色譜定性定量分析

色譜定性定量分析第一頁，共二十頁，2022年，8月28日一、色譜定性方法定性依據(jù)★主要依據(jù)是每個組份的保留值★一般需要標(biāo)準(zhǔn)樣品，離開已知純物質(zhì)的對照，就無法識別各色譜峰代表何種組份★對某一未知試樣，單獨用色譜法定性十分困難，因此常需與化學(xué)分析及其它儀器分析方法相結(jié)合第二頁，共二十頁，2022年，8月28日1.利用色譜保留參數(shù)定性①保留值定性?在一定的固定相和恒定的操作條件（如柱溫、流動相流速、固定液含量、柱長和柱徑等）下，每種物質(zhì)都有一定的保留值（tR或VR），一般不受其它組份的影響，表現(xiàn)為每一組份的特征值因此可利用已知物的保留值和未知物的保留值對照進(jìn)行定性?利用絕對保留值定性時，要求嚴(yán)格控制色譜操作條件，否則重現(xiàn)性較差?若采用相對保留值r2,1作定性分析，它僅與柱溫有關(guān)，則可消除某些操作條件差異所帶來的影響?常用標(biāo)準(zhǔn)物：苯、正丁烷、對二甲苯、環(huán)己烷、2,3,4-三甲基戊烷?對于組份比較簡單的已知范圍的混合物試樣，可采用此法進(jìn)行定性。也可利用文獻(xiàn)上的r2,1值或色譜手冊中的r2,1值對照定性。第三頁，共二十頁，2022年，8月28日第四頁，共二十頁，2022年，8月28日1.利用色譜保留參數(shù)定性②加入已知物增加峰高法?首先用被測試樣作色譜圖，然后將已知純物質(zhì)加到試樣中去，在相同的條件下作色譜圖，對比這兩個色譜圖若后一色譜圖中某一色譜峰相對增高時，則該色譜峰的組份原則上與加入已知純物質(zhì)是同一種化合物?當(dāng)試樣組份比較復(fù)雜，峰間距離太近，或操作條件不易控制穩(wěn)定，很難準(zhǔn)確地測定其保留值時，可采用此法進(jìn)行定性第五頁，共二十頁，2022年，8月28日1.利用色譜保留參數(shù)定性③雙柱法定性?將試樣和標(biāo)準(zhǔn)物的混合物分別在兩根極性相差較大的色譜柱上進(jìn)行色譜分離觀察標(biāo)準(zhǔn)物和未知物色譜峰在這兩根柱子上是否始終重合，如兩色譜峰始終重合，可判斷為同一組份，否則不是同一組份。?可以避免不同組份由于保留值的偶然一致性，可能發(fā)生的定性錯誤。第六頁，共二十頁，2022年，8月28日2.與其它方法結(jié)合定性①與化學(xué)方法結(jié)合進(jìn)行定性?將試樣經(jīng)過一些特殊試劑處理，發(fā)生物理變化或化學(xué)反應(yīng)后，其色譜峰將會提前、移后或完全消失?比較處理前后色譜圖的差異，以及在柱后用化學(xué)試劑鑒定流出物，就可初步定性鑒別試樣中含有哪些官能團(tuán)第七頁，共二十頁，2022年，8月28日2.與其它方法結(jié)合定性②與光譜、質(zhì)譜聯(lián)合定性?色譜儀與光譜或質(zhì)譜儀等聯(lián)用，實際上是光譜儀和質(zhì)譜儀等起著檢測器的作用，將復(fù)雜組份的混合物經(jīng)色譜柱分離為單組份，再利用紅外光譜、質(zhì)譜或核磁共振譜等進(jìn)行定性分析?既充分利用光譜、質(zhì)譜等適于分析分子結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)或物質(zhì)的摩爾質(zhì)量等特點，克服了它們不易檢定復(fù)雜物質(zhì)的困難，又充分利用了色譜的高效分離能力?聯(lián)用方法是解決復(fù)雜未知物定性問題最有效的方法之一，其中特別是色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，是當(dāng)今分離和鑒定未知物最好的手段第八頁，共二十頁，2022年，8月28日二、色譜定量方法1.定量依據(jù)和校正因子?在一定的操作條件下，被測組份的質(zhì)量mi與檢測器產(chǎn)生的響應(yīng)信號（色譜圖上表現(xiàn)為峰面積）Ai成正比，比例系數(shù)稱為峰面積絕對校正因子fi，即mi=fiAi

這就是色譜定量分析的依據(jù)?絕對校正因子主要由儀器的靈敏度所決定，并與分析的操作條件有密切關(guān)系第九頁，共二十頁，2022年，8月28日2.峰面積的測量①準(zhǔn)確測量法?用計算機(jī)測量通常高級色譜儀配有計算機(jī)，能自動計算峰面積?用自動積分儀測量它能自動測出曲線所包圍的面積，測量精度達(dá)0.2～2％上述兩種方法分析速度快，線性范圍廣，對小峰或不規(guī)則的峰也能得出較準(zhǔn)確的測定結(jié)果第十頁，共二十頁，2022年，8月28日2.峰面積的測量②近似測量法?對稱峰可用峰高乘半高峰寬法：在相對計算時可省略系數(shù)，狹窄峰還可將半高峰寬視為常數(shù)以峰高計算?不對稱峰可用峰高乘平均峰寬法：平均峰寬是指在峰高0.15和0.85處分別測量的峰寬的平均值第十一頁，共二十頁，2022年，8月28日3.常用定量方法①歸一法若試樣中各組份都能流出色譜柱并在所用的檢測器上都能產(chǎn)生信號顯示出色譜峰，則可測量所有組份色譜峰的峰面積，由下列公式計算各組份的含量Ai為任一組份的峰面積，fi為任一組份的質(zhì)量校正因子歸一法的優(yōu)點是無需標(biāo)樣，結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡便，操作條件（如進(jìn)樣量、流速等）變化對測定結(jié)果影響較小，宜于分析多組份試樣中各組份的含量。第十二頁，共二十頁，2022年，8月28日②外標(biāo)法A標(biāo)準(zhǔn)曲線法用標(biāo)樣配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定操作條件下，分別定量進(jìn)樣測量，繪制峰面積對標(biāo)液濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。并在相同條件下，注入相同體積的被測試樣測出峰面積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出被測組份的含量B外標(biāo)一點法（單點校正）C外標(biāo)兩點法（兩點校正）外標(biāo)法簡便，不需用校正因子，但需要標(biāo)樣并且進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，操作條件也需嚴(yán)格控制第十三頁，共二十頁，2022年，8月28日ACsAxCx第十四頁，共二十頁，2022年，8月28日ms和mi分別為內(nèi)標(biāo)物和被測組份的質(zhì)量As和Ai分別為內(nèi)標(biāo)物和被測組份的峰面積fis為組份i相對于內(nèi)標(biāo)物s的相對校正因子

③內(nèi)標(biāo)法用一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及相應(yīng)的色譜峰面積之比，計算被測組分的含量第十五頁，共二十頁，2022年，8月28日選擇內(nèi)標(biāo)物有四個要求：（a）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)；（b）它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組份的色譜峰能完全分離；（c）加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組份；（d）色譜峰的位置應(yīng)與被測組份的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組份色譜峰中間。內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點：測定的結(jié)果較為準(zhǔn)確,由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組份的峰面積的相對值來進(jìn)行計算，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差,在樣品前處理前加入內(nèi)標(biāo)，再進(jìn)行處理，可部分補(bǔ)償待測組分在樣品前處理中的損失。內(nèi)標(biāo)法的缺點：A.操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量B.有時尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難也可用內(nèi)標(biāo)校正曲線法進(jìn)行定量測定第十六頁，共二十頁，2022年，8月28日標(biāo)準(zhǔn)加入法是一種特殊的內(nèi)標(biāo)法。設(shè)樣品中待測組分含量為Wi首先在一定色譜條件下測定樣品的色譜圖，得待測組分的峰面積Ai然后在該樣品中加入已知量為△Wi的待測組分，并在相同色譜條件下測得加入后的待測組分峰面積A’i。計算公式：

第十七頁，共二十頁，2022年，8月28日標(biāo)準(zhǔn)加入法優(yōu)點：不需要另外的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)，只需要待測組分的純物質(zhì)，進(jìn)樣量不必十分準(zhǔn)確，若在陽平前處理之前就加入已知準(zhǔn)確量的的測組分，則完全可以補(bǔ)償待測組分在前處理過程中的損失。對樣品中的其他組分可作為內(nèi)標(biāo)。要求：待測組分加入前后的色譜條件要完全一致。第十八頁，共二十頁，2022年，8月28日4影響定量分析結(jié)果準(zhǔn)確度的因素樣品制備前處理方法，轉(zhuǎn)化率，溶劑，供試液儲存，進(jìn)樣技術(shù)與外標(biāo)法關(guān)系密切，手動進(jìn)樣，閥進(jìn)樣色譜條件流動相流速，流動相組成，溫度，柱效，色譜峰的對稱性檢測器性能

線性關(guān)系，濃度型檢測器，質(zhì)量型監(jiān)測器，靈敏度分離度——大則影響小第十九頁，共二十頁，2022年，8月28日5分析方法的評價——