同濟(jì)化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)課件hplc

3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

操作步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容報(bào)告儀器3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

HPLC

系統(tǒng)溶劑傳輸系統(tǒng)：心臟高壓泵樣品引入系統(tǒng)：進(jìn)樣器樣品分離系統(tǒng)：關(guān)鍵色譜柱信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)：檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：軟件3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器Agilent1100Agilent1100

基本組成脫氣機(jī)

4元泵

DAD檢測(cè)器

手動(dòng)進(jìn)樣器3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器：脫氣機(jī)脫氣機(jī)在真空室內(nèi)使用半透膜管路

TubularPlasticMembrane有效降低噪音半透膜管

透氣不漏液3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器：四元泵不是４個(gè)泵／必配真空脫氣機(jī)／二元泵各控制一種溶劑四元泵G1311ＡＭＧＧＶ在起作用ＭＧＧＶ：比例閥

ＡＩＶ：主動(dòng)閥

ＯＢＶ：?jiǎn)蜗蜷y3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

泵的基本原理往復(fù)活塞泵(單向閥)彈簧隔板/紅寶石球串聯(lián)柱塞泵消除流量脈沖

并聯(lián)柱塞泵減小流量脈沖

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儀器：DAD檢測(cè)器UV/Vis雙燈，全波長(zhǎng)檢測(cè)ＤＡＤ檢測(cè)器流路3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器：手動(dòng)進(jìn)樣器-六通閥/定量環(huán)六通閥定量環(huán)LoadInject通廢液口進(jìn)柱定量環(huán)自動(dòng)進(jìn)樣100樣品盤/機(jī)器手/自動(dòng)洗針3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器：反相柱色譜柱最常用：常規(guī)分析80%MobilePhase：水/甲醇/乙腈柱：C-8/C-18/C-4/C-2適用：中性/弱酸堿3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

儀器：樣品過濾針式濾器針式過濾器濾膜材質(zhì)混合纖維素（水系）尼龍膜（有機(jī)系）聚四氟乙烯膜聚醚砜膜孔徑(μm)0.22

0.45、0.80.22

0.45、0.80.22

0.450.22

0.45作用：樣品預(yù)濾、澄清除顆粒、液體和氣體的除菌過濾。是過濾小量樣品的首選方法。外殼材質(zhì)為聚碳酸酯塑料上、下部由超聲波焊接成一體，耐高壓。某公司生產(chǎn)的針式過濾器規(guī)格HPLC實(shí)驗(yàn)

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操作步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容報(bào)告儀器3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

開機(jī):先開電腦，出現(xiàn)

CAGBootpServer窗口開機(jī):依次開脫氣機(jī)/四元泵/檢測(cè)器，窗口出現(xiàn)7行字，通訊成功。3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

開機(jī):雙擊online軟件

出現(xiàn)右面/下面窗口點(diǎn)擊這里的on系統(tǒng)正常工作左旋四元泵的Purge3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

流動(dòng)相比例程序洗脫泵的設(shè)置3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

選擇波長(zhǎng)等DAD設(shè)置3/17/20234:28PMHPLC實(shí)驗(yàn)

進(jìn)樣Purge右旋到位用專用注射器進(jìn)樣20μl的三倍系統(tǒng)壓力及基線balance后穩(wěn)定Inject，開始分離檢測(cè)3/17/20234:28PM實(shí)驗(yàn)內(nèi)容操作步驟報(bào)告儀器HPLC實(shí)驗(yàn)

反相HPLC分析抗生素測(cè)試條件(參數(shù)為出廠報(bào)告)

流動(dòng)相：80%甲醇/20%純水

柱壓：79.3Bar

柱流速：1.00ml/min

線性流速：0.164cm/sec

溫度：室溫（常溫23℃）

注入體積：5μlHPLC實(shí)驗(yàn)

柱效檢測(cè)AgilentXDB-C8柱：4.6×150mm,5μmHPLC實(shí)驗(yàn)

柱效檢測(cè)溶劑：與流動(dòng)相組成相同，甲醇（色譜純）、高純水配制成，

甲醇體積分?jǐn)?shù)為75%。分析對(duì)象：尿嘧啶、苯酚、甲苯、4-氯硝基苯均為分析純。四種單組分溶液，及四種物質(zhì)的混合液過濾后，進(jìn)樣分析。尿嘧啶苯酚甲苯4-氯硝基苯HPLC實(shí)驗(yàn)

借這組標(biāo)樣，做系列驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)1不同公司儀器VarianProstar二元泵210/柱溫箱DAD335/自動(dòng)進(jìn)樣器410Agilent1100四元泵/DAD手動(dòng)進(jìn)樣器20μL定量環(huán)明白各部件及功能HPLC實(shí)驗(yàn)

借這組標(biāo)樣，做系列驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)2改變流動(dòng)相甲醇/水乙腈/水改變甲醇比例等度/梯度洗脫HPLC實(shí)驗(yàn)

借這組標(biāo)樣，做系列驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)3不同色譜柱不同固定相C8/C18/CN/AqC18/苯基不同填料粒徑3.5/5μM換柱HPLC實(shí)驗(yàn)

進(jìn)樣前準(zhǔn)備——樣品過濾一次性注射器針式（頭）過濾器樣品瓶HPLC實(shí)驗(yàn)

進(jìn)樣針進(jìn)樣閥，20μl定量環(huán)進(jìn)樣:留下印象的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容HPLC實(shí)驗(yàn)

柱效檢測(cè)次序：尿嘧啶/苯酚/4-氯硝基苯/甲苯AgilentXDB-C8柱：4.6×150mm,5μmHPLC實(shí)驗(yàn)

柱效檢測(cè)UltimateTMXB-Phenyl(苯基)

4.6x150mm,5μm流動(dòng)相:75%甲醇/25%水流速:1ml/min

檢測(cè)波長(zhǎng):254nm溫度：室溫3/17/20234:28PM報(bào)告實(shí)驗(yàn)內(nèi)容操作步驟儀器HPLC實(shí)驗(yàn)

HPLC實(shí)驗(yàn)

柱效檢測(cè)純物質(zhì)/2種混合物色譜圖/用軟件輸出htm格式對(duì)比純物質(zhì)/混合物的純光譜/要圖計(jì)算理論塔板數(shù)/分離度與出廠報(bào)告對(duì)照/討論/報(bào)告上傳HPLC實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前