第19章 生物技術(shù)藥物制劑

/第十九章生物技術(shù)藥物制劑第一節(jié)概述一、生物技術(shù)的基本概念生物技術(shù)或稱生物工程(biotechnologｙ）,是應(yīng)用生物體（包括微生物、動(dòng)物細(xì)胞，植物細(xì)胞）或其組成部分（細(xì)胞器和酶），在最適條件下,生產(chǎn)有價(jià)值的產(chǎn)物或進(jìn)行有益過(guò)程的技術(shù)。現(xiàn)代生物技術(shù)主要包括基因工程、細(xì)胞工程與酶工程。此外還有發(fā)酵工程（微生物工程）與生化工程。生物技術(shù)藥物是指采用現(xiàn)代生物技術(shù)，借助某些微生物、植物或動(dòng)物來(lái)生產(chǎn)所需的藥品。采用DNA重組技術(shù)或其他生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物,也稱為生物技術(shù)藥物。近十幾年來(lái)，生物技術(shù)在醫(yī)藥方面取得了驚人的成就，已有不少生物技術(shù)藥物應(yīng)用于臨床,下面介紹一些國(guó)內(nèi)外已批準(zhǔn)上市或正在研究的生物技術(shù)藥物產(chǎn)品。二、生物技術(shù)藥物的研究概況生物技術(shù)藥物產(chǎn)品，目前國(guó)內(nèi)外已批準(zhǔn)上市的約４0余種，見(jiàn)表１9－１，正在研究的有數(shù)百種之多，部分正在研究的生物技術(shù)或其他來(lái)源的藥物列于表19-2中，這些藥物均屬肽類與蛋白質(zhì)類藥物.表19—1已批準(zhǔn)上市的生物技術(shù)藥物產(chǎn)品藥品名稱用途批準(zhǔn)時(shí)間人胰島素糖尿病治療藥198２人生長(zhǎng)激素（hGH)治療侏儒癥１985α-2b干擾素治療毛細(xì)胞白血病、乙型肝炎１986OKT3單抗(小鼠抗Ｔ細(xì)胞單抗）急性肝移植排斥反應(yīng)198６乙肝疫苗預(yù)防乙型肝炎1９86組織溶纖酶原激活素急性心肌梗死１９87人促紅細(xì)胞生成素（EPO）慢性腎衰貧血1９８7Γ－lb干擾素慢性肉芽腫疾病1990GM-集落刺激因子（GＭ—CSF）骨髓移植中性、白細(xì)胞減少癥1991G—集落刺激因子（Ｇ-CＳＦ）腫瘤化學(xué)輔助治療、白血病、艾滋病199１白細(xì)胞介素－２腎細(xì)胞癌1９９2凝血VIII因子血友病1992人腫瘤壞死因子突變體肺、胃、結(jié)腸腫瘤1995幼畜腹瀉疫苗預(yù)防仔豬腹瀉上市α-ｎ３干擾素生殖器疣19８9小鼠抗CD３抗體腎移植排斥反應(yīng)1986單克隆抗體(診斷劑)結(jié)腸、直腸、卵巢癌診斷1９9２重組DNＡ酶α囊性纖維變性,改進(jìn)胸功能1９94抗血小板凝聚單克隆抗體防動(dòng)脈突然關(guān)閉高危性血管成形術(shù)病人１９9５重組葡糖腦苷脂—米葡糖腦酶戈謝病（各器官積聚葡糖腦苷脂）199４重組β-１6干擾素緩解上皮癌、腎癌、多發(fā)性骨髓瘤1993環(huán)孢素A抑制T淋巴細(xì)胞功能199６降鈣素治療骨質(zhì)疏松1996重組γ-干擾素免疫功能障礙、癌癥、感染性疾病1９9２奧曲肽（octreｏtiｄe）胃腸胰內(nèi)分泌腫瘤、消化性潰瘍出血、肢端肥大癥、垂體瘤、柯興氏綜合癥、糖尿病等1998＊gｒlａnｕｌocyte／macrophagecolｏny—ｓｔiｍuｌａt(yī)ingfａｃtoｒ（ＧM—CSF)，粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子表1９-２部分正在研究的生物技術(shù)及其他來(lái)源的蛋白質(zhì)藥物藥物作用與用途血管緊張素D抑制劑降壓心房肽激素（atriopｅptins）調(diào)節(jié)心血管功能降鈣素基因相關(guān)因子血管舒張藥Β—內(nèi)啡肽鎮(zhèn)痛神經(jīng)生長(zhǎng)因子，hNGF刺激神經(jīng)生長(zhǎng)和修復(fù)，癡呆促胃液素抑制劑減少胃酸分泌腦啡肽刺激淋巴細(xì)胞母細(xì)胞化促胸腺生成素選擇性T細(xì)胞分化激素腫瘤壞死因子控制多形核細(xì)胞功能表皮生長(zhǎng)因子，hＮGF促進(jìn)表皮生長(zhǎng)，癡呆生長(zhǎng)抑素（somａｔoｓtatix)抑制胃液素分泌促性腺素促進(jìn)排卵、精子生成促黃體生成素釋放激素（LHRH）促進(jìn)下丘腦性閉經(jīng)婦女排卵催產(chǎn)素促進(jìn)分娩促甲狀腺素釋放激素(TRＨ）延長(zhǎng)哺乳期婦女的不育和泌乳加壓素治療尿崩癥人尿激酶原溶血栓，抗凝劑人超氧化物歧化酶腎移植,燒傷白細(xì)胞介素-６腫瘤、骨髓移植，刺激造血白細(xì)胞介素－１1促血小板生成鏈激酶，ＬSＫ溶血栓人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子神經(jīng)損傷人胰島素生長(zhǎng)因子侏儒癥肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子重型肝炎肝癌單克隆抗體肝癌乙肝單克隆抗體乙肝反義寡聚核苷酸HIV感染和艾滋病TK載體產(chǎn)生細(xì)胞腦癌巨核細(xì)胞與發(fā)育因子刺激血小板生成脂質(zhì)體包被IL－2，OTX—２87腫瘤抗ＣD20基因工程抗體B細(xì)胞淋巴瘤表19—２中所列藥物,如環(huán)孢素A(cｙclｏsｐoriｎＡ）、降鈣素（ｃａlciｔonin）、促黃體生成素釋放激素（ｌutｅinｉzｉnghormｏnerｅleasｅｈorｍone,LHRH）類似物、催產(chǎn)素、加壓素等，用提取或其他方法生產(chǎn)，已在臨床上使用。隨著生物技術(shù)藥物的發(fā)展，肽和蛋白質(zhì)藥物制劑的研究與開發(fā)，已成為醫(yī)藥工業(yè)中一個(gè)重要的領(lǐng)域，同時(shí)給藥物制劑帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。由于生物技術(shù)產(chǎn)品多為多肽和蛋白質(zhì)類，性質(zhì)很不穩(wěn)定,極易變質(zhì)，因此如何將這類藥物制成安全、有效、穩(wěn)定的制劑,就是擺在我們面前的一大難題。例如降鈣素基因相關(guān)肽是治療高血壓的有效藥物,但該藥物很不穩(wěn)定,雖然早已開發(fā)，但由于存在以上問(wèn)題，至今未形成產(chǎn)品。另一方面這類藥物對(duì)酶敏感又不易穿透胃腸粘膜，故只能注射給藥，使用很不方便.因此,運(yùn)用制劑手段將這類藥物制成口服制劑或通過(guò)其他途徑給藥，以提高其穩(wěn)定性和患者使用的順應(yīng)性,是一項(xiàng)非常有意義的工作，具有潛在的研究?jī)r(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。三、生物技術(shù)藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與理化性質(zhì)生物技術(shù)藥物多為多肽類及蛋白質(zhì)類藥物，這些藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)相當(dāng)復(fù)雜，理化性質(zhì)也有它的特殊性，因此在設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià)這類藥物的給藥系統(tǒng)時(shí)必須首先了解其結(jié)構(gòu)特性與理化性質(zhì)。（一）蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)1。蛋白質(zhì)的組成和一般結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)是由許多氨基酸按一定順序排列，通過(guò)肽鍵相連而成的多肽鏈。蛋白質(zhì)分子量很大，一般在5×1０3～5×10６.蛋白質(zhì)的肽鏈結(jié)構(gòu)包括氨基酸組成、氨基酸排列順序、肽鏈數(shù)目、末端組成和二硫鍵的位置等.組成蛋白質(zhì)的氨基酸有2０多種,一個(gè)氨基酸的羧基可以和另一個(gè)氨基酸的氨基縮合失去1分子水而生成肽，兩個(gè)氨基酸縮合成的肽稱為二肽，由十個(gè)以上氨基酸組成的肽稱多肽.連接氨基酸之間的鍵稱為酰胺鍵,又稱肽鍵，是蛋白質(zhì)中氨基酸之間連接最基本的共價(jià)鍵。蛋白質(zhì)多肽鏈中許多氨基酸按一定的順序排列,每種蛋白質(zhì)都有特定的氨基酸排列順序。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)可分為一、二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu).一級(jí)結(jié)構(gòu)為初級(jí)結(jié)構(gòu)，指蛋白質(zhì)多肽鏈中的氨基酸排列順序,包括肽鏈數(shù)目和二硫鍵位置；二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)為高級(jí)結(jié)構(gòu)或空間結(jié)構(gòu)。高級(jí)結(jié)構(gòu)和二硫鍵對(duì)蛋白質(zhì)的生物活性有重要影響。２．蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)包括二級(jí)、三級(jí)與四級(jí)結(jié)構(gòu)。二級(jí)結(jié)構(gòu)指蛋白質(zhì)分子中多肽鏈骨架的折疊方式，即肽鏈主鏈有規(guī)律的空間排布,一般有螺旋結(jié)構(gòu)與折疊形式。三級(jí)結(jié)構(gòu)是指一條螺旋肽鏈,即已折疊的肽鏈在分子中的空間構(gòu)型，即分子中的三維空間排列或組合方式系一條多肽鏈中所有原子的空間排布.四級(jí)結(jié)構(gòu)是指具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)各亞基聚合而成的大分子蛋白質(zhì)。四級(jí)結(jié)構(gòu)可以由兩個(gè)以上的小亞基聚合而成。所謂亞基，就是含有二條或多條多肽鏈的蛋白質(zhì),這些多肽鏈彼此以非共價(jià)鍵相聯(lián)，每一條多肽鏈都有自己的三級(jí)結(jié)構(gòu)，此多肽鏈就是該蛋白質(zhì)分子的亞單位（亞基）。蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1９—1。圖圖１9－1蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)見(jiàn)藥劑學(xué)第４版圖２0—２圖１9—1蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象又叫空間結(jié)構(gòu)、高級(jí)結(jié)構(gòu)、立體結(jié)構(gòu)、三維構(gòu)象等，它是指蛋白質(zhì)分子中所有原子在三維空間中的排布。這種空間排布的變化，僅涉及到氫鍵等次級(jí)鍵的生成與斷裂，但不涉及共價(jià)鍵的生成與斷裂。蛋白質(zhì)分子只有在其立體結(jié)構(gòu)呈特定的構(gòu)象(conｆorｍation）時(shí)才有生物活性,形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的作用力有氫鍵、疏水作用力（hydｒoｐhｏbｉｃfｏｒce）、離子鍵、范德華力、二硫鍵與配位鍵。除二硫鍵為共價(jià)鍵外，其余都是非共價(jià)鍵,維持蛋白質(zhì)構(gòu)象是弱作用力。蛋白質(zhì)分子二級(jí)結(jié)構(gòu)中螺旋、折疊的形成依靠氫鍵，可以說(shuō)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部布滿了氫鍵。疏水作用力也稱疏水鍵，疏水鍵是兩個(gè)疏水基為了避開水相而群集在一起的作用力，在維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)方面起重要作用，也是形成生物膜的主要作用力。范德華力對(duì)穩(wěn)定和維持三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)十分重要。離子鍵對(duì)于維持蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)是不可缺少的。不少蛋白質(zhì)含有金屬離子,而金屬離子通過(guò)配位鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合,故結(jié)合蛋白質(zhì)是由氨基酸成分與非氨基酸成分通過(guò)配位鍵組成.(二）蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)1.蛋白質(zhì)的一般理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的分子量，小的有幾千，如胰島素（單體6000）；大的上千萬(wàn),如斑紋病毒（煙草)（6107)。蛋白質(zhì)在水中形成親水膠體，顆粒大小在lnm~10０ｎｍ之間。它不能透過(guò)半透膜。由于蛋白質(zhì)分子中存在極性基團(tuán)如－ＮＨ３+、－COO-、－NH2、—OH、—SＨ等,可形成水化層而穩(wěn)定。(1）旋光性：蛋白質(zhì)分子總體旋光性由構(gòu)成氨基酸各個(gè)旋光度的總和決定,通常是右旋,它由螺旋結(jié)構(gòu)引起.蛋白質(zhì)變性,螺旋結(jié)構(gòu)松開,則其左旋性增大。（２)紫外吸收：大部分蛋白質(zhì)均含有帶苯核的苯丙氨酸、酪氨酸與色氨酸,苯核在紫外２８0nm有最大吸收.氨基酸在紫外230nｍ顯示強(qiáng)吸收。（3）蛋白質(zhì)兩性本質(zhì)與電學(xué)性質(zhì):蛋白質(zhì)除了肽鏈N-末端有自由的氨基和C-末端有自由的羧基外,在氨基酸的側(cè)鏈上還有很多解離基團(tuán),如賴氨酸的-氨基，谷氨酸的γ羧基等.這些基團(tuán)在一定ｐH條件下都能發(fā)生解離而帶電.因此蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，在不同pH條件下蛋白質(zhì)會(huì)成為陽(yáng)離子、陰離子或二性離子。２．蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性對(duì)于蛋白質(zhì)類藥物的制劑研究、生產(chǎn)、貯存等極為重要.引起蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的原因很多,如前所述，共價(jià)鍵與非共價(jià)鍵的破壞與生成，均可引起蛋白質(zhì)類藥物的不穩(wěn)定.（1）由于共價(jià)鍵引起的不穩(wěn)定性:共價(jià)鍵改變引起蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的化學(xué)反應(yīng)有水解、氧化和消旋化，此外還有蛋白質(zhì)的特有反應(yīng)，即二硫鍵的斷裂與交換.有時(shí)幾種反應(yīng)同時(shí)進(jìn)行。雖然大多數(shù)降解過(guò)程在升高溫度時(shí)發(fā)生，但是蛋白質(zhì)穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明其降解過(guò)程不符合Aｒrheｎiｕs關(guān)系，故蛋白質(zhì)類藥物穩(wěn)定性的加速實(shí)驗(yàn)中應(yīng)慎重選擇其最高溫度。如白細(xì)胞介素—ｌβ(inｔｅｒleukin－1β)在溶液中高于和低于39℃時(shí)存在不同的失活機(jī)制，此實(shí)例排除了從加速溫度數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)處方有效期的可能性.但文獻(xiàn)報(bào)道組織溶纖酶原激活素(ｔiｓsｕeｐlａsminogenactivａt(yī)ｏr)在４０℃和40℃1)蛋白質(zhì)的水解：蛋白質(zhì)可被酸、堿和蛋白酶催化水解,使蛋白質(zhì)分子斷裂,分子量逐漸變小，成為分子量大小不等的肽段和氨基酸。水解分完全水解與不完全水解。完全水解是在５．7mol/Ｌ鹽酸中,于110℃高溫20h可完全變成氨基酸.在此條件下,能使色氨酸破壞,谷氨酰胺變?yōu)楣劝彼?，天冬酰胺變?yōu)樘於彼?，后二者的水解作用也叫脫酰胺作?deamｉdatｉoｎ）。酸水解可使胱氨酸變成半胱氨酸,絲氨酸、蘇氨酸也有不同程度的破壞。不完全水解是在酶或稀酸等較溫和的條件下進(jìn)行,水解產(chǎn)物有肽段與氨基酸。蛋白質(zhì)在4.2mol/LnaＯＨ溶液中水解１0ｈ2）蛋白質(zhì)的氧化：蛋白質(zhì)中具有芳香側(cè)鏈的氨基酸，如甲硫氨酸、半胱氨酸可以在一些氧化劑的作用下氧化，甲硫氨酸可氧化成甲硫氨酸亞砜而使一些多肽類激素和蛋白質(zhì)失去活性。半胱氨酸的巰基根據(jù)不同的反應(yīng)條件,可依次氧化為次磺酸(RＳOH)、二硫化物（RSSＨ）、亞磺酸（RSO２Ｈ）,最后成磺酸（RＳO3H）、半胱氨酸,即半胱磺酸。影響氧化的因素有溫度、pH值、緩沖介質(zhì)、催化劑的種類和氧的強(qiáng)度等.巰基的氧化在堿性條件下,特別是在金屬離子(如Ｃu2＋）的存在下容易發(fā)生。3)外消旋作用(rａcemｉzａt(yī)iｏn):某些旋光性物質(zhì)在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中，由于不對(duì)稱碳原子上的基團(tuán)在空間位置上發(fā)生轉(zhuǎn)移,使Ｄ—或L-型化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镈—型和L－型各50％的混合物，彼此旋光值抵消，失去旋光性，這種現(xiàn)象稱為外消旋作用。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)用堿水解時(shí)往往會(huì)使某些氨基酸產(chǎn)生消旋作用。影響氨基酸消旋作用的因素有溫度、pH值、離子強(qiáng)度和金屬離子螯合作用.蛋白質(zhì)中氨基酸的消旋作用一般能使氨基酸成為非代謝的形式（nonmｅtabｏlizａｂlefｏrmｓ）。４）二硫鍵斷裂及其交換：二硫鍵(－Ｓ—S－）又叫二硫橋或硫硫橋，是很強(qiáng)的化學(xué)鍵。它是由兩個(gè)半胱氨酸側(cè)鏈上的－SＨ巰基脫氫相連而成。二硫鍵把同一肽鏈（肽鏈內(nèi)）或不同肽鏈（肽鏈間）的不同部分連接起來(lái)，對(duì)穩(wěn)定蛋白質(zhì)的構(gòu)象起重要作用。在某些蛋白質(zhì)中,二硫鍵一旦破壞，蛋白質(zhì)的生物活性即喪失，蛋白質(zhì)分子中二硫鍵數(shù)目愈多，則結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和抗拒外界因素的能力也愈強(qiáng)。蛋白質(zhì)分子中二硫鍵斷裂接著重排能夠改變蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)，因此影響其生物活性。二硫鍵交換(bｉsｕlfidebondexｃｈａnge)可由硫醇類催化,如下式所示：H-S-RH-S-R’R-S-Ｓ—RＲ—Ｓ—S—Ｒ’十H—S—R有人證實(shí)核糖核酸酶(rｉbonucleａse）在９0℃（2)由非共價(jià)鍵引起的不穩(wěn)定性：引起蛋白質(zhì)不可逆失活作用的下列主要類型,即聚集（aggreｇatｉｏn）、宏觀沉淀、表面吸附與蛋白質(zhì)變性，這些都是由于與空間構(gòu)象有關(guān)的非共價(jià)鍵引起,這些現(xiàn)象在開發(fā)蛋白質(zhì)與多肽類藥物制劑中常會(huì)帶來(lái)許多困難。（三）蛋白質(zhì)類藥物的評(píng)價(jià)方法在前面討論蛋白質(zhì)藥物不穩(wěn)定的原因時(shí)已經(jīng)看出,要開發(fā)蛋白質(zhì)類藥物,需要多種分析方法。１．液相色譜法液相色譜法是評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)的純度與穩(wěn)定性的常用方法。在蛋白質(zhì)分析中通常采用反相高效液相色譜法(ＲP—HPLC)、離子交換色譜法（IEC）與分子排阻色譜法（Sizeexｃlusiｏncｈrｏmatｏgraphｙ,SEC）。反相色譜法是以非極性固定相與含水的極性流動(dòng)相為基礎(chǔ)的分析方法,對(duì)于大分子蛋白質(zhì),以Ｃ４或C8烷基鍵合于硅膠上或聚合物擔(dān)體上作固定相,固定相應(yīng)有較寬范圍的孔體積（直徑約300nｍ或更大)，以便分子量約為5000或更大的蛋白質(zhì)能夠充分?jǐn)U散到固定相骨架中。流動(dòng)相一般用不同濃度的乙腈水溶液,并含有離子對(duì)試劑，如三氟醋酸（0．1%）,磷酸鹽或緩血酸胺緩沖液用以調(diào)節(jié)pH以獲得最佳分離效果。應(yīng)用反相HPＬＣ法，由于有機(jī)溶劑、疏水的相互作用及分離時(shí)所用的低pH值,會(huì)使一些蛋白質(zhì)變性。然而該方法對(duì)幾種蛋白質(zhì)特別有用，并被廣泛應(yīng)用于胰島素制劑的質(zhì)量分析。藥典中胰島素一般用生物效價(jià)法測(cè)定，因此在使用時(shí)應(yīng)建立RP-ＨPＬC與生物效價(jià)法之間的相互關(guān)系。ＲP－ＨＰLＣ還應(yīng)用于瘧疾蛋白抗原（ｍaｌariａpｒoteinａntｉgｅns）、白細(xì)胞介素－2、突變蛋白（ｍuteｉｎｓ）、人生長(zhǎng)激素及重組人體干擾素制劑穩(wěn)定性的檢測(cè)。離子交換色譜法用于從N－末端甲硫氨基型分離重組白介素－ｌβ.分子排阻色譜可以測(cè)定γ—干擾素、白介素-２在升溫貯存、機(jī)械攪拌后及快速冰凍熔化后的聚集情況。2．光譜法通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)吸收、輻射、散射光的定量分析可以提供有價(jià)值的信息，了解蛋白質(zhì)的量、構(gòu)象和聚集傾向.用于評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)藥物的光譜方法有紫外(UＶ）、可見(jiàn)吸收光譜、旋光色散（ORD）、圓二色譜（CD）、熒光、紅外(IR）和拉曼（Rａman)光譜。紫外吸收常用于測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的濃度。蛋白質(zhì)在２30~2８0nm間的吸收是由酪氨酸(Amax=27４nm）、色氨酸（Amax=280nm)、苯丙氨酸(Amax=254nm)、芳環(huán)側(cè)鏈所決定.當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在溶液中聚集時(shí)，由于光散射,在3１0~4０0nｍ處有一傾斜基線，這使得吸收測(cè)定傾向于２80nm.光散射可測(cè)定制劑中蛋白質(zhì)的聚集數(shù)量,散射強(qiáng)度是單位體積散射中心數(shù)的函數(shù)。在45０nｍ處測(cè)定牛生長(zhǎng)激素的濁度可用以評(píng)價(jià)其不同折疊構(gòu)象的溶解度。濁度的測(cè)定僅限于顆粒比光波長(zhǎng)小的情況，此時(shí)濁度才與聚集程度呈線性關(guān)系.蛋白質(zhì)的遠(yuǎn)紫外圓二色譜直接反映蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),一種不對(duì)稱分子如蛋白質(zhì)大分子可顯示圓二色譜。這項(xiàng)技術(shù)可用于測(cè)定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化與穩(wěn)定性、熱處理或冰凍與熔化之間的函數(shù)關(guān)系.有人用遠(yuǎn)紫外CD法研究了牛生長(zhǎng)激素分離片段的螺旋結(jié)構(gòu).發(fā)現(xiàn)螺旋量依賴于pＨ值及肽的濃度.3。電泳電泳技術(shù)是根據(jù)在電場(chǎng)的作用下，蛋白質(zhì)在載體凝膠上產(chǎn)生特征性遷移，遷移率是所帶凈電荷及其大小的函數(shù),以此來(lái)分離混合蛋白質(zhì)。在蛋白質(zhì)的分析中廣泛使用十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDＳ-ＰＡＧE）、等電點(diǎn)聚焦（isｏｃlectrｉcfｏcusing，ＩEＦ）和新的毛細(xì)管電泳（EＣ）法。SＤＳ—PAGE電泳先用SDＳ陰離子表面活性劑使樣品變性，隨后通過(guò)聚丙烯酰胺擔(dān)體進(jìn)行電泳.本法用于測(cè)定蛋白質(zhì)亞單位組成和分子量，可取得滿意效果.４。生物活性測(cè)定與免疫測(cè)定重組DＮA和雜交瘤技術(shù)產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行生物活性的測(cè)定,蛋白質(zhì)藥物制劑的穩(wěn)定性也應(yīng)檢測(cè)其生物活性.生物活性檢測(cè)是利用體內(nèi)模型或體外組織或活性蛋白質(zhì)多肽的特異性生物學(xué)反應(yīng),通過(guò)劑量（或濃度)效應(yīng)曲線進(jìn)行定量（絕對(duì)量或比活性單位）。用理化方法代替生物活性測(cè)定時(shí),需建立兩種方法之間的相關(guān)性。生物活性測(cè)定是制訂這類藥物制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的最基本方法。免疫測(cè)定通常是采用免疫化學(xué)法，例如一種蛋白質(zhì)與含適當(dāng)比例的特異抗體血清，即免疫血清（用動(dòng)物免疫所得)混合，則會(huì)形成沉淀，這種建立在沉淀反應(yīng)基礎(chǔ)上的免疫化學(xué)方法非常適合于蛋白質(zhì)的定性及定量分析、蛋白質(zhì)制劑（混雜有其他蛋白質(zhì)）的均一性試驗(yàn)以及蛋白質(zhì)混合物組分的鑒定。這種方法也可作為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究的輔助手段。與其他方法相比較,主要優(yōu)點(diǎn)是可用于定量化學(xué)分析不能檢測(cè)的情況，例如測(cè)定蛋白質(zhì)混合物的一種組分。第二節(jié)蛋白質(zhì)類藥物制劑的處方與工藝蛋白質(zhì)類藥物制劑的研制關(guān)鍵是解決這類藥物的穩(wěn)定性問(wèn)題.對(duì)于注射給藥則采用適當(dāng)?shù)妮o料，設(shè)計(jì)合理的處方與工藝,而非注射給藥還需解決生物利用度問(wèn)題。本節(jié)主要討論這類藥物的注射劑型.一、蛋白質(zhì)類藥物的一般處方組成目前臨床上應(yīng)用的蛋白質(zhì)類藥物注射劑，一類為溶液型注射劑,另一類是凍干粉注射劑.溶液型使用方便,但需在低溫(2～8℃二、液體劑型中蛋白質(zhì)類藥物的穩(wěn)定化在液體劑型中蛋白質(zhì)類藥物的穩(wěn)定化方法分為兩類：=1\*ＧB３①改造其結(jié)構(gòu);=２\＊GB3②加入適宜輔料。改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，如改變蛋白質(zhì)一級(jí)序列、改變?nèi)〈磻?yīng)官能團(tuán)和化學(xué)修飾的方法,以提高蛋白質(zhì)空間伸展自由能,改變與溶劑接觸的性質(zhì),該方法不屬于制劑學(xué)范疇，故在此不做詳細(xì)討論。通過(guò)加入各類輔料，改變蛋白類藥物溶劑的性質(zhì)是藥物制劑中常用的穩(wěn)定化方法.蛋白類藥物的穩(wěn)定劑有以下幾類:１．緩沖液因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的物理化學(xué)穩(wěn)定性與pH值有關(guān)，通常蛋白質(zhì)的穩(wěn)定pH值范圍很窄，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)木彌_系統(tǒng)，以提高蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定性。例如紅細(xì)胞生成素采用枸櫞酸鈉－枸櫞酸緩沖劑，而α-N3干擾素則用磷酸鹽緩沖系統(tǒng),人生長(zhǎng)激素在5mmｏl/L的磷酸鹽緩沖液可減少聚集。緩沖鹽類除了影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性外,其濃度對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度與聚集均有很大影響。組織溶纖酶原激活素在最穩(wěn)定的pH條件下,藥物的溶解度不足以產(chǎn)生治療效果，因此加入帶正電荷的精氨酸以增加蛋白質(zhì)在所需pH值下的溶解度。2.表面活性劑由于離子型表面活性劑會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性，所以在蛋白質(zhì)藥物,如α-2b干擾素、G—ＣSF、組織溶纖酶原激活素等制劑中均加入少量非離子表面活性劑，如吐溫8０來(lái)抑制蛋白質(zhì)的聚集，其機(jī)理可能是因?yàn)楸砻婊钚詣﹥A向于排列在氣—液界面上，從而使蛋白質(zhì)離開界面來(lái)抑制蛋白質(zhì)的變性。3。糖和多元醇糖和多元醇屬于非特異性蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。蔗糖、海藻糖、甘油、甘露醇、山梨醇（濃度１％~１0％）最常用。糖和多元醇的穩(wěn)定作用與其濃度密切相關(guān),不同糖和多元醇的穩(wěn)定程度取決于蛋白質(zhì)的種類。還原糖與氨基酸有相互作用,因此避免使用.４．鹽類鹽可以起到穩(wěn)定蛋白質(zhì)的作用,有時(shí)也可以破壞蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，這主要取決于鹽的種類、濃度、離子相互作用的性質(zhì)及蛋白質(zhì)的電荷。低濃度的鹽通過(guò)非特異性靜電作用提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。如SO４2—、HＰO42－、ＣHCOＯ－、（CＨ3）N+、NＨ4+、Ｋ+、Na+等能增加溶液的離子強(qiáng)度，提高疏水作用,降低疏水基團(tuán)的溶解度,使蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析。此外它們使水分子聚集在蛋白質(zhì)周圍被優(yōu)先水化，所有這些都使蛋白質(zhì)更加緊密穩(wěn)定。經(jīng)常使用的鹽NaCl在穩(wěn)定蛋白質(zhì)中起關(guān)鍵作用,實(shí)驗(yàn)表明它能提高牛血清白蛋白(BSＡ)的變性溫度和熱焓.5.聚乙二醇類高濃度的聚乙二醇類常作為蛋白質(zhì)的低溫保護(hù)劑和沉淀結(jié)晶劑。研究表明不同分子量的ＰEG作用不同，如PEG300濃度０。5％或２％可抑制重組人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhKGF)的聚集;PEG200、4０0、60０和1000可穩(wěn)定BSA和溶菌酶。6．大分子化合物研究表明很多大分子化合物具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)的作用.其機(jī)制可能是通過(guò)大分子的表面活性、蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用的空間隱蔽以及提高粘度來(lái)限制蛋白質(zhì)運(yùn)動(dòng)或通過(guò)優(yōu)先吸附于大分子以起到穩(wěn)定作用,人血清白蛋白（HAS)已在許多蛋白質(zhì)類生物技術(shù)來(lái)源的藥物制劑中作穩(wěn)定劑.近年來(lái)也有采用環(huán)糊精制成包合物來(lái)增加蛋白質(zhì)藥物的溶解度，例如用2-羥丙基-－環(huán)糊精是較有前途的穩(wěn)定劑，其本身又是增溶劑可靜脈注射，可用來(lái)抑制ｈGＨ的界面變性,抑制ｒｈKGＦ的聚集,穩(wěn)定白介素-2和牛胰島素等。7．組氨酸、甘氨酸、谷氨酸和賴氨酸的鹽酸鹽等可不同程度地抑制45℃10mＭ8．金屬離子一些金屬離子,如鈣、鎂、鋅與蛋白質(zhì)結(jié)合，使整個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)更加緊密、結(jié)實(shí)、穩(wěn)定。不同金屬離子的穩(wěn)定作用視離子的種類、濃度不同而不同，應(yīng)通過(guò)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)選擇金屬離子的種類和濃度.三、固體狀態(tài)蛋白質(zhì)藥物的穩(wěn)定性與工藝蛋白質(zhì)類藥物的非注射給藥存在生物利用度低等問(wèn)題,因此目前多以注射途徑給藥。在一些蛋白質(zhì)藥物不能采用溶液型制劑時(shí)，往往用冷凍干燥與噴霧干燥的工藝使形成固體狀態(tài)以提高這類制劑的穩(wěn)定性,關(guān)于冷凍干燥及噴霧干燥的一般工藝過(guò)程在本書的第四章中已有論述，下面僅就蛋白質(zhì)類藥物的特殊性作一說(shuō)明.（一)冷凍干燥蛋白質(zhì)藥物制劑用冷凍干燥法制備蛋白質(zhì)類藥物制劑時(shí)主要考慮兩個(gè)問(wèn)題，一是選擇適宜的輔料,優(yōu)化蛋白質(zhì)藥物在干燥狀態(tài)下的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。二是考慮輔料對(duì)冷凍干燥過(guò)程中一些參數(shù)的影響，如最高與最低干燥溫度，干燥時(shí)間，冷凍干燥產(chǎn)品的外觀等。雖然凍干可以使蛋白質(zhì)藥物穩(wěn)定，但不應(yīng)忽略有些蛋白質(zhì)藥物在凍干過(guò)程中反而失去活性，主要原因是:=１\＊GＢ3①?gòu)囊簯B(tài)到固態(tài)的相變過(guò)程中,包在蛋白質(zhì)周圍的水分子被除去而失活；=２\＊GB3②高濃度的鹽和緩沖組分的結(jié)晶或緩沖液pKa對(duì)溫度敏感而導(dǎo)致pH變化、濃縮時(shí)蛋白質(zhì)有限的溶解度等均能導(dǎo)致蛋白質(zhì)藥物失活。在選擇凍干制劑的緩沖體系時(shí),要考慮到溫度對(duì)pH值和溶解度的影響。在蛋白質(zhì)類藥物凍干過(guò)程中常加入某些凍干保護(hù)劑來(lái)改善產(chǎn)品的外觀和穩(wěn)定性,如甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、右旋糖酐等.溶液中的成分也可以影響冷凍干燥過(guò)程中與熱有關(guān)的工藝參數(shù)。凍干過(guò)程中與熱有關(guān)的性質(zhì)有：制劑的冷凍溫度、有可能使餅狀物熔化或坍塌的溫度及有可能使產(chǎn)品發(fā)生降解的溫度.控制這些參數(shù)，使產(chǎn)品冷凍適度,餅狀物不融化、不坍塌也不降解，DＳC是表征與優(yōu)化凍干工藝有用的技術(shù).在凍干過(guò)程中還應(yīng)考慮藥物的含水量與餅狀物的物理狀態(tài)（無(wú)定性或晶形）。其物理狀態(tài)與冷凍過(guò)程的溫度及添加劑有關(guān)。無(wú)定形的水分含量一般較高,這是因?yàn)樵诟稍镞^(guò)程中水蒸氣的蒸發(fā)減慢的緣故。水分的增加會(huì)降低餅狀物的物理穩(wěn)定性并可能導(dǎo)致貯藏過(guò)程中餅狀物的坍塌。此外水分也可以影響蛋白質(zhì)的化學(xué)穩(wěn)定性。因此,嚴(yán)格控制產(chǎn)品的含水量,對(duì)保證產(chǎn)品的質(zhì)量是十分重要的.（二）噴霧干燥蛋白質(zhì)藥物制劑噴霧干燥工藝廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)類藥物的控釋制劑、吸入劑、微球制劑等新型給藥系統(tǒng)的研制中.在噴霧干燥過(guò)程中可加入穩(wěn)定劑，如蔗糖能提高氧血紅蛋白（oxyhemoglｏbin)的穩(wěn)定性。噴霧干燥的缺點(diǎn)是操作過(guò)程中損失大（特別是小規(guī)模生產(chǎn)），水分含量高。但只要精心控制工藝參數(shù)，選擇適合穩(wěn)定劑，可生產(chǎn)出粒徑為3m～第三節(jié)蛋白質(zhì)類藥物新型給藥系統(tǒng)一、新型注射（植入）給藥系統(tǒng)臨床經(jīng)驗(yàn)表明，很多蛋白質(zhì)類藥物在體內(nèi)血漿半衰期短，清除率高,因而需要延長(zhǎng)其在體內(nèi)的平均駐留時(shí)間,或改變蛋白質(zhì)在體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，有時(shí)需要制成非零級(jí)脈沖式釋藥系統(tǒng)（如疫苗)。為滿足這些要求，既可以對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行化學(xué)修飾，也可以控制蛋白質(zhì)進(jìn)入血流的釋放速度等。目前已有用PEG修飾蛋白質(zhì)分子以延長(zhǎng)蛋白質(zhì)藥物在血漿中的半衰期.例如ＰＥG與蛋白質(zhì)連接分子變大而不易被腎小球?yàn)V過(guò),或者由于蛋白質(zhì)的代謝和排泄所需的細(xì)胞受體的相互作用受到空間位阻。腺苷酸脫氨酶（aｄenosiｎedｅａminａse,AＤA)即采用形成ＰEG-ADA這種方法,治療因ADA缺乏而引起免疫缺損綜合征的患者，此藥已經(jīng)獲FDＡ批準(zhǔn)生產(chǎn)（一）控釋微球制劑為了達(dá)到蛋白質(zhì)類藥物控制釋放，可將其制成生物可降解的微球制劑，目前已經(jīng)實(shí)際應(yīng)用的生物可降解材料有聚乳酸（PＬA）或聚丙交酯—乙交酯（pｏlｙ（lａctide—co－glycｏlｉdｅ),PLGA）。ＰLGA也可叫聚乳酸乙醇酸共聚物（cｏpｏlｙ(ｌacｔic/glｙcoｌic）ａｃｉd）,改變丙交酯與乙交酯的比例或分子量,可得到不同時(shí)間生物可降解性質(zhì)的材料。首次經(jīng)FDA批準(zhǔn)的蛋白質(zhì)類藥物微球制劑是醋酸亮丙瑞林(ｌｅuprolｉdｅａcetａｔe）聚丙交酯-乙交酯微球。此種微球供肌內(nèi)注射，用于治療前列腺癌,可控制釋放達(dá)3０d之久，改變了普通注射劑需每天注射的傳統(tǒng)，使用方便。用于制備生物大分子藥物控釋微球的方法很多,根據(jù)不同性質(zhì)的載體材料可選擇不同的制備方法。如相分離凝聚法、乳化蒸發(fā)法、復(fù)乳液中干燥法、低溫噴霧提取法、噴霧干燥法以及超臨界萃取法等，參見(jiàn)第十六章第四節(jié)。以下介紹幾種常用于制備多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子藥物微球的方法。1.復(fù)乳液中干燥法將藥物與保護(hù)劑（多為水溶性高分子聚合物）溶于水作為水相，將聚酯（如PLA、PＬGA等)類高分子材料溶于二氯甲烷作為油相,兩者在一定溫度下（低于40℃)高速攪拌得W/O型初乳，冰浴冷卻至10℃以下，倒至一定濃度的PVA水溶液中,經(jīng)高速攪拌得W/Ｏ／W型復(fù)乳,一定溫度下攪拌蒸去有機(jī)溶劑固化微球（或減壓去有機(jī)溶劑）,離心水洗,真空干燥即得.該方法是制備多肽、蛋白質(zhì)等生物大分子藥物微球的常用方法,其特點(diǎn)為藥物包封率較高，藥物活性損失小，設(shè)備和工藝簡(jiǎn)單，但首日突釋明顯，較難放大生產(chǎn),目前用此法研究制備的藥物有γ干擾素、白細(xì)胞介素、亮丙瑞林、人生長(zhǎng)激素、環(huán)孢素以及促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素(2．低溫噴霧提取法將生物大分子藥物與保護(hù)劑的均勻粉末加至生物可降解性聚合物的有機(jī)溶劑（如二氯甲烷）中混合形成混懸液，將此混懸液經(jīng)噴頭霧化后噴入冰凍的乙醇溶液(該溶液可與上述溶液混溶,但聚合物不溶于此溶液）,在低溫（－70℃3．噴霧干燥法將生物大分子藥物及其穩(wěn)定劑的混合粉末(或水溶液)與溶有高分子聚合物的有機(jī)溶液混合形成混懸液（或乳濁液),將此混懸液（或乳濁液）經(jīng)噴嘴霧化干燥制得微球。為了減少生物活性損失，文獻(xiàn)報(bào)道采用雙噴嘴噴霧干燥裝置進(jìn)行生物大分子藥物微球的制備,可明顯增加微球的收率，同時(shí)可減少多肽、蛋白質(zhì)類藥物的活性損失.該裝置具有兩個(gè)平行噴嘴，其中一個(gè)噴嘴噴出藥物和聚合物的混懸液（或乳濁液),另一噴嘴同時(shí)噴出5%的甘露醇溶液，將微球包層，這樣可避免普通噴霧干燥裝置制備微球過(guò)程中易粘附器壁的缺陷。4．超臨界萃取法超臨界萃取技術(shù)是從20世紀(jì)8０年代逐漸發(fā)展起來(lái)的一門新技術(shù).近年來(lái)，超臨界萃取技術(shù)已在化工、冶金、食品、醫(yī)藥、生物等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。超臨界流體既具有對(duì)溶質(zhì)有較大溶解度的特點(diǎn),又具有氣體易于擴(kuò)散和運(yùn)動(dòng)的特性。更重要的是在臨界點(diǎn)附近，壓力和溫度微小的變化都可以引起流體密度很大的變化，并相應(yīng)地表現(xiàn)為溶解度的變化。因此,人們可以利用壓力、溫度的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)萃取和分離的過(guò)程而成為實(shí)現(xiàn)藥物多組分分離的一種有效方法。人們將此技術(shù)應(yīng)用于微粒給藥系統(tǒng)，制備藥物的控釋聚合物微球、藥物結(jié)晶的粉末、控釋脂質(zhì)體藥物等。在制備微粒中根據(jù)聚合物及藥物的溶解特性又分為超臨界溶液快速膨脹(raｐiｄexpansionofsupeｒcrｉticaｌsolutiｏn,ＲEＳS）技術(shù)和氣體反溶劑（gasantisｏｌutiｏｎ,ＧAS）技術(shù)。RESS技術(shù)的操作過(guò)程是:將固體物質(zhì)在一定的溫度和壓力下溶解在超臨界流體中形成溶液,然后將此高壓溶液從一個(gè)細(xì)小的噴嘴（一般噴嘴的內(nèi)徑為幾十微米,長(zhǎng)約幾個(gè)毫米）噴射到常壓的空間中，由于超臨界流體在減壓的過(guò)程中變成了氣體，溶解在其中的溶質(zhì)就沉淀析出，產(chǎn)生直徑從幾百納米到幾個(gè)微米左右的顆粒。一個(gè)典型的成功例子是包埋在聚乳酸小球中的Ｌovａｓtａｔiｎ晶體。顆粒的構(gòu)型可以通過(guò)適當(dāng)改變壓力、溫度、溶液濃度以及噴嘴幾何形裝來(lái)調(diào)節(jié)。因此用ＲEＳS技術(shù)得到的固體顆粒都在微米級(jí)而且粒徑分布比較均勻。GAＳ技術(shù)是將溶質(zhì)先溶解在某種有機(jī)溶劑中,然后將此溶液與超臨界流體混合.由于有機(jī)溶劑可溶于超臨界流體而溶質(zhì)不溶，于是溶質(zhì)析出形成微粒。由于液態(tài)二氧化碳對(duì)于有機(jī)溶劑具有溶解性,將藥物與高分子材料溶解于有機(jī)溶劑中,將此溶液與液態(tài)二氧化碳混合，載有藥物的高分子材料則析出形成微球。RaｏufＧ等采用超臨界流體技術(shù)的RＥＳS法和三種聚酯類高分子材料(DL—PLGA、L－PLＡ、DL—PLＡ)制備了氫化可的松微球，三種材料制得的微球均小于1０μm，采用N２和CO２混合物比單用CＯ２可取得更高的分散度，空白微球和包封氫化可的松的微球的粒徑大小無(wú)明顯變化,氫化可的松收率為４0％?！緦?shí)例1】亮丙瑞林微球的制備：通過(guò)復(fù)乳液中干燥法制備.取醋酸亮丙瑞林500mｇ,明膠8０mg，水lmｌ，混合加熱至６0℃為內(nèi)水相,油相為PLA或PLGA４00mｇ溶于二氯甲烷5．5ml，然后將油相在攪拌或超聲處理逐漸倒入水相中制成W/O微乳劑，此乳劑冷卻至１5℃,在50０0r／mｉn下用噴嘴加入到400m１，０。5%的聚乙烯醇水溶液中攪拌２mｉn使成（Ｗ/O/W）乳劑。將此（W／O/W)乳劑在30℃下緩慢攪拌２h或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷,得硬化的圓形微球（或微囊）.粒徑為５μm～100μ時(shí)間/d體外釋放體內(nèi)釋放剩余醋酸亮丙瑞林／％PLＧA平均分子量剩余醋酸亮丙瑞林/％PLGA平均分子量0１00120００1０01200０77０105007910５0014５７94０06０８800213７56003750002８21５０003０２8０03502６００２0２20０表１9－３說(shuō)明醋酸亮丙瑞林隨PLGＡ降解分子量下降而不斷釋放，在體內(nèi)外大體一致，體內(nèi)能維持一個(gè)月?！緦?shí)例2】白細(xì)胞介素1α（IＬ—1α）PLGＡ微球的制備：LiｍorCheｎ等以改良的復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備.具體方法為:將含有2０mg牛血清白蛋白（BＳA）和8。5μｇIL-1α的水溶液５０μl與含有200ｍgPLGA的二氯甲烷０．5ml混合，用探針式超聲乳化(56w)３0s,將此初乳分散于1mｌ用二氯甲烷飽和的1％(w／v）ＰVＡ水溶液中,漩渦混懸形成復(fù)乳,再將該復(fù)乳傾入５０ｍｌ0．1％（w/w）PVA水溶液中攪拌5ｍin,再加入50ml含有10％（v/v)２-丙醇的PVA溶液將二氯甲烷抽提到外水相中,連續(xù)攪拌30min后，離心1０mｉｎ收集微球,冰凍干燥成流動(dòng)性粉末狀微球.由于皮下注射微球后小于１0μm微球易被巨噬細(xì)胞吞噬,故需將微球粒徑控制在１０μm以上.制備過(guò)程中界面張力影響IL—1α的活性,加入０.５%(ｗ/w）磷脂酰膽堿(ＰC）可保護(hù)IL－1α,并顯著減小微球的粒徑。微球的體外釋放度試驗(yàn)表明，牛血清白蛋白和白細(xì)胞介素１α在3０min鐘內(nèi)分別釋放38％和63％,40d內(nèi)分別釋放７5%和１00%.掃描電鏡顯示，突釋后的釋藥過(guò)程與骨架的溶蝕過(guò)程同時(shí)進(jìn)行.這類制劑,盡管發(fā)展前景廣闊，但仍存在許多問(wèn)題，主要是由于在體內(nèi)多聚物降解而產(chǎn)生的酸性環(huán)境降低了蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性，因此如何加入弱堿性添加劑以保持多聚物在降解過(guò)程中的蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性是目前此類產(chǎn)品亟待解決的問(wèn)題。（二)脈沖式給藥系統(tǒng)肝炎、破傷風(fēng)、白喉等疾病所用預(yù)防藥物，即疫苗或類毒素均為抗原蛋白,使用這些疫苗全程免疫至少要進(jìn)行三次接種，才能確保免疫效果。由于種種原因，全世界不能完成全程免疫接種而發(fā)生的輟種率達(dá)７0%，因此為了提高免疫接種的覆蓋率,減少重大疾病的死亡率，采用脈沖式給藥系統(tǒng)將多劑量疫苗發(fā)展為單劑量控釋疫苗，例如將破傷風(fēng)類毒素制成ＰLGA脈沖式控釋微球制劑，可根據(jù)ＰLGＡ中乳酸和羥乙酸的比例不同、分子量不同以及制備的微球大小不同，一次注射該制劑１d～14d、l個(gè)月~2個(gè)月與9個(gè)月～１2個(gè)月內(nèi)分三次脈沖釋放，可達(dá)到全程免疫的目的。此項(xiàng)研究，目前正在進(jìn)行中。二、非注射給藥系統(tǒng)研究非注射途徑的給藥系統(tǒng)，將有益于增加病人的順應(yīng)性（compliancｅ).蛋白質(zhì)和多肽類藥物的非注射給藥方式包括鼻腔、口服、直腸、口腔、透皮和肺部給藥.目前最有應(yīng)用前景的屬鼻腔給藥，然而口服給藥還是最受歡迎的給藥途徑,但難度很大。蛋白質(zhì)類藥物非注射給藥系統(tǒng)存在的主要問(wèn)題是藥物穿透粘膜能力差,易受酶的降解，以致生物利用度很低。為了提高這類藥物制劑的生物利用度，一般采用以下方法：①對(duì)藥物進(jìn)行化學(xué)修飾或制成前體藥物;②應(yīng)用吸收促進(jìn)劑；＝3＼*GＢ３③使用酶抑制劑;④采用離子電滲法皮膚給藥.以上幾種方法中吸收促進(jìn)劑應(yīng)用最多。吸收促進(jìn)劑的種類因給藥途徑不同而異,但其作用機(jī)制一般有以下幾種：①增強(qiáng)藥物的熱力學(xué)運(yùn)動(dòng)，使藥物不易聚集，溶解性增加，易于吸收，如水楊酸鈉能增加胰島素的熱力學(xué)運(yùn)動(dòng)，因而有利于吸收;②改變上皮細(xì)胞的體積，使細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)更易進(jìn)行；＝３\＊GＢ３③抑制藥物的水解，如制成膽酸鹽。(一）鼻腔給藥系統(tǒng)鼻腔給藥是多肽和蛋白質(zhì)類藥物在非注射劑型中最有希望的給藥途徑之一。由于鼻腔粘膜中動(dòng)靜脈和毛細(xì)淋巴管分布十分豐富，鼻腔呼吸區(qū)細(xì)胞表面具有大量微小絨毛，鼻腔粘膜的穿透性較高而酶相對(duì)較少，對(duì)蛋白質(zhì)類藥物的分解作用比胃腸道粘膜低，因而有利于藥物的吸收并直接進(jìn)人體內(nèi)血液循環(huán)。目前已有一些蛋白質(zhì)多肽類藥物的鼻腔給藥制劑上市并用于臨床,主要?jiǎng)┬陀械伪莿?、噴鼻劑等。這些藥物是:LHRH激動(dòng)劑布舍瑞林（ｂuserｅlin)、去氨加壓素（dｅｓmopｒｅssin，即l—ｄeａmｉno—β—D－argｉｎine－vasopreｓｓin，ＤDAVP）、降鈣素（caｌcｉtonin）、催產(chǎn)素（Oxytｏｃｉn)、ａsopｒessin(商品名pｏstactoｎ)、胰島素(商品名Nazｌiｎ）等。為了提高蛋白質(zhì)類藥物鼻腔給藥的生物利用度，可利用吸收促進(jìn)劑。常用的鼻腔粘膜促進(jìn)劑有甘膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽、?；悄懰猁}、葡萄糖膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、烏索去氧膽酸鹽等。除膽酸鹽外，還有脂肪酸及其酯類：包括癸酸酯、辛酸酯、月桂酸酯。也有報(bào)道十二烷基硫酸鈉可促進(jìn)降鈣素的鼻粘膜吸收；檸檬烯、?；请p氫褐霉素鈉(Ｓｏdｉｕｍtauｒoｄihydrofusｉｄatｅ，SＴDHF）與二甲基-β—環(huán)糊精可促進(jìn)胰島素的鼻粘膜吸收。一些多肽與蛋白質(zhì)類藥物鼻腔給藥的生物利用度及加入吸收促進(jìn)劑后相對(duì)吸收百分?jǐn)?shù)的研究結(jié)果見(jiàn)表１９-4.表１9－4一些蛋白質(zhì)類藥物鼻腔給藥不加促進(jìn)劑與加促進(jìn)劑的生物利用度比較藥物生物利用度／%加促進(jìn)劑后生物利用度／%氨基酸個(gè)數(shù)腦啡肽類似物(eｎkeｐhalin）5994（甘膽酸鹽）5促甲狀腺素釋放因子（ＴRH）453生長(zhǎng)激素釋放抑制因子類似物7３6催產(chǎn)素（somａt(yī)osｔatm)19后葉加壓素類似物（vasaprｅssｉn）５～1040~50(甘膽酸鹽）9LHＲＨ激動(dòng)劑（ＬHRHagoniｓｔs）1~5ACTH（1—18)1218腸促胰液肽（ｓｅcrｅｔiｎ)10２7胰高血糖素(ｇ1ucagon）<1７0~90（甘膽酸鹽）２9生長(zhǎng)素釋放因子GHRＨ<１2～２0（特殊組成溶媒)4０～44降鈣素＜115～20（甘膽酸鹽)3２胰島素＜l10～３0（甘膽酸鹽)５1Met-hＧH＜17~8（甘膽酸鹽)１9胰島素鼻腔給藥系統(tǒng)已進(jìn)行廣泛的研究,胰島素不用促進(jìn)劑經(jīng)鼻腔給藥生物利用度小于1％，但用葡萄糖膽酸酯作吸收促進(jìn)劑，其生物利用度可提高到10%~30%。近年來(lái)有報(bào)道將胰島素制成淀粉微球，微球直徑４5鼻腔給藥系統(tǒng)當(dāng)前存在的主要問(wèn)題是有些分子量大的藥物透過(guò)性差,生物利用度低，有些藥物制劑存在吸收不規(guī)則,且產(chǎn)生局部刺激性、對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的妨礙以及長(zhǎng)期給藥所引起的毒性，因而使應(yīng)用受到限制。隨著制劑處方與工藝的改進(jìn)，這類給藥系統(tǒng)的發(fā)展前景看好。（二)口服給藥系統(tǒng)蛋白質(zhì)藥物口服給藥主要存在四個(gè)問(wèn)題：①在胃內(nèi)酸催化降解;②在胃腸道內(nèi)的酶水解；=3\*GＢ3③對(duì)胃腸道粘膜的透過(guò)性差；④在肝的首過(guò)效應(yīng)。一些多肽類與蛋白質(zhì)類藥物及部分小分子藥物口服吸收與分子量關(guān)系見(jiàn)表19-5。表1９-5肽類與蛋白質(zhì)藥物及部分小分子藥物口服吸收情況藥物吸收／%分子量動(dòng)物模型牛IgG215０000大鼠牛血清白蛋白＜2６7００0大鼠人血清白蛋白1．264000大鼠干擾素<12５０00大鼠胰島素〈257０0大鼠環(huán)孢素３4120３人l—脫氨—Ｄ—精氨酸-加壓素＜210０7狗抑肽素甘氨酸＜2７4０大鼠促甲狀腺素釋放因子12400狗氨芐西林25～５03４9人卡托普利（CaptoPrｉl)>50217人Aｌafosfalin2５～５0196人胰島素口服給藥是人們關(guān)注的熱點(diǎn)，因?yàn)橐葝u素目前主要靠注射給藥，而且每天需頻繁注射（3~４次)，某些病人需終身給藥，給病人帶來(lái)很大的痛苦與不便,為此研制口服胰島素給藥制劑,十分必要。下面簡(jiǎn)述研究的幾種主要?jiǎng)┬汀?．微乳制劑以蛋黃磷脂、甘油單油酸酯、膽固醇、油酸及一些抗氧劑與防腐劑為油相，用胰島素、枸櫞酸、抑肽酶（aprotｉniｎ）溶于乙醇為水相，乳化劑主要為聚氧乙烯(４0）硬脂酸酯（溶于水），用高壓乳勻機(jī)乳化為W/O微乳,或?qū)⑽⑷閲娪诹u丙基纖維素或羧甲基纖維上干燥裝于膠囊中。以lＩU/kg的劑量用于3個(gè)糖尿病患者約半年，血中胰島素水平上升而血糖明顯下降，取得了較好的療效。近年來(lái)Coｒtecｓ公司也有類似報(bào)道,他們以胰島素、烏索脫氧膽酸、聚山梨酯８０和中鏈單甘油酯為基本組分，采用Mａcroｓol技術(shù)制成澄明的水包油微乳溶液供口服應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。2．納米囊在胰島素口服制劑中，Ｄaｍge等人的工作引人注目。1988年作者將胰島素制成聚氰基丙烯酸異丁酯納米囊（ｎanocapsules），平均粒徑為２２0nm，包封率５４．9％.以1２.5IＵ／ｋg、２5ＩU/kg與50IU/ｋg劑量給大鼠灌胃，在2ｄ降低禁食糖尿病大鼠血糖50％~6０%,此效果持續(xù)6d（12.5IU/kg）或２0d(５01Ｕ/kg)。只有１00IU／ｋｇ的劑量能降低飽腹糖尿病大鼠血糖２5％.作者用實(shí)驗(yàn)證明此生物可降解的納米囊可防止胃腸酶的水解，可以穿過(guò)腸上皮細(xì)胞，主要吸收部位在回腸，125I標(biāo)記胰島素顯示改變了胰島素的組織分布，７ｄ后血中標(biāo)記的胰島素最高，其次為肝、小腸、結(jié)腸中有少量殘存，胃中沒(méi)有殘留。關(guān)于納米囊通過(guò)腸壁的機(jī)制,一般認(rèn)為依賴于微囊的大小,小于500nｍ的微?？梢酝ㄟ^(guò)小腸粘膜內(nèi)的集合淋巴結(jié)中的M細(xì)胞而進(jìn)入體循環(huán).CournaｒieF等在前人研究的基礎(chǔ)上制備人胰島素聚氰基丙烯酸異丁酯毫微囊,給小鼠口服后0。5h到1ｈ在血液中可檢測(cè)到人胰島素。3。胰島素腸溶軟膠囊Ｔouitou等將胰島素設(shè)計(jì)為軟膠囊，然后用EｕdragitRS與S或EudragitRS與Ｌ的丙酮溶液包衣。大鼠灌胃并以腹腔注射為對(duì)照，測(cè)定降糖效果,計(jì)算降糖曲線下的面積,計(jì)算其藥理利用度（pｈarmaｃoｌogiｃalavailabilｉｔy）F。結(jié)果表明其藥理利用度為9。3%到12。7％。４.胰島素微球制劑Morｉshitａ等將定量的胰島素與抑肽酶(aprotｉnin，ＡP）制備Ｅｕdragit胰島素微球，再進(jìn)一步用Eｕdｒａgit包衣，過(guò)篩得180μｍ～５００μm的微球。Eudragｉt選用L1００與S１00兩種，分別制得L－IMS、S—IＭS與ＬS－IＭS等胰島素微球，并進(jìn)行動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表19—６所示：表19—6胰島素口服微球的降血糖效果微球材料劑量／IＵkg-1包封率／％AUC(每小時(shí)血糖降低／％）相對(duì)有效性/％Ｌ—對(duì)照／／17。2１2．0/L-IMS5080.２８.486。８17.3１．３0.2L—ＩMS+AＰ５0／１80。０31．5３．６1．0LS—IMＳ+AＰ５０／1０4。242。5２．３1.3LS-IMS５0７8.17。０68．１15．５1.00。2S-IMS5065.85。4４5.91０．70.80.１S-IMS+AP５０／８０．022．21.20。3注:相對(duì)有效性是以靜脈注射為參比的相對(duì)效率。IＭS為胰島素微球。5．胰島素脂質(zhì)體Ｍuramatsu等制備了胰島素脂質(zhì)體，大小約１00nm，包封率約17.９％~33。６％，以大豆甾醇(soyｂeａn－dｅrivedｓterol,SＳ）代替膽固醇同法制備胰島素脂質(zhì)體，并進(jìn)行動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表１9-7。表19—7胰島素脂質(zhì)體實(shí)驗(yàn)結(jié)果脂質(zhì)體組成劑量/IUkｇ—１AUC（每小時(shí)血糖下降百分?jǐn)?shù)/%）藥理利用度/％靜脈注射0。579．99.４98.8１3.4口服DPＰC/ch(7:2）23．８11.89.4０.80.６DPＰＣ/ch(7:4）15．5２1２．８5６．8２１。95.8DPＰC/ch（7：2)28。3419．38５。024．14.9DＰPC/ss（7:4)2９。03９2.8７0.731.6５。7結(jié)果表明藥理利用度最高達(dá)31．6％，盡管如此,但仍需做進(jìn)一步研究。目前,胰島素口服劑型的研究很多，但離實(shí)用產(chǎn)品尚有較大距離,還需要做艱巨的工作。（三）直腸給藥系統(tǒng)由于直腸內(nèi)水解酶活性比胃腸道低,而且pH接近中性，所以藥物破壞較少,且藥物吸收后基本上可避免肝的首過(guò)代謝，直接進(jìn)入全身血液循環(huán)，同時(shí)也不像口服藥物受到胃排空及食物的影響，因此多肽類與蛋白質(zhì)類藥物直腸給藥不失為一條理想的給藥途徑.為了提高胰島素類直腸吸收效果，一般采用吸收促進(jìn)劑，常用的直腸吸收促進(jìn)劑有水楊酸、5—甲氧基水楊酸、去氧膽酸鈉、DL－苯基苯胺乙醚乙酸乙酯（DＬ－phenｙｌalanineetｈｙlaｃｅtｏaｃｅtate）、聚氧乙烯(ＰEＯ－９—月桂基醚)、烯胺（enａminｅ)衍生物如D-甘氨酸鈉、Ｄ-亮氨酸鈉、Ｄ-苯丙氨酸鈉等。一些肽類和蛋白質(zhì)藥物直腸給藥的生物利用度及加促進(jìn)劑后吸收百分率見(jiàn)表19-８。表19—８肽和蛋白質(zhì)藥物直腸給藥的生物利用度藥物生物利用度／％加促進(jìn)劑后相對(duì)吸收/%氨基酸數(shù)目四肽胃泌素（tetragaｓtrｉn）5～1６/4五肽胃泌素2~1０18(5—甲氧基水楊酸)5胃泌素１0～1533(5-甲氧基水楊酸）１７降鈣素0。826（ＰEＯ—9—月桂基醚）32胰島素〈１27.5（烯胺衍生物）5１表皮生長(zhǎng)因子068。２（CＭCNa）55生長(zhǎng)激素0。２7~9．５（水楊酸）1９1表中可見(jiàn)胰島素不加促進(jìn)劑直腸給藥生物利用度小于1%,但加入DＬ－苯基苯胺乙醚乙酸乙酯,則吸收達(dá)27．5%，此外,也有用20IU的胰島素加1５0mg５-甲氧基水楊酸和4％明膠可顯著促進(jìn)胰島素的吸收達(dá)25%(與肌內(nèi)注射對(duì)照)。(四)口腔粘膜給藥系統(tǒng)口腔粘膜較鼻粘膜厚，但無(wú)角質(zhì)層,由于面頰部血管豐富,藥物吸收后可經(jīng)頸靜脈、上腔靜脈直接進(jìn)入全身循環(huán),可避免胃腸消化液及肝的首過(guò)作用。Iｓhida用HPC與卡波普（Ｃaｒbｏpol934)制成粘膜粘附制劑，該制劑內(nèi)層由胰島素與甘膽酸鈉及可可豆脂組成,外周粘附層則為ＨPC與卡波普。在狗的口粘膜上可貼附６h，但胰島素口腔粘膜制劑生物利用度與肌內(nèi)注射相比，僅為0。5%（根據(jù)血藥濃度計(jì)算）。Aungst等認(rèn)為口腔粘膜吸收主要改進(jìn)藥物的膜穿透性和抑制藥物的代謝，故要使用吸收促進(jìn)劑，實(shí)驗(yàn)方法是將胰島素與促進(jìn)劑在適當(dāng)?shù)娜軇┲腥芙獠⒄{(diào)節(jié)到所需pＨ，溫?zé)嶂?0℃,多數(shù)輔料可用0．1ｍol／Ｌ表１9-9不同促進(jìn)劑對(duì)胰島素口腔粘膜給藥的影響促進(jìn)劑名稱濃度/%劑量／IUkg－1相對(duì)肌內(nèi)注射的有效性/％甘膽酸鈉５１0２5。57.甘膽酸鈉５518.36.６去氧膽酸鈉51020。６5．0梭鏈孢酸鈉5101６.94．6聚氧乙烯(9)月桂基醚51027．210.3聚氧乙烯（9）辛基苯醚５１014。84．7十二烷基硫酸鈉51０2０。35．6磷脂酰肌醇５１０１１。36。４其他藥物,如普魯瑞林(ｐroｔirｅｌin）、布舍瑞林(ｂuserelin）等經(jīng)口腔吸收，均有一定的藥理作用。（五）經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究表明皮膚的穿透性低是多肽和蛋白質(zhì)類藥物透皮吸收的主要障礙，但皮膚的水解酶活性相當(dāng)?shù)停@對(duì)多肽與蛋白質(zhì)類藥經(jīng)皮給藥創(chuàng)造了有利條件。離子導(dǎo)入技術(shù)(iｏｎtｏpｈｏｒｅsis）指電荷或中性分子在電場(chǎng)作用下遷移進(jìn)入皮膚的過(guò)程。該項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用使大分子量、荷電和親水性的多肽和蛋白質(zhì)類藥物能透過(guò)皮膚角質(zhì)層.如胰島素、TRH、LＨRH、精氨酸加壓素等的透皮吸收都取得一定研究進(jìn)展.（六）肺部給藥系統(tǒng)蛋白質(zhì)類藥物的肺部給藥系統(tǒng)目前受到越來(lái)越多的關(guān)注.據(jù)報(bào)道三種治療用多肽，如亮丙瑞林（9個(gè)氨基酸）、胰島素（5１個(gè)氨基酸）、生長(zhǎng)激素(19２個(gè)氨基酸)可以生理活性型從肺部吸收，生物利用度為10%～2５%。該值超過(guò)胰島素與生長(zhǎng)激素不加促進(jìn)劑鼻腔給藥系統(tǒng)的生物利用度.目前蛋白質(zhì)肺部給藥系統(tǒng)存在的主要問(wèn)題是：長(zhǎng)期給藥后安全性評(píng)估；肺吸收分子大小的限制;促進(jìn)吸收的措施；穩(wěn)定的蛋白質(zhì)藥物的處方設(shè)計(jì)方法等。一旦這些問(wèn)題獲得解決,肺部給藥系統(tǒng)也是這類藥物的適宜途徑。近年來(lái)胰島素采用吸入粉霧劑(或粉末吸入劑）.肺部給藥已取得重大進(jìn)展，現(xiàn)已進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段.第四節(jié)蛋白質(zhì)類藥物制劑的評(píng)價(jià)方法制劑中藥物的含量測(cè)定制劑中蛋白質(zhì)類藥物的含量測(cè)定可根據(jù)處方組成確定，如紫外分光光度法和反相高效液相色譜法常用于測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的濃度，但必須進(jìn)行方法的適用性試驗(yàn)，在處方中其他物質(zhì)不干擾藥物測(cè)定的前提下,將蛋白質(zhì)類藥物制劑溶于1。0N氫氧化鈉溶液中后采用２92nm波長(zhǎng)條件下的紫外分光光度法測(cè)定。也可采用反相高效液相色譜法(RＰ—ＨPLC)、離子交換色譜(IEC）與分子排阻色譜(Sizeｅxclｕsｉｏnchｒomatogrａｐhy,ＳEC）法測(cè)定。制劑中藥物的活性測(cè)定蛋白質(zhì)類藥物制劑中藥物的活性測(cè)定是評(píng)價(jià)制劑工藝可行性的重要方面，活性測(cè)定方法有藥效學(xué)方法（如細(xì)胞病變抑制法)和放射免疫測(cè)定法。前一種方法是利用體外細(xì)胞與活性蛋白質(zhì)多肽的特異生物學(xué)反應(yīng),通過(guò)劑量（或濃度）效應(yīng)曲線進(jìn)行定量(絕對(duì)量或比活性單位)，該方法具有結(jié)果可靠，方法重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，是制訂藥物制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)最基本的方法。后一種方法是建立在蛋白質(zhì)類藥物的活性部位與抗原決定簇處在相同部位時(shí)實(shí)施的一種方法，否則活性測(cè)定會(huì)產(chǎn)生誤差。此外也可采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＳDS—PAGE）法測(cè)定蛋白質(zhì)類藥物活性.制劑中藥物的體外釋藥速率測(cè)定測(cè)定控緩釋制劑中蛋白質(zhì)類藥物的體外釋藥速率時(shí)考慮到藥物在溶出介質(zhì)中不穩(wěn)定，多采用測(cè)定制劑中未釋放藥物量的方法.具體方法(以微球?yàn)槔┦菍?shù)個(gè)試驗(yàn)組的微球（每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置數(shù)個(gè)取樣點(diǎn)）置于一定量的溶出介質(zhì)中,放入３7℃制劑的穩(wěn)定性研究蛋白質(zhì)類藥物制劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)包括制劑的物理穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性兩個(gè)方面,物理穩(wěn)定性研究應(yīng)包括制劑中藥物的溶解度、釋放速率以及藥典規(guī)定的制劑常規(guī)指標(biāo)的測(cè)定，化學(xué)穩(wěn)定性包括藥物的聚集穩(wěn)定性、降解穩(wěn)定性和生物活性測(cè)定.試驗(yàn)方法可參照藥物制劑穩(wěn)定性章節(jié),檢測(cè)手段根據(jù)不同藥物的特性選擇光散射法、圓二色譜法、電泳法、分子排阻色譜法和細(xì)胞病變抑制法等進(jìn)行測(cè)定.體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究由于蛋白質(zhì)類藥物劑量小，體內(nèi)血藥濃度檢測(cè)的靈敏度要求高，常規(guī)體外檢測(cè)方法不能滿足體內(nèi)血藥濃度測(cè)定，此外藥物進(jìn)入體內(nèi)后很快被分解代謝，因此選擇合適的檢測(cè)方法是進(jìn)行體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究的關(guān)鍵.對(duì)于非靜脈給藥的控緩釋制劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)可考慮選擇放射標(biāo)記法測(cè)定血漿中藥物的量，該方法靈敏度高，適合多數(shù)蛋白質(zhì)類藥物體內(nèi)血藥濃度的測(cè)定.如果藥物血藥濃度與藥效學(xué)呈線性關(guān)系,也可用藥效學(xué)指標(biāo)代替血藥濃度進(jìn)行體內(nèi)吸收和藥動(dòng)學(xué)研究。刺激性及生物相容性研究與其他類型藥物制劑研究一樣,刺激性及生物相容性研究是蛋白質(zhì)類藥物制劑（特別是各類注射