臨床血液學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)10 PT APTT 血小板功能

實(shí)驗(yàn)十血小板功能檢測(cè)（示教）PTAPTT目的要求掌握PT、APTT測(cè)定的原理、方法、注意事項(xiàng)、臨床意義掌握試管法熟悉血凝儀法熟悉血小板聚集儀血小板功能檢驗(yàn)血小板黏附試驗(yàn)血小板聚集試驗(yàn)全血的PLT不能小于50×109/L血小板黏附試驗(yàn)原理在體內(nèi)血小板具有粘附于被暴露的膠原組織和相互之間粘附的機(jī)能，在體外血小板可粘附于帶負(fù)電荷的非生理性表面（如金屬、玻璃）的機(jī)能，同時(shí)也反應(yīng)血小板的聚集功能。血小板黏附試驗(yàn)一定量的血液一定時(shí)間之后，一定量的血小板粘附在容器內(nèi)表面利用粘附前后的血小板之差，計(jì)算粘附率0.7ml，粘附15min用硅化試管采集1：9枸櫞酸鈉抗凝血7.2ml用硅化移液管吸取0.8ml混勻的抗凝血至小粘附瓶?jī)?nèi)將粘附瓶?jī)?nèi)的抗凝血用血球計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)粘附前血小板數(shù)目將粘附瓶塞入粘附儀器內(nèi)的橡皮塞，并做平衡打開粘附儀電源，按START鍵,儀器進(jìn)入旋轉(zhuǎn)粘附測(cè)試完畢，取出粘附瓶,再同前計(jì)數(shù)粘附后的血小板數(shù)目計(jì)算粘附率,記錄結(jié)果操作步驟注意事項(xiàng)采血過程必須順利，避免產(chǎn)生氣泡，溶血和凝塊器材必須標(biāo)準(zhǔn)化，使用的試管，滴管必須硅化處理，或用塑料制品。檢測(cè)前1周，禁止服用阿司匹林類可以影響血小板的藥物血小板的計(jì)數(shù)要準(zhǔn)確，宜作2-3次取平均值。參考范圍53.9%-71.1%臨床意義：粘附率增高：見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病，如心梗，心絞痛，動(dòng)脈硬化，口服避孕藥等。粘附率減低：見于vWD、巨大血小板綜合征，血小板無(wú)力癥，肝硬化等。血小板聚集試驗(yàn)原理：在體內(nèi)，血管壁受損后血小板立即粘附于受損血管壁創(chuàng)面處，繼而發(fā)生聚集反應(yīng)形成白色血栓。在體外，將血小板聚集誘導(dǎo)劑加入富含血小板的血漿中通過血小板聚集儀觀察血小板聚集反應(yīng)，稱血小板聚集功能試驗(yàn)。PRP（plateletrichplasm)800-1000rpm,10minPPP（plateletpoorplasm)3000rpm,15min

以PPP調(diào)零，在PRP中加入血小板聚集誘導(dǎo)劑后，用一涂硅小磁棒粒進(jìn)行攪拌，血小板逐漸聚集，透光度增加，通過記錄儀描繪出血小板聚集的曲線，分析血小板的聚集能力。開啟血小板凝聚儀，將誘聚劑放入儀器預(yù)熱槽內(nèi)進(jìn)行溫浴用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反應(yīng)杯中，并加入磁棒用普通移液管準(zhǔn)確吸0.3mlPPP加入聚集反應(yīng)杯中，不加入磁棒將PPP管放入反應(yīng)通道內(nèi)，選擇血小板聚集試驗(yàn)，按ENTER進(jìn)行調(diào)零,調(diào)零結(jié)束后取出PPP管將PRP放入剛才的反應(yīng)通道內(nèi)，按ENTER，儀器讀取PRP的濁度當(dāng)屏幕顯示ADP時(shí)，準(zhǔn)確加入30ul誘聚劑，同時(shí)按ENTER,儀器進(jìn)行血小板聚集的測(cè)試測(cè)試結(jié)束，屏幕將顯示最大聚集率%操作步驟注意事項(xiàng)⑴采血時(shí)應(yīng)一針見血，并避免產(chǎn)生氣泡和溶血。止血帶不得扎時(shí)間過長(zhǎng)⑵采血當(dāng)天應(yīng)禁食牛奶、豆?jié){類脂肪性食物。⑶實(shí)驗(yàn)在采血后3小時(shí)內(nèi)完成。⑷采血前1周內(nèi)不應(yīng)服用抑制血小板聚集的藥物：如阿司匹林、潘生丁、肝素、雙香豆素等⑸所用器具均必須硅化處理⑹PRP調(diào)至血小板數(shù)目為220×109/L，PPP調(diào)至血小板數(shù)目為20×109/L以下參考范圍ADP--------62.7±16.1 Adr--------67.8±17.8膠原--------71.7±19.3瑞斯托酶素-----87.5±11.4臨床意義增高：反映血小板聚集功能增強(qiáng)，見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病，如心梗，心絞痛，糖尿病，腦血管病變減低：反應(yīng)血小板聚集功能減低，見于血小板無(wú)力癥，巨大血小板綜合征，尿毒癥，肝硬化，低（無(wú)）纖維蛋白原癥等PTAPTTTTFIB凝血四項(xiàng)ⅫaⅪaⅨaⅧ,PF3,Ca2+ⅢⅦaCa2+ⅩaⅤ,PF3,Ca2+凝血酶原(Ⅱ)凝血酶(Ⅱa)纖維蛋白原(Ⅰ)纖維蛋白(Ⅰa)APTT凝血活酶生成期PT

組織因子(兔腦、胎盤、肺組織浸液)Ca2+

血漿[參考值]QUIK法：11-13s

血漿凝血酶原時(shí)間

（Prothrombintime,PT）【原理】PrincipleofPT

inBlood

inPlasmaPTReagentFibrinIIIExtrinsicSystemMeasureClottingTimewithoutTissueFactorCalcium(Ca2+)withoutwithoutNormalRange10-14secIX37度Ca2+,PLCa2+,PLXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIVIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIVIIIIIXVIIIBloodSamplingTrisodiumCitrate操作1.枸櫞酸鈉1:9抗凝血2ml2.3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘3.PT試劑取出進(jìn)行37℃溫浴4.將血漿100ul加入試管內(nèi)溫浴1分鐘5.加入200ul已溫浴的PT試劑，同時(shí)啟動(dòng)秒表不斷輕輕傾斜試管，記錄凝固時(shí)間6.重復(fù)2次取均值報(bào)告[意義]外源性凝血系統(tǒng)的篩選試驗(yàn)比正常參考值延長(zhǎng)或縮短3秒以上有臨床意義。（1）延長(zhǎng)：

1．因子II、V、VII、X單獨(dú)或聯(lián)合缺乏

2．嚴(yán)重纖維蛋白原降低（尤其<1g/L時(shí)）

3．Vitk缺乏癥、嚴(yán)重肝病

4．纖溶亢進(jìn)（如DIC后期）

5．循環(huán)中抗凝物質(zhì)增加，如SLE

（2）縮短：

高凝狀態(tài)（hypercoagulationstate）血栓性疾病口服避孕藥

（3）口服抗凝劑的首選監(jiān)測(cè)指標(biāo)：

INR2-3PT的報(bào)告方式時(shí)間（S）PT比值（PTR）=國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）=PTRISI待測(cè)血漿PT正常血漿PTInternationalNormalizedRatioInternationalSensitivityIndex注意事項(xiàng)⑴抗凝比例要準(zhǔn)確，血量±不得超過0.2ml⑵離心速度及時(shí)間必須到位，以除去血小板的干擾⑶采血后2小時(shí)內(nèi)完成⑷標(biāo)本不得有溶血(5)手工操作時(shí)，凝血酶原時(shí)間的終點(diǎn)計(jì)算以出現(xiàn)混濁的初期凝固為準(zhǔn)。(6)測(cè)定溫度36.5~38.5℃，過低或過高均使PT延長(zhǎng)。(7)如遇標(biāo)本結(jié)果異常應(yīng)密切聯(lián)系臨床[原理]

XII因子活化劑

Ca2+、磷脂（替代PF3）血漿

[參考值]

（37±3.3）秒

>正常對(duì)照10s以上者延長(zhǎng)

<正常對(duì)照5s以上者縮短活化部分凝血活酶時(shí)間（activatedpartialthromboplastin

time,APTT）PrincipleofAPTT

inBlood

inPlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIAPTTReagentActivatorPLIntrinsicSystemMeasureClottingTimeEllagicacid,silicaetc.Calcium(Ca2+)NormalRange20-40secCaCl2IVPhospholipidFibrin37度XIIIXXIVIIIXVIIICa2+,PLCa2+,PLBloodSamplingTrisodiumCitrate操作1.枸櫞酸鈉1:9抗凝血2ml

2.3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘3.氯化鈣試劑取出進(jìn)行37℃溫浴，APTT試劑常溫放置4.將血漿100ul加入試管內(nèi)溫浴1分鐘5.加入100ulAPTT試劑，同時(shí)啟動(dòng)秒表，激活3分鐘6.加入100ul氯化鈣（20mmol/L），同時(shí)啟動(dòng)秒表不斷輕輕傾斜試管，記錄凝固時(shí)間，重復(fù)2次取均值（1）延長(zhǎng)：

1.主要檢測(cè)內(nèi)源性途徑的凝血因子缺陷（如Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ/血友病甲、乙）

2.其次檢測(cè)第二、三階段因子，如凝血酶原、纖維蛋白原

3.嚴(yán)重肝病、DIC.4.循環(huán)中抗凝物質(zhì)增多

[意義]

（2）縮短：高凝狀態(tài)(hypercoagulationstate)（腦血栓、心梗、DIC高凝期）（3）普通肝素應(yīng)用的首選監(jiān)測(cè)指標(biāo)

1.5-3.0倍注意事項(xiàng)不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時(shí)間，對(duì)各種因子缺陷、對(duì)肝素和狼瘡抗凝物質(zhì)的敏感性差異很大，應(yīng)根據(jù)不同的檢測(cè)目的選擇相應(yīng)敏感的凝血活酶或活化劑。通