體內(nèi)藥物分析

千里之行，始于足下。第2頁(yè)/共2頁(yè)精品文檔推薦體內(nèi)藥物分析第二章生物樣品與樣品制備

1.體內(nèi)藥分的對(duì)象：人體和動(dòng)物體液、組織、器官、排泄物2．體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)：樣品量少，別易重新獲得；樣品復(fù)雜，干擾雜質(zhì)多；供臨床用藥監(jiān)護(hù)的檢測(cè)分析辦法要求簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，以便迅速為臨床提供設(shè)計(jì)合理的用藥方案及中毒拯救措施；實(shí)驗(yàn)室擁有多種儀器設(shè)備，可舉行多項(xiàng)分析工作；工作量大，測(cè)定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時(shí)別太容易。需相關(guān)學(xué)科參與。

3．體內(nèi)藥物分析樣品的種類：最常用且易獲得的分析樣品有：血樣、尿樣、唾液和糞便。特別事情下：乳汁、淚液、脊髓液、膽汁、羊水、各種組織

4．血清：血清是由血液中纖維蛋白原等的妨礙引起血液凝聚而析出的澄清黃群液體，約為全血的

30%?50%

5．尿液：尿液的要緊成分：水、含氮化合物、鹽類；體內(nèi)藥物清除要緊經(jīng)過(guò)尿液排出，藥物以其原型或代謝物及其綴合物等形式排出；尿藥測(cè)定要緊用于藥物劑量回收、尿清除率、生物利用度、藥物代謝率的研究，并可判斷患者是否按醫(yī)囑用藥。

6．生物樣品分析的前處理：是指測(cè)定生物樣品中的藥物及其代謝物時(shí)，對(duì)樣品舉行分離、純化、濃集，必要時(shí)對(duì)待測(cè)組分舉行衍生化，為測(cè)定制造良好的條件。

7．為何舉行前處理？

1）藥物進(jìn)入體內(nèi)除原藥外還有多種形式存在

2）生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜，尤其蛋白質(zhì)嚴(yán)峻妨礙分離效果，必須舉行前處理

3）除去介質(zhì)中含有的大量?jī)?nèi)源性物質(zhì)等雜質(zhì)，提取出低濃度的被測(cè)藥物，并且濃集藥物或代謝物的濃度，使其在所用分析技術(shù)的檢測(cè)范圍內(nèi)。

8．生物樣品處理辦法挑選的普通原則：待測(cè)藥物的理化性質(zhì)；待測(cè)藥物測(cè)定的目的與濃度范圍。9．去除蛋白質(zhì)的辦法：加與水相混溶的有機(jī)溶劑；加入中性鹽；加入強(qiáng)酸；加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑；酶解法。

10．生物樣品的分析由兩步組成：樣品的前處理（分離、純化與濃集）和對(duì)提取物的儀器分析；提取法是應(yīng)用最多的分離、純化辦法；提取的目的：從大量共存物中分離出所需要的微量組分藥物及其代謝物，并經(jīng)過(guò)溶劑的蒸發(fā)使樣品得到濃集，以供測(cè)定；提取法分為液-液提取法和液-固提取法。

11．提取溶劑的挑選：對(duì)被測(cè)組分的溶解度大，沸點(diǎn)低，易于濃集、揮散，與水別相混溶，無(wú)毒、化學(xué)穩(wěn)定、別易乳化；最常用的溶劑是乙醚和氯仿。

12．被測(cè)組分的濃集：樣品在提取過(guò)程中被測(cè)組分得到純化但因微量的組分分布在較大體積的提取溶劑中，由于進(jìn)樣量的限制，被測(cè)組重量也許達(dá)別到檢測(cè)靈敏度，故需將被測(cè)組分濃集后再測(cè)定；兩種濃集辦法：末次提取時(shí)加入提取液盡可能少；揮去提取溶劑法。

13．分離前將藥物舉行衍生化的目的：使藥物變成具有能分離的性質(zhì)；提高檢測(cè)的靈敏度；增強(qiáng)藥物的穩(wěn)

定性；提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體分離的能力；GC中的化學(xué)衍生化和HPLC中的化學(xué)衍生化。

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第三章體內(nèi)藥物分析辦法的設(shè)計(jì)與驗(yàn)證

1生物樣品經(jīng)處理后，需挑選適當(dāng)?shù)姆治鲛k法舉行測(cè)定，目前供生物樣品藥物及其代謝物監(jiān)測(cè)的分

析辦法要緊有以下五類：光譜分析法；群譜法；毛細(xì)管電泳法；免疫分析法；同位素法

2.體內(nèi)藥物分析辦法的挑選原則：普通要依照藥物的結(jié)構(gòu)、物理性質(zhì)、體內(nèi)藥物濃度大小、干擾成分的多少、樣品的預(yù)處理辦法、實(shí)驗(yàn)條件和目的等因素舉行綜合思考，方可挑選出可供生物樣品中藥物及其代謝物含量測(cè)定的分析辦法。

3.體內(nèi)藥物分析辦法設(shè)計(jì)的要緊依據(jù)：

(1明確分析辦法的目的要求；

(2)調(diào)研文獻(xiàn)了解待測(cè)藥物的特性；

(3)儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)室條件。

4.體內(nèi)藥物分析辦法設(shè)立與建立的普通步驟：依據(jù)測(cè)定目的要求結(jié)合藥物結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)及體內(nèi)存

在狀態(tài)、參考同類藥物的文獻(xiàn)資料，先擬定初步的分析辦法舉行一系列的體外和體內(nèi)試驗(yàn)工作以挑選最合適的實(shí)驗(yàn)條件，進(jìn)一步驗(yàn)證所擬定的分析辦法是否習(xí)慣實(shí)際樣品的檢測(cè)，要緊步驟包括：以純品舉行測(cè)定；以處理過(guò)的空白樣品舉行測(cè)定；回收率的測(cè)定；以水代替空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定；以空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定；體內(nèi)實(shí)際樣品測(cè)定。

5.體內(nèi)藥物分析辦法的評(píng)價(jià)：

準(zhǔn)確度：回收率一一絕對(duì)回收率和辦法回收率

周密度：日內(nèi)或批內(nèi)周密度、日偶爾批間周密度

靈敏度：檢測(cè)限、定量限、最低檢測(cè)濃度

專屬性：代謝產(chǎn)物、內(nèi)源性物質(zhì)、配伍藥物的干擾

穩(wěn)定性：短期室溫條件下穩(wěn)定性考察

長(zhǎng)期低溫條件下穩(wěn)定性考察

冷凍-解凍穩(wěn)定性考察

另外對(duì)體內(nèi)藥物分析辦法的考察還要從分析辦法的可靠性、操作的難易、每個(gè)樣品測(cè)定耗費(fèi)時(shí)刻、儀器設(shè)備要求及成本費(fèi)用多少舉行綜合評(píng)價(jià)

第4章所有適用于體內(nèi)藥物分析的辦法簡(jiǎn)介

第一節(jié)、紫外—可見(jiàn)分光光度法：

1.UV-VIS的基本原理：

物質(zhì)對(duì)別同顏群的光能汲取是有挑選性的，特定的物質(zhì)要緊汲取一定波長(zhǎng)的光，物質(zhì)汲取了高能量的光往后，就發(fā)生能級(jí)躍遷產(chǎn)生汲取光譜。當(dāng)物質(zhì)汲取的光的波長(zhǎng)在200?400XXX具有共軛結(jié)構(gòu)

的有機(jī)復(fù)雜的外層電子(價(jià)電子)發(fā)生能級(jí)躍遷并伴隨著分子振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷，形成紫外吸

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收光譜。400~76OXXXM有較大共軛結(jié)構(gòu)的價(jià)電子或有群無(wú)機(jī)物的價(jià)電子發(fā)生能級(jí)躍遷，并伴隨分子振動(dòng)

能級(jí)的躍遷形成可見(jiàn)光譜

2.UV-VIS定量分析的依據(jù)：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL其中E為汲取系數(shù)，在定量分析中盡量選E值越大的波長(zhǎng)處測(cè)定以提高測(cè)定的靈敏度越好即E值越大所能測(cè)量的某物質(zhì)的溶液濃度越小，測(cè)定靈敏度越高。

3.汲取度的加和性：假如溶液中存在兩種以上吸光物質(zhì)時(shí)，只要共存物質(zhì)別互相妨礙也別改變各自本身的汲取系數(shù)，則溶液的汲取度是各組分汲取度的加和，各組分的汲取度由各自的濃度與汲取系數(shù)所決定。物質(zhì)對(duì)光的汲取度加和性是測(cè)定混合組分的依據(jù)。

4.妨礙測(cè)定準(zhǔn)確度的因素：

1、偏離Beer定律而引起的誤差

要緊由于儀器和溶液（理化性質(zhì)）的實(shí)際條件與Beer-Lambert定律的條件別一致而引起；

儀器：光源別穩(wěn)、入射光的譜帶寬度別夠窄、比群皿的厚度和均勻度別合要求

溶液的理化性質(zhì)：被測(cè)物為膠體溶液或渾濁液；被測(cè)物的理化性質(zhì)別穩(wěn)或溶液濃度改變而使溶質(zhì)

發(fā)生解離、締合導(dǎo)致被測(cè)物的組成改變或顯群條件操縱不行；被測(cè)物溶液濃度過(guò)大（大于

0.01mol/L）導(dǎo)致工作曲線彎曲。

2、透光率測(cè)定誤差：濃度測(cè)量值的相對(duì)誤差，C/C=0.434；T/TlgT，當(dāng)汲取度值在0.2—0.7時(shí)濃

度測(cè)量值的相對(duì)誤差值較小，為最佳測(cè)量范圍。

在體內(nèi)藥物分析中由于藥物濃度較低，汲取度的測(cè)量值較小，會(huì)在0.02-0.001之間，測(cè)量值的相對(duì)誤差值達(dá)2.8%-10.3%

3、操作別當(dāng)引起的誤差

5.常用樣本處理辦法：

液液萃取

萃取后衍生化

固相萃取

第二節(jié)氣相XXX譜：

1.基本原理：以氣體（載氣）為流淌相，由于被測(cè)樣品中各組分在固定相與載氣間的分配系數(shù)別同而被分離。各組分將按分配系數(shù)大小順序，依次被載氣帶出XXX譜柱，分配系數(shù)小的組分先流出；分配系數(shù)大的后流出。流出群譜柱的各組分被載氣帶入檢測(cè)器。檢測(cè)器將物質(zhì)的質(zhì)量變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡妷夯螂娏髯兓?，由記錄器記錄電壓或電流隨時(shí)刻的變化，即群譜的峰高或峰面積。由于群譜的峰高或峰面積與被測(cè)物質(zhì)的含量成正比，可用峰高或峰面積舉行定量分析；物質(zhì)的群譜峰出峰時(shí)刻與物質(zhì)本性有關(guān)，群譜峰的出峰時(shí)刻即保留時(shí)刻舉行定性分析。

2.要緊儀器裝置：載氣瓶f壓力調(diào)節(jié)器f凈化器f穩(wěn)壓閥f柱前壓力表f轉(zhuǎn)子流量計(jì)f進(jìn)樣器f群譜柱—群譜柱恒溫箱—檢測(cè)器—尾氣出口—記錄器

載氣由高壓氣瓶供給，經(jīng)壓力調(diào)節(jié)器落壓，經(jīng)凈化器脫水及凈化，由穩(wěn)壓閥調(diào)至適宜的流量進(jìn)入群譜，待流量、溫度及基線先定后，即可進(jìn)樣。液態(tài)樣品用微量注射器吸取，由進(jìn)樣器注入，樣品被載氣帶入XXX譜柱。氣態(tài)樣品可用六通閥或注射器進(jìn)樣。

3.固定液的必備條件：普通為高沸點(diǎn)的液體，室溫時(shí)為固態(tài)和液態(tài)

(1)在操作溫度下呈液體狀態(tài)及蒸氣壓低，蒸氣壓低，固定液流失慢、柱壽命長(zhǎng)、檢測(cè)器本底低

(2)對(duì)樣品中各組分有腳夠的溶解能力，分配系數(shù)較大

(3)挑選性能高，對(duì)兩個(gè)沸點(diǎn)或性質(zhì)相近的組分的分配系數(shù)比別相等

(4)與樣品中的各組分別產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

4.固定液挑選的原則：

相似性原則：按被分離組分的極性或官能團(tuán)與固定液相似的原則來(lái)挑選，相似相溶的原因

被分離藥物為非極性的f非極性的固定液

被分離藥物為極性的f極性的固定液

被分離藥物為酯或醇f酯、聚酯或醇、聚乙二醇類固定液

難分離藥物樣品f按一定比例組成的混合液涂在載體

5.常用檢測(cè)器種類：30多種，要緊有：FID、AFID、NPDECDMSD

第三節(jié)高效液相XXX普法

1.基本原理：混合物中各組分在固定相與流淌相中的挪移速度別同二相互分離。分析HPLC勺分離分析質(zhì)量，要緊參數(shù)如保留值(tR)、相平衡參數(shù)(K)、分離度(R)、理論塔板數(shù)(n)。

2.保留值：

保留值：用來(lái)描述樣品組分在XXX譜中保留程度的參數(shù)，是群譜的定性指標(biāo)?？捎帽Ａ魰r(shí)

間、保留體積、調(diào)整保留時(shí)刻和調(diào)整保留體積來(lái)表示。

保留時(shí)刻(tR)：從進(jìn)樣開(kāi)始到某組分的群譜峰頂點(diǎn)時(shí)時(shí)刻間隔

保留體積(VR):從進(jìn)樣開(kāi)始到某組分在柱后浮現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所需經(jīng)過(guò)群譜柱的流淌

體積

死時(shí)刻tO:別保留組分(該組分別溶于固定相或別被固定相吸附)的保留時(shí)刻，相對(duì)應(yīng)

的流淌相的體積為死體積V0

調(diào)整保留時(shí)刻tR'二tR—t0和調(diào)整保留體積VR'二VR-V0

3,相平衡參數(shù)：在群譜洗脫過(guò)程中樣品分子在流淌相和固定相之間分配處于動(dòng)力學(xué)平衡狀態(tài)，這一平衡可用平衡分配系數(shù)和容量因子表示。

4?分離度R定量分析時(shí)要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰有較好的分離度R,—般R1.5，除另有規(guī)定。

5.理論塔板數(shù)n

（1）群譜柱的理論塔板數(shù)n=5.54（tRwh/2）2或n=16（tRw），是柱效指標(biāo)

（2）在選定條件下用供試品溶液或內(nèi)標(biāo)物溶液（規(guī)定項(xiàng)規(guī)定），測(cè)得理論板數(shù)n,假如n：：：規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變柱長(zhǎng)、載體性能、XXX譜柱充填優(yōu)劣，使n達(dá)到要求

（3）wh/2越小柱效越高。增加n來(lái)提高分離度，即使群譜峰變窄將兩相鄰峰分開(kāi)

6.梯度洗脫：所謂梯度洗脫，具有兩種或兩種以上別同極性的溶劑在分離過(guò)程中按一定程序延續(xù)的改變，以

改變流淌相的配比和極性。

7.反相鍵合相群譜：在反相群譜中流淌相得極性大于固定相得極性.洗脫次序?yàn)闃O性大得組分先洗脫，極性小得組分后洗脫

固定相一非極性鍵合相即鍵合相表面基團(tuán)為非極性烴基,最常用得為十八烷基鍵合相（ODS鍵合相），但注意

鍵合相的穩(wěn)定性（pH2~7.5）及鍵合相的重現(xiàn)性

流淌相：與普通液相群譜用流淌相的要求一樣?；瘜W(xué)穩(wěn)定性好，別與固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；必

須與檢測(cè)器相習(xí)慣；對(duì)樣品有適宜的溶解度；粘度小，因?yàn)檎扯刃〉娜軇┛稍黾又鶋翰⒎恋K柱效。最廣泛應(yīng)用的流淌相甲醇-水、乙睛-水、四氫呋喃-水

8.正相鍵合相群譜：正相鍵合相群譜中流淌相的極性小于固定相的極性。洗脫次序?yàn)闃O性弱的先出峰，極性強(qiáng)的后出峰.正相鍵合相的分離機(jī)理有吸附合分配之分爭(zhēng)，吸附過(guò)程是要緊的相互作用。

正相鍵合相群譜中的固定相為極性鍵合固定相，要緊是氨基、氰基鍵合相。

流淌相:正相群譜流淌相的挑選原則和液-固群譜、薄層群譜的洗脫劑的挑選大體