說明書基因克隆近岸蛋白質科技

產(chǎn)品信 pED-T結構 使用EasyDigestionT-Vector使用說 DL2000PlusDNAMarker使用說 SinoBio實驗方案PCR產(chǎn)物加 菌落菌液PCR鑒 產(chǎn)品SinoBioEasyDigestionT-Vector是一種PCR產(chǎn)物高效TA克隆的T載體，它由pTZ19R載體改造而成。EasyDigestionT-Vector在插入位點兩端特別設計了兩個價和高效的EcoRI與HindIII雙酶切檢測及亞克隆。SBoEsyDisonco保留了pZR載體的所有功能：PCR產(chǎn)物插入后可以利用α互補性進行藍白斑篩選，挑選陽性克?。豢梢杂?3、MR通用引物對PCR產(chǎn)物進序；含有7RNA聚合酶的啟動子，可以對插入片段進行體外轉錄。產(chǎn)品pED-TvectorpED-Tvector（25ControlInsert（50兩種LigationBuffer2×2×TaqMasterMix(快速上樣型 保存溫 -產(chǎn)品提供2快速連接系統(tǒng)（15分鐘即可完成連接反應）及10傳統(tǒng)型連接系統(tǒng)（過附贈2TaqMasterMix，2FastTaqMasterMix快速PCR系統(tǒng)，及DL2,000PlusDNAMarker，滿足您的PCR鑒定、電泳實驗需求。質量ControlInsert克隆后的白色菌落中，有90%以上含有InsertDN段ControlInsert克隆后，經(jīng)確認“T”突出的存在pED-Tphagef1intergenicregion2-457lacZalphafragment449-734multiplecloningsite615-690repliconofpMB11117-1731 gene1891-2751*序列EasyDigestionT-vector使用說InsertDNA不需不需“加A”反 Taq酶（E001，E005）FastTaq（E029） SuperTaq（E030，E034）TaqPlus （E009，007）SuperTaq E036）及熱啟動TaqPCR產(chǎn)物作為InsertDNA，應該純化后再進行載體連接，盡量減少PCR產(chǎn)物中的InsertDNA及T載體的使用量可按以下方法計算InsertDNAInsertDNA和T載體的摩爾數(shù)比為M（2～10：1均可，常用比例為3：1），假設T載體的使用量為Y（單位ng），InsertDNA長度為I（單位kb），T載體大小為V（單位kb），則InsertDNA的用量X（單位ng）可用以下計算X=Y*M*I/一般情況下，T載體的使用量（Y）為50ng/反應，而InsertDNA和T載體的摩爾（I）的InsertDNA（如試劑盒自帶的ControlInsert片段）需要加入量X=50*3*1/3=50例如下午完成PCR片段，需要傍晚前完成連接反應，以便轉化實驗后可以過快速連接體系配制，以ControlInsert（1kb）2×QuickLigationBufferpED-Tvector（25ng/μl）ControlInsert（50ng/μl）T4DNALigase連接反應溫度及時間：1625℃下，保溫15至30**果反而會變差。一些較難連接的片段（如大片段），請采用傳統(tǒng)型10×T4DNALigation例如傍晚完成PCR片段，需要連接過夜，第二天進行轉化實驗，請采用傳統(tǒng)型10×LigationBuffer。傳統(tǒng)型連接體系配制，以ControlInsert（1kb）10×LigationpED-Tvector（25ng/μl）ControlInsert（50ng/μl）T4DNALigase連接反應溫度及時間：16℃保溫3小時以上或過夜**10LigationBuffer融化時，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請于37℃保溫溶解混勻后連接產(chǎn)物轉化*注意由于2×QuickLigationBuffer中含有PEG成分，對于使用2×QuickLigationBuffer的連接產(chǎn)物，我們推薦使用化學方法的感受態(tài)來*注意由于2×QuickLigationBuffer中含有PEG成分，對于使用2×QuickLigationBuffer的連接產(chǎn)物，我們推薦使用化學方法的感受態(tài)來轉化連接產(chǎn)物。如要采用電轉化，需先將快欣百諾已推出的種T載體試劑盒有著很高的陽性率，藍白斑篩選所起的減少鑒定步驟工作量的作用并不明顯，因此對于常規(guī)的PCR片段連接，我們并不推薦增加藍白斑篩選步驟，而是直接進行陽性克隆檢測：我們建議使用PCR的方法，利用試劑盒自帶的高速PCR擴增試劑2×stMstx直接進行菌落PCR鑒定，相關的操作請參考“2×FstMstix使用說明”（第頁）。對較難一些較難克隆的片段（如較大的PCR片段）2TaqMasterMix使用說產(chǎn)品本制品是將PCR反應所需的酶、NP混合物、MCl2以及反應緩沖液預先配置成的倍濃度的混合物。SiBio2×qMserx專為常規(guī)PCR擴增反應優(yōu)化，擴增長度可達kb，能對kb及其以下長度的片段進行高效地擴增。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到倍濃度即可進行PCR的污染。SiBo2×qserix提供含快速上樣型普通型兩種形式供您選擇，快速上樣型已含（藍色），在PCR反應完成后可直接電泳，節(jié)省時間。經(jīng)測試，的加入不影響PCR反應。產(chǎn)品靈敏：可從0.05ng人組DNA模板中擴增出特定片段。穩(wěn)定：反復凍融幾十次，4℃放置0天，室溫放置一周，擴增性能不受影響?？旖荩篜CR便利：適用各種常規(guī)體系，PCR反應后可直接電泳（快速上樣型）。產(chǎn)品1TaqMasterMix1反應緩沖體系(pH8.5dATPdGTPdCTPdTTP各200μM2mMMgCl2，保存溫 -使用使用本試劑擴增得到的PCR產(chǎn)物'端有一突出“A”堿基，可直接克隆于載體中。當擴增較長片段時，推薦使用SnBoqsserx,aqs對于較長的DN段擴增具有更高的擴增效率及保真度。質量常用反應體系2×TaqMaster常用PCR

1分鐘30

72℃，60秒/1kb（根據(jù)產(chǎn)物長度調整

應用實5ng0.5ng0.05ng0.005ng0.0005ng在50μl的擴增體系中，分別以5ng~00005ng的組DNA為模板,擴增bp的目的條帶。以國內T公司的TaqMaster由結果可以看出noBoaqMaserx可以檢測到0.005ng級的模板，對005ng級以上的模板有很好的擴增，并在不同模板濃度間有很好的檢測梯度。

10 50次在50l的擴增體系中，以LadaDNA為模板，分別用反復凍融10次，20次，30次，0次，50次的nooTaqasterMx進行擴增。由實驗結果可以看出，SinoBioTaqMasterMix反復TaqMasterMix有很好的穩(wěn)定性。

0.5bp1kb2kb4kb6kb8kb在50μl的擴增體系中，以LamdaDNA由實驗結果可以看出，SnoBoTaqasterMx可以對500bp到8kb的片段進行有效的擴增。以上說明nooTaqaserx的高擴增效率。2FastTaqMasterMix使用說產(chǎn)品本制品采用2×serx形式，將PCR反應所需的聚合酶、NP混合物、Cl2、上樣以及反應緩沖液預先配置成倍濃度的混合物。使用時只需加入模板和引物并稀釋到倍濃度即可進行PCR反應，簡化了操作過程，減少了操作過的污染。上樣的加入不影響PCR反應，在PCR反應完成后可直接電泳，節(jié)省時間。本制品采用了新型的FastTaq酶，該酶是SinoBio采用分子進化技術在普通Taq酶基礎上改造、的新型快速聚合酶，其擴增速度為普通Taq酶的數(shù)倍，72℃保溫*特別提醒 FastTaq擴增速度為15秒/kb，長時擴增可能會引起非特異性擴增產(chǎn)品省時：配以高速PCR聚合酶FastTaq大幅縮短PCR鑒定所需時間。產(chǎn)品1FastTaqMasterMix成份1反應緩沖體系(pH8.5dATPdGTPdCTPdTTP各200μM2mMMgCl2，保存溫 -使用質量常用反應體系2×FastTaqMaster常用PCR1分鐘3094℃，3057℃，30

微量菌液或菌 1分鐘3094℃，5DL2000PlusDNAMarker使用說制品SinoBioDNAMarker為預混1LoadingBuffer的片段組3000（加亮），4000，5000bp，其中750，3000bp條帶濃度加倍，約為20ng/μl，顯示為亮帶，使電泳條短期使用可置于4°C，長時間保存(超過90天)請緩沖液10mMTris-HCl，10mMEDTA，5%Glycerol，0.0025%溴酚推薦上5μl每孔(或按每毫米膠孔寬度上1μl)SinoBioDNAMarker注：圖中斜體標注的條帶為指示條帶，濃度約為20ng/μl，其余條帶大小為10SinoBio實驗方案：PCR產(chǎn)物加方案取1-7μl純化的PCR產(chǎn)物(約100ng)加上2μl5×TaqDNA聚合酶緩沖液(含有MgCl2，加入終濃度為0.25mMdATP（推薦）或dNTP，以及1UTaqDNA聚合酶，加蒸餾水至10μl，72℃反應15-30min。取1-2μl進行連接反應（產(chǎn)物純化后連接方案取0l純化的PCR產(chǎn)物(約0)，加入等體積2×qPCRaserx，℃反應10i。取l進行連接反應（產(chǎn)物純化后連接效果更佳）?？砂吹缺壤龜U大反應體系。SinoBio實驗方案：菌落菌液PCR鑒方案配置20μlPCR反應體接種至另一相應抗生素平板上，在編號的方將此牙簽或小槍頭在PCR反應液中輕輕攪動幾次，您也可以挑取單菌先PCR反應液中輕輕攪動兩、三次，其后將牙簽或小槍頭置于裝有l(wèi)含相應抗生素培養(yǎng)基的試管中搖菌后保種。PCR反應預變性，采用95℃2～5分鐘以充解細菌釋放模板DNA取5～10μlPCR產(chǎn)物跑膠檢測，以確定陽方案配置20μlPCR反應體系量（～0.2μl）菌液作為模PCR反應預變性，采用95℃2～5分鐘以充解細菌釋放模板DNA取5～10μlPCR產(chǎn)物跑膠檢測，以確定陽如需擴增較長片段，推薦使用SinoBio2×FastTaqMasterMix，將大幅縮短T載體系列產(chǎn)SimpleCloningT-vector（pSC-EasyDigestionT-vector(pED-EasyCloningT-vector(pEC-PCR系列2×TaqMaster2×FastTaqMaster2×TaqPlusMasterHotStartTaqDNASuperTaqDNATaqPlusDNAHotStartTaqplusDNASuperTaqPlusDNAPfuDNAFastPfuDNADNAMarker系列產(chǎn)DL2000DNADL2000PlusDNA1kbDNALadder1kbDNALadderPlus1kbDNALadd