HLAB高分辨基因分型的臨床演示文稿

HLAB高分辨基因分型的臨床演示文稿當(dāng)前1頁，總共46頁。優(yōu)選HLAB高分辨基因分型的臨床ppt當(dāng)前2頁，總共46頁。

HLA-B27分子及其等位基因1

與HLA-B27相關(guān)的疾病2

HLA-B27檢測方法3

本公司試劑盒簡介4當(dāng)前3頁，總共46頁。

1.HLA-B27抗原分子及其等位基因當(dāng)前4頁，總共46頁。

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)及其特點(diǎn)HLA-B27抗原分子是由位于人類第六號染色體短臂上B*27等位基因編碼的糖蛋白,分子量為56×103U。由兩條多肽鏈組成，一條為α鏈或重鏈，分子量約為44×103U，包括胞外區(qū)，跨膜區(qū)，胞內(nèi)區(qū)三個(gè)結(jié)構(gòu)域，其中胞外區(qū)又分為α1，α2，

α3三個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)；另一條為β鏈或輕鏈即β2微球蛋白，分子量約12×103U，二者結(jié)合共同組成HLA-B27抗原分子。當(dāng)前5頁，總共46頁。

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)當(dāng)前6頁，總共46頁。

α1區(qū)與α2區(qū)的肽鏈折疊后共同構(gòu)成一個(gè)抗原結(jié)合凹槽，槽內(nèi)形成A,B,C,D,E,F共6個(gè)袋狀結(jié)構(gòu)，其中B袋在HLA-B27分子中是最保守的結(jié)構(gòu)。凹槽的作用是結(jié)合抗原肽，使抗原肽與HLA-B27分子牢固的結(jié)合。當(dāng)前7頁，總共46頁。HLA-B*27等位基因結(jié)構(gòu)及其特點(diǎn)2002年WHO正式命名的HLA—B*27等位基因達(dá)到了24個(gè)，其中只有15個(gè)有相對應(yīng)的抗原表達(dá)。到2009年11月WHO正式命名HLA—B*27等位基因達(dá)到59個(gè)(B*2701一B*2759)。HLA—B*27等位基因呈多態(tài)性，主要是因?yàn)閭€(gè)別的堿基突變造成的，編碼蛋白的差異主要集中在αl、α2結(jié)構(gòu)區(qū)內(nèi)。當(dāng)前8頁，總共46頁。

其中HLA-B*2701與HLA-B*2705編碼的蛋白在78-81范圍內(nèi)有2個(gè)氨基酸的不同；其中HLA-B*2702與HLA-B*2705編碼的蛋白在78-81范圍內(nèi)有3個(gè)氨基酸的不同；其中HLA-B*2703與HLA-B*2705編碼的蛋白僅有1個(gè)氨基酸的差別，即在59位前者為組氨酸（His），后者為酪氨酸（Tyr）；當(dāng)前9頁，總共46頁。

HLA-B*2705基因分布最廣，幾乎見于所有人種。甚至認(rèn)為其它等位基因都是由HLA-B*2705基因發(fā)生突變、移位形成的。HLA-B*2705編碼的蛋白最為顯著的特點(diǎn)就是在B袋上的45位發(fā)生氨基酸的突變，這一改變直接影響HLA-B27分子在細(xì)胞表面的表達(dá)，影響HLA-B27分子與抗原肽的結(jié)合，同時(shí)影響了HLA-B27分子對胞內(nèi)外抗原的遞呈。當(dāng)前10頁，總共46頁。

2.與HLA-B27相關(guān)的疾病當(dāng)前11頁，總共46頁。

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)白血病等疾病當(dāng)前12頁，總共46頁。強(qiáng)直性脊柱炎（AS）1973年Brewerton和schiosstein發(fā)現(xiàn)強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）與HLA-B27抗原有非常強(qiáng)的相關(guān),這是目前唯一有臨床價(jià)值的血型相關(guān)抗原,這在迄今已知的HLA與疾病的關(guān)聯(lián)中是最強(qiáng)和最典型的。當(dāng)前13頁，總共46頁。AS的抗原學(xué)檢測【HLA-B27與強(qiáng)直性脊柱炎的臨床分析】報(bào)道：HLA-B27抗原陽性率在AS患者高達(dá)96％以上，而正常群體中僅4%-7%,HLA-B27抗原攜帶者發(fā)生AS的相對危險(xiǎn)率高達(dá)70%。當(dāng)前14頁，總共46頁。與AS相關(guān)的B*27等位基因當(dāng)前15頁，總共46頁。AS的基因?qū)W檢測不同人群的AS患者涉及的B*27等位基因當(dāng)前16頁，總共46頁。

與AS相關(guān)的B*27等位基因當(dāng)前17頁，總共46頁。

不同人群AS患者中HLA-B*27等位基因頻率

不同人群AS患者的HLA-B*27等位基因頻率

摘自【HLA—B*27高分辨等位基因在1606例疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中的表達(dá)】當(dāng)前18頁，總共46頁。HLA-B27與AS致病機(jī)制的研究HLA-B27分子與非折疊蛋白理論假說HLA-B27分子游離重鏈與AS其它當(dāng)前19頁，總共46頁。HLA-B27分子非折疊蛋白理論假說

HLAI類分子是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成熟的，新合成的HLAIα進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔與鈣連蛋白結(jié)合，使I類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中維持部分折疊，繼而與新合成的β2-微球蛋白組裝成完整的I類分子，此時(shí)B27分子才能被認(rèn)為是成熟的，轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面。研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27折疊速度較其他HLA分子（非HLA-B27分子）慢。導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中出現(xiàn)大量的折疊不良或部分折疊的HLA-B27重鏈部分，通常情況下，非折疊的重鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)能夠被清除，但由于一些相關(guān)物質(zhì)的缺乏或無效，所致非折疊的重鏈堆積，形成了非折疊蛋白反應(yīng)。有資料報(bào)道，AS的發(fā)生可能與這些HLA-B27分子的未折疊有關(guān)。當(dāng)前20頁，總共46頁。HLA-B27分子游離重鏈與ASHLA-B27分子的主要功能是：識別和處理抗原肽，然后在遞呈給T淋巴細(xì)胞。HLA-B27分子具有特殊的生物學(xué)效應(yīng)，它在體外具有形成重鏈二聚體的能力，主要是通過B27分子第67位氨基酸的殘基半氨酸的二硫鍵結(jié)合形成穩(wěn)定的二聚體。通過認(rèn)識HLA-B27分子結(jié)構(gòu)的特異性，重要的是深入研究游離重鏈的表達(dá)是否應(yīng)該認(rèn)為是導(dǎo)致AS的發(fā)病原因之一。當(dāng)HLA-B27分子適當(dāng)?shù)?、正確的組裝時(shí)，其遞呈的抗原肽通常被CD8CTL識別；但當(dāng)AS發(fā)生時(shí)，限制性的CIMTh細(xì)胞卻能識別非折疊、空載或缺失的B27分子。在這種情況下，就是HLAII類分子遞呈B27重鏈，降解后形成的多肽被CD4Th細(xì)胞識別后導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥。此研究目前還存在爭議。當(dāng)前21頁，總共46頁。其它HLA-B27可提高致關(guān)節(jié)炎的細(xì)菌在胞內(nèi)的存活率，從而加劇關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重度。B27改變信號轉(zhuǎn)導(dǎo)學(xué)說，即HLA-B27通過修飾炎癥因子基因相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程而致關(guān)節(jié)炎。HLA-B39,HLA-B60可能對AS的誘發(fā)起到一定的作用。當(dāng)前22頁，總共46頁。幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（JRA）幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病中的一個(gè)特殊類型，而HLA-B27抗原陽性的幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎又是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病中的一個(gè)亞型。幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是兒童時(shí)期較常見的結(jié)締組織病，國外的報(bào)道發(fā)現(xiàn)，較多的幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的HLA-B27抗原呈現(xiàn)陽性，且沒有男女性別差異。當(dāng)前23頁，總共46頁。

【differentialdiagnosisjuvenileankylosingspondylitisandjuvebilerheumatoidarthritisbysubtypesofHLA-B27alleles】報(bào)道：和該疾病相關(guān)的HLA-B*27的等位基因涉及B*2705,B*2704,B*2707,B*2702基因。在HLA-B27抗原陽性的JRA患者中，B*2705基因占60.7%，B*2704基因占28.57%，B*2702基因占3.57%，B*2707基因占7.14%。當(dāng)前24頁，總共46頁。HLA-B27與JRA致病機(jī)制的研究以各種感染性微生物作為外來抗原（HLA-B27分子與其結(jié)構(gòu)有相似性），激活免疫細(xì)胞，通過損傷或分泌細(xì)胞因子觸發(fā)異常的免疫反應(yīng)，引起自身組織的損害和變性。特別是細(xì)菌、病毒的特殊成分作為超抗原，其結(jié)構(gòu)與人類MHC抗原有同源性，不需抗原呈遞細(xì)胞加工處理，即可直接與T細(xì)胞受體直接結(jié)合（HLA-B27充當(dāng)細(xì)胞表面受體），激活T細(xì)胞。當(dāng)前25頁，總共46頁。急性前葡萄膜炎（AAU)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)是一類常見的自身免疫性致盲眼病，病因復(fù)雜、病程長、易反復(fù)發(fā)作,要確定其發(fā)病原因仍比較困難。自1973年BrewertonDA等人首次報(bào)道HLA—B27抗原與AAU之間的相關(guān)性以來，迄今為止，已發(fā)現(xiàn)2O多種眼病與HLA抗原具有相關(guān)性，其中最主要的是HLA—B27抗原與AAU之間的相關(guān)性。當(dāng)前26頁，總共46頁。

【AssociationbetweenHLA-B27antigenandacuteanterioruveitis】指出：國內(nèi)外報(bào)道有所不同，國內(nèi)報(bào)道37.0％-60％AAU患者HLA-B27抗原呈陽性，國外報(bào)道19％-88％呈陽性,而B*27等位基因與AAU的關(guān)系報(bào)道較少?！綼cuteanterioruveitisandHLA-B27】報(bào)道，在HLA-B27抗原陽性的AAU患者中,HLA-B*2704基因占44．7%,B*2705基因占56%。當(dāng)前27頁，總共46頁。HLA-B27與AAU致病機(jī)制的研究葡萄膜炎-受體假說：HLA—B27(+)的AAU可能由于HLA—B27分子擔(dān)當(dāng)細(xì)胞表面受體，其與微生物結(jié)合，由此引起葡萄膜炎。分子擬態(tài)假說:HLA—B27分子在結(jié)構(gòu)上與激發(fā)引起AAU的微生物肽序列相似,從而引發(fā)葡萄膜炎。當(dāng)前28頁，總共46頁。其它疾病【Geneticmarkerslinkedtorheumatoidarthritisarealsostronglyassociatedwitharticularmanifestationsinulcerativecolitispatients】【Flt3一ITDmutationscangenerateleukaemiaspecificneoepitopes：potentialroleforimmunotherapeuticapproaches】【AnkylosingspondylitisislinkedtoKlebsiella—theevidence】

等三篇文獻(xiàn)報(bào)道：HLA-B27抗原與白塞氏病也有一定的相關(guān)性。當(dāng)前29頁，總共46頁。

此外，HLA-B27抗原與白血病、心臟疾病、鼻咽癌、銀屑病、關(guān)節(jié)炎型腸炎也有相關(guān)性，但相關(guān)報(bào)道較少。當(dāng)前30頁，總共46頁。

名稱易感性等位基因強(qiáng)直性脊柱炎B*2701,B*2702,B*2704,B*2705,B*2710類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎B*2702,B*2704,B*2705,B*2713青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎B*2724脊椎關(guān)節(jié)炎 B*2709，B*2705關(guān)節(jié)炎型炎癥性腸病B*27XX白塞病B*2702銀屑病B*27XX白血病B*27XX銀屑病B*27XX鼻咽癌B*27XX賴姆疏螺旋體病B*27XXHIV-1感染B*27XX當(dāng)前31頁，總共46頁。

3.HLA-B27的檢測方法當(dāng)前32頁，總共46頁。

微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)（CDC）流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分子生物學(xué)技術(shù)（PCR）

當(dāng)前33頁，總共46頁。

三種檢測方法的對比

當(dāng)前34頁，總共46頁。

HLA-B27基因分型檢測方法特異性引物序列聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSO）

聚合酶鏈反應(yīng)-直接測序分型（PCR-SBT）

當(dāng)前35頁，總共46頁。

PCR-SSP:針對HLA-B*27基因的外顯子2的序列，合成相應(yīng)的HLA-B*27基因引物，在PCR擴(kuò)增儀上擴(kuò)增即可，這種特異性的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可通過瓊脂糖凝膠電泳檢出，凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。

當(dāng)前36頁，總共46頁。

血清學(xué)檢測HLA-B27抗原的優(yōu)缺點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)操作方面（1）經(jīng)典的血清學(xué)分型技術(shù)因其操作簡便，準(zhǔn)確率尚可且成本較低，曾得到廣泛應(yīng)用。（2）所用標(biāo)本須為新鮮血液標(biāo)本。

（3）受細(xì)胞純度、補(bǔ)體差異、單抗效價(jià)的影響，易出現(xiàn)錯(cuò)判漏判，觀察結(jié)果存在主觀因素。臨床應(yīng)用方面：血清學(xué)檢測的是蛋白抗原，不能檢測出HLA-B*27等位基因，即血清學(xué)結(jié)果是陰性，只能說明HLA-B27抗原陰性，并不能確定HLA-B*27基因是否存在。目前尚無針對HLA-B*27不同等位基因的抗體，故不能檢測出對應(yīng)的HLA-B*27等位基因.

當(dāng)前37頁，總共46頁。

基因?qū)W方法檢測HLA—B*27基因的優(yōu)缺點(diǎn)（以PCR-SSP為例）：

實(shí)驗(yàn)操作方面（1）只需PCR擴(kuò)增儀和瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備；費(fèi)用中等，適合在我國現(xiàn)有條件下開展。（2）標(biāo)本需要量少，取材容易，提取的DNA可長期保存；陳舊血、冷凍血也可用于DNA的提取，使留取標(biāo)本不受時(shí)間的限制。（3）結(jié)果準(zhǔn)確可靠，分析結(jié)果客觀，根據(jù)內(nèi)對照及有無特異性區(qū)帶來判斷結(jié)果一目了然。（4）PCR時(shí)要在嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，防止污染。臨床應(yīng)用方面：能直接檢測出HLA-B*27的等位基因，且不同的等位基因與疾病的相關(guān)性大相徑庭，不同等位基因?qū)е碌呐R床表現(xiàn)各不相同，適于臨床常規(guī)；當(dāng)前38頁，總共46頁。

檢測結(jié)果不正確主要的危害在于：檢測結(jié)果假陰性：使很多病人在鑒別診斷上缺乏依據(jù)；檢測結(jié)果假陽性：使一些病人誤用治療類風(fēng)濕和強(qiáng)直性脊椎炎的藥物。HLA-B27高分辨試劑盒能簡單、快捷的檢測出HLA-B*27等位基因，有效地避免了血清學(xué)檢測結(jié)果的假陰性造成疾病診斷的漏診；同時(shí)也能有效地避免了檢測結(jié)果的假陽性，造成疾病診斷的誤診；同時(shí)，直接檢測出的HLA-B*27等位基因與疾病的相關(guān)性各不相同，能有效的指導(dǎo)臨床疾病的診斷。當(dāng)前39頁，總共46頁。

4.本公司的HLA-B27試劑盒當(dāng)前40頁，總共46頁。

HLA-B*27篩查試劑盒HLA-B*27驗(yàn)證試劑盒HLA-B*27高分辨試劑盒當(dāng)前41頁，總共46頁。

本公司研制的HLA-B*27基因高分辨引物板試劑盒，采用PCR-SSP方法檢測HLA-B*27等位基因，能直接檢測出中國人常見的HLA—B*2704、2705、2702、2706、2701、2708、2710等基