(jié)合而成XHXhY或或說明：Ⅲ2產(chǎn)生異常的XhY精子和Ⅲ3產(chǎn)生正常的卵細胞XH結(jié)合而成XHXhY或或說明：Ⅲ2產(chǎn)生異常的XhY精子和Ⅲ3產(chǎn)生正常的卵細胞XH結(jié)合而成XHXhY或或說明：Ⅲ2產(chǎn)生異常的XhY精子和Ⅲ3產(chǎn)生正常的卵細胞XH結(jié)合而成XHXhY或說明：Ⅲ2產(chǎn)生正常的Y精子和Ⅲ3產(chǎn)生異常的卵細胞XHXh結(jié)合而成XHXhY說明：Ⅲ2產(chǎn)生正常的Y精子和Ⅲ3產(chǎn)生異常的卵細胞XHXh結(jié)合而成XHXhY“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前48頁，總共158頁。【解析】（3）由題可知，IV3是血友病患者，所以建議III3終止妊娠。（4）采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長時間，其目的是洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密；若F8比某些雜蛋白先收集到，說明F8的相對分子質(zhì)量較這些雜蛋白較大。（5）要使乳腺細胞合成F8，構(gòu)建表達載體時，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的啟動子和終止子等調(diào)控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒有內(nèi)含子。（6）為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細胞核注入去核卵細胞，構(gòu)成重組胚胎進行繁殖?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前49頁，總共158頁。（2012北京）5．高中生物學(xué)實驗中，在接種時不進行嚴(yán)格無菌操作對實驗結(jié)果影響最大的一項是（）A．將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中B．將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上C．將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上D．將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上【解析】植物組織培養(yǎng)中的外植體必須在嚴(yán)格的無菌環(huán)境中進行培養(yǎng)，而且操作的各環(huán)節(jié)都要注意嚴(yán)格滅菌，必須無菌操作，C對；葡萄酒的制作原理是利用酵母菌無氧發(fā)酵時產(chǎn)生酒精，在無氧條件下，大部分微生物都不能生存，隨著發(fā)酵的進行，酒精度增大，也有殺菌的作用；而制作腐乳時，主要是將毛霉等微生物接種在豆腐上，此過程的加鹽、加鹵湯等操作均有一定的殺菌作用；選擇培養(yǎng)基只能允許目的菌生長，會抑制其他雜菌生長，因此不是嚴(yán)格無菌操作時A、B、D選項的情況下比C選項的受影響要小。C當(dāng)前50頁，總共158頁。（2012海南）31.【生物—選修3：現(xiàn)代生物科技專題】（15分）已知甲種農(nóng)作物因受到乙種昆蟲危害而減產(chǎn)，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質(zhì)后死亡。因此，可將丙種蛋白質(zhì)基因轉(zhuǎn)入到甲種農(nóng)作物體內(nèi)，使甲種農(nóng)作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力?；卮鹣铝袉栴}：（1）為了獲得丙種蛋白質(zhì)的基因，在已知丙種蛋白質(zhì)氨基酸序列的基礎(chǔ)上，推測出丙種蛋白質(zhì)的_______序列，據(jù)此可利用________方法合成目的基因。獲得丙種蛋白質(zhì)的基因還可用_______、____________方法。（2）在利用上述丙中蛋白質(zhì)基因和質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，常需使用__________酶和__________。PCR化學(xué)基因基因文庫DNA連接酶限制當(dāng)前51頁，總共158頁。（2012海南）31.【生物—選修3：現(xiàn)代生物科技專題】（15分）已知甲種農(nóng)作物因受到乙種昆蟲危害而減產(chǎn)，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質(zhì)后死亡。因此，可將丙種蛋白質(zhì)基因轉(zhuǎn)入到甲種農(nóng)作物體內(nèi)，使甲種農(nóng)作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力?；卮鹣铝袉栴}：（3）將含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與甲種農(nóng)作物的愈傷組織共培養(yǎng)，篩選出含有丙種蛋白質(zhì)的愈傷組織，由該愈傷組織培養(yǎng)成的再生植株可抵抗_____________的危害。（4）若用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，則該植株的種子_________（填“含有”或“不含”）丙種蛋白質(zhì)基因。乙種昆蟲不含當(dāng)前52頁，總共158頁?！窘馕觥浚?）在已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列的情況下，可根據(jù)氨基酸和堿基的對應(yīng)關(guān)系，推出合成該蛋白質(zhì)的基因序列，然后用DNA合成儀通過化學(xué)方法來合成目的基因。此外也可以從基因文庫中獲取目的基因，也可通過PCR方法獲取目的基因。（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，需要用限制酶將運載體切開，并用DNA連接酶將目的基因連接到運載體上，從而構(gòu)建基因表達載體。（3）愈傷組織中含有丙蛋白，說明丙蛋白的基因得到了表達，在培養(yǎng)成的植株體內(nèi)也含有丙蛋白，乙昆蟲食用丙蛋白后會死亡，則該植株可抵抗乙昆蟲的危害。（4）直接用含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌直接感染甲種農(nóng)作物植株葉片傷口，僅僅在該葉片內(nèi)部分細胞中能合成丙蛋白，該植株的種子和其他的營養(yǎng)器官均不含有重組質(zhì)粒，也就不含有丙中蛋白質(zhì)的基因。當(dāng)前53頁，總共158頁。（2011重慶）31.（16分）擬南芥是遺傳學(xué)研究的模式植物，某突變體可用于驗證相關(guān)的基因的功能。野生型擬南芥的種皮為深褐色（TT），某突變體的種皮為黃色（tt）,下圖是利用該突變體驗證油菜種皮顏色基因(Tn)功能的流程示意圖?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前54頁，總共158頁。（1）與擬南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA變?yōu)椋粒牵?，其末端序列成為“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＣＵＣＵＡＡ”，則Tn比ｔ多編碼

個氨基酸（起始密碼子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ為終止密碼子）。（2）圖中①應(yīng)為

。若②不能在含抗生素Kan的培養(yǎng)基上生長，則原因是

。若③的種皮顏色為

，則說明油菜Tn基因與擬南芥T基因的功能相同。2重組質(zhì)粒

重組質(zhì)粒未導(dǎo)入

深褐色

當(dāng)前55頁，總共158頁。（3）假設(shè)該油菜Tn基因連接到擬南芥染色體并替換其中一個t基因，則③中進行減數(shù)分裂的細胞在聯(lián)會時的基因型為_____；同時，③的葉片卷曲（葉片正常對葉片卷曲為顯性，且與種皮性狀獨立遺傳），用它與種皮深褐色、葉片正常的雙雜合體擬南芥雜交，其后代中所占比列最小的個體表現(xiàn)______________?、鄣那o尖培養(yǎng)成16顆植珠，其性狀通常________（填“不變”或“改變”）。（4）所得的轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥______（填“是”或者“不是”）同一個物種。TnTntt

黃色正常、黃色卷曲

不變

是當(dāng)前56頁，總共158頁。“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記?！窘馕觥客ㄟ^對基因工程和遺傳知識的相結(jié)合來考察學(xué)生對該部分知識的掌握，屬中檔題，較難。油菜Tn基因的mRNA中UGA變?yōu)锳GA，而末端序列為“—AGCGCGACCAGACUCUAA—”，在擬南芥中的UGA本是終止密碼子不編碼氨基酸，而在油菜中變?yōu)锳GA可編碼一個氨基酸，而CUC還可編碼一個氨基酸，直到UAA終止密碼子不編碼氨基酸。假設(shè)油菜Tn基因連接到擬南芥染色體并替換其是一個t基因，注意擬南芥是指實驗有的突變體tt，所以③轉(zhuǎn)基因擬南芥基因型為Tnt，減數(shù)分裂聯(lián)會時形成四分體是由于染色體進行了復(fù)制，基因也進行了復(fù)制，因而基因型為TnTntt。設(shè)③轉(zhuǎn)基因擬南芥的葉片卷曲與正常葉是由B、b基因控制，正常葉為顯性，而對該性狀與種皮性狀為獨立遺傳，則這兩對性狀遵循基因的分離與自由組合定律。則：當(dāng)前57頁，總共158頁。③轉(zhuǎn)基因擬南芥（Tntbb）雙雜合擬南芥（TtBb）進行逐對分析：TntTt→1/4TnT、1/4Tnt、1/4Tt、1/4tt由于Tn和T的功能相同，所以表示為：3/4T_（深褐色）、1/4tt（黃色）BbBb→1/2Bb（正常葉）、1/2bb（卷曲葉）所以后代中有四種表現(xiàn)型：3/8種皮深褐色正常葉；3/8種皮深褐色卷曲葉；1/8種皮黃色正常葉；1/8種皮黃色卷曲葉。?、坜D(zhuǎn)基因擬南芥的莖尖培養(yǎng)為植物組織為無性繁殖，所以后代性狀一般不變。（排除基因突變）由上可知所得③轉(zhuǎn)基因擬南芥Tnt和野生型擬南芥TT兩個品種相當(dāng)于發(fā)生基因突變，沒有隔離，能雜交產(chǎn)生可育后代，因此是同一個種。當(dāng)前58頁，總共158頁。（2011江蘇）14．關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用的敘述,錯誤的是（

）A．蛋白質(zhì)工程可合成自然界中不存在的蛋白質(zhì)B．體細胞雜交技術(shù)可用于克隆動物和制備單克隆抗體C．植物組織培養(yǎng)技術(shù)可用于植物莖尖脫毒D．動物細胞培養(yǎng)技術(shù)可用于轉(zhuǎn)基因動物的培養(yǎng)B當(dāng)前59頁，總共158頁。（2011福建）32.[現(xiàn)代生物科技專題]一對表現(xiàn)型正常的夫婦，生了一個鐮刀型細胞貧血癥（常染色體隱性遺傳?。┗純?。在他們欲生育第二胎時，發(fā)現(xiàn)妻子的雙側(cè)輸卵管完全堵塞，不能完成體內(nèi)受精。醫(yī)生為該夫婦實施了體外受精和產(chǎn)前基因診斷，過程如右圖。②受精卵早期胚胎子宮羊水中的胎兒細胞妻子卵子丈夫精子③擴增產(chǎn)物酶切產(chǎn)物抽取、分離PCRMstⅡ父、母、患兒酶切產(chǎn)物父母患兒胎兒④電泳條帶加樣孔基因分析電泳帶譜“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前60頁，總共158頁。請回答：（1）過程①是指在體外進行__________的處理，從而使精子與卵細胞結(jié)合形成受精卵；過程②稱為_________。（2）在對胎兒進行鐮刀型細胞貧血癥的產(chǎn)前基因診斷時，要先從羊水中的胎兒細胞提取物質(zhì)③_______進行PCR擴增。然后用MstⅡ?qū)U增產(chǎn)物進行切割，產(chǎn)生多個片段的酶切產(chǎn)物。據(jù)此判斷，MstⅡ是一種________酶。（3）不同長度的酶切產(chǎn)物在電泳時移動的速率不同，形成不同的電泳條帶。該家庭成員的鐮刀型細胞貧血癥基因分析的電泳帶譜如④，據(jù)此判斷胎兒為______（正常/患者/攜帶者）。限制酶DNA精子獲能胚胎移植正常當(dāng)前61頁，總共158頁。（2011北京）31.T-DNA可隨機插入植物基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過程如下：種植野生型擬南芥，待植株形成花蕾時，將地上部分浸入農(nóng)桿菌（其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因）懸浮液中以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱為T1代）。T-DNA被插入的基因片段環(huán)狀DNA示意圖A、B、C、D表示能與T-DNA鏈互補、長度相等的單鏈DNA片段；箭頭指示DNA合成方向當(dāng)前62頁，總共158頁。（2011北京）

31.T-DNA可隨機插入植物基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過程如下：種植野生型擬南芥，待植株形成花蕾時，將地上部分浸入農(nóng)桿菌（其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因）懸浮液中以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱為T1代）?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前63頁，總共158頁。（1）為促進植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾，需要去除_____，因為后者產(chǎn)生的_______會抑制側(cè)芽的生長。（2）為篩選出已轉(zhuǎn)化的個體，需將T1代播種在含_______的培養(yǎng)基上生長，成熟后自交，收獲種子（稱為T2代）。（3）為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將T2代播種在含____的培養(yǎng)基上，獲得所需個體。（4）經(jīng)過多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體。為確定抗鹽性狀是否由單基因突變引起，需將該突變體與________植株進行雜交，再自交_____代后統(tǒng)計性狀分離比。（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能喪失，從該突變體的表現(xiàn)型可以推測野生型基因的存在導(dǎo)致植物的抗鹽性_______。生長素除草劑頂芽鹽野生型1降低當(dāng)前64頁，總共158頁。（6）根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可以擴增出被插入的基因片段。其過程是：提取__植株的DNA，用限制酶處理后，再用_________

將獲得的DNA片段連接成環(huán)（如右圖）以此為模板，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片斷中選取______作為引物進行擴增，得到的片斷將用于獲取該基因的全序列信息。DNA連接酶突變體B、C當(dāng)前65頁，總共158頁。（2011廣東）27.登革熱病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人時將病毒傳染給人，可引起病人發(fā)熱、出血甚至休克?？茖W(xué)家擬用以下方法控制病毒的傳播。

（1）將S基因轉(zhuǎn)入蚊子體內(nèi)，使蚊子的唾液腺細胞大量表達S蛋白，該蛋白可以抑制登革熱病毒的復(fù)制。為了獲得轉(zhuǎn)基因蚊子，需要將攜帶S基因的載體導(dǎo)入蚊子的

細胞。如果轉(zhuǎn)基因成功，在轉(zhuǎn)基因蚊子體內(nèi)可檢測出

、

和

。受精卵

S基因S基因的mRNAS蛋白當(dāng)前66頁，總共158頁。（2）科學(xué)家獲得一種顯性突變蚊

子（AABB）。A、B基因位于非同源

染色體上，只有A基因或B基因的胚

胎致死。若純合的雄蚊（AABB）與

野生型雌蚊（aabb）交配，F(xiàn)1群體

中A基因頻率是

，F(xiàn)2群體中A基

因頻率是

。

（3）將S基因分別插入到A、B基因的緊鄰位置（如圖11），將該純合的轉(zhuǎn)基因雄蚊釋放到野生型群體中，群體中蚊子體內(nèi)病毒的平均數(shù)目會逐代

，原因是

。減少60%50%群體中S基因頻率逐代升高，而S基因表達的蛋白可以抑制蚊子體內(nèi)病毒的繁殖ASBS圖11“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前67頁，總共158頁。（2011四川）5.北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強。下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是（）A.過程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序B.將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達的新基因，不能得到抗凍性增強的抗凍蛋白C.過程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進行篩選D.應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達B“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前68頁，總共158頁。（2011上海）（九）回答下列有關(guān)基因工程的問題。（10分）

57．基因工程中使用的限制酶，其特點是＿＿＿＿＿＿＿＿

＿＿＿＿。

下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。特異性地識別和切割DNA58．將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X-1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有＿＿＿。（可多選）

A．X-1B．X-2C．X-3D．X-4ABC“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前69頁，總共158頁。60．如果X-1用E1酶切，產(chǎn)生850對堿基和3550對堿基兩種片段：那么質(zhì)粒X-2（Tcr基因的長度為1200對堿基）用E2

酶切后的片段長度為＿＿＿＿對堿基。

61．若將外源的Tcr基因兩端用E2切開，再與用E2切開的

X-1混合連接，并導(dǎo)入大腸桿菌細胞，結(jié)果顯示，含X-4的細胞數(shù)與含X-1的細胞數(shù)之比為1∶3，增大DNA連接酶用量能

否提高上述比值？＿＿＿。原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。4750不能

DNA連接酶對DNA片段沒有選擇性/兩段DNA片段沒有選擇性/兩段DNA末端相同當(dāng)前70頁，總共158頁。（2011天津）1．下列有關(guān)酶的敘述正確的是（）A．酶的基本組成單位是氨基酸和脫氧核糖核苷酸B．酶通過為反應(yīng)物供能和降低活化能來提高化學(xué)反應(yīng)速率C．在動物細胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶可將組織分散成單個細胞D．DNA連接酶可連接DNA雙鏈的氫鍵，使雙鍵延伸C當(dāng)前71頁，總共158頁。（2011安徽）31Ⅱ.家蠶細胞具有高效表達外源基因能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。（1）進行轉(zhuǎn)基因操作前，需用____________________酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞。（2）為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達載體的________和_______之間。（3）采用PCR技術(shù)可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細胞。該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、______________和______________________________?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。胰蛋白（或膠原蛋白）

啟動子終止子對干擾素基因特異的DNA引物對

TaqDNA聚合酶

當(dāng)前72頁，總共158頁。擴大細胞貼壁生長的附著面積

（4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細胞時，貼壁生長的細胞會產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以____________________________增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量，也有利于空氣交換。當(dāng)前73頁，總共158頁。【解析】（1）為了使組織分散開為單個細胞通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶。（2）將目的基因正確插入表達載體的啟動子和

終止子之間，才能使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達。（3）PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、對干擾素基因特異的DNA引物對和

TaqDNA聚合酶。（4）細胞離體培養(yǎng)時通常表現(xiàn)出：貼壁生長和接觸抑制，因此將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以擴大細胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量。當(dāng)前74頁，總共158頁。（2011山東）35．【生物—現(xiàn)代生物科技專題】人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型常用于致病機理的探討及治療藥物的篩選。利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠的流程如圖所示?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，未經(jīng)允許不得擅自修改或用于任何形式的商業(yè)用途。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前75頁，總共158頁。（1）卵母細胞除從活體輸卵管中采集外，還可以從已處死的雌鼠______中獲取。（2）圖中的高血壓相關(guān)基因作為

，質(zhì)粒作為______二者需用

切割后連接成重組載體，該過程與質(zhì)粒上含有

有關(guān)。（3）子代大鼠如果

和__________

，即可分別在分子水平和個體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達，然后可用其建立高血壓轉(zhuǎn)基因動物模型。目的基因載體同種限制酶限制酶切割位點檢測到體內(nèi)有相關(guān)蛋白出現(xiàn)高血壓卵巢

當(dāng)前76頁，總共158頁。（2011浙江）6.將ada（腺苷酸脫氨酶基因）通過質(zhì)粒pET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是（）A．每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒B．每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點C．每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入一個adaD．每個插入的ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子【解析】將切下的目的基因的片段插入質(zhì)粒的切口處，首先堿基互補配對結(jié)合，兩個黏性末端吻合在一起，堿基之間形成氫鍵，再加入適量DNA連接酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連接起來，形成一個重組DNA分子。目的基因?qū)胧荏w細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑒定才能知道。這是基因工程的第四步工作。已經(jīng)表達了就說明導(dǎo)入成功。所以A、B和D正確，C錯誤。C當(dāng)前77頁，總共158頁。(1）從良種母牛采集的卵母細胞，都需要進行體外培養(yǎng)，其目的是____________________；從良種公牛采集的精子需________后才能進行受精作用。（2）在體外培養(yǎng)受精卵時，除了給予一定量的O2以維持細胞呼吸外，還需要提供____氣體以維持________________?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。（2010山東）35.【生物-現(xiàn)代生物科技專題】胚胎工程是一項綜合性的動物繁育技術(shù)，可在畜牧業(yè)和制藥業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。下圖是通過胚胎工程培育試管牛的過程。

使卵母細胞成熟獲能CO2培養(yǎng)液的pH“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前78頁，總共158頁。胚胎移植提高優(yōu)良母畜的繁殖率顯微注射法牛奶中含有人類白細胞介素（3）圖中過程A稱為_______________，它在胚胎工程中的意義在于_________________________。（4）研制能夠產(chǎn)生人類白細胞介素的牛乳腺生物反應(yīng)器，需將目的的基因?qū)肱Ｊ芫?，最常用的?dǎo)入方法是_____________；獲得轉(zhuǎn)基因母牛后，如果______________________________即說明目的基因已經(jīng)表達?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前79頁，總共158頁。[解析]采集到的卵細胞都要在人工培養(yǎng)到成熟后才能與獲能的精子受精，采集到的精子也需獲能處理才能與卵子結(jié)合；培養(yǎng)基制備時要調(diào)pH以保證細胞的正常生活環(huán)境；早期胚胎移入受體子宮的過程為胚胎移植，胚胎移植充分發(fā)揮了雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力，大大提高了優(yōu)良母畜的繁殖率；基因工程技術(shù)中，導(dǎo)入動物受體細胞的常用方法是顯微注射法，導(dǎo)入成功后，如果檢測到牛乳中含有人類白細胞介素，則證明目的基因已成功表達。[易錯點擊]動物細胞培養(yǎng)也需調(diào)節(jié)pH，通常加入的物質(zhì)是二氧化碳。“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記。當(dāng)前80頁，總共158頁。（2010海南）26．（18分）［選修模塊3：現(xiàn)代生物科技專題］請回答胚胎工程和基因工程方面的問題：（1）應(yīng)用胚胎工程技術(shù)可以培育出“試管?！?。試管牛的培育需經(jīng)過體外受精、______________、＿＿＿＿＿以及在母體中發(fā)育和產(chǎn)出等過程。（2）在“試管牛”的培育過程中，要使精子和卵母細胞在體外成功結(jié)合，需要對精子進行處理使其______。另外，培養(yǎng)的卵母細胞需要發(fā)育至減數(shù)第二次分裂的中期，該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細胞和__________。（3）通常奶牛每次排出一枚卵母細胞，采用激素處理可使其一次排出多枚卵母細胞，常使用的激素是____________。早期胚胎培養(yǎng)

胚胎移植獲能

第一極體促性腺激素當(dāng)前81頁，總共158頁。獲取目的基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細胞目的基因的檢測與鑒定

顯微注射法

人干擾素基因（或目的基因）

終止子

標(biāo)記基因

受精卵

（4）利用基因工程可以獲得轉(zhuǎn)基因牛，從而改良奶牛的某些性狀?；蚬こ痰乃膫€基本操作步驟是______________、基因表達載體的構(gòu)建、________________________和_____________________。若要使獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人干擾素，則所構(gòu)建的基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、_____＿＿___________、＿＿＿_、＿＿＿＿___和復(fù)制原點等。將該基因表達載體導(dǎo)入受體細胞所采用的方法是＿＿＿＿__＿（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法），為獲得能大量產(chǎn)生人干擾素的轉(zhuǎn)基因牛，該基因表達載體應(yīng)導(dǎo)入的受體細胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺細胞）。當(dāng)前82頁，總共158頁。

（2010上海）（七）分析有關(guān)基因表達的資料，回答問題。（9分）取同種生物的不同類型細胞，檢測其基因表達，結(jié)果如右圖。“漢水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。2012年1月15日，漢水丑生標(biāo)記?！皾h水丑生的生物同行”超級群大型公益活動：歷年高考題PPT版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所