ABO亞型鑒定及案例分析

ABO亞型ABO亞型簡(jiǎn)介

根據(jù)血型血清學(xué)試驗(yàn)所表現(xiàn)的抗原性強(qiáng)弱程度的分級(jí)量化等血清學(xué)特征，可鑒別出各種ABO亞型A抗原亞型較多：主要是A1（占80%）和A2亞型（占20%），其它的A亞型（A3、Am、Ax、Aint、Ael、Ay等）較少見或罕見B抗原的亞型比A亞型少，較常見的有B1、B3、Bm、Bx、Bel等亞型O型血型中，常把孟買型、類孟買型和一些H缺失型、Hm表型等歸類為H抗原的亞型

可以根據(jù)以下原則區(qū)分A亞型紅細(xì)胞與抗A及抗A1的凝集強(qiáng)度；紅細(xì)胞上與抗A，B的凝集強(qiáng)度；紅細(xì)胞上H抗原強(qiáng)弱血清中是否存在抗A1;分泌型人唾液中A及H物質(zhì)的存在A1

和A2

亞型區(qū)別：A1和A2是血型血清學(xué)方法確定的最重要的A型紅細(xì)胞亞型。

有兩種A型抗原：A和A1A1亞型的紅細(xì)胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗體；A2亞型的紅細(xì)胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗體外，還可能有少量抗A1抗體。A1型紅細(xì)胞A2型紅細(xì)胞與抗A血清反應(yīng)4+4+與抗A1血清反應(yīng)4+—抗原位點(diǎn)數(shù)目成人1000000250000臍血310000140000α-乙酰-D-半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶在PH6時(shí)最多、活性較強(qiáng)在PH7時(shí)最多、活性較弱含不同抗原紅細(xì)胞區(qū)別其它A亞型Aint亞型（A1-A2intermediate）：與抗-Ａ1反應(yīng)程度介于Ａ１～Ａ２之間Ａ３型：很罕見的亞型（1／1000）主要特征：與抗-Ａ和抗-Ａ,Ｂ均反應(yīng)呈現(xiàn)混合凝集現(xiàn)象即A3細(xì)胞與抗-A和大多數(shù)抗-A，B孵育后出現(xiàn)一些由數(shù)個(gè)紅細(xì)胞形成的小凝集塊，并被絕大多數(shù)游離的非凝集紅細(xì)胞包圍。無(wú)A1抗原Ａ３型：大多數(shù)人血清中無(wú)抗A1,偶見有抗A1；有較強(qiáng)H物質(zhì)容易被誤認(rèn)為O型；白血病可引起抗原減弱，顯現(xiàn)于A3類似的反應(yīng)Ａend型：與A3類似；與一些抗A、抗A,B出現(xiàn)混合視野凝集；但Ａend型個(gè)體唾液中只含H抗原，不含A物質(zhì)其它A亞型——Ａx（Ao）型：更罕見的亞型主要特征：Ａ抗原十分弱，僅僅只能通過抗-Ａ，Ｂ檢測(cè)，通常其血清中存在抗-Ａ１。如果未用抗-Ａ，Ｂ進(jìn)行檢測(cè)，則Ax表型易被誤定為Ｏ型。

其它A亞型——Ａx（Ao）型：Ax型紅細(xì)胞與B型血清（抗A抗體）不發(fā)生凝集或弱凝集與O型血清可發(fā)生程度不一的凝集，這可能是因?yàn)镺型血中抗A效價(jià)比B型血抗A效價(jià)高及0型血清中有抗A、B抗體故現(xiàn)做ABO血型鑒定時(shí)，應(yīng)加O型血清（內(nèi)含抗A、抗B及抗AB），以防將Ax型誤定為O型。其它A亞型——Ａx（Ao）型：血清中存在抗A1分泌型體液及紅細(xì)胞上有H抗原與抗H的凝集增強(qiáng)Am亞型：更加罕見主要特征：Am型紅細(xì)胞在常規(guī)試驗(yàn)中不與抗-Ａ、抗-B和抗-Ａ，Ｂ反應(yīng)，但其血清反定型時(shí)出現(xiàn)正反定型不一致，只有抗B，缺乏抗-ＡAel僅能通過吸收放散試驗(yàn)才能證明紅細(xì)胞上有A抗原存在的個(gè)體血型正定型試驗(yàn)血型物質(zhì)抗原數(shù)／細(xì)胞（×103）血清中抗－A1抗A抗AB抗H抗A1A14+4+w+4+A,H810~1170無(wú)A24+4+2+0A,H240~290少A32+mf2+mf3+0A,H35很少AendWkmfwkmf3+0H200(只有10%細(xì)胞產(chǎn)生凝集)無(wú)Ax0/w+1~2+4+0H4幾乎全部Am004+0A,H0.2~1.9無(wú)Ael004+0H0.1~1.4經(jīng)常一些ABO亞型病例分析病例分析獻(xiàn)血者,男,23歲。在獻(xiàn)血時(shí)檢測(cè)血型發(fā)現(xiàn)正反定型不一致,即送本院血型室鑒定。

H物質(zhì)測(cè)定用抗H與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞反應(yīng)并同時(shí)采用其他正常成人新鮮Bc、Oc做平行對(duì)照。各紅細(xì)胞與抗H凝集強(qiáng)度為Oc>獻(xiàn)血者紅細(xì)胞>Bc?？笻呈增強(qiáng)反應(yīng)。吸收放散試驗(yàn)：取獻(xiàn)血者紅細(xì)胞與效價(jià)為256的人源抗-A血清混合冷吸收后進(jìn)行放散,釋放液與A型試劑紅細(xì)胞反應(yīng)出現(xiàn)凝集,說(shuō)明其紅細(xì)胞上確有A抗原存在。唾液中血型物質(zhì)測(cè)定：唾液中未檢出血型物質(zhì),該獻(xiàn)血者為非分泌型。

抗AB反應(yīng)強(qiáng)度試驗(yàn)：用抗AB效價(jià)為4和抗B效價(jià)為16血清分別與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞反應(yīng),抗AB、抗B凝集強(qiáng)度分別為3+、2+,由上可得出抗AB增強(qiáng)。該個(gè)體可能是哪種血型？病例分析

患者男,20歲,臨床診斷為急性單核細(xì)胞白血病(M5a),血液檢果:WBC100.17×109/L,PLT9×109/L,申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞及血小板制品。輸血前進(jìn)行血型鑒定為Rh(D)陽(yáng)性,ABO血型正反定型(室溫)不相符,正定型紅細(xì)胞與抗A、抗B均不凝集,反定型血漿與A、O型紅細(xì)胞不凝集,與B型紅細(xì)胞強(qiáng)凝集。思考該做哪些實(shí)驗(yàn)確定ABO血型？實(shí)驗(yàn)方法1、紅細(xì)胞ABH抗原檢測(cè):采用試管法在室溫及4℃,使被檢者紅細(xì)胞分別與抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H單抗反應(yīng),鑒定其ABH抗原。2、血漿ABO血型抗體及不規(guī)則抗體檢測(cè):采用試管法,使血漿與標(biāo)準(zhǔn)A、B型紅細(xì)胞反應(yīng)。檢測(cè)ABO血型系統(tǒng)抗體;采用微柱凝膠抗球蛋白試驗(yàn),使血漿與3人份O型篩檢紅細(xì)胞反應(yīng),檢測(cè)ABO血型系統(tǒng)以外的不規(guī)則抗體。3、紅細(xì)胞吸收放散試驗(yàn):在壓積紅細(xì)胞中加入2倍體積人源抗-A血清,混勻,37℃吸收30min后轉(zhuǎn)入4℃過夜,離心去血清,將吸收后的紅細(xì)胞用4℃生理鹽水洗滌5次(末次洗液留作對(duì)照),56℃放散10min,離心取放散液,采用試管法,在室溫及4℃分別與A型紅細(xì)胞反應(yīng),檢測(cè)紅細(xì)胞弱A抗原。4、唾液血型物質(zhì)檢測(cè):把抗-H單克隆試劑、人源抗-A血清和人源抗-B血清分別按呈現(xiàn)++凝集的最高稀釋倍數(shù)稀釋,將被檢者的唾液煮沸后,與稀釋的抗-H單克隆試劑、人源抗-A血清和人源抗-B血清作中和抑制試驗(yàn),檢測(cè)是否有H、A、B血型物質(zhì)。在室溫及4℃,被檢者紅細(xì)胞與抗A、抗A1、抗B均不凝集,與抗AB微弱凝集,與抗H均明顯凝集;血漿與標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞及O型篩檢紅細(xì)胞均不凝集,與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞強(qiáng)凝集;紅細(xì)胞吸收人源抗A血清后的放散液與A型紅細(xì)胞有明顯凝集;唾液中檢出H及A血型物質(zhì),未檢出B血型物質(zhì)1、該患者是何血型？2、該患者該如何進(jìn)行輸血？3、該實(shí)驗(yàn)室做法是否正確？有何補(bǔ)充之處？病例分析

獻(xiàn)血者屠某，女，36歲，原定為B型，與B型白血病患者徐某主、次測(cè)配血均配合，而與另一個(gè)體陸某血清在鹽水介質(zhì)中弱凝集。紅細(xì)胞吸收放散試驗(yàn)：以效價(jià)128的抗A、抗B試劑分別與屠某紅細(xì)胞、A1B型紅細(xì)胞在4℃吸收1h，吸收后抗A效價(jià)64，抗B效價(jià)0.A1B紅細(xì)胞吸收后，抗A、抗B效價(jià)均為0.經(jīng)56℃放散，屠某紅細(xì)胞放散液中抗A效價(jià)為32，抗B為2，A1B型紅細(xì)胞放散液中抗A、抗B效價(jià)均為2.該獻(xiàn)血者可能是哪種血型？該患者作為獻(xiàn)血者，其紅細(xì)胞和血漿可以輸給哪種血型的受血者？病例分析在河北省血液中心2002年1月15日組織的一次無(wú)償獻(xiàn)血中,檢驗(yàn)科遇到1份正反定型不符標(biāo)本送血型參比實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。正定型反定型抗A抗B抗H抗A1抗ABABO4+2+mf2+—4++W+—當(dāng)反定型的反應(yīng)條件在37℃時(shí),A細(xì)胞側(cè)凝集消失,證明是冷凝集素所致,而B細(xì)胞側(cè)仍存在弱凝集。唾液物質(zhì)測(cè)定唾液中只分泌H物質(zhì)。用最佳稀釋度的抗-A、抗-B血清對(duì)唾液進(jìn)行測(cè)定,沒有發(fā)現(xiàn)A、B物質(zhì)。該個(gè)體可能是哪種血型？家系血型遺傳圖家族中其它c(diǎn)isAB型者大部分為非分泌型,即使是分泌型也僅分泌H物質(zhì)。僅發(fā)現(xiàn)1名(先證者之父)分泌A及H物質(zhì)PCR—SSP方法用于ABO疑難血型檢定樣品來(lái)源：2001年7月-2002年6月河南各地血站及省血液中心血清學(xué)方法檢測(cè)ABO血型正反定型不符的血樣共30份。選出本實(shí)驗(yàn)室再次血清學(xué)檢測(cè)仍正反定型不符或仍存在疑問的9例作ABO基因檢測(cè)；另挑選A、B、O、AB型正常樣品各2例抽提DNA擴(kuò)增ABO基因作為對(duì)照。標(biāo)本的基本情況1、2、5、7、8號(hào)為健康無(wú)償獻(xiàn)血者(2號(hào)檢測(cè)出存在抗．M)，3號(hào)為急性單核細(xì)胞白血病(AML)M5患者，4號(hào)為1名持續(xù)發(fā)燒原因待查的患者，6號(hào)為自身免疫性溶血性貧血、乙型肝炎、Goombs’試驗(yàn)呈陽(yáng)性，9號(hào)為肝癌患者；提取DNA擴(kuò)增引物PCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)取擴(kuò)增后標(biāo)本在含0．5gg的溴化乙錠(EB)的2％瓊脂糖凝膠中電泳15-20min，觀察結(jié)果；根據(jù)是否產(chǎn)生擴(kuò)增片段以及片段的長(zhǎng)度確定ABO基因型(同時(shí)擴(kuò)增出6和7特異性片段確定A2基因)。討論

根據(jù)血清反應(yīng)格局，1(有冷抗體影響)、2、5、7號(hào)判斷為亞型，其中5、7號(hào)未能檢測(cè)出B抗原，檢出的基因型證實(shí)了相應(yīng)基因的存在并最終確定血型；3號(hào)是由于疾病使血型抗原減弱，4號(hào)可能因疾病使抗體減弱，6號(hào)產(chǎn)生自身抗體使血型判斷困難，8號(hào)因血清中有較強(qiáng)的冷抗體影響了反定型，9號(hào)可能是抗B減弱，此5例均通過AB0基因的檢測(cè)確定了血型?；颊呓?jīng)基因檢測(cè)確定血型，給予同型血輸注治療均取得滿意的效果。

向東，劉曦，郭忠慧等，上海地區(qū)中國(guó)人群中ABO亞型的研究，中國(guó)輸血雜志，2006，19（1）：25-27目的研究中國(guó)人群中各種ABO亞型分布的特點(diǎn),以及在A、B亞型中不規(guī)則ABO抗體的發(fā)生率。方法用常規(guī)方法對(duì)本中心2003～2004年的獻(xiàn)血者血樣共440617份進(jìn)行篩選,對(duì)于正反定型不符的血樣進(jìn)一步作血清學(xué)以及分子生物學(xué)分析,并分類。另外,使用抗H和抗A1,篩選A2、A2B亞型。ABO亞型初篩用抗A,抗B做正定型,用Ac,Bc、Oc做反定型。使用96孔板,用Vivace型自動(dòng)加樣儀每份血樣加后,650g離心30s,放置10min,用判讀儀比色并以肉眼判斷。凡正反定型不符或凝集明顯較弱的血樣,均進(jìn)行手工復(fù)檢。

由于A2及A2B亞型通常正反定型相符,所以對(duì)篩選中檢出的A2、A2B未加統(tǒng)計(jì),而另用抗H和抗A1分別對(duì)隨機(jī)選取的2693份A型和869份AB型健康獻(xiàn)血者血樣進(jìn)行篩選,對(duì)篩選岀的血樣重復(fù)正反定型以及抗H、抗A1檢測(cè),并檢測(cè)血清中的可能存在的抗A1。結(jié)果

從440617份健康獻(xiàn)血者血樣中,篩選出的ABO亞型共66例(不包括A2,A2B和類孟買)。其中,A亞型22例,B亞型41例:AxB11例,AelB3例,Ax3例,Ael2例,Amh2例,A31例,Bx11例,B39例,ABx7例,AB35例,Bel3例,Bm2例,ABel1例,ABend1例,ABm1例,Bend1例;另檢出B(A)型1例、CisAB型2例。

從2693份A型和869份AB型血樣中,檢出A214例(0.520%);A2B亞型35例(4.03%)。對(duì)1695例上海獻(xiàn)血者同期隨機(jī)抽樣調(diào)查:A型占29.9%,B型占28.6%,AB型占11.0%。結(jié)合本次篩選的A2和A2B結(jié)果推算岀:A2占總?cè)巳旱谋壤秊闉?9.9%×0.520%=0.156%A2B占總?cè)巳旱谋壤秊?1.0%×4.03%=0.443%。ABO亞型分布的不平衡性根據(jù)對(duì)上海獻(xiàn)血者同期隨機(jī)抽樣調(diào)查,AB型和A型人數(shù)的比例為:AB/A=11.0%/29.9%=0.368。如果A亞型完全符合孟德爾遺傳規(guī)律遺傳,則在AB型和A型中檢出亞型的概率相同,因此A2B/A2=AB/A。

但在AB型中檢出A2B的幾率遠(yuǎn)高于A型中檢出A2的幾率。其它“A亞型B”的檢出率也遠(yuǎn)高于A亞型的檢出率如上所示,A亞型中,A亞型B的檢出率明顯較高,和非亞型數(shù)據(jù)比較,檢出率分別高出倍為:(A2B/A2)/(AB/A)=2.84/0.368=7.72倍;(AxB/Ax)/(AB/A)=3.67/0.368=9.97倍;(AelB/Ael)/(AB/A)=1.5/0.368=4.08倍。B亞型中,AB亞型的檢出率和非亞型數(shù)據(jù)比較,檢出率高出: