病原微生物實驗室生物安全管理手冊

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ī)范3.1組織框架圖單位法人{(lán)或授權(quán)}負(fù)責(zé)人↓實驗室負(fù)責(zé)人↓生物安全員↓實驗室工作人員3.2各類人員相應(yīng)行為規(guī)范3.2.1（1）負(fù)責(zé)組織生物安全實驗室的立項、選址，施工隊的資質(zhì)驗證。（2）負(fù)責(zé)成立生物安全委員會負(fù)責(zé)生物安全，制定管理制度，監(jiān)督有關(guān)法規(guī)和操作規(guī)程的執(zhí)行情況。（3）負(fù)責(zé)組織對造成外環(huán)境污染、實驗室污染、人身傷害事故的調(diào)查與處理。3.2.2（1）組織制定安全手冊、操作規(guī)程等文件。（2）按照上述文件要求組織實驗室的各項工作，保證實驗室運行的安全和實驗室工作質(zhì)量的準(zhǔn)確可靠。（3）組織進(jìn)入生物安全二級實驗室的人員進(jìn)行業(yè)務(wù)培訓(xùn)，保證工作人員熟知微生物的操作規(guī)程和技術(shù)，掌握實驗室設(shè)備的特殊要求并熟練操作，對培訓(xùn)的結(jié)果進(jìn)行考核，決定進(jìn)入實驗室工作人員的資格。3.2.3（1）對技術(shù)方法、化學(xué)品、材料與設(shè)備定期進(jìn)行內(nèi)部安全檢查，確保其符合國家和地方的有關(guān)安全與衛(wèi)生政策與標(biāo)準(zhǔn)。一旦發(fā)現(xiàn)不安全因素，立即停止工作并上報實驗室負(fù)責(zé)人。（2）與有關(guān)人員討論研究安全政策的問題。（3）確認(rèn)所有工作人員都具有進(jìn)入實驗室工作的資格。（4）為所有人員提供連續(xù)性的安全要教育與指導(dǎo)。（5）針對操作程序、技術(shù)方法和各種條件要求的變更，以及新設(shè)備的引進(jìn)，為全體工作人員提供最新的安全文獻(xiàn)和信息資料。（6）定期檢查實驗室的各項技術(shù)參數(shù)，組織對實驗室裝備的常規(guī)保養(yǎng)。（7）所有可能涉及潛在傳染性或有毒物質(zhì)泄露的意外事件與事故，即使沒有人員受傷或暴露，也要予以調(diào)查，并向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人員和安全委員會報告調(diào)查結(jié)果和提出建議。（8）當(dāng)任何實驗室工作人員的疾病或缺勤與工作有關(guān)，并被記錄為可能的實驗室獲得性感染時，協(xié)助隨訪調(diào)查其疾病或缺勤情況。（9）確保在發(fā)生傳染性物質(zhì)濺灑其他事件時，監(jiān)督消毒凈化程序得到正確執(zhí)行；并對這類意外事件和事故進(jìn)行詳細(xì)的書面記錄。（10）確保任何需要修理和維護(hù)的儀器設(shè)備在消毒與凈化之后方可運出實驗室。生物安全員由主管檢驗師以上的人員承擔(dān)，必須具備如下資質(zhì)：具有實際工作的經(jīng)驗；對操作的微生物有全面、完整的了解；具有組織實驗室工作的能力；對工作有高度的責(zé)任心。3.2.4（1）生物安全二級實驗室，只允許進(jìn)行實驗室目的規(guī)定的操作，與此無關(guān)的活動一律不得進(jìn)行。（2）必須按規(guī)定進(jìn)行個人防護(hù)，方得進(jìn)入實驗室。（3）保持實驗室環(huán)境的整潔，每項工作完成之后，必須清理和清潔臺面，離開實驗室（4）注意個人的健康狀況，出現(xiàn)身體不適情況，應(yīng)及時向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人報告。（5）實驗室內(nèi)禁止飲食、吸煙、訪客和喧嘩。實驗室工作人員的技術(shù)要求（1）必須了解實驗室安全原理，熟悉本手冊的各項規(guī)定，熟記緊急情況下的正確應(yīng)對措施。（2）掌握病原微生物操作的基本要求，正確、安全地實用標(biāo)本，避免污染，以獲得準(zhǔn)確、可靠的實驗結(jié)果。（3）必須熟悉相關(guān)實驗的國家標(biāo)準(zhǔn)，能夠完成標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的任務(wù)。（4）一旦發(fā)生意外，立即向生物安全員匯報。4、個人防護(hù)程序4.1個人防護(hù)用品的使用要求4.1.1口罩：應(yīng)使用N95型口罩或12---16層棉紗口罩，最好使用防濺口罩{如31860型}如有胡須應(yīng)刮去，使用應(yīng)始終保持口罩與臉緊貼。一次性使用口罩應(yīng)在使用后4小時丟棄，不能重復(fù)使用，不能與他人共同使用。如口罩遭到分泌物飛濺或弄濕，應(yīng)嚴(yán)格洗手后，帶上清潔手套更換。4.1.2防護(hù)面罩：實驗人員在進(jìn)行工作時應(yīng)佩帶防護(hù)面罩，防護(hù)面罩要求透亮度好，有較好的防飛濺功能，重復(fù)使用前應(yīng)進(jìn)行徹底消毒。4.1.3防護(hù)服：實驗人員工作時應(yīng)穿戴一次性防護(hù)服。最好是連體式，防水及抗靜電性能好，無過濾作用。袖口、腳踝口應(yīng)為彈性收口，面部、腰部應(yīng)有彈性收口或拉繩收口。4.1.4手套和鞋套：鞋套應(yīng)為一次性防水鞋套。手套為一次性膠乳手套，須戴兩副，外層手套應(yīng)根據(jù)需要及時更換。4.2個人防護(hù)用品的穿戴順序4.2.1進(jìn)入清潔區(qū)前穿上普通白大衣和實驗室專用鞋。4.2.2進(jìn)入清潔區(qū)時穿戴一次性口罩，手術(shù)帽，一次性隔離衣、兩副膠乳手套和兩副一次性鞋套。注意將手套和鞋套分別套在袖口和褲口外。4.2.3戴N95口罩及防護(hù)面罩、穿防水隔離服、防水鞋套、再戴外層手套。4.3個人防護(hù)用品脫卸順序4.3.1完成實驗后，在半污染區(qū)先用75%乙醇溶液消毒外層手套，然后脫掉外層手套{在脫另一只手套時，手指只能接觸手套的里部}。4.3.2著內(nèi)層手套依次脫掉防護(hù)面罩、N95口罩、防水鞋套及防水隔離服{脫隔離服時，不要接觸隔離服的外表面，應(yīng)從里反脫，以保里面超外}。將脫掉的物品放入專用消毒袋中就地高壓消毒。防護(hù)面罩等重復(fù)使用的物品立即放入消毒液內(nèi)，按有關(guān)規(guī)定消毒處理。4.3.3脫掉外層一次性鞋套，用75%乙醇溶液消毒內(nèi)層手套。4.3.4戴者手套脫掉一次性口罩、手術(shù)帽、內(nèi)層鞋套、然后脫掉一次性隔離衣及手套，放入消毒袋高壓消毒。4.3.5用消毒巾擦拭面部，用碘伏徹底消毒雙手，并用流動水沖洗。事件、傷害、事故和職業(yè)性疾病報告制度1、目的糾正檢驗工作中的差錯，及時處理責(zé)任事故，吸取事故的教訓(xùn)，確保檢驗設(shè)備和人員的安全。2、范圍適用于檢驗工作中出現(xiàn)的事故分析報告、調(diào)查和處理。3、職責(zé)3.1事故責(zé)任部門負(fù)責(zé)人填寫事故報告單，報告事故發(fā)生的原因及采取的措施。3.2業(yè)務(wù)質(zhì)量管理科和有關(guān)科室負(fù)責(zé)人協(xié)助中心負(fù)責(zé)人做好事故的調(diào)查處理工作。4、工作程序4.1事故分類凡違反各項規(guī)定所造成的事故均為責(zé)任事故，按其經(jīng)濟損失和人身傷害和大小分為以下幾種：大小事故界限表損失情況小事故一般事故大事故重大事故經(jīng)濟損失≤100元100~1000元1000~10000元≥10000元人身傷亡一人受傷，休工≤3日一人受傷，休工3日以上兩人受傷或一人受傷，休工1-6個月三人以上受傷，休工一年以上，或一人致殘或死亡。4.2事故的處理4.24.2.24.2.34.2.4重大事故發(fā)生后一周內(nèi)，由4.2實驗室生物危險標(biāo)識使用規(guī)定1.目的規(guī)范生物安全二級實驗室的使用和管理。2.適用范圍適用于生物安全二級實驗室。3.具體要求：3.1在具有生物安全二級實驗室門口加貼專門的生物安全警示標(biāo)識，以避免無關(guān)人員進(jìn)入相關(guān)區(qū)域，造成感染的危險。3.2在有可能對人員造成威脅的生物標(biāo)本儲存處加貼生物安全警示標(biāo)識，以防無關(guān)人員將危險標(biāo)本帶入安全區(qū)域?qū)θ藛T造成威脅。實驗室內(nèi)務(wù)管理制度1.目的確保生物安全二級實驗室的正常運行、實驗人員、物品和環(huán)境的安全2.適應(yīng)范圍適應(yīng)于生物安全二級實驗室。3.職責(zé)進(jìn)入生物安全二級實驗室工作的所有工作人員嚴(yán)格遵照本管理制度執(zhí)行。4.基本制度4.1在主實驗室設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)。入口處貼有醒目的生物危險標(biāo)志。4.2非實驗室有關(guān)人員和物品不得進(jìn)入。4.3實驗室內(nèi)不得進(jìn)食和飲水，或者進(jìn)行其他與實驗無關(guān)的活動。4.4實驗室工作人員、外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)。4.5實驗過程中，嚴(yán)格按有關(guān)操作程序操作，降低剪除和氣溶膠的產(chǎn)生。4.6用移液器吸取液體，嚴(yán)禁口吸。4.7實驗室的工作人員必須是經(jīng)受過專業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員。在獨立進(jìn)行工作前還需在中高級實驗室技術(shù)人員指導(dǎo)下進(jìn)行上崗培訓(xùn)，達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，方可開始工作。4.8實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作。4.9實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程。4.10實驗室的工作人員在開始工作前必須留本底血清進(jìn)行有關(guān)的檢測，以后定期復(fù)檢。如有疫苗必須進(jìn)行免疫注射。4.11所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室前必須經(jīng)可行的消毒方法進(jìn)行消毒。4.12工作前應(yīng)消毒，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒。5.實驗室特殊管理制度5.1進(jìn)行感染性實驗室時，應(yīng)禁止他人進(jìn)入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人同意方可入內(nèi)，免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的人員不許進(jìn)入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)同意方可入內(nèi)。5.2實驗室人員進(jìn)入實驗室前必須進(jìn)行有效的培養(yǎng)和模擬訓(xùn)練。掌握預(yù)防暴露和暴露后的消毒處理程序。5.3實驗室人員應(yīng)接受必要的免疫接種和相應(yīng)的抗體水品測定。5.4實驗室事故處理：工作人員在操作過程中發(fā)生意外，如針刺和切傷、皮膚污染、感染性標(biāo)本濺及體表和口鼻眼內(nèi)、衣物污染實驗臺面等均視為安全事故，應(yīng)視事故類型的不同情況，立即進(jìn)行緊急處理。具體措施按《實驗室應(yīng)急處置預(yù)案》執(zhí)行。5.5填寫意外情況登記與處理記錄表，并按規(guī)定報告給有關(guān)部門。5.6處特殊情況外，禁止在實驗室內(nèi)使用銳器。5.7剩余的標(biāo)本應(yīng)密封后置于適當(dāng)條件下保存。5.8實驗過程中應(yīng)使用鑒定合格的二級生物安全柜。5.9實驗設(shè)備在運出修理或維修前必須嚴(yán)格消毒，方可運出。實驗室菌（毒）種和生物樣本安全保管和檔案管理制度1.目的規(guī)范實驗室菌（毒）種和生物樣本的保管和檔案管理2.適用范圍實驗室菌（毒）種和生物樣本的處理和檔案管理3、實驗室菌（毒）種和生物樣本的保管3.1按國家規(guī)定可以保存的菌（毒）種，由指定的專人負(fù)責(zé)登記、保存和管理。按期傳代、鑒定，必須在無菌室或接種罩內(nèi)進(jìn)行，并做好有關(guān)記錄。在保存過程中發(fā)現(xiàn)菌（毒）種變異或死亡，應(yīng)及時上報科長和中心主任。3.2本區(qū)檢出的地方菌（毒）株應(yīng)及時上報，因工作需要暫時保留的菌（毒）株也應(yīng)按上級規(guī)定的時間進(jìn)行銷毀處理。新發(fā)現(xiàn)的菌（毒）株，要做好原始記錄，并上報主管部門復(fù)核確認(rèn)。3.3菌（毒）種必須每種設(shè)一記錄卡，其內(nèi)容包括：名稱、編號、來源、分離日期、引進(jìn)日期、鑒定日期、鑒定結(jié)果、鑒定者、審核者、傳代情況、所用培養(yǎng)基、保存方法、溫度、使用轉(zhuǎn)移及銷毀情況、保存者、部門負(fù)責(zé)人等。3.4向上級主管部門申請索取菌（毒）種和向下級有關(guān)部門發(fā)放菌（毒）種時，應(yīng)有2人參加辦理，嚴(yán)格執(zhí)行國家有關(guān)規(guī)定，手續(xù)要完備，并認(rèn)真做好記錄備查。3.5一、二類菌（毒）種，應(yīng)派專人向提供單位領(lǐng)取，不得郵寄；三類菌（毒）種的郵寄必須持有郵寄單位證明，并按照菌（毒）種郵寄與包裝的有關(guān)規(guī)定辦理。3.6未經(jīng)上級批準(zhǔn)，任何單位及個人不得以工作之便，進(jìn)行國際間各類菌（毒）種交流，做好菌（毒）種安全防范工作。4、檔案管理制度4.1、非實驗室人員不得隨意查看實驗室記錄4.2、實驗室人員負(fù)責(zé)妥善保存各種樣品登記本、報告單及實驗室原始記錄，不得擅自修改和銷毀4.3、專人負(fù)責(zé)保管感染者檔案4.4、未經(jīng)領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)不得向無關(guān)人員或單位提供任何實驗室及感染者信息4.5、HIV抗體初篩實驗室檢測的陽性結(jié)果不是最終結(jié)果，須進(jìn)一步確認(rèn)，確認(rèn)前不得出具陽性報告及告知受檢者本人或有關(guān)單位實驗室廢棄物管理制度1.目的規(guī)范廢棄物處理2.適用范圍尖銳器具和其他廢棄物的處理。3.具體方法：3.1尖銳器具的處理3.1.1尖銳器具，如針、注射器等，除特殊情況外，禁止在實驗室使用，盡可能用塑料器材代替玻璃器材。3.1.2注射和吸取感染性材料時，盡可能使用一次性注射器。用過的針頭禁止折段、剪段、折段、重新蓋帽或從注射器上取下，禁止用手直接操作。用過的針頭、注射器直接放入防刺破的盛廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，進(jìn)行高壓消毒處理。3.1.3盡可能使用帶針頭套的的注射器、無針頭的系統(tǒng)和其他安全裝置。3.1.4打碎的玻璃器具，禁止用手直接清理，必須使用其他工具，如掃把、簸箕、夾子或鑷子等。盛污染針、銳器及碎玻璃的容器在丟棄前必須徹底消毒。3.2廢棄物的處理3.2.1實驗后的廢棄物如不及時處置則會污染環(huán)境，從而對人造成危害，因此有關(guān)人員必須嚴(yán)格按照規(guī)定執(zhí)行。3.2.2實驗樣本在處理和進(jìn)行實驗室檢測時產(chǎn)生的廢棄物，如一次性針頭、離心管、平皿等應(yīng)放入適當(dāng)?shù)娜萜骱蛧?yán)格防漏的高壓袋內(nèi)，待實驗結(jié)束后立即就地高壓消毒。3.2.3實驗過程中產(chǎn)生的污染性液體物質(zhì)、廢棄的液體標(biāo)本等放在盛有消毒液的嚴(yán)格防滲漏的專用容器中，并及時加蓋。3.2.4進(jìn)行實驗所必須使用的容器，如針頭、一次性注射器、玻璃器具、手術(shù)刀片等，放入專用的堅壁容器內(nèi)，加蓋密封。3.2.5以上所有盛裝廢棄物的容器，在每次實驗結(jié)束后，就地高壓消毒。3.2.6高壓鍋應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，嚴(yán)格按使用說明操作，確保在121條件下，高壓30分鐘，以達(dá)到消毒要求。3.2.7所有實驗產(chǎn)生的廢棄物，必須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒后方能運出實驗區(qū)，并送至指定地點集中焚燒處理。十一、實驗室消毒隔離制度1.目的規(guī)范微生物實驗室和生物安全二級實驗室的消毒隔離工作。2.適用范圍微生物實驗室和生物安全二級實驗室。3.職責(zé)所有工作人員都必須遵從本規(guī)程。4.具體步驟4.1實驗室基本要求4.1.1實驗室相對獨立，實驗室核心區(qū)包括實驗間及緩沖間，明確劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)，并有明顯標(biāo)識。4.1.2各區(qū)域交叉處應(yīng)設(shè)置有效氯2000的含氯消毒劑溶液浸濕的腳墊。4.1.3實驗室內(nèi)所有物品應(yīng)專用，須帶出時必須嚴(yán)格消毒。4.1.4實驗人員進(jìn)入實驗室應(yīng)穿戴好個人防護(hù)用品，如隔離衣、防護(hù)眼睛、口罩、一次性手套等。實驗過程中注意自身防護(hù)，并防止操縱過程中的交叉污染。4.1.5培養(yǎng)基、組織、體液等必須放在防漏密閉的容器中儲運。4.1.6血清學(xué)試驗、樣品的處理和分裝應(yīng)在BSL-2安全柜內(nèi)進(jìn)行。4.1.7樣品離心使用密封的離心杯，以防濺出。4.1.8實驗過程中使用的器材、實驗廢棄物均應(yīng)按廢棄物處理程序進(jìn)行消毒處理。4.1.9當(dāng)傳染性標(biāo)本溢出或濺出后，應(yīng)有專業(yè)人員立即消毒和清理。4.1.10實驗完畢，先消毒物體表面，再按規(guī)定程序脫下個人防護(hù)用品放入包裝袋內(nèi)就地高壓消毒，并進(jìn)行空氣消毒。4.1.11離開實驗室前，必須按有關(guān)規(guī)定消毒雙手。4.2消毒方法4.2.1儀器等表面消毒：工作結(jié)束后，用含有效氯1000的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分鐘以上。4.2.2實驗器材的分類消毒：將使用后的銳器方入防刺破、防滲漏的密閉專用銳器處置盒內(nèi)，121℃高壓消毒30分鐘。其他器材方入有效氯為2000mg/L的含氯消毒液內(nèi)浸泡1小時以上。處理時應(yīng)避免皮膚損傷。4.2.3工作臺等物體表面消毒：工作完畢，用含有效氯2000mg/L的消毒液或75％乙醇溶液擦拭消毒，作用20分鐘以上。4.2.4個人防護(hù)用品消毒：實驗結(jié)束，將隔離衣、口罩、帽子、手套、鞋套等121℃高壓消毒30分鐘。防護(hù)鏡浸泡在75％乙醇或有效氯為1000mg/L的含氯消毒劑中，作用30-60分鐘。4.2.5手的消毒：用典伏或75％的乙醇擦拭，作用1-3分鐘。4.2.6空氣消毒：每次實驗前后用紫外燈照射消毒，每次不少于1小時，每立方米空間安裝紫外燈瓦數(shù)≥1.5W，距紫外燈1米處照射強度≥70W/㎡。4.2.7這張消毒：應(yīng)用80ml/m3福爾馬林，密閉熏蒸消毒6小時后方可帶出。4.2.8地面消毒：工作結(jié)束，應(yīng)用含有有效2000mg/L的消毒液噴灑拖地。4.2.9廢棄物的處理：實驗的廢棄物應(yīng)放入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，就地121℃高壓消毒30分鐘，消毒后的廢棄物集中收集、焚燒處理。5.實驗室高壓消毒安全操作5.1使用前應(yīng)了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則，以及不正確使用而導(dǎo)致的災(zāi)難性后果。5.2按照操作規(guī)程使用高壓鍋5.2.1接通電源，合上高壓滅菌器左側(cè)總電源開關(guān)。5.2.2注入加熱用水，注水至加熱器罩的水位水準(zhǔn)器配件尖端浸入水中為止。5.2.3設(shè)定滅菌溫度，先按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需溫度，然后按“實行”鍵，把所設(shè)溫度存進(jìn)程序。5.2.4設(shè)定滅菌時間，先按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需時間，然后按“實行”5.2.5按“實行”鍵執(zhí)行滅菌程序，此時“滅菌”5.2.65.2.75.3高壓鍋操作人員在使用高壓鍋時不得離開崗位；在日常使用過程中，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，并按照規(guī)定進(jìn)行設(shè)備的維護(hù)。每1年保養(yǎng)一次，每月檢測一次消毒效果。5.4高壓鍋的物品不得放的過滿，否則影響滅菌效果。放好被消毒滅菌的物品后，高壓鍋的蓋子或門必須擰緊。5.5定期檢查高壓鍋，以確保其正常工作，防止意外事故發(fā)生，保證消毒滅局效果。5.6高壓滅菌安全操作步驟5.6.15.6.25.6.35.6.4當(dāng)開始滅菌時必須確信滅菌國內(nèi)水量合適，高壓溫度和時間設(shè)置正確。滅菌應(yīng)保持在121℃十二、實驗室應(yīng)急處置預(yù)案1．目的規(guī)范緊急情況的處理工作。2．適用范圍微生物實驗室和微生物安全二級實驗室。3．職責(zé)遇有緊急情況所有工作人員嚴(yán)格按此規(guī)程處理。4．具體要求：4.1造成或可能造成實驗室污染，但未造成人身傷害的實驗室事故，由實驗室負(fù)責(zé)人處理。例如實驗過程中，由于標(biāo)本、試劑溢出濺落造成操作臺或地面的污染等，應(yīng)立即噴灑消毒液并覆蓋浸透消毒液的紙巾，等消毒液徹底浸泡30分鐘后，對污染的物品進(jìn)行處理。清理后的物品高壓滅菌。并填寫生物安全二級實驗室意外情況登記與處理記錄表，實驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)指導(dǎo)這些處理行動，并檢查處理效果。4.2在沒有強毒微生物時，再實驗室內(nèi)受到意外傷害，例如割傷、燒傷、燙傷等，由實驗室負(fù)責(zé)人處理。令受到傷害的人員立即停止工作，用消毒液清洗未破損的皮膚表面，傷口以碘伏消毒，眼睛用洗眼器反復(fù)沖洗。有在同一實驗室內(nèi)工作人員或派人迅速著裝進(jìn)入實驗室，清除造成傷害的原因，清理實驗材料，幫助受傷人員緊急處理并撤離實驗室。受到傷害的人員應(yīng)立即就醫(yī)，并將受傷原因及接觸微生物的情況通報負(fù)責(zé)人。對其進(jìn)行恰當(dāng)而完整的病史記錄。在其身體狀況未恢復(fù)之前，不得重新進(jìn)入實驗室工作。實驗室在經(jīng)過整理，消除了造成傷害的故障之后，方可重新使用。4.3傷害事故可能導(dǎo)致被強毒微生物感染，例如針頭刺破、銳器割傷、粘膜暴露等途徑接觸到感染性液體，首先進(jìn)行局部處理，用肥皂和水清洗污染的皮膚，擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液，用肥皂或清水沖洗，用消毒液浸泡或涂抹消毒，并包扎傷口。在操作過程中發(fā)生培養(yǎng)物、污染材料濺落身體表面等情況，首先使用噴淋裝置，盡快將污染物沖洗掉，然后再進(jìn)行局部處理。暴露的粘膜應(yīng)盡快用生理鹽水或清水沖洗干凈。實驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)向上級部門報告，對受傷害者進(jìn)行隔離觀察，同時根據(jù)情況預(yù)防性用藥，并寫出職業(yè)暴露后預(yù)防感染的評價和處理方案。4.4實驗室事故可能造成氣溶膠污染，如壓力容器或管道破裂等，立即關(guān)閉實驗室，疏散現(xiàn)場的所有人員，對所有暴露人員提出相應(yīng)的醫(yī)學(xué)建議。立即通知實驗室負(fù)責(zé)人及生物安全員。至少在1小時內(nèi)，任何人員不得進(jìn)入現(xiàn)場，以便氣溶膠的消散記空氣中較重微粒的沉降。張貼禁止入內(nèi)的警示標(biāo)志。在生物安全員的監(jiān)督下進(jìn)行消毒、凈化處理；執(zhí)行這項工作時應(yīng)當(dāng)穿戴合適的防護(hù)服及呼吸防護(hù)用具。實驗室負(fù)責(zé)人員除立即采取對應(yīng)措施外，應(yīng)向上級部門報告，填寫意外情況登記與處理記錄表。4.5培養(yǎng)物等傳染性物質(zhì)的破碎被傳染性物質(zhì)物質(zhì)污染的小玻璃瓶及其他容器破碎時，用布或紙巾覆蓋，爾后將消毒劑傾倒其上，放置30分鐘。其后即可清除掉，玻璃碎片應(yīng)當(dāng)用鑷子清理。污染區(qū)域應(yīng)當(dāng)用消毒劑清洗。破碎物品清理時如果使用了簸箕，應(yīng)將其進(jìn)行高壓滅菌或用有效的消毒劑浸泡24小時。清理使用過的布、紙巾、抹布及拖把，放入污染廢棄物容器中。上述步驟均應(yīng)佩戴手套。4.6如果實驗室的紀(jì)錄表格、其他印刷品或書面材料遭到污染，在妥善轉(zhuǎn)抄后或烤后，應(yīng)當(dāng)將其棄入污染廢棄物容器。4.7試管破碎于密閉式安全離心杯中所有密閉式安全離心杯在生物安全過程中裝載和卸載。如果懷疑發(fā)生了破損，應(yīng)當(dāng)將其蓋子擰松；爾后，將整個離心杯高壓滅菌。4.8蓄意破壞堅固、厚重的門、牢靠的鎖具以及限制出入，都是合適的防范措施。發(fā)現(xiàn)蓄意破壞情況后報告實驗室負(fù)責(zé)人及生物安全員，視破壞種類按照上述方法進(jìn)行處理，并詳細(xì)填寫意外情況登記與處理記錄表。十三、實驗活動生物安全標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（一）艾滋病初篩檢測實驗操作規(guī)程1.目的保證艾滋病病毒抗體ELISA實驗的準(zhǔn)確性。2.適用范圍艾滋病病毒抗體ELISA實驗。3.具體要求3.1樣品采集樣品采集安試劑盒要求采集。采血時注意安全，用一次性注射器謹(jǐn)慎操作，防止發(fā)生刺傷和造成外界污染。血樣如即時用可存于普通冰箱，如要長期保存，分離血清置于-20℃及以下。同時做好記錄。3.2樣品運送樣品轉(zhuǎn)送，除特殊需要外，必須是血清或血漿，置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，或?qū)⑺芰显嚬苡镁凭珶舴馑?，防止樣品流出。試管上?biāo)明姓名、時間、編號，將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理，在所放試管周圍上下墊有軟性物質(zhì)，以免碰碎，容器外標(biāo)有HIV檢測專用字樣和生物危害標(biāo)志。路途較遠(yuǎn)或氣候炎熱時，容器應(yīng)置于4℃以下運送。這樣同時附送檢單。3.3樣品登記和處理3.3.1收到樣品后，及時填寫標(biāo)本登記記錄表，送樣人、收樣人簽字，如已進(jìn)行過初檢，登記初檢結(jié)果和實驗方法及所用試劑情況。3.3.2對從其他實驗室送來的樣品，檢查并注明送檢單與標(biāo)本記錄的符合、樣品管破損、溢漏等情況。如有溢漏應(yīng)立即將尚存的血樣移出，并對管壁和盛器消毒。檢查并記錄樣品的質(zhì)量有無嚴(yán)重溶血、細(xì)菌污染、血脂過多以及黃疸等情況。3.3.3對實驗室自采的樣品，最好將血液先放置1-2個小時，再用3000離心15分鐘，吸出上清液備用，如在幾天內(nèi)檢測可放在2-8℃冰箱中，如要貯存，置于-20℃冰箱。3.4實驗準(zhǔn)備3.4.1將試劑從冰箱中取出，按試劑盒要求時間恢復(fù)室溫。3.4.2檢查并記錄冰箱、溫箱溫度。3.4.3按照試劑盒要求準(zhǔn)備實驗原始記錄表，標(biāo)明空白、陰性對照、陽性對照、外部質(zhì)控血清以及檢測樣本的位置：登記日期和實驗起止時間，記錄環(huán)境條件及試劑盒廠家、批號、效期：整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細(xì)登記。3.4.4按照試劑盒的要求配置洗液及其他所需要的試劑。3.5加樣和稀釋根據(jù)樣品數(shù)量將合適數(shù)量的酶標(biāo)板條固定在板架上，為了不損壞洗扳機，每道上的酶標(biāo)板條必須保持完整{不足部分可用廢棄的微孔添充}，檢查加樣器加樣刻度是否與試劑盒要求的加樣量相符，按照原始記錄表表明的位置加入各種質(zhì)控品和檢測樣品，注意：空白只加標(biāo)本稀釋液。加樣量和稀釋度嚴(yán)格按照試劑盒說明書規(guī)定的操作，一般先加樣品稀釋液后再加入樣品。加樣要準(zhǔn)確，小心不要使吸頭碰著酶標(biāo)板空上是包被抗原。為保證加樣的準(zhǔn)確，最好使用多孔道加樣器，使用時注意防止吸頭間的交叉污染。3.6溫育貼好封板膜，按照試劑盒要求的溫度和時間進(jìn)行溫育，最好選擇濕育方法。3.7洗板開啟洗板機前，先檢查洗板機廢液瓶是否已排空，開啟后先用蒸餾水沖洗管道，再換上洗液瓶。按照試劑盒的要求，選擇、修改洗扳方式、洗滌次數(shù)和浸泡時間，根據(jù)所用酶標(biāo)板的條數(shù)確定洗板道數(shù)，根據(jù)酶標(biāo)板的位置調(diào)節(jié)洗頭的位置，然后開始洗板，洗板結(jié)束后用蒸餾水沖洗管道。3.8加酶結(jié)合物對于二步法ELISA實驗需加酶結(jié)合物，按試劑盒要求完成。3.9加底物洗好板后應(yīng)立即加底物，需加自配的底物應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。3.10終止反應(yīng)在規(guī)定的時間內(nèi)用試劑盒中的或根據(jù)要求自行配置的終止液終止反應(yīng)。3.11酶標(biāo)儀讀物按照試劑盒的要求選擇濾光片，確定空白孔位置，選擇合適達(dá)的打印報告格式，讀數(shù)并打印結(jié)果。3.12所用儀器在使用后及時填寫使用記錄。3.13結(jié)果判斷計算3.13.1根據(jù)試劑盒說明書要求的陰陽對照OD值范圍判斷實驗的準(zhǔn)確性，陰陽性對照OD值在范圍之內(nèi)，試驗方可成立，超出范圍，試驗失敗，整個實驗重做。3.13.2在指控圖上標(biāo)出外部指控血清的S/CO值，判斷實驗結(jié)果是否被接受。3.13.3以上兩個條件俊被接受后，根據(jù)試劑盒要求計算cutoff值。小于cutoff值的標(biāo)本為陰性，大于或等于cutoff值得標(biāo)本為陽性，在cutoff±10%的標(biāo)本為灰色帶反應(yīng)。陽性及灰色反應(yīng)區(qū)標(biāo)本，用原有的試劑盒另一種試劑重復(fù)試驗。3.14結(jié)果登記和報告將試驗結(jié)果登記在級路標(biāo)和標(biāo)本試劑表上，將OD值打印結(jié)果貼在原始記錄表上，檢查原始記錄表是否填寫完整，操作者，復(fù)核者簽字。陰性結(jié)果出具HIV抗體篩查報考，陰性結(jié)果填寫HIV抗體篩查陽性送檢單。3.15標(biāo)本留存轉(zhuǎn)送陰性標(biāo)本收集血清冷凍保存一年。并填寫陰性血清保存記錄表，陽性標(biāo)本收集血清封口包好，冷藏運送送確認(rèn)實驗室。4.支持性文件全國艾滋病監(jiān)測工作規(guī)范艾滋病實驗室安全操作及防護(hù)措施（二）、結(jié)核桿菌實驗室生物安全規(guī)程1.實驗室管理制度（1）實驗室入口處必須貼上生物危險標(biāo)志，注明危險因子，生物安全級別，試驗室負(fù)責(zé)人和相關(guān)負(fù)責(zé)人姓名和電話。（2）實驗室應(yīng)有明顯的區(qū)域劃分，清潔區(qū)，辦污染區(qū)和污染區(qū)。（3）無論進(jìn)入實驗室時間長短，必須填寫工作日志。要嚴(yán)格遵守實驗室的一切操作規(guī)程。（4）進(jìn)行結(jié)核菌操作時，需有兩名工作人員同時進(jìn)入實驗室，盡量避免單獨工作。（5）在對大批量的痰標(biāo)本和菌株進(jìn)行分離培養(yǎng)和藥敏試驗前，英語中心新主任和實驗室主任討論，必要時加強預(yù)防措施。（6）試驗室人員應(yīng)做結(jié)核菌素試驗，試驗結(jié)果為陰性時，應(yīng)接種卡介苗，并做好登記記錄。（7）外來進(jìn)修，參觀人員必須學(xué)習(xí)實驗室的一切規(guī)章制度和有關(guān)操作規(guī)程，經(jīng)試驗室主任批準(zhǔn)方可進(jìn)入實驗室。2.標(biāo)本采集人員安全要求（1）標(biāo)本采集人員的防護(hù)：痰標(biāo)本有病人自行留取，采集咽拭子等特殊標(biāo)本，采集人員應(yīng)穿防護(hù)服，戴一次性口罩，帽子，戴醫(yī)用手術(shù)手套。（2）采集標(biāo)本污染器材的處理：采集標(biāo)本的痰盒，試管等污染器材軍需高壓處理。3.標(biāo)本運送安全要求痰標(biāo)本需留置在特制的痰盒內(nèi)（直徑4cm，高2cm的光口蓋密閉