高中生物課件多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增片段

高中生物課件多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增片段第一頁，共四十七頁，2022年，8月28日㈠.DNA分子的結(jié)構(gòu)C、H、O、N、P1.元素組成：脫氧核苷酸2.基本單位:知識(shí)回顧脫氧核苷酸脫氧核苷磷酸脫氧核糖含氮堿基嘌呤嘧啶腺嘌呤（A）鳥嘌呤（G）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）第二頁，共四十七頁，2022年，8月28日一個(gè)核苷酸上的磷酸基團(tuán)上的“－OH”和另一個(gè)核苷酸分子的第3位碳原子上的羥基之間失去一分子水，形成磷酸二酯鍵，即在相鄰的兩個(gè)脫氧核苷酸的3’和5’碳原子之間形成磷酸二酯鍵。數(shù)量龐大的四種脫氧核苷酸通過3’、5’、磷酸二酯鍵彼此連接起來形成脫氧核苷酸鏈。通常將DNA的羥基“－OH”末端稱為3’端，而磷酸基團(tuán)的末端稱為5’端3.多脫氧核苷酸鏈的形成多脫氧核苷酸鏈結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖第三頁，共四十七頁，2022年，8月28日OOPOHO堿基OOHOOPOHOOH堿基5’3’3’5’堿基脫氧核糖磷酸基團(tuán)堿基脫氧核糖堿基脫氧核糖5’3’多脫氧核苷酸鏈結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖第四頁，共四十七頁，2022年，8月28日連接ATGC第五頁，共四十七頁，2022年，8月28日連接ATGCATGC5'端含磷酸基團(tuán)3'端（含羥基）第六頁，共四十七頁，2022年，8月28日連接ATGCATGC5'端含磷酸基團(tuán)3'端（含羥基）3'端5'端第七頁，共四十七頁，2022年，8月28日第八頁，共四十七頁，2022年，8月28日3.DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)⑴DNA分子是由

的脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈盤旋而成的規(guī)則

結(jié)構(gòu)。⑵

與

交替連結(jié)，排列在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架；

排列在鏈的內(nèi)側(cè)。⑶兩條鏈上的堿基通過

連結(jié)起來，形成堿基對(duì)。堿基對(duì)的組成有特定的規(guī)律：即腺嘌呤一定與

配對(duì)，

一定同胞嘧啶配對(duì)。雙螺旋兩條反向平行脫氧核糖磷酸堿基氫鍵胸腺嘧啶鳥嘌呤第九頁，共四十七頁，2022年，8月28日㈡.DNA的復(fù)制2.時(shí)期有絲分裂間期減數(shù)第一次分裂前的間期。3.場(chǎng)所細(xì)胞核（主要）、線粒體、葉綠體。1.概念由一個(gè)DNA形成兩個(gè)完全相同的DNA的過程。4.基本條件酶:解旋酶、DNA聚合酶能量:ATP原料:四種脫氧核苷酸模板:DNA的兩條鏈第十頁，共四十七頁，2022年，8月28日⑴.邊解旋邊復(fù)制(過程）5.復(fù)制特點(diǎn)⑵.半保留復(fù)制（結(jié)果）6.遵循原則：堿基互補(bǔ)配對(duì)原則7.精確復(fù)制的原因8.復(fù)制的意義DNA分子通過復(fù)制使遺傳信息從親代傳給了后代，從而保持了遺傳信息的連續(xù)性⑴規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)為復(fù)制提供了精確的模板⑵堿基互補(bǔ)配對(duì)能力保證了復(fù)制準(zhǔn)確無誤的進(jìn)行第十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物總結(jié)：胞內(nèi)DNA復(fù)制的基本體系打開DNA雙鏈提供DNA復(fù)制的模板合成子鏈的原料催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸第十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日第十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日第二十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日1.DNA

分子的熱變性原理DNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃）復(fù)性（緩慢冷卻）變性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈有利于引物與兩條單鏈結(jié)合

在80~100℃的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為變性總結(jié)第二十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日PCR技術(shù)總結(jié)利用DNA分子的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解旋與結(jié)合，從而完成體外DNA分子的擴(kuò)增。

四種脫氧核苷酸、耐熱的DNA聚合酶、引物、DNA模板、緩沖溶液和控制溫度的溫控設(shè)備。子鏈的5’端向3’端延伸

具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出。原理?xiàng)l件方向特點(diǎn)第二十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日5/3/3/5/5/3/引物Ⅰ5/3/引物Ⅱ變性95oC復(fù)性55oC5/3/3/5/第二十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日5引物15引物2第二次復(fù)制第一次復(fù)制55

55

5

5模板DNA55

555

5

55經(jīng)n次循環(huán)（復(fù)制）后，DNA的含量理論上可以擴(kuò)大到

倍。2n延伸72oC第二十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日每次循環(huán)分為：PCR的反應(yīng)過程總結(jié)變性——復(fù)性——延伸②DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的DNA序列，使這段固定長(zhǎng)度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。①從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會(huì)與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸PCR的反應(yīng)結(jié)果第三十頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十七頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十八頁，共四十七頁，2022年，8月28日第三十九頁，共四十七頁，2022年，8月28日第四十頁，共四十七頁，2022年，8月28日第四十一頁，共四十七頁，2022年，8月28日第四十二頁，共四十七頁，2022年，8月28日第四十三頁，共四十七頁，2022年，8月28日4.下列屬于PCR擴(kuò)增區(qū)別于

DNA體內(nèi)復(fù)制的是()①需要解旋酶②需要引物③常溫常壓下進(jìn)行④以四種脫氧核苷酸為原料⑤需要耐高溫的TaqDNA聚合酶⑥邊解旋邊復(fù)制⑦可以短時(shí)間得到大量拷貝⑧需要模板A．①②③④⑤⑥⑦⑧C．⑤⑦B．②③④⑤⑥⑦D．③④⑥⑧第四十四頁，共四十七頁，2022年，8月28日

【名師點(diǎn)撥】：體內(nèi)復(fù)制與PCR擴(kuò)增既有區(qū)別又有聯(lián)系，PCR體外擴(kuò)增概念很明確，在體外，加熱解旋，因此需要耐高溫的TaqDNA聚合酶，它能以極少量的DNA為模板，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA?！敬鸢浮浚篊第四十五頁，共四十七頁，2022年，8月28日【配對(duì)練習(xí)1】真核生物細(xì)胞質(zhì)中也有DNA，例如葉綠體、線粒體等，關(guān)于細(xì)胞質(zhì)DNA復(fù)制不正確的是()

A．需要解旋酶

B．需要DNA聚合酶

C．兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn)

D．不是半保留復(fù)制

解析：真核生物細(xì)胞質(zhì)中DNA復(fù)制需要解旋酶、DNA聚合酶、兩條鏈同時(shí)復(fù)制只有一個(gè)起點(diǎn)，是半保留復(fù)制。

答案：D第四十六頁，共四十七頁，2022年，8月28日【配對(duì)練習(xí)