HPV基因診斷試劑盒

一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進展二、HPV的生物學研究三、宮頸癌的早期篩查四、宮頸病變的治療第一頁，共51頁。一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進展第二頁，共51頁。宮頸癌－－最常見的婦科惡性腫瘤據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計，每年大約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的5%，其中80%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年宮頸癌新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的28.8%，發(fā)病率僅次于乳腺癌位居第二。隨著篩查制度的建立，世界宮頸癌的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)大幅下降。我國由70年代的10.28/10萬下降到90年代的3.25/10萬，但在高發(fā)病區(qū)，死亡率仍高居不下。地區(qū)死亡率(/10萬）世界8.00中國3.25北京2.54上海3.8山西陽城36.00第三頁，共51頁?；疾∧挲g更趨于年輕化（發(fā)病年齡提前到45歲），發(fā)病史縮短。如吉林省在80年代統(tǒng)計宮頸癌患者中小于35歲的婦女占4.8％，而2000年已經(jīng)占到34.1％第四頁，共51頁。子宮頸癌的危險因素：行為危險因素：如性生活過早、多個性伴侶、多孕多產(chǎn)、社會經(jīng)濟地位低下、營養(yǎng)不良及性混亂等；生物學因素：如細菌、病毒和衣原體等各種微生物的感染。目前僅有少量研究表明宮頸癌可能存在著家族聚集現(xiàn)象。第五頁，共51頁。宮頸癌的生物學病因研究進展：

*早在十九世紀四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結(jié)婚與否與宮頸癌的發(fā)生可能有關；

*60－70年代，人們的主要研究對象是HSV,HCMV等病原體；

*1974年zurHausen首次提出HPV感染與宮頸腫瘤有密切關系；

*1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）顆粒；

*1995年IARC專題討論會：高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要病因。

---99.7％的宮頸癌患者都能發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染。

第六頁，共51頁。二、HPV的生物學研究第七頁，共51頁。人乳頭瘤病毒（HumanPapillomaviruses,HPV）雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb；病毒顆粒直徑為50～55nm；依靠宿主細胞進行復制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。

HPV病毒電鏡圖第八頁，共51頁。

型別：已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型（如果DNA序列同源性小于90％，則定為新的亞型）。其中超過35種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關。

1）低危型：宮頸上皮內(nèi)低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性?。℉PV6、11、42）；

2）高危型：宮頸上皮內(nèi)高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關（HPV16、18、31、33、35、39

、45、51、52、53、56、58、59、66及68）；

分布：有些亞型和地區(qū)、宮頸癌的病理類型有關。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。

在宮頸鱗狀上皮細胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。型別與分布第九頁，共51頁。表HPV型別與宮頸病變常見HPV型別宮頸病變6，11濕疣，CINI16CIN,18CIN30，40，58，69CIN31，33，35，39CIN45，51，52，56CINI42，43，44CINI53正常宮頸上皮54尖銳濕疣55鮑溫樣丘疹病59VIN61，62，64，67VaIN66鱗癌70外陰乳頭狀瘤第十頁，共51頁。HPV在歐洲的常見分型和感染率最常見的低危型（HPV6、11）最常見的高危型（HPV16、18、31、33、45、58）HPV16HPV18HPV45HPV31HPV33Other宮頸癌患者中高危型HPV感染率(歐州2000年資料)第十一頁，共51頁。深圳不同HPV亞型的檢出頻率統(tǒng)計（WHO項目）

注：1.本表統(tǒng)計樣本數(shù)為1153例，其中陽性樣本數(shù)為119例；由于檢測樣本中存在復合感染，故亞型的檢出頻率＝（該亞型的檢出次數(shù)/所有亞型的檢出次數(shù)）×100％，所有亞型檢出次數(shù)為226。2.本表統(tǒng)計數(shù)據(jù)由WHO深圳項目提供，HPV分型基因檢測試劑由亞能生物技術（深圳）有限公司提供。第十二頁，共51頁。浙江12000例HPV檢測初步結(jié)果分型情況：16型占26%左右，其他依次為58、33、52、45、18。與其他地區(qū)的統(tǒng)計有明顯差異。高危人群陽性率在30%左右，普通人群在11%左右。溫州地區(qū)麗水地區(qū)陽性率明顯高于省內(nèi)其他地區(qū)。進一步的研究正在進行中。第十三頁，共51頁。HPV基因結(jié)構(gòu)按功能可分為早期區(qū)(E區(qū))、晚期區(qū)(L區(qū))和非編碼區(qū)（LCR）三個區(qū)域。E區(qū)分為E1～E7開放閱讀框架，主要編碼與病毒復制、轉(zhuǎn)錄、調(diào)控和細胞轉(zhuǎn)化有關的蛋白（HPV無E3）。L區(qū)分L1和L2，分別編碼主要衣殼蛋白和次要衣殼蛋白。LCR是E區(qū)與L區(qū)間-6.4～1.0Kb的DNA片段，可負責轉(zhuǎn)錄和復制的調(diào)控第十四頁，共51頁。HPV的致癌機理HPV以游離態(tài)感染上皮細胞后，可以持續(xù)存在于染色體外，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如尖銳濕疣或輕度不典型增生等。而癌變則與病毒DNA整合入宿主染色體密切相關。高危型HPVDNA鏈通常在E1或E2的開放讀碼框內(nèi)斷裂，使HPVDNA整合入染色體脆弱區(qū)。E6和E7具有促進和維持整合狀態(tài)的功能。HPVE6蛋白間接抑制p53活性，阻礙細胞對DNA損傷的反應。（負向調(diào)節(jié)細胞的生長和分化）HPVE7蛋白與pRb結(jié)合后使其功能失活，改變細胞周期的正常調(diào)控。第十五頁，共51頁。國內(nèi)對不同亞型感染致病性研究近況北京大學第一臨床醫(yī)院趙健等對1715例患者研究表明：在高危型中，致癌性最強的是16型，其次是33和31型。（十五攻關資助項目）。在北京中日友好醫(yī)院進行的591例研究中，發(fā)現(xiàn)多重感染患者發(fā)生宮頸癌的危險性明顯高于單一感染者，對放療敏感性差，無進展生存期和帶瘤生存期比單一感染者明顯縮短。第十六頁，共51頁。HPV感染途徑及危險因素感染途徑：主要為性傳播和直接皮膚接觸特別案例：母親分娩過程中傳播至嬰兒的口腔危險因素：1、年齡因素：30歲以后HPV感染率下降，但危險性提高。2、性行為的影響：初次性交年齡越小，性伴侶數(shù)量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚無一致意見；4、免疫抑制狀態(tài)使HPV感染的危險性增加：如HIV感染后、腎移植等。第十七頁，共51頁。三、宮頸癌的早期篩查第十八頁，共51頁。未見上皮內(nèi)病變－－鱗狀上皮細胞異常－－腺上皮細胞異常ASC（AtypicalSquamousCells)：非典型鱗狀上皮細胞ASC-US（ASCofUndeterminedSignification）:意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞ASC-H（ASCcannotexcludeHSIL）：意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變L-SIL（Low－gradeSquamousIntraepithelialLesion）：低度鱗狀上皮內(nèi)病變－－－HPV感染、CINIH-SIL（High－gradeSIL）：高度鱗狀上皮內(nèi)病變－－－與CINII、CINIII或原位癌含義一致SCC（SquamousCellCarcinoma）：鱗狀細胞癌AGC（AtypicalGlandularCells)：非典型腺上皮細胞AIS（AdenocarcinomaInSitu)：腺原位癌ACA（Adenocarcinoma）：腺癌組織學檢查的分類：CIN（CervicalIntraepithelialNeoplasm)：宮頸上皮內(nèi)瘤變CINI：輕度不典型增生CINII：中度不典型增生CINIII：重度不典型增生、原位癌2001年版TBS（TheBethesdaSystem)報告分類中常見的細胞學診斷宮頸癌前病變的幾個術語解釋：第十九頁，共51頁。正常婦女HPV暴露主要是性傳播感染幾率：>40％HPV年齡<30歲一過性，80％平均8個月年齡>30歲平均8~24個月CINI（組織學）CINII/III（組織學）無細胞學改變/HPV消除子宮頸浸潤癌機體免疫機制輔助致癌因素圖HPV感染與宮頸病變的自然過程潛伏感染期亞臨床感染期臨床癥狀期HPV相關腫瘤期8－10年第二十頁，共51頁。

臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要8-10年。因此，必須采取適當?shù)念A防和篩查措施，才能夠阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終消滅宮頸癌。在現(xiàn)代醫(yī)學技術的支持下，婦科醫(yī)生應該大有作為。篩查是早診早治關鍵第二十一頁，共51頁。篩查間隔時間（年）1233～55～10>10陽性病變風險系數(shù)122.5349備注：1～3年篩查間隔比較安全，隨著篩查間隔的增加，風險大幅度增加。表：篩查間隔時間與陽性病變風險系數(shù)表第二十二頁，共51頁。表：不同的篩查頻率，可以降低的宮頸癌的累積發(fā)病率

篩查頻率累積發(fā)病率的降低（％）每年篩查一次90-93每兩年篩查一次86-91每三年篩查一次75-88一生篩查5次61-74一生篩查3次35-55一生篩查2次29-42一生篩查一次17-32摘自：GoldieSJ,etal.2001.13；篩查策略所應用方法包括：1-VIA檢查，2-HPV檢測，3-巴氏涂片。第二十三頁，共51頁。篩查對象：三年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女。起始年齡：經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)：25～30歲，經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)：35～40歲，高危人群起始年齡應相應提前。終止年齡：65歲以上危險性極低。篩查間隔：每年一次，若連續(xù)兩次HPV和細胞學篩查均為正常，可延長篩查間隔時間至5～8年。發(fā)達國家：16—68歲，HPV+TCT，間隔3—5年。中國癌癥研究基金會（CCRF）宮頸癌篩查及早診早治指南第二十四頁，共51頁。中國癌癥研究基金會（CCRF）

宮頸癌篩查及早診早治指南篩查方案：基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗（碘液試驗）（農(nóng)村普查）一般方案：HPV+papsmear檢測（二級及以上醫(yī)院）最佳方案：HPV+TCT檢測（發(fā)達地區(qū)）檢查后隨訪對象：細胞學低度病變、CINI以上者、“特殊職業(yè)”婦女人群、年齡>30歲以上的高危HPV感染者，每年定期隨訪檢查。注意事項：1、月經(jīng)來潮后10～18天為最佳檢查時間2、檢查前48h內(nèi)不要做陰道沖洗，不用使用陰道內(nèi)用藥物3、檢查前48h內(nèi)不要行性生活第二十五頁，共51頁。第二十六頁，共51頁。宮頸癌的常規(guī)臨床檢測方法臨床檢查：如肉眼觀察、陰道鏡等

操作簡便，但準確率和特異性有待提高（50-70％）細胞學檢測：觀察宮頸上皮細胞的變異，常見方法有：巴氏涂片、LCT、TCT等（70%以上）

1）長期宮頸糜爛可導致宮頸上皮細胞形態(tài)變異，但非HPV引起的細胞形態(tài)異常與宮頸癌病變沒有直接聯(lián)系。2）在感染早期，細胞往往不會出現(xiàn)形態(tài)變化，但此時HPV對細胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的損傷可能已經(jīng)產(chǎn)生。

病毒學檢測：HPVDNA檢測（PCR方法），常見方法有：基因芯片分型檢測、HC-2、熒光PCR等特異性強、靈敏度高，操作簡便快捷(98%)第二十七頁，共51頁。宮頸分泌物HPV結(jié)果注：亞能和凱普均以13種高危型別統(tǒng)計若以23種型別計算，亞能HPV陽性129例，陽性率為11.3％。共剔除18例13種型別以外的型別第二十八頁，共51頁。HPV基因分型快速診斷試劑應用膜雜交技術建立的敏感、特異、簡便的檢測方法，可同時對23種HPV亞型(18種高危型及5種低危型)進行檢測。第二十九頁，共51頁。

基因芯片（GeneChip）就是將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標記的樣本進行雜交，通過檢測雜交信號的強度和分布來進行分析。高度的靈敏性和準確性快速簡便同時檢測多種疾病第三十頁，共51頁。HPV基因分型快速診斷試劑操作流程采集樣本提取DNAPCR擴增雜交顯色第三十一頁，共51頁。第三十二頁，共51頁。結(jié)果判斷檢測結(jié)果：HPV16、HPV43檢測結(jié)果：HPV33、HPV35第三十三頁，共51頁。（一）宮頸病變的篩查1、HPV檢測的最大優(yōu)勢之一在于發(fā)現(xiàn)高危型HPV陽性而細胞學涂片正常的婦女，因為這一人群中10％會在四年內(nèi)發(fā)展成CINⅢ。2、篩查并濃縮高風險人群，便于進行有效監(jiān)控，早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌。3、HPV檢測的陰性預測值為99％，可將篩查間隔延長至3年一次，大大地降低了檢查成本。敏感性：88－100％特異性：98％陰性預測值：幾乎100％HPV檢測的臨床意義第三十四頁，共51頁。圖：德、法、英三個國家研究數(shù)據(jù)總概HPV（＋）是宮頸病變的重要依據(jù)，持續(xù)的HPV感染是CINII/CINIII的重要條件，相對于TCT檢測，HPV檢測敏感度更高，更有臨床意義，在歐洲已經(jīng)作為首選篩查方法。第三十五頁，共51頁。GC-HPV與TCT的差異GC-HPVTCT兩種檢測的差異病原學檢測細胞學檢測兩種檢測對宮頸癌篩查的提示全程提示即時提示臨床意義提示有患癌的可能，確定已經(jīng)發(fā)生細胞形態(tài)改變者的病因判斷是否進入亞臨床期或臨床期第三十六頁，共51頁。（二）ASCUS和低度病變的分流1、HPV檢測通過排除可疑的或低度病變，從而提高診斷的可信度，降低漏診的風險。

2、把具有潛在宮頸癌風險的婦女從低風險的婦女中區(qū)分出來，指導陰道鏡的合理使用。3、比起復查細胞學，HPV檢測提供了更快捷的結(jié)果，從而很有信心地把HPV陰性的婦女重新放回常規(guī)篩查人群中。

第三十七頁，共51頁。病例數(shù)：3000例，圖顯示HPV的相對風險隨CIN的級別上升而明顯增加第三十八頁，共51頁。（三）HPV檢查提供了CIN治療后隨診手段1、可預測病變惡化或術后復發(fā)的風險，有效指導術后追蹤。

2、術后6個月、12個月檢測HPV陰性，提示病灶切除干凈，可最大限度減少病人的焦慮。3、若術后HPV檢測陽性，提示有殘留病灶及有復發(fā)的可能。

CIN患者：成功治療率達90～95％，復發(fā)率10％；但比正常人發(fā)生浸潤癌的幾率仍高4－5倍；危險期：8年左右；

第三十九頁，共51頁。病變進展（惡化）持續(xù)（穩(wěn)定）消退（逆轉(zhuǎn)）級別單純HPVCINICINIICINIII風險率(%)5153045持續(xù)率(%)15373556消退率(%)80574332CIN級別發(fā)展為CC的風險評估說明：CIN級別越高，其消退和逆轉(zhuǎn)的機會越小。各型CINⅢ和宮頸癌中高危型HPV感染率達98%以第四十頁，共51頁。四、宮頸病變的治療“治病”即“治毒”----郎景和教授語錄第四十一頁，共51頁。一、物理治療：電凝、冷凍、微波、激光等。二、手術治療：LEEP、子宮頸錐切術等。三、藥物治療：抗生素、干擾素、HPV疫苗（預防型和治療型）第四十二頁，共5