版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
實驗5果蠅唾腺染色體的觀察一實驗?zāi)康?.練習(xí)取出果蠅幼蟲唾腺的技術(shù)和制作唾腺染色體標(biāo)本的方法。2.了解體細(xì)胞染色體聯(lián)會現(xiàn)象,觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征,并根據(jù)唾腺染色體上橫紋的形態(tài)和排列,識別不同的染色體。3.識別染色體結(jié)構(gòu)變異的細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)。
二實驗原理本世紀(jì)初,D.Kostoff用壓片法首先在果蠅(Drosophilamelanogaster)幼蟲的唾液腺細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)了特別巨大的染色體——唾液腺染色體(salivaryglandchromosomes)。由于它具有許多重要特點而成為細(xì)胞遺傳學(xué)、發(fā)生遺傳學(xué)、進(jìn)化遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)研究中不可多得的好材料。果蠅是雙翅目昆蟲,幼蟲期具有很大的唾腺細(xì)胞,其中的染色體是巨大的唾液腺染色體。唾液腺染色體不斷地進(jìn)行自我復(fù)制而不分開,經(jīng)過許多次的復(fù)制形成約1000~4000拷貝的染色體絲,合起來達(dá)5mm寬,400mm長,比普通中期相染色體大得多(約100~150倍),所以又稱為多線染色體。唾液腺染色體具有許多重要特征,為遺傳學(xué)研究的許多方面,如染色體結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、基因差別表達(dá)等提供了獨特的研究材料。
果蠅種間或種內(nèi)不同品系與近緣種之間的遺傳差異常表現(xiàn)為唾液腺染色體不聯(lián)會,形成泡(puff)、縊痕(constrictions)、間帶區(qū)(interband)的伸縮性以及頂體(telomere)的形態(tài)等多方面的變異,特別重要的是可觀察是否產(chǎn)生了倒位、染色體的斷裂、融合或重排,據(jù)此研究其基因序列的差異。因此,無論從細(xì)胞遺傳學(xué)的角度研究基因與突變性狀之間的關(guān)系,還是從進(jìn)化遺傳學(xué)方面研究染色體的系統(tǒng)發(fā)育,探討近緣種間的遺傳差異和生殖隔離機(jī)制等,唾液腺染色體的分析研究都是十分重要的。果蠅唾液腺染色體已廣泛用于種內(nèi)系統(tǒng)發(fā)育和種間親緣關(guān)系的研究中。
普通果蠅(2n=2x=8)唾腺染色體的特點表現(xiàn)在:各染色體著絲點附近異染色質(zhì)區(qū)相互結(jié)合形成染色很深的染色中心,第Ⅱ、Ⅲ對染色體呈V形(中著絲粒),各有兩臂,X染色體呈棒狀,第Ⅳ對染色體呈粒狀,觀察時可見五條臂由染色中心向外蜿蜒伸展。三實驗材料果蠅三齡幼蟲活體。四實驗器具、藥品試劑顯微鏡,生化培養(yǎng)箱;果蠅培養(yǎng)瓶,鑷子,解剖針,載玻片,蓋玻片,吸水紙等。
0.7%氯化鈉(NaCl),1mol/LHCl;改良苯酚品紅染色液;果蠅培養(yǎng)基等。五實驗方法1.培養(yǎng)果蠅三齡幼蟲將果蠅放在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中,15℃~18℃下飼養(yǎng),幼蟲要生長肥大,才能獲得較大的唾腺。培養(yǎng)要求:①飼料松軟,含水量較高,營養(yǎng)豐富,發(fā)酵良好(建議配方:玉米粉10g,紅糖13g,瓊脂1g,酵母粉2g,丙酸3~4滴,加蒸餾水100~120ml)。②追加酵母液。在一齡幼蟲出現(xiàn)后,將成蟲移入另一培養(yǎng)瓶中,在飼料表面滴加低濃度的酵母液(2%~4.5%),每天滴加1~2滴;2齡~3齡幼蟲時期適當(dāng)增加酵母液的濃度(約10%左右);滴加的量以覆蓋在飼料表面薄薄的一層為宜。③控制幼蟲的密度。一般情況下,半磅牛奶瓶中10對成蟲交配后在12h左右必須將成蟲轉(zhuǎn)移,一般要求每cm2培養(yǎng)基表面20~40只幼蟲左右。④低溫培養(yǎng):稍低的溫度有利于幼蟲的充分生長發(fā)育,一般15℃~18℃較為合適。2.取唾腺
挑選生長肥大的三齡幼蟲放入表面皿中用0.7%的生理鹽水盡量洗去幼蟲體表所沾附的培養(yǎng)基,然后將幼蟲置載玻片上,滴1~2滴0.7%生理鹽水,找到具有口器的頭部(有一小黑點),一手用解剖針刺入(或壓住)頭部,將蟲固定,一手用攝子夾緊幼蟲下半部(尾端1/3處),輕輕向兩端拉開,唾腺隨頭部拉出。唾腺是一對透明的棒狀腺體,外有白色的脂肪組織(不透明)。去除幼蟲其它組織部分,并把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈。唾液腺解剖針解剖針
在低倍顯微鏡下,調(diào)節(jié)好光亮度觀察,可見一對半透明、隱約可見細(xì)胞界限的囊狀物——唾腺。移去蟲體其余部份,用解剖針剔除附在唾腺一側(cè)深色泡沫狀的脂肪體,以保證制片質(zhì)量。若載片上雜質(zhì)較多,可用生理鹽水適當(dāng)沖洗,用吸水紙吸去多余的生理鹽水。注意:在整個剝離過程中,不能讓載片上的生理鹽水干涸,否則唾腺收縮而不易剝離;沖洗殘渣和吸去多余水液時,要避免唾腺被吸水紙吸走。3.解離
將剝好的唾腺移到載片中央,加一滴1mol/LHCl于腺體上,解離2~3min,使組織疏松,以便壓片時細(xì)胞分散,染色體展開。4.染色
用吸水紙吸去HCl,加1滴蒸餾水輕輕沖洗后,小心吸干。加1~2滴改良苯酚品紅或其它染液,染色10~15min。5.壓片
染色完成后,蓋上干凈的蓋片,并覆一層濾紙。將片子放在實驗臺上,用大拇指均勻用力壓片。(注意不要使蓋片移動。)
注意:壓片時適當(dāng)多加些染液有利于染色體臂的伸展,但要防止染液過多而造成材料隨染液而溢出。6.鏡檢在低倍鏡選擇唾腺細(xì)胞多且染色體分散好的視野,換高倍鏡仔細(xì)觀察唾腺染色體的染色中心、染色體臂和橫紋以及可能有的疏松區(qū)、裴氏環(huán)、或因易位而形成的十字形圖象和因倒位而形成的倒位環(huán)等各種結(jié)構(gòu)。六注意事項1.一定加生理鹽水,否則唾腺易干。2.將脂肪組織清除干凈。3.水不可太多,否則幼蟲會漂浮而且活躍。4.染色時間不可過長,否則背景也著色。5.壓片時要揉,用力要均勻。6.染色完以后,將舊的染色液吸去,加新的染色液,再壓片。7.吸水時勿將唾腺一起吸走。七作業(yè)1.制效果較好的唾腺染色體臨時片1張。2.繪出你所觀察到的果蠅唾腺染色體略圖,并仔細(xì)描繪各染色體臂末端5條橫紋。附錄資料:不需要的可以自行刪除2023/3/25
低氧血癥
一、定義
低氧血癥是指血液中含氧不足,動脈血氧分壓(PaO2)低于同齡人的正常下限。主要表現(xiàn)為血氧分壓與血氧飽和度下降。成人正常動脈血氧分壓(PaO2):80~100㎜Hg。各種原因如中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患,支氣管、肺病變等引起通氣和(或)換氣功能障礙都可導(dǎo)致缺氧的發(fā)生。因低氧血癥程度、發(fā)生的速度和持續(xù)時間不同,對機(jī)體影響亦不同。低氧血癥是呼吸科常見危重癥之一,也是呼吸衰竭的重要臨床表現(xiàn)之一。2、肺泡通氣不足(限制性及阻塞性)成人靜息狀態(tài)下有效肺泡通氣量4L/min;
限制性通氣不足主要見于呼吸肌活動障礙、胸廓順應(yīng)性降低、大量胸腔積液、積氣時肺擴(kuò)張受限;阻塞性通氣不足主要見于氣管痙攣、管壁水腫或纖維化、異物、滲出物等。3、彌散功能障礙:
①肺泡膜面積減少(肺實變、肺不張、肺葉切除);②肺泡膜厚度增加(肺泡上皮、毛細(xì)血管內(nèi)皮、基底膜;肺水腫、肺纖維化、肺泡毛細(xì)血管擴(kuò)張等);③心輸出量增加、肺血流增快、血液與肺泡接觸時間過于縮短,導(dǎo)致低氧血癥。44、肺泡通氣/血流比例失調(diào)
、肺泡通氣/血流比例失調(diào)
V/Q=0.8
部分肺泡通氣不足(肺動靜脈樣分流、功能性分流)
部分肺泡血流不足(死腔樣通氣)
5、肺內(nèi)動靜脈解剖分流增加
提高氧濃度不能提高分流靜脈血的氧分壓。6、氧耗量增加:
發(fā)熱、寒戰(zhàn)、呼吸困難、抽搐等,伴有通氣功能障礙。三、病理生理改變
低氧血癥對機(jī)體的影響包括短期效應(yīng)及長期效應(yīng)。低氧血癥首先興奮呼吸中樞,增加通氣量以提高PaO2;同時通過增加心率和搏出量使心輸出量增加。繼之,促紅細(xì)胞生成素分泌增多,紅細(xì)胞比容增加,從而增加血氧含量。以上效應(yīng)的結(jié)果是增加機(jī)體的供氧量。PaO2降低使肺血管收縮,短期內(nèi)可改善肺V/Q比值,增加氧輸送,但其長期結(jié)果是使肺動脈壓升高、心肌做功增加,導(dǎo)致肺源性心臟病的發(fā)生。低氧血癥可使呼吸氧耗增加,導(dǎo)致慢性營養(yǎng)不良。四、分級
低氧血癥是指動脈血氧分壓(PaO2)低于正常值下限,或低于預(yù)計值10mmHg。正常人PaO2隨年齡增長而逐漸降低。計算公式:
PaO2=(100-0.3×年齡)±5mmHg。輕度:PaO2?50mmHg,SaO2?80%,常無紫紺。中度:PaO230~50mmHg,SaO260%~80%,常有紫紺。重度:PaO2?30mmHg,SaO2?60%,紫紺明顯。紫紺出現(xiàn)與否與低氧血癥并不完全一致。一般來說,紫紺出現(xiàn)意味著中等程度以上的低氧血癥,但除外:嚴(yán)重貧血、氰化物或一氧化碳中毒、肺心病等。低氧血癥臨床上常根據(jù)PaO2(mmHg)和SaO2來劃分低氧血癥的嚴(yán)重程度。五、臨床表現(xiàn)
.正常組織器官氧合的必要條件:1、適當(dāng)?shù)腜aO2以維持一定的動脈血氧飽和度2.血液中輸送氧的血紅蛋白的質(zhì)和量3.適當(dāng)?shù)男妮敵隽?.組織器官周圍血管及微循環(huán)情況5.氧解離曲線對各系統(tǒng)的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng):PaO2降至60mmHg,出現(xiàn)注意力不集中、智力和視力輕度減退;降至40-50mmHg,會引起頭痛、定向與記憶力障礙,精神錯亂嗜睡;低于30mmHg,神志喪失乃至昏迷;低于20mmHg,只需數(shù)分鐘即可造成神經(jīng)細(xì)胞不可逆性損傷。循環(huán)系統(tǒng):PaO2降低、PaCO2升高,反射性心率加快、心肌收縮力增強(qiáng),嚴(yán)重時可直接抑制心血管中樞,造成心臟活動受抑和血管擴(kuò)張、血壓下降和心律失常等嚴(yán)重后果。呼吸系統(tǒng):PaO2<60mmHg,作用于頸動脈體和主動脈體的化學(xué)感受器可反射性興奮呼吸中樞、增強(qiáng)呼吸運動、甚至呼吸窘迫;PaO2<30mmHg,低氧血癥對呼吸中樞的抑制作用強(qiáng)于興奮作用。腎臟:常合并腎功能不全,如及時治療,腎功能可恢復(fù)。消化系統(tǒng):消化不良、胃黏膜糜爛、壞死、潰瘍、出血、肝臟轉(zhuǎn)氨酶升高。酸堿平衡和電解質(zhì):乳酸增多、代謝性酸中毒、高鉀血癥等。六、診斷和鑒別診斷
目前仍以動脈血氣分析為主肺功能檢測及胸部影像學(xué)檢查鑒別診斷低氧血癥、缺氧和氧供不足,這三個概念很多人混為一談,明確這些概念對于我們的臨床工作大有裨益。低氧血癥是指循環(huán)系統(tǒng)中的氧分壓低于正常,定義為PaO2低于60mmHg,PaO2是判斷有無低氧血癥的唯一指標(biāo)。
缺氧是指因氧供減少、耗氧增加或利用氧障礙引起細(xì)胞發(fā)生代謝功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)異常變化的病理過程。缺氧的診斷卻比較困難。缺氧時線粒體不能進(jìn)行有氧氧化,而進(jìn)行無氧酵解。由于無氧酵解產(chǎn)生大量乳酸,因此血液中乳酸的含量是判斷有無缺氧的重要指標(biāo),血乳酸濃度超過1.5mmol/L即為缺氧。但是,不是所有的缺氧都存在血液中乳酸濃度升高,如在低血容量休克早期組織存在缺氧,但由于血管收縮,組織中產(chǎn)生的乳酸聚集在局部組織中而未進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng),血液中的乳酸可不升高;同樣,血液中乳酸含量升高并不都存在缺氧,如肝硬化的患者輸注大量含乳酸的液體可導(dǎo)致血液中乳酸含量升高。因此,判斷有無缺氧首先應(yīng)明確有無導(dǎo)致缺氧的病因存在,測定血液中乳酸含量只是輔助診斷措施。氧供(Oxygendelivery,DO2)又稱為總體氧供(globaloxygendelivery),是指單位時間內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)向全身組織輸送氧的總量。氧供(DO2)由下面公式計算:DO2=CO×CaO2其中CO為心排出量,CaO2為動脈血氧含量。從上面的公式可以看出,心排出量和動脈氧含量不足都可導(dǎo)致氧供不足。心排出量受每搏量和心率的影響。氧含量受血紅蛋白含量和氧飽和度的影響。低氧血癥常出現(xiàn)在吸入氣中氧含量過低、肺泡氣體不足、彌散功能障礙和循環(huán)功能障礙。缺氧則要根據(jù)上面的四種類型進(jìn)行分析。氧供不足如果發(fā)生在心排出量和動脈氧含量正常的情況下,常見的原因是病理性氧供依賴和生理性氧供依賴增加,麻醉中的處理的措施無外乎降低氧耗。七、治療(一)保持呼吸道通暢:
1、清除氣道內(nèi)分泌物;
2、昏迷病人可采取仰臥位、頭后仰、托起下頜;
3、如以上方法不能奏效,建立人工氣道。(二)氧療氧療的目的在于提高動脈血氧分壓、氧飽和度及氧含量以糾正低氧血癥,確保對組織的氧供應(yīng),達(dá)到緩解組織缺氧的目的。保證PaO2迅速提高到60mmHg或指脈氧(SpO2)達(dá)90%以上。單純低氧血癥可給予較高濃度(>35%)給氧,迅速緩解低氧血癥而不會引起二氧化碳潴留。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025至2030年中國純正高原螺旋藻數(shù)據(jù)監(jiān)測研究報告
- 2025年中國美味雪菜市場調(diào)查研究報告
- 2025年度體育賽事運營管理場規(guī)則與格式規(guī)范3篇
- 二零二四年度一致行動人文化旅游產(chǎn)業(yè)合作協(xié)議合同3篇
- 2025年水電安裝工程設(shè)備采購與安裝合同6篇
- 2025賓館與旅游公司聯(lián)合運營客房租賃合同范本2篇
- 2024物流企業(yè)稅收優(yōu)惠適用合同
- 2025年度充電樁充電樁項目融資與投資合同3篇
- 2025廠房買賣合同模板:工業(yè)地產(chǎn)投資合作框架3篇
- 2025年度龍門吊拆除設(shè)備再利用及資源化利用合同范本4篇
- 公司SWOT分析表模板
- 小學(xué)預(yù)防流行性感冒應(yīng)急預(yù)案
- 肺癌術(shù)后出血的觀察及護(hù)理
- 聲紋識別簡介
- 生物醫(yī)藥大數(shù)據(jù)分析平臺建設(shè)-第1篇
- 基于Android的天氣預(yù)報系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)
- 沖鋒舟駕駛培訓(xùn)課件
- 美術(shù)家協(xié)會會員申請表
- 聚合收款服務(wù)流程
- 中石化浙江石油分公司中石化溫州靈昆油庫及配套工程項目環(huán)境影響報告書
- 搞笑朗誦我愛上班臺詞
評論
0/150
提交評論