動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)二魚類采血技術(shù)與血細(xì)胞生理

動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)二魚類采血技術(shù)與血細(xì)胞生理第1頁(yè)/共27頁(yè)血液組成第2頁(yè)/共27頁(yè)紅細(xì)胞脆性與溶血：紅細(xì)胞具有選擇透過(guò)性，高滲失水，低滲吸水，低滲條件下或其他原因致使紅細(xì)胞易破裂導(dǎo)致血紅蛋白逸出稱溶血。第3頁(yè)/共27頁(yè)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?．學(xué)習(xí)魚類采血的主要方法，掌握魚類尾柄動(dòng)脈采血技術(shù)；2．了解血液的組成，進(jìn)一步深刻認(rèn)識(shí)血漿與血清的主要區(qū)別。3．觀察紅細(xì)胞在不同濃度生理鹽水中的細(xì)胞形態(tài)，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)紅細(xì)胞的滲透脆性。第4頁(yè)/共27頁(yè)【實(shí)驗(yàn)原理】第5頁(yè)/共27頁(yè)第6頁(yè)/共27頁(yè)第7頁(yè)/共27頁(yè)第8頁(yè)/共27頁(yè)第9頁(yè)/共27頁(yè)第10頁(yè)/共27頁(yè)第11頁(yè)/共27頁(yè)【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

鯽魚【實(shí)驗(yàn)藥品】

肝素鈉溶液、MS-222溶液，生理鹽水（1%，0.65%，0.3%）、蒸餾水?！緝x器與器材】

解剖盤1個(gè)、毛巾1塊，1mL注射器5個(gè)、燒杯（200mL）、1.5mL離心管（10個(gè)）、顯微鏡、載破片5片、滴管2支、拭鏡紙。第12頁(yè)/共27頁(yè)【實(shí)驗(yàn)方法與步騾】1、血液采集

（1）實(shí)驗(yàn)魚的麻醉

將鯽魚先放入MS-222溶液的桶中，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)魚的麻醉，當(dāng)鯽魚在麻醉劑溶液中緩慢運(yùn)動(dòng)或在桶中側(cè)翻時(shí)，這時(shí)表明麻醉的程度比較適中。第13頁(yè)/共27頁(yè)魚類麻醉前后對(duì)比示意圖第14頁(yè)/共27頁(yè)

（2）取血的準(zhǔn)備

將準(zhǔn)備好的1mL注射器，一只不作任何處理，一只抽動(dòng)活塞用肝素鈉溶液將注射器內(nèi)濕潤(rùn)，為血液的采集做好準(zhǔn)備工作。第15頁(yè)/共27頁(yè)

（3）血液的采集

注射器的針頭從臀鰭基部下針，將針頭沿著垂直于尾柄的方向推進(jìn)，使針頭剛好尾部脊柱的下側(cè)，此時(shí)保證針頭的位置不隨意挪動(dòng)，右手大拇指和食指帶動(dòng)活塞向外運(yùn)動(dòng)，經(jīng)大氣壓力將血液壓入注射器中。第16頁(yè)/共27頁(yè)2、血清、血漿的制備①血清的制備

用未經(jīng)肝素鈉溶液處理的注射器所采集的血樣，注入離心管后讓其靜止放置20分鐘，待血液凝結(jié)后所析出的上清液即為血清。

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②血漿的制備

經(jīng)肝素鈉溶液處理的注射器所采集的血樣，注入離心管后放置1小時(shí)，或者3000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，獲得的上層淡黃色液體即為血漿。③比較血漿和血清兩者存在的區(qū)別。第18頁(yè)/共27頁(yè)3、紅細(xì)胞的滲透脆性①等滲觀察

用滴管吸0.65%的生理鹽水，吸1mL左右滴入1只新的離心管中，再將剛采取的新鮮血液（或去纖維蛋白血）用注射器輕輕推1-2滴到該生理鹽水中，待輕輕顛倒混勻后，用吸管滴1滴到載玻片上，放于顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。第19頁(yè)/共27頁(yè)

②滲透失水

用滴管吸1%的生理鹽水，吸1mL左右滴入1只新的離心管中，再將剛采取的新鮮血液（或去纖維蛋白血）用注射器輕輕推1-2滴到該生理鹽水中，待輕輕顛倒混勻后，用吸管滴1滴到載玻片上，放于顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。第20頁(yè)/共27頁(yè)

③滲透吸水

用滴管吸0.3%的生理鹽水，將1mL左右生理鹽水滴入1只新的離心管中，再將剛采取的新鮮血液（或去纖維蛋白血）用注射器輕輕推1-2滴到該生理鹽水中，待輕輕顛倒混勻后，用吸管滴1滴到載玻片上，放于顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。

④脆性鑒定

再將新鮮血液滴入蒸餾水中，觀察細(xì)胞的形態(tài)。第21頁(yè)/共27頁(yè)【注意事項(xiàng)】1．麻醉實(shí)驗(yàn)魚時(shí)不要過(guò)度麻醉，會(huì)對(duì)血液的流動(dòng)產(chǎn)生一定的影響，最終導(dǎo)致采血困難。同時(shí)，麻醉的時(shí)間也不能過(guò)短，否則影響采血操作。2．肝素鈉溶液處理注射器時(shí)，一定要將注射器內(nèi)部全部濕潤(rùn)，否則仍可能會(huì)產(chǎn)生凝血。第22頁(yè)/共27頁(yè)3．下針的位置有要準(zhǔn)，一定要刺到脊柱腹側(cè)，且針頭不能輕易變動(dòng)位置，不然血液很難抽出，若出現(xiàn)位置失誤，應(yīng)該重新再試一次。4．未經(jīng)肝素鈉處理的注射器，抽出的血液要盡快注入到離心管中，避免血液在注射器中凝固。第23頁(yè)/共27頁(yè)5．血液顛倒混勻的過(guò)程要輕，不能太劇烈，否則容易導(dǎo)致溶血。6．離心的速度不能太快，否則易導(dǎo)致溶血。第24頁(yè)/共27頁(yè)【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】1.描述血漿與血清的主要特點(diǎn)，并說(shuō)出他們的主要區(qū)別。2.描述不同濃度下紅細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，以及形成這種結(jié)果的原因。3.描述尾柄動(dòng)脈采血的過(guò)程。第25頁(yè)/共27頁(yè)【思考與討論】1．采出的血液很快凝固，這是由什么原因?qū)е碌?2．采血的過(guò)程中，為什么針